环境中洋葱伯克利霍尔德菌群对化妆品的影响及其检测方法分析

本文通过对各国药典、法规、指导原则、行业标准和行业指南等文件进行梳理,简要介绍了洋葱伯克利霍尔德菌群对化妆品安全性的影响及其影响机制、目前的研究进展、在各领域中已经建立的检测方法、检测结果的分析,以及应用前景。研究发现,洋葱伯克利霍尔德菌群在化妆品中存在一定的风险,需要对其进行有效的检测和控制。本文旨在为相关研究提供参考和指导,以确保化妆品的使用安全性。

纯露类化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群的检查方法及结果分析

建立纯露类化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群(BCC)的检测方法,并对市售常见55批次纯露类化妆品进行BCC检测和鉴定。采用SIMCA软件对结果进行处理,运用主成分分析法(PCA)寻找微生物污染的规律。结果35批次样品检出洋葱伯克霍尔德菌,检出率为63.6%;PCA结果表明BCC的污染呈现一定的企业聚集性。该方法可用于纯露类化妆品中不可接受微生物BCC的检查,且多批次样品检出BCC表明消费者使用具有一定的风险,应引起高度重视。

洋葱伯克霍尔德菌复合群耐药机制及药物治疗进展

洋葱伯克霍尔德菌复合群(Bcc)是免疫功能低下患者的重要机会性致病菌,最早在肺囊性纤维化(CF)患者的痰液中分离发现,被认为是一种重要的CF相关气道病原体。随着抗菌药物使用、血液透析以及静脉导管、支气管镜等侵入性操作增加,Bcc感染不再局限于呼吸道感染,还可引起血流感染、化脓性关节炎及胸膜炎等其他部位感染。Bcc对不同类别的抗生素具有高度耐药性,治疗药物选择有限。因其耐药广泛,且耐药机制复杂,给临床治疗带来严峻挑战。现就其耐药机制及治疗进展进行综述。

洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)及干扰菌在不同增菌培养基中的生长研究

目的:考察Bcc以及Bcc与干扰菌的混合物在不同的增菌培养基中能否生长和增殖;探讨不同的Bcc菌种对增菌培养基的营养需求和抗生素的耐受是否存在差异。方法:将Bcc的代表菌株、干扰菌以及Bcc与干扰菌的混合物分别接种至TSB、10倍稀释的TSB、添加10 mg·L^(-1)庆大霉素的TSB和添加250000 U·L^(-1)多粘菌素B的TSB中培养,划线分离至选择性培养基上观察结果,并对可疑菌落进行分离和鉴定。结果:只接种Bcc的4种增菌培养基均能使之良好地增殖。低量的Bcc(约102 cfu)与高量的干扰菌(104 cfu)的混合接种,除了神秘伯克霍尔德菌CMCC(B)23010外,4种增菌培养基能使Bcc增殖并被检出。结论:添加抗生素的TSB与未添加抗生素的相比没有表现出明显的优势。TSB可以作为Bcc检验时的增菌培养基使用。生长缓慢且活力弱的Bcc菌株在特定条件下有可能会被漏检。

水分活度对洋葱伯克霍尔德菌群生长的影响

研究不同调节剂作用下洋葱伯克霍尔德菌群(Burkholderia cepacia complex,Bcc)最低生长水分活度(water activity,Aw),及Aw对其生长曲线的影响。以氯化钠、甘油、蔗糖为调节剂,配制一系列Aw不同的胰酪大豆胨液体培养基,将3株Bcc分别接种其中32.5℃培养72 h,全自动生长曲线分析仪每30 min测量1次OD 600,绘制生长曲线。结果显示,氯化钠组,当Aw<0.978时3株Bcc均不生长;甘油组,当Aw<0.944时,3株Bcc均不生长,Aw=0.944时仅20170801-1生长;蔗糖组,当Aw<0.971时,3株Bcc均不生长,Aw=0.971时仅20180108-11生长。随着Aw降低,可测量时间(time to detection,TTD)延长;在Aw≥0.988时,生长曲线峰值、斜率随Aw变化不明显,但随着Aw继续降低,生长曲线峰值、斜率则明显下降。结果表明,Bcc在不同调节剂作用下最低生长Aw为0.978(氯化钠)、0.944~0.955(甘油)、0.971~0.978(蔗糖);在氯化钠和蔗糖作用下;Bcc最低生长Aw接近,与之相比甘油作用下则更低;随Aw降低,TTD延长,曲线峰值及斜率整体呈下降趋势。

洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)的分类鉴定研究进展

目的:探讨适用于药品微生物控制中的洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)的鉴定策略。方法:结合药品微生物控制中对Bcc的鉴定和分型需求,对目前应用较为广泛的微生物鉴定技术的特点和鉴定或分型能力进行阐述和讨论,提供满足不同鉴定水平要求的鉴定策略。结果:对于Bcc,不同的鉴定方法能达到的鉴定水平存在差异。手动/自动化的生化鉴定系统可达到属/菌群水平的准确鉴定;基质辅助激光解析电离飞行质谱(MALDI-TOF MS)以及16S r RNA序列分析技术可达到菌群的准确鉴定;看家基因如rec A或his A等的序列分析,基本可达到菌种水平的鉴定,必要时,可补充多位点序列分型(MLST)进行确认。MLST、核糖体分型(Ribotyping)或全基因组测序(WGS)技术则适用于菌株水平的分型和溯源。结论:明确不同的鉴定技术对于Bcc的鉴定能力和应用特点,针对不同的鉴定需求给出相应鉴定方法的建议,为在实际应用中涉及Bcc检验、鉴定和溯源分析的生产企业、检验人员提供参考和借鉴。

洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)的选择和分离培养基研究

目的:对现有洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)选择性培养基配方进行优化和调整,以获得更优的选择和分离培养效果,提高Bcc的检出效率,形成《中国药典》拟收载Bcc检查法中的选择和分离培养基。方法:调整选择性培养基营养成分和指示剂组分,使用分离自制药环境及产品的Bcc菌株,通过计数回收、表型观察和生长曲线试验等方法,从选择性培养基的促生长能力、指示特性、抑制能力几方面评估其配方优化后的结果。结果:优化获得的Bcc选择性培养基(BCCSA),对Bcc菌株的回收优于其他选择性培养基,生长曲线试验结果也表明Bcc菌株在BCCSA中的生长速率更快并更早到达生长稳定期;BCCSA对Bcc生长的指示特性相较于其他培养基更好,表现为培养基颜色变化更为明显,菌落颜色更易观察;对于美国药典中要求的抑制特性试验菌株,BCCSA可满足其抑制能力要求。结论:综合而言,BCCSA表现出更优的促生长能力和指示特性,可作为《中国药典》拟收载Bcc检查法中的选择和分离培养基。

《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中标准菌株的稳定性研究

目的:应用现有微生物分类鉴定技术手段,对《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中所选用的标准菌株进行冻存及传代稳定性考察。方法:选取美国药典USP43-NF38 Bcc检查法中的一株Bcc标准菌株ATCC25416为对照菌株。以3株拟收载标准菌株和1株对照标准菌株为试验菌株,分别对这些试验菌株冻存0.5年、1年、2年的样本及连续6代的传代样本进行菌落表型观察、Biolog生化鉴定分析、16S rRNA基因测序及Ribo Printer全自动基因指纹图谱分析,并使用Bio Numerics 7.6对核糖体图谱数据进行聚类分析。结果:试验菌株在经冻存及传代后,各菌株表型无明显差异;菌株的Biolog生化鉴定结果虽略有差异,但菌株关键生化代谢属性稳定,其鉴定结果均属Bcc;同时,各菌株的16S rRNA测序结果一致;核糖体带型相似值均大于0.95。结论:在本研究考察的冻存时间及传代次数内,3株《中国药典》洋葱伯克霍尔德菌群检查法拟收载的标准菌株的表型、基因型相对稳定。

两批次抗真菌乳膏中洋葱伯克霍尔德菌群的检测结果及其耐药性考察

目的:考察抗真菌乳膏中洋葱伯克霍尔德菌群(Brukholderia cepacia complex,BCC)检测、鉴定结果及其耐药性。方法:(1)采用薄膜过滤法测定两批抗真菌乳膏中需氧菌总数;(2)挑选滤膜上生长的菌落进行纯化并观察其特性,再采用Vitek MS型全自动快速微生物质谱检测系统鉴定纯化后的菌落,以及用Vitek 2 Compact型梅里埃全自动细菌鉴定及药敏分析系统对检出的BCC菌进行鉴定和药敏试验。结果:两批抗真菌乳膏中检出的需氧菌总数接近限值;滤膜上生长的菌落被鉴定为污染伯克霍尔德菌和稳定伯克霍尔德菌;这2株菌落对大部分抗菌药物均耐药。结论:两批抗真菌乳膏中的BCC,对尼泊金类防腐剂和大部分抗菌药物均耐药,其在药品中进一步繁殖的可能性较大,临床使用具有一定的风险,应引起高度重视。

洋葱伯克霍尔德菌群3种鉴定方法的比较

为了比较VITKE 2 COMAPCT、 VITEK MS质谱、 16s rDNA基因测序3种方法鉴定洋葱伯克霍尔德菌群的异同,挑选15株从米面制品、淀粉及其制品中分离得到的洋葱伯克霍尔德菌群的菌,分别用VITEK 2 COMPACT、 VITEK MS质谱和16s rDNA基因测序进行鉴定。结果显示, VITEK 2COMPACT只能鉴定到群水平,可信度88%—99%; VITEK MS质谱可鉴定到种水平,鉴定置信度99%;16s rDNA基因测序可鉴定到种水平,序列同源性能达到99%以上,但每株菌16s序列能匹配到2种以上洋葱伯克霍尔德菌群里的菌。所以, 3种鉴定方法中, VITEK MS质谱法可鉴定出洋葱伯克霍尔德菌群里的不同种,该方法结果准确,时效性高,操作步骤简单。

洋葱伯克霍尔德菌群3种检测方法的比较

目的通过对环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、基于聚合酶链式扩增(polymerase chain reaction,PCR)的SYTO 9染料法及TaqMan探针实时荧光定量PCR法(简称TaqMan探针法)3种检测方法的比较,旨在建立一种能够快速、准确检测24株洋葱伯克霍尔德菌群的PCR方法。方法根据NCBI数据库中24株洋葱伯克霍尔德菌的分子生物学信息,筛选出洋葱伯克霍尔德菌所特有的多个候选序列片段,设计能同时检出24株洋葱伯克霍尔德菌的特异性引物和探针,同时探索了LAMP法、基于PCR的SYTO 9染料法及Taqman探针法3种检测方法,优化筛选出最佳退火温度,并采用39株实验菌株对洋葱伯克霍尔德菌群检测方法开展了验证研究。结果采用LAMP法无法实现对洋葱伯克霍尔德菌群的有效检出,采用SYTO 9染料法和TaqMan探针法可以实现对20多株洋葱伯克霍尔德菌群的有效检出,而TaqMan探针法扩增效率更高,检测灵敏度、重复性、稳定性更好,能够满足本研究的要求。结论本研究建立了洋葱伯克霍尔德菌群的TaqMan探针快速检测方法,相较于LAMP法和SYTO 9染料法,该方法具有快速、简便和敏感性高等优点,为洋葱伯克霍尔德菌群的快速检测提供了技术支持。

口服溶液剂洋葱伯克霍尔德菌群检测方法的建立及污染菌存活能力挑战试验

目的建立口服溶液剂洋葱伯克霍尔德菌群检测方法以及产品自身抗污染能力的评价方法。方法采用4种洋葱伯克霍尔德菌模式菌株,分别进行6种口服溶液剂的方法适用性试验,并接种至6种口服液中,持续监测挑战样品中洋葱伯克霍尔德菌的存活情况,评价产品的抗污染能力。结果6个品种的口服溶液剂,采用接种至100 mL TSB培养基和1/10 TSB培养基的方法,适用性试验均可检出洋葱伯克霍尔德菌,方法可行,产品对洋葱伯克霍尔德菌群没有明显的抗菌活性;挑战试验结果显示,接种洋葱伯克霍尔德菌放置6个月,部分产品仍可检出存活菌,不同菌株的存活率不同,抗逆性存在差异。结论洋葱伯克霍尔德菌抗逆性较强,生存条件要求不高,常规检查方法易于检出,在口服溶液剂中可长期存活,风险较高,应作为口服溶液剂的常规检测项目,加强生产过程控制。

食品中伯克霍尔德菌属快速鉴定及耐药性分析

目的探究伯克霍尔德菌属快速鉴定方法,以及食品中伯克霍尔德菌属的分布特点及耐药现状。方法依据模式菌株的RNA聚合酶β亚基编码基因(rpoB)序列设计引物,扩增食品分离株的rpoB序列,构建基于rpoB的系统发育树。同时利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对食品分离株进行快速鉴定。利用微量肉汤稀释法对食品分离株进行耐药表型检测。结果在种水平,rpoB与基因组鉴定一致率可达100.00%。而MALDI-TOF MS的鉴定准确性为73.47%(36/49),洋葱伯克霍尔德菌复合群(Bcc)存在种间误判的情况。食品分离的Bcc菌株对大多数抗生素的最小抑菌浓度(MIC)远高于B.gladioli,但对头孢他啶的MIC却相反。结论可利用MALDI-TOF MS在属水平对伯克霍尔德菌属进行快速准确的鉴定,再利用rpoB鉴定到种。食品中检出耐多药的伯克霍尔德菌高致病种,提示应加强对食品中伯克霍尔德菌属的监测。

洋葱伯克霍尔德菌复合群治疗及预防研究进展

洋葱伯克霍尔德菌复合群(Burkholderia cepacia complex,Bcc)是一种机会致病菌,易感染囊性纤维化(cystic fibrosis,CF)患者及免疫功能低下的非CF患者[1]。目前缺乏相关指南明确Bcc感染患者的最佳治疗方案及预防措施[2]。本文对Bcc感染的治疗和预防研究进展进行综述。

日化产品中洋葱伯克霍尔德氏菌复合群(Bcc)的分类和神秘伯克霍尔德氏菌的耐药性研究

【目的】对从2020–2022年不同日化产品中分离的29株洋葱伯克霍尔德氏菌复合群(Burkholderia cepacia complex,Bcc)进行分类和分型,另将2020年前来源于日化产品中6株被鉴定为Burkholderia lata的菌株进行分类更正。探究神秘伯克霍尔德氏菌(Burkholderia aenigmatica)的耐药性。【方法】本文主要应用多位点分型研究方法(multilocus sequence typing,MLST),PCR扩增atpD、gltB、gyrB、recA、lepA、phaC和trp B 7个管家基因片段,将测序结果与MLST数据库中的数据比对分析,获得菌株各管家基因的编号和ST型(sequence type),对本检测中心分离自日化产品的Bcc进行分型;利用多位点序列分析(multilocus sequence analysis,MLSA),结合MLST中等位基因的核苷酸序列构建进化树,从而对Bcc进行系统发育分析和鉴定。利用最小抑菌浓度法(minimum inhibitory concentration,MIC)测定Bcc对常见防腐剂(1,3-二羟甲基-5,5-二甲基乙内酰脲、卡松、苯甲酸钠、山梨酸钾)和抗生素(头孢他啶、卡那霉素、四环素)的耐药性。【结果】本文29株Bcc菌株共有5个菌种类型(B.cenocepacia、B.contaminans、B.aenigmatica、B.vietnamiensis和B.stabilis)和15个不同分型,分类过程中发现了7个新等位基因,7个新ST分型(ST2118、ST2120、ST2122、ST2127、ST2128、ST2129和ST2130)并鉴定了其种类。另将2020年前来源于样品中6株被鉴定为Burkholderia lata的菌株用MLST法重新分类鉴定,其鉴定结果均为Burkholderia aenigmatica。11株B.aenigmatica分离株中只有1株对头孢他啶耐药,其他菌均对其不耐药,分别有9株和8株B.aenigmatica对卡那霉素和四环素耐药。卡松和1,3-二羟甲基-5,5-二甲基乙内酰脲(1,3-dimethylmethylol-5,5-dimethylhydantoin,DMDMH)在最大允许量范围内能有效抑制B.aenigmatica的生长,有9株B.aenigmatica表现出苯甲酸钠和山梨酸钾的耐药性。【结论】Bcc的分类较为复杂且存在许多未知等位基因和分型,Burkholderia aenigmatica已经成为污染日化产品的主要Bcc菌株。大部分B.aenigmatica对氨基糖苷类和四环素类抗生素具有耐药性,大部分来自日化产品中的B.aenigmatica对苯甲钠和山梨酸钾均具有耐药性。

洋葱伯克霍尔德菌复合群的分子分型和药敏比较

洋葱伯克霍尔德菌复合群广泛分布在自然界中，可通过污染水、消毒液及导管等导致多种医院感染。近年来随着各种介入性操作及免疫功能低下患者的增多，洋葱伯克霍尔德菌复合群在肺囊性纤维化、

比较MALDI-TOF MS直接涂片法与蛋白提取法鉴定洋葱伯克霍尔德菌群的应用研究

目的比较基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)直接涂片法和蛋白提取法鉴定洋葱伯克霍尔德菌群的差异。方法收集118株临床分离经VITEK全自动细菌仪鉴定为洋葱伯克霍尔德菌群菌株,采用MALDI-TOF MS直接涂片法和蛋白提取法进一步分析基因型,同时比较两种鉴定方法之间的优缺点。结果 118株洋葱伯克霍尔德菌群经MALDI-TOF MS两种方法只是鉴定结果分数有所差异,鉴定结果一致,分别为:93株Burkhoderia cencepacia(基因型Ⅲ型),11株多嗜伯克霍尔德菌(基因型Ⅱ型),10株洋葱伯克霍尔德菌(基因型I型),3株越南伯克霍尔德菌(基因型V型),1株吡咯伯克霍尔德菌(基因型Ⅸ型)。MALDI-TOF MS直接涂片法鉴定分数均值2.126,仅9株(7.62%)鉴定结果不可信(分值<1.700),准确鉴定至种(t≥2.300)与准确鉴定至属(t≥1.700)的比例分别为38.98%和92.38%;MALDI-TOF MS蛋白提取法仅2株(1.69%)鉴定结果不可信,准确鉴定至种(t≥2.300)与准确鉴定至属(t≥1.700)的百分比均高于直接涂片法,分别为44.92%和98.31%;但是不同分值分组间准确鉴定至种(分值≥2.300)、鉴定至属(分值≥1.700),两种方法差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 MALDI-TOF MS可快速准确地鉴定洋葱伯克霍尔德菌群至基因型,临床标本鉴定时首选MALDI-TOF MS直接涂片法,对于鉴定结果不可信的菌株可进一步采用蛋白提取法鉴定。

非无菌水性基质药品中洋葱伯克霍尔德菌群控制的一般考虑

洋葱伯克霍尔德菌群(Burkholderia cepacia complex,BCC)在营养有限的水性环境中有较强的生存能力,对一些治疗用抗菌药和常用抑菌剂具有耐药性,可引起囊性纤维化、慢性肉芽肿患者或低免疫力易感人群的严重感染。BCC已被美国食品药品监督管理局(FDA)明确归为不可接受微生物,因此,非无菌水性基质药品中BCC的预防及控制对药品安全至关重要。主要对BCC的特性、检测方法及风险评估和控制策略进行阐述,为非无菌水性基质药品中BCC的研究和控制提供参考。

肺结核合并糖尿病住院患者肺部感染菌群研究

目的 探讨肺结核合并糖尿病住院患者肺部感染菌群分布及药敏情况.方法 以湖南省胸科医院内三科肺结核住院患者的连续病例为研究对象,分析痰培养出病原菌株或经纤支镜灌洗液、刷检培养出病原菌的分布和药敏情况.结果 肺结核合并糖尿病住院患者122例,共培养出病原菌303株,排在前十位依次为白色念珠菌,铜绿假单胞菌,肺炎克雷伯菌,大肠埃希菌,鲍氏不动杆菌,阴沟肠杆菌,嗜麦芽寡单胞菌,金黄色葡萄球菌,洋葱伯克霍尔德菌,产气肠杆菌.患者感染1种菌株比例为47.5%,感染2种菌株比例为40.2%,感染3种菌株比例为9.0%,感染4种及以上菌株比例为3.3%.药敏试验提示多数革兰氏阴性病原菌对哌拉西林他唑巴坦的敏感率在62.5%~78.6%之间,对头孢哌酮舒巴坦的敏感率在70.0%~87.5%之间,对三代头孢类的敏感率在21.4%~88.3%之间,对阿米卡星的敏感率在75.5%~92.0%之间,对左氧氟沙星的敏感率在28.6%~66.7%之间,对碳青霉烯类抗生素敏感率较高.金葡菌对碳青霉烯类抗生素和万古霉素敏感率较高,对其他抗生素敏感率均较低.结论 肺结核合并下呼吸道感染以及耐药情况严重,易合并多种病原菌感染,因此在结核患者合并感染临床选用抗生素治疗时应以药敏试验为依据,选择合理有效的抗生素,减少盲目用药和不良反应的产生.减少耐药菌株的产生.

产生多种抗真菌活性物质菌种的筛选分离和鉴定

从堆肥样品中分离出的伯克霍尔德菌(Burkholderia)CF-66株能够抑制若干植物病原霉菌和病原酵母菌,并且显示了广谱抗菌活性.这种抑制作用不需要细胞的接触或活细胞,说明抗菌活性物质应是分泌代谢到细胞外的化合物.通过生理学和生物化学检测及16SrRNA测序,清楚表明:CF-66菌株归属于洋葱伯克霍尔德菌群.以前的研究指出,洋葱伯克霍尔德菌群中的亚门(genomovar)Ⅱ、Ⅲ含有传染性的菌株,但通过species-specificPCR鉴定已证明,CF-66菌株并不属于洋葱伯克霍尔德菌群中的genomovarⅡ、Ⅲ,而归属于洋葱伯克霍尔德菌群genomovarⅤ.