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应用活体骨髓瘤细胞制备单克隆抗体
被引量:
4
1
作者
李永亮
田美娜
+2 位作者
卢曾军
杨苏珍
刘在新
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第11期63-66,共4页
目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2~3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/...
目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2~3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/0细胞进行融合做比较,分两组进行。比较两种方法的融合率以及两种方法制备出来的单克隆抗体的相对亲和力。结果:做了6次融合,实体瘤融合组融合率为70.4%,常规法融合组44.6%,两种方法制备单抗的相对亲和力均达到1∶100000以上。结论:利用活体实体瘤细胞进行融合能明显提高细胞融合率。
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关键词
单克隆抗
体
(MAb)SP2/0
细胞
活体骨髓瘤细胞
融合
下载PDF
职称材料
间接免疫荧光法筛选抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体及其性质的初步鉴定
2
作者
张梅
何金生
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2012年第11期1277-1277,共1页
目的利用活体骨髓瘤细胞与杂交瘤技术,采用间接免疫荧光分析法(IFA)筛选出更多可识别人呼吸道合胞病毒(RSV)的单克隆抗体,并对其体外性质进行鉴定,以期为RSV的被动免疫治疗以及临床诊断奠定基础。方法以RSV通过滴鼻途径免疫小鼠,同时采...
目的利用活体骨髓瘤细胞与杂交瘤技术,采用间接免疫荧光分析法(IFA)筛选出更多可识别人呼吸道合胞病毒(RSV)的单克隆抗体,并对其体外性质进行鉴定,以期为RSV的被动免疫治疗以及临床诊断奠定基础。方法以RSV通过滴鼻途径免疫小鼠,同时采用实体瘤技术体内制备骨髓瘤细胞。取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用IFA方法筛选经有限稀释法亚克隆获得的可稳定分泌抗RSV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA和Western blot等方法初步分析McAb对RSV蛋白的特异性结合能力,通过免疫酶法(IE)蚀斑减少中和实验和融合抑制实验分析McAb体外保护作用。结果获得4株稳定分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为2A7、3E10、1F10及3G4,经间接ELISA以及Westernblot初步鉴定,获得的4株单克隆抗体可特异性识别RSV蛋白,McAbs 2A7和3E10可分别识别融合糖蛋白(F)蛋白二聚体和单体,McAbs 1F10和3G4可识别黏附糖蛋白(G)蛋白。其中McAbs 2A7与1F10可以在体外抑制RSV对HEp-2细胞的感染,具有中和活性,同时具有融合抑制活性。结论利用IFA法成功筛选了能特异性识别RSV的4种单克隆抗体,初步鉴定显示两种单抗可分别识别F蛋白二聚体和单体,另两种单抗可识别G蛋白。IE法蚀斑减少实验显示两种单抗在体外具有中和活性和融合抑制活性,表明获得的单抗对RSV感染具有一定的预防作用。
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关键词
人呼吸道合胞病毒
间接免疫荧光
活体骨髓瘤细胞
单克隆抗
体
中和
活
性
融合抑制
活
性
下载PDF
职称材料
题名
应用活体骨髓瘤细胞制备单克隆抗体
被引量:
4
1
作者
李永亮
田美娜
卢曾军
杨苏珍
刘在新
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点实验室、国家口蹄疫参考实验室
河南省农业科学院动物免疫学重点实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第11期63-66,共4页
基金
国家“973”计划资助项目(2005CB523201)
文摘
目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2~3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/0细胞进行融合做比较,分两组进行。比较两种方法的融合率以及两种方法制备出来的单克隆抗体的相对亲和力。结果:做了6次融合,实体瘤融合组融合率为70.4%,常规法融合组44.6%,两种方法制备单抗的相对亲和力均达到1∶100000以上。结论:利用活体实体瘤细胞进行融合能明显提高细胞融合率。
关键词
单克隆抗
体
(MAb)SP2/0
细胞
活体骨髓瘤细胞
融合
Keywords
Monoclonal antibody (MAb)
SP2/0 cell
Live tumor
Cell fusion
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
间接免疫荧光法筛选抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体及其性质的初步鉴定
2
作者
张梅
何金生
机构
安徽医科大学免疫学教研室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2012年第11期1277-1277,共1页
基金
国家自然科学基金(编号:30972604)
北京市自然科学基金(编号:7092053)
文摘
目的利用活体骨髓瘤细胞与杂交瘤技术,采用间接免疫荧光分析法(IFA)筛选出更多可识别人呼吸道合胞病毒(RSV)的单克隆抗体,并对其体外性质进行鉴定,以期为RSV的被动免疫治疗以及临床诊断奠定基础。方法以RSV通过滴鼻途径免疫小鼠,同时采用实体瘤技术体内制备骨髓瘤细胞。取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用IFA方法筛选经有限稀释法亚克隆获得的可稳定分泌抗RSV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA和Western blot等方法初步分析McAb对RSV蛋白的特异性结合能力,通过免疫酶法(IE)蚀斑减少中和实验和融合抑制实验分析McAb体外保护作用。结果获得4株稳定分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为2A7、3E10、1F10及3G4,经间接ELISA以及Westernblot初步鉴定,获得的4株单克隆抗体可特异性识别RSV蛋白,McAbs 2A7和3E10可分别识别融合糖蛋白(F)蛋白二聚体和单体,McAbs 1F10和3G4可识别黏附糖蛋白(G)蛋白。其中McAbs 2A7与1F10可以在体外抑制RSV对HEp-2细胞的感染,具有中和活性,同时具有融合抑制活性。结论利用IFA法成功筛选了能特异性识别RSV的4种单克隆抗体,初步鉴定显示两种单抗可分别识别F蛋白二聚体和单体,另两种单抗可识别G蛋白。IE法蚀斑减少实验显示两种单抗在体外具有中和活性和融合抑制活性,表明获得的单抗对RSV感染具有一定的预防作用。
关键词
人呼吸道合胞病毒
间接免疫荧光
活体骨髓瘤细胞
单克隆抗
体
中和
活
性
融合抑制
活
性
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用活体骨髓瘤细胞制备单克隆抗体
李永亮
田美娜
卢曾军
杨苏珍
刘在新
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
4
下载PDF
职称材料
2
间接免疫荧光法筛选抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体及其性质的初步鉴定
张梅
何金生
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2012
0
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