重组脂肪氧合酶基因工程菌破碎条件优化及其酶活力测定方法研究

建立适用于从重组E.coli中提取重组脂肪氧合酶非机械法的破碎条件。采用化学渗透法、冻融法和酶解法破碎重组E.coli细胞,并采用单因素试验和L25(56)正交试验对细胞破碎条件进行优化。结果表明:溶菌酶添加量为1.5mg/mL、溶菌酶处理时间40min、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)添加量为2.0mmol/L、吐温-60添加量为2%、冻融温度(-70℃冷冻37℃融解)、冻融次数3次,效果最佳,获得粗酶液的脂肪氧合酶(LOX)酶活力为6840U/mL,比优化前(4750U/mL)提高了0.44倍;并在此条件下,比较分光光度法、碘化钾-淀粉法和二甲苯酚橙法测定LOX酶活力,其中碘化钾-淀粉法简单、灵敏、快速,且测定体系具备肉眼可辨的特征颜色,可用于LOX酶活性高通量筛选。

纤维素酶活力测定方法的比较研究

对 18种酶制剂的滤纸酶活力、组分酶活力及辅助酶活力分别进行了测定。结果发现测定Cx酶活力、C1酶活力均与滤纸酶活力有相关性 ,其相关系数分别为 92 %和 85 %。其相关方程为 :滤纸酶活力 =0 .0 97×Cx酶活力 - 986 ,这一结果可使我们利用Cx酶活力的测定结果来推算出滤纸酶活力 。

红花注射液对豚鼠肝细胞呼吸活力的影响

目的探讨红花注射液对细胞呼吸的作用。方法应用微量呼吸检压仪测定豚鼠肝细胞耗氧量。结果红花注射液增加细胞呼吸活力且呈剂量依赖性。结论红花注射液具有改善细胞呼吸的作用。

小鼠巨噬细胞的体外培养

目的巨噬细胞在体外培养需要有巨噬细胞克隆刺激因子的刺激方可增殖，故被认之谓“惰性细胞”。本文通过添加L929细胞培养上清液刺激巨噬细胞增殖拟建立体外巨噬细胞培养法。方法在原代巨噬细胞培养液中添加不同浓度的L929细胞培养上清液，用细胞生长动态线图来反映巨噬细胞的增殖改变。结果当添加L929细胞培养上清液浓度≥12．5％时，较对照管呈明显地刺激巨噬细胞生长并伴随添加浓度的增加呈正相关作用。结论用L929细胞培养上清液可刺激原代巨噬细胞增殖，将为有关巨噬细胞功能等研究提供一项有效工具。

简述葡萄糖氧化酶

本文介绍了葡萄糖氧化酶的一般性质、分离纯化方法、活力测定法和应用。