红曲霉固态发酵产洛伐他汀工艺条件的研究

该文通过对洛伐他汀生产菌红曲霉S-01固态发酵工艺条件的研究,确定了固态发酵的最佳工艺条件:发酵培养基配方为大米2500 g、甘油75 g、蛋白胨175 g、初始含水量40%,按装载量350 g/1.5 L进行装瓶,接种量25%,于30℃发酵7 d(前发酵),23℃发酵33 d(后发酵),经过优化后的红曲固态发酵产洛伐他汀的含量达到14.38 mg/g,酸式(开环)洛伐他汀含量为9.35 mg/g,酸式(开环)洛伐他汀占比为65.02%。该研究对功能红曲的工业化生产有一定的指导意义。

高产色素和洛伐他汀红曲菌株的筛选、鉴定及发酵条件研究

红曲色素(Monascus pigments,MPs)和洛伐他汀(Lovastatin)是两种具有极高营养、保健和药用价值的红曲菌代谢产物,寻找挖掘高产MPs和洛伐他汀的红曲菌,具有重要实践意义。从土样中分离得到红曲菌A1和A2,在对其进行分类鉴定的基础上,采用分光光度法对MPs的色价和洛伐他汀含量进行测定,并通过单因素和正交试验对发酵培养基进行了优化。结果表明:菌株A1和A2隶属于紫色红曲菌(Monascus purpureus)。在基础培养基中,菌株A1和A2的MPs色价分别为3287.11、2561.30 U/g,洛伐他汀含量为31.35、33.74μg/mL。通过L_(16)(4^(5))正交试验优化培养基,获得产MPs最优配方为乳糖20 g/L、KNO_(3)5 g/L、KH_(2)PO_(4)4 g/L、KCl 2 g/L、Na_(3)C_(6)H_(5)O_(7)2 g/L,产洛伐他汀最优配方为乳糖20 g/L、KNO_(3)15 g/L、KH_(2)PO_(4)2 g/L、KCl 6 g/L、Na_(3)C_(6)H_(5)O_(7)4 g/L。在最优培养基中A1菌株总色价可达15851.98 U/g,提高了3.82倍,洛伐他汀含量为122.96μg/mL,提高了2.92倍;A2菌株总色价为8933.58 U/g,提高了2.49倍,洛伐他汀含量达198.26μg/mL,提高了4.88倍。该文为红曲菌资源库提供了优秀潜力菌株,为工业上大规模生产MPs和洛伐他汀奠定了理论基础并提供了实际方案。

血脂康胶囊中洛伐他汀不同处理方法对其生物利用度的影响

目的:探讨血脂康胶囊中洛伐他汀不同处理方法对其生物利用度的影响。方法:将血脂康胶囊中的洛伐他汀分别与无机盐、薄荷脑、甘油酯、卵磷脂复配,采用离体肠道穿透实验,研究各处理方法对洛伐他汀生物利用度的影响。结果:洛伐他汀与薄荷脑复配后的平均生物利用度最高;不同处理方法基本不产生基质效应,提取回收率均>90%,其中薄荷脑复配的回收率最高。相同处理方法下,不同温度洛伐他汀浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血脂康胶囊中的洛伐他汀分别与无机盐、薄荷脑、甘油酯、卵磷脂复配效果较好,可以提高药物成分的生物利用度,其中将洛伐他汀与薄荷脑复配的生物利用度最高。

双波长紫外分光光度法测定红曲中洛伐他汀(Lovastatin)的含量

：对紫外分光光度计测定组曲中洛伐他汀（Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）的方法进行研究。采用７５％乙醇对红曲中的Ｌｏｖｉｓｔａｔｉｎ超声提取２０ｍｉｎ。离心后用中性氧化铝柱层析吸附上清液中的色素．一定条件下Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ不被吸附而随着洗脱液流出．由于Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ在２４６ｎｍ、 ２５４ｎｍ两波长下其吸光度之差（Ａ２４６—Ａ２５４）正好能够代表一个特征吸收峰的峰高，并且经实验测定与其浓度的关系符合比尔定律．而红曲色素在此波长下△Ａ值极小，因此采用双波长紫外分光光度法能够排除样品经吸附层析分离后残存色素的干扰，完成对样品中Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ含量的定量测定．在本实验条件下６次重复测定加标样品的回收率为９７．５±１．３８％，变异系数为１．４％．样品中Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ的最低检测下限为０．６５μｍ／ｍｌ．利用本实验条件成功测定了三种红曲发酵制品中Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ的含量．同时测定加标回收率．结果看到实测样品的回收率都在９５％以上，标准偏差小于０．２．说明该方法具有良好的实用性．适用于中小企业对Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ产品的科研开发及产品质量控制．

一测多评法同时测定红曲茯苓片中洛伐他汀和洛伐他汀酸含量

目的:建立适于红曲茯苓片质量控制的洛伐他汀和洛伐他汀酸的一测多评含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,以洛伐他汀为对照,建立与其开环产物洛伐他汀酸的校正因子关系,同时对产品中洛伐他汀和洛伐他汀酸两种成分同时进行定量检测的一测多评方法。结果:阴性样品无干扰,样品检测方法的专属性良好,洛伐他汀和洛伐他汀酸在相应的线性范围内线性关系良好,R^(2)>0.9999,精密度和重复性RSD值均小于3%,加标回收率为在98.43%~103.18%之间。洛伐他汀对洛伐他汀酸的相对校正因子为0.9000;一测多评法测定三批红曲茯苓片中洛伐他汀酸的平均含量为0.3563 mg/g,外标法测定洛伐他汀酸的平均含量为0.3668 mg/g;洛伐他汀的平均含量为1.1113 mg/g,表明所构建的一测多评法可用于红曲茯苓片的多成分质量评价研究。结论:本研究建立的产品中洛伐他汀定量方法稳定准确,专属性强,为以红曲为原料的红曲茯苓片的质量控制和深度开发提供了科学依据。

土曲霉(Aspergillus terreus)产生洛伐他汀(lovastatin)的研究

从土曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ ＣＡ９５１发酵液中，分离出一种白色针状晶体，经质谱、紫外光谱、红外光 谱和核磁共振谱分析，与文献报道的洛伐他汀（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）基本一致。 Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ ＣＡ９５１经亚硝基胍诱变，选出 编号为ＣＡＮ １８７的突变株，其产生洛伐他汀的能力比ＣＡ９５１高６６％。摇瓶发酵实验研究了不同碳源、氮源和 水质对 ＣＡＮ１８７ 菌株产生洛伐他汀的影响，并进行了 ５００Ｌ发酵罐实验，发酵单位达９００ｍｇ／Ｌ左右。

国产洛伐他汀（Lovastatin）调血脂作用的实验观察

通过观察重庆制药五厂研制生产的洛伐他汀对由ＴｒｉｔｏｎＷＲ－１３３９所致的大鼠高脂血症的影响。灌服１０ｍｇ／ｋｇ的作用最为明显，可使因Ｔｒｉｔｏｎ升高的血清总胆固醇，低密度脂蛋白的含量显著降低（Ｐ＜０．０１），而使高密度脂蛋白含量显著升高（Ｐ＜０．０１），但对甘油三脂的含量无显著影响。

剑南春酒曲中高产洛伐他汀菌株的选育

研究从剑南春中酒曲中选育到一株高产洛伐他汀的霉菌。结合菌株的形态、生理生化特征和18SrDNA基因序列分析该菌株定性为紫红曲霉。通过固态发酵条件优化得出该菌株在温度30℃,培养10天,外加葡萄糖浓度1%,蛋白胨浓度1.5%时,该紫红曲霉菌株产洛伐他汀最高,可达135mg/kg。

洛伐他汀(Lovastatin)对鸡蛋和鸡血浆中胆固醇含量的影响

将44只新扬州鸡随机平均分成4组。对照组用基础日粮,试验组在饲喂基础日粮的同时分别添加0.015%、0.03%和0.06%的洛伐他汀(Lovastatin),研究洛伐他汀对鸡蛋和血浆中胆固醇含量的影响,试验期为5周。试验结果表明:洛伐他汀能显著降低产蛋鸡血浆和鸡蛋中胆固醇水平(P<0.05),但对产蛋率的影响不显著(P>0.05)。

相对校正因子法测定红曲米药材中洛伐他汀和开环洛伐他汀

目的通过相对校正因子同时测定红曲米药材中两种洛伐他汀的含量。方法以洛伐他汀为对照,通过高效液相色谱法建立该成分与开环洛伐他汀的相对校正因子,并通过相对校正因子计算开环洛伐他汀的量;同时为验证方法的准确性及适用性,比较17批红曲米药材外标法实测值与相对校正因子法的测定值。结果相对校正因子法得到的17批红曲米药材中洛伐他汀与开环洛伐他汀的总量与高效液相外标法测得的总含量值无显著性差异。结论相对校正因子法可以作为红曲米药材质量控制方法;该法以洛伐他汀一种对照品同时控制2种成分的量,节约了试验成本,为多指标成分中药材质量评价模式提供参考。

洛伐他汀调节NMDA受体功能减缓NMDA兴奋性毒性损害

目的:检测洛伐他汀(lovastatin,LOV)对N⁃甲基⁃D⁃天门冬氨酸(N⁃methyl⁃D⁃aspartate,NMDA)诱导的兴奋性毒性的神经保护作用并探讨LOV调节NMDA受体功能在神经保护中的潜在机制。方法:培养的大鼠原代神经元细胞分未处理组、LOV组、NMDA组、LOV+NMDA组、谷氨酸(glutamate,Glu)组及Glu+APV(一种特异性NMDA受体拮抗剂)组。免疫荧光染色检测神经元形态,TUNEL分析检测神经元凋亡,免疫印迹测定蛋白水平,生物素化法检测细胞表面受体。结果:①与NMDA组或Glu组少数幸存微管相关蛋白(microtubule⁃associated protein 2,MAP⁃2)阳性神经元相比,LOV+NMDA组和Glu+APV组MAP⁃2阳性神经元的数量明显增多,神经元树突的数目和长度均明显增加(P<0.001);②与NMDA组或Glu组TUNEL阳性细胞显著增多相比,LOV+NMDA组或Glu+APV组TUNEL阳性细胞显著减少(P<0.001);③与未处理组相比,NMDA组NMDA受体蛋白(N⁃methyl⁃D⁃aspartate receptor,NR2B)表达显著减少(P<0.001),而LOV预处理后增加NR2B蛋白表达(P<0.05);④生物素化法检测细胞表面受体显示,NMDA处理导致细胞表面大部分NR2B丢失(P<0.001),LOV预处理能显著减少NMDA诱导的细胞表面NR2B丢失(P<0.05)。进一步研究显示,NMDA处理后,NR2B在酪氨酸(tyrosine,Tyr)1472位点的磷酸化下降(P<0.05),LOV预处理显著恢复Tyr1472位点的磷酸化(P<0.05)。结论:LOV能减轻NMDA诱导的兴奋性毒性损害,这一作用可能与其影响NMDA受体亚单位NR2B的细胞内吞和/或胞内降解,进而调节NR2B表面分布有关。

红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响

为研究红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响,丰富洛伐他汀代谢调控机制。用ATMT和REMI法将gus-orf5融合基因转化红曲霉,并对ATMT法的共培养条件和REMI法的内切酶进行优化筛选,对获得的潮霉素抗性菌株进行GUS染色和PCR鉴定,并检测阳性菌株的洛伐他汀含量变化。结果筛选出20μg/mL潮霉素的培养基作为转基因红曲霉的抗性筛选浓度,补充1/10 LB的Co-IM共培养基有利于ATMT法转化,在REMI法中Xba I介导的转化效果较好。用ATMT和REMI法均获得抗性菌落,经PCR检测表明orf5和hyg基因均已导入红曲霉,GUS染色呈蓝色。过表达菌株的洛伐他汀含量比对照明显提高,高达36.89%。红曲霉过表达orf5有利于增加洛伐他汀的积累,为深入研究红曲霉orf5基因的功能提供参考。

飞行时间-高分辨质谱法分析红曲类食品中他汀类物质

采用飞行时间-高分辨质谱法对22批次保健食品和普通食品中他汀类物质进行了分析,并总结了其裂解规律.利用高效液相色谱法测定了保健食品和普通食品中洛伐他汀总含量,内酯型与酸型洛伐他汀的比例.结果表明,保健食品及普通食品D1,D2中他汀类物质含量较高,不同样品中内酯型与酸型洛伐他汀的总含量及比例不同;保健食品中洛伐他汀日服用量在国家规定的安全范围内;大部分普通食品中未检出他汀类物质.

洛伐他汀调控转化生长因子-β诱导的卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的研究洛伐他汀对卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭的影响及作用机制。方法该研究于2019年8月至2020年5月进行,体外培养SKOV3细胞。细胞计数(CCK-8)法检测(0、5、10、20、40、60µmol/L)洛伐他汀对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的SKOV3细胞增殖的影响;细胞划痕、Transwell实验、蛋白质印迹法(Western blotting)检测对照组、TGF-β(10µg/L)组、洛伐他汀(10µmol/L)组、洛伐他汀+TGF-β组SKOV3细胞的迁移、侵袭、上皮细胞间充质化(EMT)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路蛋白水平。结果与0µmol/L组(0.885±0.066、1.365±0.114、1.669±0.123)相比,5(0.746±0.059、1.365±0.114、1.669±0.123)、10(0.625±0.051、1.015±0.062、1.284±0.086)、20(0.518±0.044、0.856±0.067、1.101±0.081)、40(0.402±0.033、0.703±0.062、0.917±0.072)、60µmol/L(0.276±0.022、0.536±0.043、0.756±0.071)洛伐他汀呈浓度依赖性抑制TGF-β诱导的SKOV3细胞24 h、48 h和72 h增殖(P<0.05);与TGF-β(10µg/L)组相比,洛伐他汀逆转TGF-β诱导的SKOV3细胞迁移(212.341±20.523比357.962±32.632)、侵袭(114.362±10.963比179.635±15.432),抑制EMT,减少磷酸化p38(p-p38)蛋白水平(1.256±0.116比1.897±0.145)(P<0.05)。结论洛伐他汀可能通过调控p38MAPK信号通路抑制TGF-β诱导的SKOV3细胞迁移、侵袭、EMT。

添加有机酸对红曲发酵产洛伐他汀的影响

探讨了添加六种不同有机酸(苹果酸、乳酸、柠檬酸、琥珀酸、草酸、醋酸)对红曲发酵产洛伐他汀的影响。首先采用Plackett-Burman实验筛选出对红曲发酵产洛伐他汀具有显著影响的三个因子,即柠檬酸、草酸、醋酸,然后通过Box-Behnken响应面实验确定产洛伐他汀的最佳工艺。研究结果表明:柠檬酸添加量为1.86%,草酸添加量为0.58%,醋酸添加量为0.06%的条件下,洛伐他汀的含量为11.35 mg/g。

高效液相色谱法测定保健食品纳豆红曲茶多酚软胶囊中洛伐他汀的方法

目的:本文建立高效液相色谱法测定保健食品中(以纳豆红曲茶多酚软胶囊为例)洛伐他汀的方法。方法:样品经乙腈提取后,用液相色谱C18柱分离,二元流动相洗脱,238 nm波长下紫外检测器检测,测定精密度、准确度。结果:洛伐他汀在10~200μg·mL^(-1)线性关系良好,相关系数>0.9999,相对标准偏差为0.62%。当加标浓度为0.5 mg时,回收率为98.8%;当加标浓度为1.0 mg时,回收率为102.7%;当加标浓度为1.5 mg时,回收率为99.7%。结论:本方法检测灵敏度高、操作简单、定性定量准确、针对性强,为纳豆红曲茶多酚软胶囊质量控制和深度开发提供了科学依据。

他汀类药物治疗老年冠心病合并高血脂症的疗效及安全性对比

本研究旨在评估单硝酸异山梨酯配合瑞舒伐他汀钙、阿托伐他汀钙和洛伐他汀对老年冠状动脉心脏病患者并发高血脂症的治疗效果及安全性。方法 于在2021年3月至2022年7月期间研究了我院治疗的120位同时患有高血脂症和冠状动脉疾病的老年患者,他们被随机分为三组:A组(服用瑞舒伐他汀钙)、B组(服用阿托伐他汀钙)和C组(服用洛伐他汀),然后对比他们在治疗结束后的总体疗效、血脂水平以及副作用的发生情况。结果 A组的总有效率在统计上显著超过B组和C组(P<0.05),所有组别的血脂水平都有明显改善(P<0.05),其中A组改善最显著(P<0.05)。三组在治疗过程中的副作用发生频率在统计上不存在显著差异(P>0.05)。结论 他汀类药物在治疗老年冠状动脉疾病伴高血脂症方面具有显著效果,尤其是瑞舒伐他汀钙,不仅疗效显著,所需剂量较少,降脂效果优秀,且安全性较高。

红曲中洛伐他汀总量的测定方法

考察降脂红曲产品的安全性和功效性 ,测定洛伐他汀的总量比仅仅测定其内酯含量更为可取。本文建立了测定红曲中洛伐他汀总量的方法 ,并对方法的可行性进行了验证。采用HPLC方法 ,色谱柱 :C18柱(2 5 0mm× 4 60mm) ;流动相 :甲醇 :水 (72 :2 8) ,检测波长 :2 3 8nm ;流速 :1 0ml min;柱温 :室温 ,方法回收率98 3 % ,RSD =0 3 3 %。

产洛伐他汀紫色红曲霉发酵普洱茶初探

以晒青茶为原料,接种专利菌株紫色红曲霉(Monascus purpure)MPT13(专利号:201010182965.9)发酵普洱茶,设不接种菌株为对照。通过灭菌/不灭菌、菌种形态(固态菌、液态菌)、接种时间方式、发酵温度等因子的组合实验,研究该菌株在普洱茶发酵中产洛伐他汀的最佳条件。结果表明,对照样中均未检测到洛伐他汀,而接种菌株的茶样洛伐他汀含量为0-0.199mg/g,说明不同处理对菌株产洛伐他汀有不同影响。同时,接种该菌株进行发酵后,发酵茶样中的主要功能物质化学成分含量较对照样中的化学成分含量有所提高,具有传统普洱茶的品质风味,在香气和滋味方面有新的特点,具有明显的酯香。

HPLC法对不同来源红曲中洛伐他汀的定量分析

采用硅胶柱预处理－ＨＰＬＣ对自制组曲Ｈ－１８及市售组曲中的洛伐他汀进行了定量分析， 线性范围 ０．６５～５７．２μｇ／ｍＬ，ｒ＝０．９９９９，加样回收率为９６．４％，ＲＳＤ＝３． ６８％。结果表明，各地产 红由商品药材中有 ７种洛伐他汀未测出或只有痕量，５种含量甚微（０．０８８～０．５５１μｇ／ｇ生药），而 自制组曲Ｈ－１８的洛伐他汀含量最高，达５μｇ／ｇ生药。