用绿色荧光蛋白和洋葱表皮细胞检测拟南芥rd29A基因启动子活性的方法

将rd29A基因的启动子与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合在一起,构建成植物表达载体,并以CaMV35S启动子驱动的GFP基因的植物表达载体为对照,用基因枪介导法转化置于4种类型培养基上的洋葱表皮细胞。对其进行不同温度下的培养,16h后观察GFP基因瞬时表达水平的结果表明,rd29A启动子对高盐和脱水逆境的响应较温度显著,特别是在含PEG6000的培养基上,细胞无破损,绿色荧光强烈,适合于GFP的瞬时表达。而高盐由于易导致细胞出现离子毒害,不宜作为GFP瞬时表达的培养基。

根癌农杆菌介导的GFP在洋葱表皮细胞定位研究

采用根癌农杆菌介导的方法,以受控于CaMV35S启动子的携带有GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1300-35S-GFP转化洋葱表皮细胞.荧光显微镜下观察结果显示,GFP基因在经浸染和共培养后的洋葱表皮细胞中得到了表达,绿色荧光分布在细胞核和细胞质中,为进一步研究新基因的亚细胞定位和瞬时表达奠定了基础.

表现性评价在高中生物实验教学中的实施——以“观察洋葱表皮细胞的质壁分离及复原”实验为例

生物学是一门以实验为基础的自然科学,所以实验在高中生物教学中占有重要位置,为保证实验教学质量,教师应慎重选择教学方法。借助表现性评价可以激发学生学习兴趣,帮助学生培养自主合作学习意识,提高学生实验操作的规范性。文章以“观察洋葱表皮细胞的质壁分离及复原”实验为例,对表现性评价的应用方法作了详细介绍。

“观察洋葱表皮细胞的质壁分离及质壁分离复原”的实验改进

基于“观察洋葱表皮细胞的质壁分离及质壁分离复原”实验中紫色外表皮取材困难的问题,利用光照处理,获得紫色内表皮,解决问题,简化实验.利用黑藻叶肉细胞及番茄果肉圆粒状细胞进行实验拓展,观察不同材料质壁分离的现象,巩固渗透概念的理解.

Ca^(2+)对洋葱内表皮细胞凋亡的影响

选择洋葱为实验材料,研究不同浓度的Ca^(2+)在不同处理时间下对洋葱鳞茎内表皮细胞凋亡的影响.结果表明:不同浓度的Ca^(2+)处理洋葱鳞茎内表皮1h后就出现细胞凋亡现象,随着Ca^(2+)浓度的升高及处理时间的延长,细胞凋亡现象更加明显,细胞凋亡率上升,细胞内丙二醛含量也上升.这表明在一定的Ca^(2+)处理浓度与处理时间作用下,洋葱鳞茎内表皮细胞形态、细胞凋亡率及细胞内丙二醛含量均受到不同程度地影响.

钙离子、铝离子及过氧化氢处理对洋葱内表皮细胞骨架影响的初步研究

为了解植物细胞骨架在离子应激及氧化损伤时细胞骨架变化情况,以洋葱为实验材料,使用0.05、0.1、0.15 mol·L-1Ca Cl2处理洋葱内表皮细胞2 h;0.01、0.025、0.05 mol·L-1 Al Cl3处理10 min;0.01、0.025、0.05 mol·L-1 H2O2处理2 h,观察这三种因素处理后洋葱细胞骨架变化情况。结果表明:随着钙离子浓度的升高,洋葱内表皮细胞的细胞质骨架解聚,细胞核消失;铝离子浓度越高,细胞质骨架越少,受损越严重,并出现边极化现象;随过氧化氢浓度升高,细胞骨架解聚,低浓度的过氧化氢即可造成细胞骨架破坏。

观察洋葱表皮细胞实验的改进

在实验过程中,教师可以想办法培养学生的竞争意识与创新意识。竞争意识的培养可以通过组间或个人间进行比赛的形式获得,如比比谁先观察到玻片标本上的东西。创新意识的培养主要体现在实验的设计方面,不拘泥于书本上的方案,根据现有条件重新设计方案。在此过程中,通过评选最佳方案又可以培养学生的竞争意识。诸如此类的情感教育,完全可以让学生全面体会到实验教学的功效,在情感的指引下唤起学生内部的学习动机,巩固实验的浓厚兴趣。

甘露糖外切酶的细胞生物学定位研究

用不同试剂从西红柿种子提取甘露聚糖外切酶,结果表明甘露聚糖外切酶只能被含高盐的缓冲液(0.1mol/LHepes+500mmol/LNaCl,pH7.0)提取出来,单独的低盐缓冲液(0.1mol/LHepes,pH7.0)或用非盐洗涤剂代替高盐则不能提取该酶.通过基因枪将甘露聚糖外切酶和GFP融合蛋白转化洋葱表皮细胞,发现转化了甘露聚糖外切酶和GFP融合蛋白的洋葱表皮细胞壁上有荧光,表明甘露聚糖外切酶可能定位在细胞壁上.

中学生物实验“植物细胞质壁分离和复原”的教学探索

植物细胞质壁分离和复原实验是人教版高中生物必修一第四章第一节'物质跨膜运输的实例'的探究实验,原名称为植物细胞的吸水和失水。在这之前,学生已经初步学习了渗透作用的原理以及渗透必备的几个条件,对半透膜、渗透作用和渗透作用的装置有了基本的认识。

甜瓜谷氨酰胺合成酶的亚细胞定位

在一级结构上的差异,使得植物中胞质型(GS1)与质体型(GS2)谷氨酰胺合成酶(GS;EC 6.3.1.2)在生理水平上的作用及亚细胞结构中的定位不同。GS1通常定位于细胞质中,而GS2则多定位于细胞质体(叶绿体)中。为了对课题组从甜瓜(Cucumis melo L.)中克隆到的首个胞质型(M-GS1,GenBank登录号:DQ851867)及质体型(M-GS2,GenBank登录号:AY773090)GS基因的表达产物进行亚细胞定位,本研究在对其进行生物信息学分析和定位预测的基础上,通过将其各自的编码区分别与定位报告基因——黄色荧光蛋白YFP基因融合,构建重组植物表达载体(pA7-GS1-YFP和pA7-GS2-YFP),在基因枪轰击下转入洋葱内表皮细胞中瞬时表达,再用激光扫描共聚焦显微镜对各表达产物在洋葱内表皮细胞内的分布情况进行了观察和分析。2种手段分析结果均提示,M-GS1定位于细胞质中,而M-GS2则定位于细胞的质体中。对甜瓜谷氨酰胺合成酶进行精确亚细胞定位,为进一步探讨M-GS1和M-GS2在提高植物N素利用效率上的作用奠定了基础。

第4章 生物体的结构层次 第1节 细胞分化形成组织(第1课时)

一、教学分析本节内容主要涉及初中生物新课标的第二个主题生物体的结构层次。在前一章中,学生已经学习了细胞是生物体结构和功能的基本单位,本节的学习活动要让学生掌握细胞能进行分裂、分化,以生成更多的不同种类的细胞用于生物体的生长、发育和生殖。学生要了解细胞分化而形成组织,能识别植物的几种主要组织以及人体(动物体)的基本组织.

利用洋葱鳞叶表皮细胞观察植物细胞结构实验的改进

以洋葱表皮细胞为研究材料,通过中性红液泡染色和质壁分离实验相结合,将能更清晰地观察到细胞壁,细胞质膜,细胞质,液泡膜,液泡,细胞核,核仁等结构,达到光学显微镜下观察植物细胞基本结构的教学目的。改进后的实验大大提高了利用洋葱表皮细胞观察植物细胞结构实验的教学效果,同时可以通过观察不同部位液泡体积变化,了解植物细胞的动态发育,使学生掌握了更多的知识点。

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验的改进

在“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验教学中，选择口腔上皮细胞作为实验材料，有滴液、取材、涂片、烘干等十几个操作步骤，其中包含的许多细节决定实验结果的成败；选择洋葱内表皮作为实验材料，教材中没有说明具体的操作细节，目的是让学生自己进行实验探究。通过改进实验操作细节，可使操作更简便，染色效果更明显，实验成功率更高。

探究植物细胞质壁分离及自动复原的情况

有大液泡的植物细胞能在一定条件下发生质壁分离及复原现象。若植物细胞能够自动吸收外界溶液中的物质,已发生质壁分离的植物细胞就可以自动复原。反复使用不同浓度的硝酸钾溶液进行实验,并无法成功展示质壁分离复原现象。寻找能使自动复原现象明显的溶液才具有推广学生实验的教学意义。将洋葱外表皮细胞直接放在6.25%的甘油溶液中,观察质壁分离及自动复原情况,效果非常明显。

一堂有趣有益的科学课

“洋葱表皮细胞李竟然有晶体!”“太神奇了!”在中天北京小学办公部六(7)班的教师里,传来一阵阵惊叹声与欢呼声。正是六(7)班的同学们在进行关于“观察洋葱表皮细胞”的实验!是的,同学们翘首以盼的科学课终于到来了,同学们早已拿好书,一本正经地坐在座位上。

稀土Eu掺杂纳米TiO_2的荧光特性研究及其应用

以Eu2O3试剂为荧光前驱体,与钛酸正丁酯在酸-水溶液中发生溶胶-凝胶反应,制备了一种可作为荧光标记分子的Eu3+/TiO2荧光性纳米微粒,并对样品的形貌、组成及结构进行了表征。结果表明,纳米粒子的平均粒径5nm。用468nm激发光源激发样品,荧光强度随着Eu3+的掺杂含量0、0.5%、1%、2%、3%、4%先升高后降低,当掺杂含量为2%时,荧光强度最强。采用倒置荧光显微镜观察了Eu3+/TiO2纳米荧光探针在洋葱表皮细胞膜上聚集受激发射荧光行为。

未曾预约的美丽——质壁分离实验图像不规则的再探究

在探究＂植物细胞吸水和失水＂实验中,学生对显微镜下质壁分离图像不规则提出质疑。教师因势利导,把实验意外开发为生成性教学资源,学生利用数码显微镜找到了原因,探究出质壁分离适宜的蔗糖浓度。学生体验了科学探究的过程,掌握了科学探究的一般方法。

马铃薯Y病毒辅助成分蛋白酶与加工番茄OPA3-like蛋白结合及其定位研究

为了研究加工番茄OPA3-like蛋白与马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的辅助成分蛋白酶(helper component proteinase,HC-Pro)的相互作用,进行了2种蛋白的结合及其定位研究。通过PCR的方法从加工番茄中克隆OPA3-like基因,同时利用Blast方法对其分析,进行了OPA3-like蛋白基因氨基酸序列同源性分析。通过构建双分子荧光互补载体pSPYCE-35S-OPA3-like和pSPYNE-35S-HC-Pro,利用农杆菌介导法共侵染洋葱表皮细胞60 h后,在共聚焦显微镜下观察洋葱表皮细胞中的黄色荧光。结果显示:加工番茄OPA3-like基因ORF长510 bp,编码169个氨基酸,编码蛋白属OPA3蛋白家族。激光共聚焦显微镜下可观察到沿细胞膜呈小泡状分布黄色荧光,说明PVY的HC-Pro蛋白与加工番茄OPA3-like蛋白结合并且共定位在细胞膜附近。这为进一步研究PVY的HC-Pro蛋白与加工番茄OPA3-like蛋白的相互作用机制奠定了一定的基础。

拟南芥中ELO家族同源基因的克隆与表达

采用RT-PCR方法,克隆了拟南芥中可能参与超长链脂肪酸合成的ELO家族同源基因At1g75000、At4g36830和At3g06470的全长cDNA,构建其与eGFP基因融合的植物表达载体At1g75000∷eGFP∷NOS/pPZP211、At4g36830∷eGFP∷NOS/pPZP211和At1g06470∷eGFP∷NOS/pPZP211,并利用基因枪介导法将构建的植物表达载体转入洋葱表皮细胞,并在荧光显微镜下检测到了绿色荧光信号。为进一步研究拟南芥中AtELO家族同源基因的功能奠定基础。

几个重要生物实验的改进

本文通过实践摸索,发现几个重要生物实验中存在的弊端,并探索出一些行之有效,简单易行的改进方法,给同行提供参考。