洋葱伯克霍尔德菌复合群耐药机制及药物治疗进展

洋葱伯克霍尔德菌复合群(Bcc)是免疫功能低下患者的重要机会性致病菌,最早在肺囊性纤维化(CF)患者的痰液中分离发现,被认为是一种重要的CF相关气道病原体。随着抗菌药物使用、血液透析以及静脉导管、支气管镜等侵入性操作增加,Bcc感染不再局限于呼吸道感染,还可引起血流感染、化脓性关节炎及胸膜炎等其他部位感染。Bcc对不同类别的抗生素具有高度耐药性,治疗药物选择有限。因其耐药广泛,且耐药机制复杂,给临床治疗带来严峻挑战。现就其耐药机制及治疗进展进行综述。

日化产品中洋葱伯克霍尔德氏菌复合群(Bcc)的分类和神秘伯克霍尔德氏菌的耐药性研究

【目的】对从2020–2022年不同日化产品中分离的29株洋葱伯克霍尔德氏菌复合群(Burkholderia cepacia complex,Bcc)进行分类和分型,另将2020年前来源于日化产品中6株被鉴定为Burkholderia lata的菌株进行分类更正。探究神秘伯克霍尔德氏菌(Burkholderia aenigmatica)的耐药性。【方法】本文主要应用多位点分型研究方法(multilocus sequence typing,MLST),PCR扩增atpD、gltB、gyrB、recA、lepA、phaC和trp B 7个管家基因片段,将测序结果与MLST数据库中的数据比对分析,获得菌株各管家基因的编号和ST型(sequence type),对本检测中心分离自日化产品的Bcc进行分型;利用多位点序列分析(multilocus sequence analysis,MLSA),结合MLST中等位基因的核苷酸序列构建进化树,从而对Bcc进行系统发育分析和鉴定。利用最小抑菌浓度法(minimum inhibitory concentration,MIC)测定Bcc对常见防腐剂(1,3-二羟甲基-5,5-二甲基乙内酰脲、卡松、苯甲酸钠、山梨酸钾)和抗生素(头孢他啶、卡那霉素、四环素)的耐药性。【结果】本文29株Bcc菌株共有5个菌种类型(B.cenocepacia、B.contaminans、B.aenigmatica、B.vietnamiensis和B.stabilis)和15个不同分型,分类过程中发现了7个新等位基因,7个新ST分型(ST2118、ST2120、ST2122、ST2127、ST2128、ST2129和ST2130)并鉴定了其种类。另将2020年前来源于样品中6株被鉴定为Burkholderia lata的菌株用MLST法重新分类鉴定,其鉴定结果均为Burkholderia aenigmatica。11株B.aenigmatica分离株中只有1株对头孢他啶耐药,其他菌均对其不耐药,分别有9株和8株B.aenigmatica对卡那霉素和四环素耐药。卡松和1,3-二羟甲基-5,5-二甲基乙内酰脲(1,3-dimethylmethylol-5,5-dimethylhydantoin,DMDMH)在最大允许量范围内能有效抑制B.aenigmatica的生长,有9株B.aenigmatica表现出苯甲酸钠和山梨酸钾的耐药性。【结论】Bcc的分类较为复杂且存在许多未知等位基因和分型,Burkholderia aenigmatica已经成为污染日化产品的主要Bcc菌株。大部分B.aenigmatica对氨基糖苷类和四环素类抗生素具有耐药性,大部分来自日化产品中的B.aenigmatica对苯甲钠和山梨酸钾均具有耐药性。

新洋葱伯克霍尔德氏菌YM12的分离鉴定及其对黄瓜软腐病的防治效果

黄瓜软腐病是由巴西果胶杆菌Pectobacteriumbrasiliense引起的一种细菌性病害,该病害发生严重且难防难控,以筛选具有高效抑菌作用的生防微生物为目的,本研究在黄瓜根际土壤中分离得到了一株对巴西果胶杆菌具有显著抑制效果的菌株YM12。经形态学观察、生理生化特征测定及多基因系统发育树分析,鉴定其为新洋葱伯克霍尔德氏菌Burkholderia cenocepacia;抗生素合成基因检测结果表明,菌株YM12具有产生硝吡咯菌素pyrrolnitrin与藤黄绿脓菌素pyoluteorin的能力;其他生防性状分析表明,YM12具有溶磷能力,还可产生蛋白酶及嗜铁素。经抑菌谱分析,菌株YM12能够抑制5种病原细菌及3种病原真菌的生长。盆栽试验结果表明,菌株YM12对黄瓜软腐病具有明显的防治效果,防效可达62.84%,优于对照药剂春雷霉素。综上,菌株YM12是目前首次报道的对细菌性软腐病具有良好生防效果的新洋葱伯克霍尔德氏菌。

环境中洋葱伯克利霍尔德菌群对化妆品的影响及其检测方法分析

本文通过对各国药典、法规、指导原则、行业标准和行业指南等文件进行梳理,简要介绍了洋葱伯克利霍尔德菌群对化妆品安全性的影响及其影响机制、目前的研究进展、在各领域中已经建立的检测方法、检测结果的分析,以及应用前景。研究发现,洋葱伯克利霍尔德菌群在化妆品中存在一定的风险,需要对其进行有效的检测和控制。本文旨在为相关研究提供参考和指导,以确保化妆品的使用安全性。

纯露类化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群的检查方法及结果分析

建立纯露类化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群(BCC)的检测方法,并对市售常见55批次纯露类化妆品进行BCC检测和鉴定。采用SIMCA软件对结果进行处理,运用主成分分析法(PCA)寻找微生物污染的规律。结果35批次样品检出洋葱伯克霍尔德菌,检出率为63.6%;PCA结果表明BCC的污染呈现一定的企业聚集性。该方法可用于纯露类化妆品中不可接受微生物BCC的检查,且多批次样品检出BCC表明消费者使用具有一定的风险,应引起高度重视。

洋葱伯克霍尔德氏菌及其在林木病害防治中的应用

洋葱伯克霍尔德氏菌是一个具有17个相近种的复合群体,称为洋葱伯克霍尔德氏菌群(Burkholderia cepacia complex,简称BCC),其中一些种具有生物防治、促进植物生长、生物修复等功能,同时又有一些种是人类的条件致病菌。笔者就BCC的生物学特性、基因型和基因组、生防机制、安全性评估、在林业中的应用现状等进行综述,同时对其在我国林业中应用前景进行了分析,认为正确区分有毒株和无毒株是BCC在林业中应用的关键和前提,最后提出了在林业中应用BCC菌株要注意的8个方面。

洋葱伯克霍尔德氏菌株Lyc2的鉴定及对棉苗的防病促生作用

从烟草根际土壤中分离到一株细菌菌株Lyc2,平皿对峙培养显示该菌可显著抑制多种植物病原真菌菌丝体的生长。温室盆栽试验表明,Lyc2对棉花苗期立枯病的防治效果达到48.8%;水培棉花苗试验表明,Lyc2能显著增加棉苗的鲜重和干重,但对株高的影响不显著。该菌经形态、生理生化试验测定及16S rDNA和ITS序列分析,初步确定为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia);进一步通过种特异的recA基因序列分析,证明Lyc2菌株属于B. cepacia复合物中基因型IX,B.pyrrocinia。

洋葱伯克霍尔德氏菌Lu10-1产脂肪酶发酵条件优化及酶学性质研究

旨在对洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)Lu10-1产脂肪酶的发酵条件及酶学性质进行研究。通过单因素和正交实验探讨了碳源、氮源、诱导物、初始p H值、温度等主要发酵参数的影响,并初步考察了温度、p H、金属离子和有机溶剂等对其催化反应的影响。结果表明,B.cepacia Lu10-1产脂肪酶最佳培养基组成和发酵参数为:可溶性淀粉1.5%,蛋白胨1.5%,橄榄油3 g/L,K2HPO4 2 g/L,发酵温度32℃,初始p H 9.0,培养48 h酶活达12.4 U/m L,比初始酶活提高了2.7倍。酶的最适温度和p H值分别为60℃和9,在60℃以下保持100 h酶活仍保持在80%以上,在p H5.0-10.0之间活性稳定,对甲醇、乙醇等有机溶剂耐受性好。

洋葱伯克霍尔德氏菌CAS19嗜铁素合成相关基因cepR的克隆及生物信息分析

本研究采用PCR方法克隆了洋葱伯克霍尔德氏菌CAS19嗜铁素合成相关基因cepR,并对cepR基因编码蛋白的结构和功能进行生物信息学分析和预测。同源性分析表明,CAS19的cepR核苷酸序列与Burkholderia cepacia LMG1222cepR基因的同源性为99%;cepR基因全长768bp,包含一个完整的231bp的开放阅读框架,编码239个氨基酸;该基因编码蛋白分子量为26.59kD,理论的等电点为5.55,含有一个LuxR型HTH结构域,在氨基酸残基的不同区域分布有酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪氨酸激酶磷酸化位点、N-肉豆蔻酰化位点和N-糖基化位点,还有一个明显的跨膜结构。本研究结果将为洋葱伯克霍尔德氏菌嗜铁素合成相关研究提供调控基因信息和参考依据,并为其进一步开发和利用奠定基础。

洋葱伯克霍尔德氏菌Lu10-1产生抗菌活性物质的发酵培养基和发酵条件优化

洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)Lu10-1是从桑叶中分离得到的一株具有抗菌及促进植物生长等多种生物学功能的内生细菌。利用基于统计学的响应面法(response surface methodology,RSM)对影响该菌产生抗细菌活性物质的发酵培养基组成和发酵培养条件进行了优化。部分重复因子试验表明,酵母浸粉和氯化钠是培养基组分中的主要影响因子,其中酵母浸粉为正效应,氯化钠为负影响;结合最陡爬坡路径逼近最大响应区域和中心组合设计及响应面分析,确定了培养基中主要配方的最佳质量浓度为蔗糖17.0 g/L、酵母浸粉5.855 g/L、氯化钠4.519 g/L、磷酸二氢钾0.2 g/L。通过PB(plackeet-burman)试验发现接种量和发酵温度是该菌株产生抗菌活性物质发酵条件中的主要影响因子,经中心组合设计法优化的最佳发酵条件为:接种量0.027 7 mL/mL,摇瓶装液量100 mL,发酵温度30.29℃,培养基初始pH6.2,培养时间42 h。

洋葱伯克霍尔德氏菌产邻苯二酚2,3-双加氧酶的研究

对洋葱伯克霍尔德氏菌L 68生长及产邻苯二酚2,3 双加氧酶(C23D)的条件进行了研究,其最适产酶pH7.2;最适生长温度30～35℃;最适培养时间48h;苯酚浓度0.09%最有利于菌体产酶.对菌株L 68产生的C23D酶进行了纯化,超声波破碎后的细胞提取液经硫酸铵分级沉淀、DEAESepharoseFastFlow层析、Hydroxyapatite层析、SephadexG 150层析后,收率为20%,酶比活力提高了230倍.SDS PAGE检测得到了分子量为(34±1)kDa的蛋白.

洋葱伯克霍尔德氏菌L68邻苯二酚2,3-双加氧酶基因克隆、表达和纯化

采用自行设计的引物,从洋葱伯克霍尔德氏菌L68中PCR扩增得到phnE(邻苯二酚2,3-双加氧酶)基因,亚克隆到高表达载体pET 32a上,转入表达菌株中。经双向测序,证实构建过程中未出现突变。重组子经IPTG诱导后,可以表达有活性的重组双加氧酶。选择26℃进行重组蛋白诱导。薄层扫描显示,表达重组蛋白总量最高可占总蛋白的64.92%。利用金属螯合层析对重组蛋白进行了一步纯化,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白纯度达到95%。

洋葱伯克霍尔德菌复合群部分菌株基于基因组的物种水平重鉴定

目的:基于全基因组序列信息分析洋葱伯克霍尔德复合群细菌的分类情况。方法:构建基于recA基因全长序列、7个看家基因片段串联的系统发生树,进行菌株全基因组平均核酸一致性(ANI)值比较,分析各菌株分类情况。结果:获得了recA单基因和7个看家基因片段串联的系统发生树,有5株细菌在系统发生树上的位置与其当前鉴定种的进化分支存在较大差异,全基因组ANI比较显示其与所在进化树分支种的相似性更高。结论:纠正了5株细菌错误的种鉴定,提示公共数据库中该复合群细菌的种鉴定信息需要进一步分析和纠正。

洋葱伯克霍尔德氏菌L68双加氧酶区基因克隆及序列分析

克隆洋葱伯克霍尔德氏菌L68双加氧酶区基因并对其进行序列分析。采用邻苯二酚喷洒方法从洋葱伯克霍尔德氏菌L68的基因文库中筛选到了1株含有双加氧酶区基因的重组子,其重组质粒命名为pB2k。重组质粒pB2k含有8030bp的L68基因片断,经BLAST比对,该片断含有11个与已报道的ORF相近的ORF。在该片断的5’端,ORF1和ORF2分别编码两个转移酶基因,tomA1t、omA2t、omA3和tomA4编码酚羟化酶组份,tomA5编码氧化还原酶,phnT编码铁氧还蛋白,phnE编码邻苯二酚2,3-双加氧酶,ORF3编码未知功能蛋白,phnG编码部分2-羟粘糠酸半醛脱氢酶。

洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)及干扰菌在不同增菌培养基中的生长研究

目的:考察Bcc以及Bcc与干扰菌的混合物在不同的增菌培养基中能否生长和增殖;探讨不同的Bcc菌种对增菌培养基的营养需求和抗生素的耐受是否存在差异。方法:将Bcc的代表菌株、干扰菌以及Bcc与干扰菌的混合物分别接种至TSB、10倍稀释的TSB、添加10 mg·L^(-1)庆大霉素的TSB和添加250000 U·L^(-1)多粘菌素B的TSB中培养,划线分离至选择性培养基上观察结果,并对可疑菌落进行分离和鉴定。结果:只接种Bcc的4种增菌培养基均能使之良好地增殖。低量的Bcc(约102 cfu)与高量的干扰菌(104 cfu)的混合接种,除了神秘伯克霍尔德菌CMCC(B)23010外,4种增菌培养基能使Bcc增殖并被检出。结论:添加抗生素的TSB与未添加抗生素的相比没有表现出明显的优势。TSB可以作为Bcc检验时的增菌培养基使用。生长缓慢且活力弱的Bcc菌株在特定条件下有可能会被漏检。

水分活度对洋葱伯克霍尔德菌群生长的影响

研究不同调节剂作用下洋葱伯克霍尔德菌群(Burkholderia cepacia complex,Bcc)最低生长水分活度(water activity,Aw),及Aw对其生长曲线的影响。以氯化钠、甘油、蔗糖为调节剂,配制一系列Aw不同的胰酪大豆胨液体培养基,将3株Bcc分别接种其中32.5℃培养72 h,全自动生长曲线分析仪每30 min测量1次OD 600,绘制生长曲线。结果显示,氯化钠组,当Aw<0.978时3株Bcc均不生长;甘油组,当Aw<0.944时,3株Bcc均不生长,Aw=0.944时仅20170801-1生长;蔗糖组,当Aw<0.971时,3株Bcc均不生长,Aw=0.971时仅20180108-11生长。随着Aw降低,可测量时间(time to detection,TTD)延长;在Aw≥0.988时,生长曲线峰值、斜率随Aw变化不明显,但随着Aw继续降低,生长曲线峰值、斜率则明显下降。结果表明,Bcc在不同调节剂作用下最低生长Aw为0.978(氯化钠)、0.944~0.955(甘油)、0.971~0.978(蔗糖);在氯化钠和蔗糖作用下;Bcc最低生长Aw接近,与之相比甘油作用下则更低;随Aw降低,TTD延长,曲线峰值及斜率整体呈下降趋势。

洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)的分类鉴定研究进展

目的:探讨适用于药品微生物控制中的洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)的鉴定策略。方法:结合药品微生物控制中对Bcc的鉴定和分型需求,对目前应用较为广泛的微生物鉴定技术的特点和鉴定或分型能力进行阐述和讨论,提供满足不同鉴定水平要求的鉴定策略。结果:对于Bcc,不同的鉴定方法能达到的鉴定水平存在差异。手动/自动化的生化鉴定系统可达到属/菌群水平的准确鉴定;基质辅助激光解析电离飞行质谱(MALDI-TOF MS)以及16S r RNA序列分析技术可达到菌群的准确鉴定;看家基因如rec A或his A等的序列分析,基本可达到菌种水平的鉴定,必要时,可补充多位点序列分型(MLST)进行确认。MLST、核糖体分型(Ribotyping)或全基因组测序(WGS)技术则适用于菌株水平的分型和溯源。结论:明确不同的鉴定技术对于Bcc的鉴定能力和应用特点,针对不同的鉴定需求给出相应鉴定方法的建议,为在实际应用中涉及Bcc检验、鉴定和溯源分析的生产企业、检验人员提供参考和借鉴。

洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)的选择和分离培养基研究

目的:对现有洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)选择性培养基配方进行优化和调整,以获得更优的选择和分离培养效果,提高Bcc的检出效率,形成《中国药典》拟收载Bcc检查法中的选择和分离培养基。方法:调整选择性培养基营养成分和指示剂组分,使用分离自制药环境及产品的Bcc菌株,通过计数回收、表型观察和生长曲线试验等方法,从选择性培养基的促生长能力、指示特性、抑制能力几方面评估其配方优化后的结果。结果:优化获得的Bcc选择性培养基(BCCSA),对Bcc菌株的回收优于其他选择性培养基,生长曲线试验结果也表明Bcc菌株在BCCSA中的生长速率更快并更早到达生长稳定期;BCCSA对Bcc生长的指示特性相较于其他培养基更好,表现为培养基颜色变化更为明显,菌落颜色更易观察;对于美国药典中要求的抑制特性试验菌株,BCCSA可满足其抑制能力要求。结论:综合而言,BCCSA表现出更优的促生长能力和指示特性,可作为《中国药典》拟收载Bcc检查法中的选择和分离培养基。

《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中标准菌株的稳定性研究

目的:应用现有微生物分类鉴定技术手段,对《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中所选用的标准菌株进行冻存及传代稳定性考察。方法:选取美国药典USP43-NF38 Bcc检查法中的一株Bcc标准菌株ATCC25416为对照菌株。以3株拟收载标准菌株和1株对照标准菌株为试验菌株,分别对这些试验菌株冻存0.5年、1年、2年的样本及连续6代的传代样本进行菌落表型观察、Biolog生化鉴定分析、16S rRNA基因测序及Ribo Printer全自动基因指纹图谱分析,并使用Bio Numerics 7.6对核糖体图谱数据进行聚类分析。结果:试验菌株在经冻存及传代后,各菌株表型无明显差异;菌株的Biolog生化鉴定结果虽略有差异,但菌株关键生化代谢属性稳定,其鉴定结果均属Bcc;同时,各菌株的16S rRNA测序结果一致;核糖体带型相似值均大于0.95。结论:在本研究考察的冻存时间及传代次数内,3株《中国药典》洋葱伯克霍尔德菌群检查法拟收载的标准菌株的表型、基因型相对稳定。

洋葱伯克霍尔德菌复合体及其耐药性

洋慧们克霍尔德菌复合体(BCC)是一组基因型不同、表型相近的细菌,上世纪80年代作为一种重要的临床病原菌尤见于囊性纤维化和慢性肉芽肿病患者。BCC可在患者之间传播且对多种抗生素高度耐药,现行治疗方法尚无法根治BCC引起的感染。本文简要综述BCC及其耐药性、治疗现状及潜在药物治疗靶点开发。