液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定昆虫对茚虫威活化代谢活性的差异

采用液相色谱-三重四极杆串联质谱,建立了测定昆虫对茚虫威活化代谢（N-脱甲氧羰基反应,产物为DCJW）活性的新方法.按本方法制备样品后30 h内,产物DCJW的化学稳定性较好,5次重复测定的相对标准偏差（RSD）为2.1％.本方法的检出限为0.01 pg,定量限为0.1 pg;DCJW纯乙腈溶液、小菜蛾酶促反应样品连续进样、5次独立酶促反应样品分别进样,3组样品独立测定的RSD分别为0.7％,1.1％,2.7％;3种DCJW添加水平（440,880和2200 pg）的回收率为96.1％～102.9％,RSD为4.8％～9.4％;DCJW在46～2310 pg范围内线性关系良好.本方法灵敏度高,操作方便,适用于昆虫代谢酶系对茚虫威的活化代谢活性分析.应用本方法比较了小菜蛾阿维菌素抗性品系与敏感品系对茚虫威N-脱甲氧羰基代谢活性差异,结果表明,小菜蛾抗性品系对茚虫威N-脱甲氧羰基活性是敏感品系的3.43倍,初步推断小菜蛾对杀虫剂阿维菌素和茚虫威可能存在负交互抗性.

限量饮食对致癌物活化代谢及DNA断裂的影响

目的：研究限量饮食（ＤＲ）对小鼠肝代谢活化致癌物以及致癌物导致的ＤＮＡ链断裂程度的影响。方法：用３２Ｐ后标记和高效液相色谱法测定致癌物ＤＮＡ主要加合物生成量；用随机寡核甘酸引物合成法（ＲＯＰＳ）测定ＤＮＡ链断裂程度；用体外代谢酶活性测定法检测有关代谢酶的活性。结果：①限量饮食减少小鼠肝中黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）和２乙基氨基芴（２ＡＡＦ）ＤＮＡ加合物（ＡＦＣ８ｄＧ）的生成，同时也减少致癌物导致的ＤＮＡ链断裂；限量饮食增加苯并［ａ］芘（ＢａＰ）ＤＮＡ加合物（ＢａＰＮ２ｄＧ）和６硝基苯甲萘（６ＮＣ）ＤＮＡ总加合物的生成，也增加致癌物导致的ＤＮＡ链断裂。②在小鼠肝中，致癌物ＤＮＡ加合物的生成量与致癌物导致的ＤＮＡ链断裂程度密切相关；③限量饮食诱导某些与致癌物代谢有关的酶。结论：限量饮食特异地改变小鼠肝代谢酶的活性继而影响致癌物的代谢活化，这种作用在致癌过程的起始阶段可能起着重要的作用。

中药天然产物代谢活化的化学性质可能与其毒性相关

确保中药(TCM)的安全性一直是医疗保健领域中长期存在的普遍挑战。对天然产品的毒理学复杂性进行细致的研究至关重要,特别是这些物质的代谢转化以及随后产生的反应性中间体。这一生化过程是多种毒性表现的起源,包括肝毒性、肾毒性、肺毒性和遗传毒性。在TCM中分类的化合物,包括吡咯里西啶生物碱、蒽醌、呋喃萜类、烯基苯、双苄基异喹啉生物碱、黄酮类和甲氧基二苯基衍生物,在代谢激活后表现出一系列有害机制。这篇综述提供了这些化合物通过代谢激活引起毒性的途径的全面描述。这篇综述强调了天然产物代谢激活中涉及的化学机制,这些机制可能触发毒性级联反应,而不仅仅是表面现象。此外,这项研究通过深入探讨代谢激活引起的毒性机制,丰富了现有文献。总之,这篇综述强调了仔细研究毒性机制的重要性,并为合理和安全使用中药提供了见解。

检测饮用水中雌激素物质的方法——结合S9代谢活化的重组基因酵母法

采用将大鼠肝脏微粒体酶系统（S9）代谢活化体系和重组基因酵母测试体系相结合的方法检测饮用水中的间接雌激素物质。通过对双酚A代谢活化前后的活性对比,优化了S9代谢活化方法,并将该方法应用于南方某水厂饮用水处理工艺样品的雌激素效应检测。研究表明水样中存在间接雌激素效应物质,经S9代谢活化后可检出其活性。原水中的间接雌激素物质在混凝、砂滤两工艺段得到有效去除。检测标准样品和实际样品的应用研究表明,重组基因酵母检测方法结合S9代谢活化步骤简单、方便,更全面地反映了样品潜在的雌激素水平,有望在水质安全评价上得到广泛的应用。

代谢活化系统在人细胞转化模型中的应用

【目的】探讨不同的代谢活化系统在人细胞转化模型中潜在的应用价值。【方法】在永生化人肝细胞L02中导入第12密码子突变的H-RAS癌基因(L02-R细胞),使其处于恶性转化前的易感状态。选择具有代表性的间接致癌物黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)作用于永生化和转化前期细胞株,采用三种代谢系统:高表达代谢酶P450 CYP1A2,低剂量底物诱导和加入经典的大鼠S9代谢辅助系统,通过软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验来比较在不同的代谢活化系统下,间接致癌物诱导细胞转化的效能。【结果】蛋白印迹验证H-Ras稳定高表达的转基因细胞株构建成功。通过Ames试验,蛋白印记和CYP1A2酶活性等方法比较三种代谢系统酶活性。在未加代谢系统的条件下,经AFB1染毒后第17周L02-R细胞发生转化,而对照组细胞L02-V在染毒20周未能发生转化。而加入S9代谢系统时,AFB1诱导L02-R细胞在第8周发生转化,比未加代谢系统缩短了9周;经低剂量0.1μmol/LAFB1诱导和高表达CYP1A2均使L02-R的转化间期缩短6周,于第11周发生转化。【结论】三种代谢系统都能够促进间接致癌物AFB1的代谢活化,缩短细胞转化的时间,提高细胞转化效率。与传统的S9代谢活化系统相比,低剂量诱导作为新的代谢活化的方法在细胞转化试验中有着良好的应用前景。

化学物遗传毒理学研究中应用代谢活化的进展

本文综述了化学物代谢活化系统的进展,包括宿主介导试验的更新、转基因动物的出现、基因工程的应用、动物及人肝细胞培养、植物代谢系统的发现以及对S_9的重新评价。

体外代谢活化对香烟烟雾诱导的细胞氧化损伤的影响

目的探讨香烟烟雾对A549细胞的氧化损伤作用以及体外代谢活化对细胞氧化损伤效应的影响。方法香烟烟雾染毒A549细胞,在加与不加S9的条件下测定细胞活性氧(ROS)含量,检测细胞染色体、DNA损伤及抗氧化酶活性。结果随着香烟烟雾浓度的增加,加与不加S9细胞的ROS含量、DNA损伤、染色体损伤均增加,SOD和GSH-Px活性均降低。相同染毒剂量下,加S9细胞ROS含量高于不加S9细胞;加S9细胞微核率、拖尾率、LTail、OTM值均大于不加S9细胞;加S9细胞抗氧化酶活性的降低趋势较不加S9细胞更为显著。结论香烟烟雾对A549细胞具有氧化损伤作用,体外代谢活化可以增加细胞的氧化应激,从而加剧香烟烟雾对细胞的遗传毒性。

2型糖尿病患者活化血小板糖基化复合物活性与脂代谢异常的相关性

探讨 2型糖尿病患者血小板活化与脂代谢异常的关系。将 12 0例 2型糖尿病患者按有无脂代谢异常分为有脂代谢异常组 (n =6 2 )和无脂代谢异常组 (n =5 8) ,并选择 2 5例正常者作对照。应用流式细胞仪分别测定各组的活化血小板糖基化复合物活性 ,比较两组糖尿病患者活化血小板糖基化复合物活性的差异 ,并分析其与甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇水平的相关性。结果发现 ,两组糖尿病患者的活化血小板糖基化复合物活性均明显高于正常对照组 ,且有脂代谢异常的糖尿病组活化血小板糖基化复合物活性高于无脂代谢异常组 ,低密度脂蛋白胆固醇水平与活化血小板糖基化复合物活性显著正相关 (r=0 .6 4,P <0 .0 5 )。结果提示 ,2型糖尿病患者脂代谢异常是导致血小板活化水平增高的重要因素。

利用模拟代谢活化体系研究污染物的基因毒性

利用二氯乙烷、三氯乙烷、三氯乙烯、N,N-二甲基甲酰胺、丙酮作为典型污染物与Fe2+/EDTA/H2O2/联氨模拟体系反应,所产生的活性中间体与4-(对硝基苄基)吡啶反应生成了紫红色物质.据此,本文建立了一种分光光度法检测活性中间产物的新方法.该方法测量灵敏度高(10-6mol/L).应用该方法证实了其中4种污染物(二氯乙烷、三氯乙烷、三氯乙烯、N,N-二甲基甲酰胺)具有形成DNA加合物的能力.同时对代谢活化体系的各种显色条件进行了优化.

1-硝基芘的生成及其代谢活化机理

本文就1-硝基芘(1-NP)在环境中的生成及其在细菌、哺乳动物细胞、鼠肝S_9酶系统和动物体内的代谢活化机理等问题进行了综述。

人精子诱变检测中新体外代谢活化系统的研究

人精子与去透明带金黄地鼠卵受精，在受精后异合卵培养阶段，用终浓度分别为２０μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、６０μｇ／ｍｌ的间接诱变剂环磷酰胺进行处理，继而制备精子染色体进行核型分析。得到环磷酰胺诱发的染色体畸变精子率在上述剂量组依次为３３％、５０％、３３％；断裂均数依次为０．５４、１．９４和０７２。与空白对照组比较，差异具有显著性（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜００１）。本研究结果表明，用人精子／金黄地鼠异合卵为靶细胞，能够检出间接诱变剂的诱变性。异合卵内源性代谢活化体系的发现和应用在哺乳动物配子的毒理遗传研究中具有重要意义。

环境化学物在体内的代谢活化

环境化学物在体内的代谢活化上海医科大学劳动卫生学教研室（２０００３２）龚梓初环境化学物的生物转化又称代谢转化，是化学物在生物体内经各种酶的催化，使其分子结构发生改变生成代谢物的过程。化学物分子结构的改变包括活性基团的增减或改变，整个分子的缩合或降解，...

重组DNA技术发展体外代谢活化测试系统的研究

重组ＤＮＡ技术发展体外代谢活化测试系统的研究薛开先（江苏省肿瘤防治研究所南京２１０００９）众多的原致癌剂、致突变剂需经代谢活化才能产生效应，细胞内参与活化的酶主要是细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ４５０），但用于遗传毒理学检测的细胞系已丧失或较低水平地表达，...

肝微粒体孵育体系中大黄酸及其代谢活化产物的检测方法研究

目的：优化和建立大黄酸及其代谢活化产物检测方法,并应用于大黄酸肝微粒体代谢活化研究。方法：肝微粒体孵育样品以含3%甲酸的甲醇酸化并沉淀蛋白后,用API 4000LC-MS/MS对大黄酸和其活性代谢物大黄酸乙酰葡糖醛酸进行定性、定量分析。使用Agela Venusil XBP C18column（50×2.1 mm,3μm）色谱柱,流动相为0.1%甲酸水-乙腈梯度洗脱。ESI离子源在负离子模式下进行测定,多反应离子监测,用于定量分析的离子对为m/z 283.0→239.5（大黄酸）和459.0→283.0（大黄酸葡糖醛酸）。结果：大黄酸乙酰葡糖醛酸在PBS、甲醇中都不稳定,以含3%甲酸的甲醇处理后,大黄酸乙酰葡糖醛酸在样品溶液中稳定性良好。大黄酸和大黄酸乙酰葡糖醛酸的线性范围分别为100～25 000 nmol·L-1和10～5 000 nmol·L-1,日内和日间RSD均〈10.7%,准确度在95.8%～112%之间。最适宜孵育时间优化为40 min。结论：本实验所建立的肝微粒体体系中大黄酸及其代谢活化产物大黄酸乙酰葡糖醛酸的测定方法简便、可行,为进一步研究大黄酸的代谢活化提供了基础。

不同代谢活化条件对N-亚硝胺类化合物细菌回复突变结果的影响

目的检测N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)的致突变风险,探讨不同肝微粒体S_(9)混合液对N-亚硝胺类化合物致突变结果的影响。方法将鼠疫伤寒杆菌TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535、TA1537和待测化合物分别与SD大鼠、CD-1小鼠和人的肝脏S_(9)混合液混合后于37℃预培养1 h,之后接种于6孔细胞培养板,并继续在37℃孵箱中培养约48 h,观察回复突变菌落的数目。结果在非S_(9)条件下NDEA、NDMA均无致突变性。小鼠S_(9)及人S_(9)条件下NDEA、NDMA均无致突变性且在小鼠S_(9)及人S_(9)预培养条件下NDEA、NDMA也无致突变性。SD大鼠S_(9)预培养条件下NDMA、NDEA使TA97、TA100、TA102和TA1535菌株发生回复突变。当大鼠S_(9)含量为30%时,NDEA、NDMA产生明显致突变性的浓度范围为10~1000μg/孔,与阴性对照(DMSO,20μl/孔)比较存在显著性差异(回复突变率超过阴性对照组的2~3倍),且存在一定剂量相关性。结论证实使用经诱导的SD大鼠S_(9)混合液检测N-亚硝胺类化合物致突变性的合理性和准确性,为后续研究N-亚硝胺类化合物遗传毒性奠定基础。

探析代谢活化在酪氨酸激酶抑制剂所致肝毒性的作用及防治对策

酪氨酸激酶抑制剂作为新型靶向抗肿瘤药物,现已成为恶性肿瘤药物治疗的研究热点。但这类靶向药物会产生一些毒副作用,尤其是肝毒性较为突出。已有文献报道,多种酪氨酸激酶抑制剂(吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼和克唑替尼等)在治疗恶性肿瘤过程中产生显著的肝毒性,严重限制了其临床应用。目前研究认为,代谢活化是酪氨酸激酶抑制剂产生肝毒性的主要诱因。本文综述有关酪氨酸激酶抑制剂引起肝损伤的国内外文献,探析代谢活化导致肝损伤的机制,为酪氨酸激酶抑制剂临床用药提供参考。

氧化代谢酶对化学致癌物的活化与致癌作用

许多化学致癌物需要经代谢活化形成能与DNA等生物大分子作用的终致癌物,才能发挥致癌效应。癌症的发生是多基因参与多阶段发展的复杂过程。终致癌物可在癌症形成的各个阶段引起DNA损伤并启动基因突变。除细胞色素P450和前列腺素合成酶是参与致癌物活化最常见的途径外,脂氧合酶也与这些化学物的致癌作用有关。