基于壳聚糖纳米颗粒的基因枪法转化洋葱细胞研究

以交联法制备壳聚糖纳米颗粒,用透射电子显微镜和Zeta电位仪对壳聚糖纳米颗粒进行表征,发现颗粒呈球形,粒径约为50 nm,微球表面光滑、球形圆整、颗粒比较均匀、分散性好,电位约为11.1 mv;琼脂糖凝胶电泳结果显示,壳聚糖纳米颗粒能有效地结合质粒DNA,并能保护所结合的DNA防止DNase I的酶切;将含GFP基因的壳聚糖纳米颗粒复合物使用基因枪转化洋葱表皮细胞,在倒置荧光显微镜下观察,发现细胞表达了绿色荧光蛋白,表达效率为8%.

工业废水对洋葱细胞遗传损伤的研究

研究工业废水对洋葱细胞遗传物质的损伤作用。采用单细胞凝胶电泳技术和微核试验,对用体积分数分别为40%,60%,80%,100%的工业废水处理过的洋葱根尖细胞进行拖尾率和微核率的测定,并观察在不同时间处理下,细胞核中物质的受损情况。结果显示,工业废水对洋葱根尖细胞造成了一定的DNA损伤,废水浓度越高,处理时间越长,细胞的拖尾率越高。在染毒8d时,工业废水体积浓度100%组的细胞拖尾率达到0.69%,与阴性对照组比较,差异极显著。细胞微核率随着废水浓度的升高而升高,在染毒8d时,100%浓度组的微核率达到4.80%,而处理时间对微核率的影响不明显。研究表明洋葱细胞可以用作单细胞凝胶电泳监测工业废水污染的检测细胞。

手机显微摄影在生物实验中的应用——以观察洋葱细胞的微观视界为例

利用手机和普通生物显微镜组合,对生物实验材料洋葱细胞进行显微拍照,相对于传统方法更易于掌握,且节省成本;通过学生的亲身体验、动手操作,充分利用实验、媒介资源,实现信息共享与交流,有效落实三维目标,增强课堂教学效率。

洋葱细胞核仁中DNA的原位位置和排布构型

真核细胞核仁中ＤＮＡ的原位位置及排布构型是长期以来未能解决的问题．以洋葱细胞为研究材料，应用电子显微镜常规技术和ＤＮＡ细胞化学特异染色技术，观察并分析了洋葱细胞核仁的超微结构以及核仁内 ＤＮＡ的分布和特征；并进一步对ＮＡＭＡ－Ｕｒ ＤＮＡ特异染色方法进行了改进，从而在原位水平对核仁中ＤＮＡ的位置以及排布构型进行了直观的观察，研究结果揭示出洋葱细胞核仁中ＤＮＡ主要位于ＦＣ与ＤＦＣ的交界处，并呈现出环绕ＦＣ排布的构型．

根癌农杆菌介导的GFP在洋葱表皮细胞定位研究

采用根癌农杆菌介导的方法,以受控于CaMV35S启动子的携带有GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1300-35S-GFP转化洋葱表皮细胞.荧光显微镜下观察结果显示,GFP基因在经浸染和共培养后的洋葱表皮细胞中得到了表达,绿色荧光分布在细胞核和细胞质中,为进一步研究新基因的亚细胞定位和瞬时表达奠定了基础.

洋葱内表皮细胞中DNA和RNA染色方法的改进

目的改进洋葱内表皮细胞中DNA和RNA的染色方法。方法使用固定液固定后,以不同浓度的甲基绿派洛宁混合染色液对洋葱内表皮细胞进行染色处理,与传统方法对比,观察染色效果。结果用甲醇冰醋酸固定液固定后,洋葱内表皮细胞不会发生质壁分离,更容易染色;甲基绿与派洛宁的浓度比为3∶2和1∶1时能在细胞中更加分明地将细胞核染成蓝绿色,将细胞质和核仁染成红色。结论用甲醇冰醋酸固定液固定,甲基绿与派洛宁的浓度比为3∶2至1∶1时能得到较好的实验效果。

用绿色荧光蛋白和洋葱表皮细胞检测拟南芥rd29A基因启动子活性的方法

将rd29A基因的启动子与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合在一起,构建成植物表达载体,并以CaMV35S启动子驱动的GFP基因的植物表达载体为对照,用基因枪介导法转化置于4种类型培养基上的洋葱表皮细胞。对其进行不同温度下的培养,16h后观察GFP基因瞬时表达水平的结果表明,rd29A启动子对高盐和脱水逆境的响应较温度显著,特别是在含PEG6000的培养基上,细胞无破损,绿色荧光强烈,适合于GFP的瞬时表达。而高盐由于易导致细胞出现离子毒害,不宜作为GFP瞬时表达的培养基。

工业废水诱发的洋葱根尖细胞有丝分裂染色体畸变与微核的测定

用工业废水对洋葱根尖染毒，对其诱发的根尖细胞有丝分裂期染色体畸变、微核测定表明，处理样品有丝分裂过程中存在着大量的畸变类型，主要表现为多极分裂、染色体桥、染色体片段、滞后染色体以及微核的产生。

Ca^(2+)对洋葱内表皮细胞凋亡的影响

选择洋葱为实验材料,研究不同浓度的Ca^(2+)在不同处理时间下对洋葱鳞茎内表皮细胞凋亡的影响.结果表明:不同浓度的Ca^(2+)处理洋葱鳞茎内表皮1h后就出现细胞凋亡现象,随着Ca^(2+)浓度的升高及处理时间的延长,细胞凋亡现象更加明显,细胞凋亡率上升,细胞内丙二醛含量也上升.这表明在一定的Ca^(2+)处理浓度与处理时间作用下,洋葱鳞茎内表皮细胞形态、细胞凋亡率及细胞内丙二醛含量均受到不同程度地影响.

0.2MeV中子照射洋葱萌发种子后根尖细胞微核诱发率的研究

目的了解单能中子的相对生物效应。方法通过由Schenkel型加速器产生的0.2MeV单能中子以及60Coγ射线照射洋葱萌发种子,观察单位剂量的两种辐射在洋葱根尖细胞中微核诱发率的差异。结果0.2MeV单能中子单位剂量的微核诱发率为(133.0±6.4)%Gy-1;60Coγ射线单位剂量的微核诱发率为(3.59±0.19)%Gy-1。以60Coγ射线为参考辐射,0.2MeV单能中子照射洋葱萌发种子后在根尖细胞中诱发微核的相对生物效应(RBE)值为37.0±2.7。结论以60Coγ射线为参考辐射,0.2MeV单能中子照射洋葱萌发种子后在根尖细胞中诱发微核的RBE值高达37.0±2.7。因此,为更好地解明具有高线能传输(LET)的中子的生物效应机制,以及放射治疗的基础研究提供了一种较好的手段。

钙离子、铝离子及过氧化氢处理对洋葱内表皮细胞骨架影响的初步研究

为了解植物细胞骨架在离子应激及氧化损伤时细胞骨架变化情况,以洋葱为实验材料,使用0.05、0.1、0.15 mol·L-1Ca Cl2处理洋葱内表皮细胞2 h;0.01、0.025、0.05 mol·L-1 Al Cl3处理10 min;0.01、0.025、0.05 mol·L-1 H2O2处理2 h,观察这三种因素处理后洋葱细胞骨架变化情况。结果表明:随着钙离子浓度的升高,洋葱内表皮细胞的细胞质骨架解聚,细胞核消失;铝离子浓度越高,细胞质骨架越少,受损越严重,并出现边极化现象;随过氧化氢浓度升高,细胞骨架解聚,低浓度的过氧化氢即可造成细胞骨架破坏。

分别用空气、O_2、N_2、CO_2加压对洋葱根尖细胞的影响初探

初次研究了用空气、O_2、N_2、CO_2加压对洋葱(Allium cepa L.)根尖细胞的影响,发现洋葱根尖经不同气体加压处理后,其间期细胞和分裂期细胞的形态和结构有显著的变化。在分裂间期的细胞中,有的细胞核出芽一形成核上小核;有的细胞核分解,形成数个微核。在分裂期的细胞中,染色体出现各种畸变(如缺失、断片、染色体环、双着丝点染色体等);染色体的数目亦有变化;有丝分裂时不均等分裂,染色体桥,落后染色体也大量存在。实验表明,气压(空气、O_2、CO_2、N_2)对间期细胞和分裂期细胞的结构及行为有影响。不同的气体成分对间期细胞和分裂期细胞结构和行为的影响程度不同。

洋葱根尖细胞有丝分裂实验改进

洋葱根尖细胞有丝分裂实验是中师生物教学的一个基础实验 .由于教材提供的实验方法存在一些弊端 ,致使该实验常常达不到预期效果 .通过对本实验各个环节的认真研究 ,探讨出了一种新的实验操作方案 。

表现性评价在高中生物实验教学中的实施——以“观察洋葱表皮细胞的质壁分离及复原”实验为例

生物学是一门以实验为基础的自然科学,所以实验在高中生物教学中占有重要位置,为保证实验教学质量,教师应慎重选择教学方法。借助表现性评价可以激发学生学习兴趣,帮助学生培养自主合作学习意识,提高学生实验操作的规范性。文章以“观察洋葱表皮细胞的质壁分离及复原”实验为例,对表现性评价的应用方法作了详细介绍。

“观察洋葱表皮细胞的质壁分离及质壁分离复原”的实验改进

基于“观察洋葱表皮细胞的质壁分离及质壁分离复原”实验中紫色外表皮取材困难的问题,利用光照处理,获得紫色内表皮,解决问题,简化实验.利用黑藻叶肉细胞及番茄果肉圆粒状细胞进行实验拓展,观察不同材料质壁分离的现象,巩固渗透概念的理解.

甘露糖外切酶的细胞生物学定位研究

用不同试剂从西红柿种子提取甘露聚糖外切酶,结果表明甘露聚糖外切酶只能被含高盐的缓冲液(0.1mol/LHepes+500mmol/LNaCl,pH7.0)提取出来,单独的低盐缓冲液(0.1mol/LHepes,pH7.0)或用非盐洗涤剂代替高盐则不能提取该酶.通过基因枪将甘露聚糖外切酶和GFP融合蛋白转化洋葱表皮细胞,发现转化了甘露聚糖外切酶和GFP融合蛋白的洋葱表皮细胞壁上有荧光,表明甘露聚糖外切酶可能定位在细胞壁上.

甜瓜谷氨酰胺合成酶的亚细胞定位

在一级结构上的差异,使得植物中胞质型(GS1)与质体型(GS2)谷氨酰胺合成酶(GS;EC 6.3.1.2)在生理水平上的作用及亚细胞结构中的定位不同。GS1通常定位于细胞质中,而GS2则多定位于细胞质体(叶绿体)中。为了对课题组从甜瓜(Cucumis melo L.)中克隆到的首个胞质型(M-GS1,GenBank登录号:DQ851867)及质体型(M-GS2,GenBank登录号:AY773090)GS基因的表达产物进行亚细胞定位,本研究在对其进行生物信息学分析和定位预测的基础上,通过将其各自的编码区分别与定位报告基因——黄色荧光蛋白YFP基因融合,构建重组植物表达载体(pA7-GS1-YFP和pA7-GS2-YFP),在基因枪轰击下转入洋葱内表皮细胞中瞬时表达,再用激光扫描共聚焦显微镜对各表达产物在洋葱内表皮细胞内的分布情况进行了观察和分析。2种手段分析结果均提示,M-GS1定位于细胞质中,而M-GS2则定位于细胞的质体中。对甜瓜谷氨酰胺合成酶进行精确亚细胞定位,为进一步探讨M-GS1和M-GS2在提高植物N素利用效率上的作用奠定了基础。

细胞活体染色可增加质壁分离实验效果

细胞活体染色可增加质壁分离实验效果湖南省华容县第二中学（４１４２１５）陈正昌“植物细胞的质壁分离与复原”这一实验，在教科书中指出：该实验材料是紫色的洋葱，不需染色可直接观察到液泡体积大小的变化。洋葱的表皮，实际上只有外表皮呈现出紫色，但对于初学者来说...

观察植物细胞质壁分离和复原实验的改革

我在指导高中学生做观察植物细胞质壁分离和复原实验时,采用了探索法教学法。这种方法有利于培养学生的技能。具体做法如下;

中学生物实验“植物细胞质壁分离和复原”的教学探索

植物细胞质壁分离和复原实验是人教版高中生物必修一第四章第一节'物质跨膜运输的实例'的探究实验,原名称为植物细胞的吸水和失水。在这之前,学生已经初步学习了渗透作用的原理以及渗透必备的几个条件,对半透膜、渗透作用和渗透作用的装置有了基本的认识。