钙（Ⅱ）对抗凝血因子Ⅱ与活化凝血因子X结合反应的影响

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ（ACFⅡ）不具有酶的活性，通过与活化凝血因子X（FXa）的合成1：1复合物来延长凝血时间。用高效液相色谱方法，发现ACFⅡ与FXa的结合反应依赖于Ca（Ⅱ）浓度，ACFⅡ与FXa的最大结合反应所需要的Ca(Ⅱ)浓度约为1×10^-3mol/L，平衡透析的结果表明，ACFⅡ分子中有两个不同亲和性的Ca（Ⅱ）结合位点，表观结合常数分别为（1．1±0．3）×10^5L/mol和（1．7±0．4）×10^4L/mol,ACFⅡ与2个Ca(Ⅱ）结合所需要的Ca(Ⅱ)浓度也约为1×10^-3mol/L,Ca(Ⅱ)对ACFⅡ的荧光有增强效应，其最大荧光增强所需要的Ca(Ⅱ)浓度也约为1×10^-3mol/L。由此推测ACFⅡ结合上2个Ca(Ⅱ)可能是其与FXa结合的前提条件。

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子I与活化凝血因子X的结合特征

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ｉ在抗凝血反应中存在一临界浓度（１２ ｎｍｏｌ／Ｌ），只有在高于其临界浓度时，才表现出显著的抗凝血活性．用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，发现抗凝血因子Ｉ与活化凝血因子Ｘ在钙离子作用下形成１：１的复合物，从而延长凝血时间．天然抗凝血因子Ｉ和脱钙抗凝血因子Ｉ没有钙离子存在条件下均不能与活化凝血因子Ｘ形成复合物．锶离子也可以使二者结合，而钡离子和铽离子均不能使两者结合．抗凝血因子Ｉ是凝血因子ＩＸ或凝血因子Ｘ结合蛋白家族中一个新发现的成员，其分子量为 ２９６０３．６ _ｕ，分子中两条肽链分子量十分接近，约为 １４．７ｋｕ．抗凝血因子Ｉ是由２ ５１个氨基酸残基组成的，其氨基酸组成与这一家族中其他成员十分相似．

凝血因子X的活化及活化的凝血因子X的抑制

凝血因子X(FX)在凝血过程中起重要的作用 .利用鲁氏蝰蛇毒素 (RVV)中的FX活化酶 (RVV X) ,研究了Ca2 + 存在时的FX的活化 .RVV X活化FX有两条路径 :(1 )FX→FXβ→FXaβ;(2 )FX→FXaα→FXaβ.研究表明这两条路径在活化初期呈竞争状态 ,但是随着反应的进行 ,逐渐以第 (2 )种路径为主 ,FXβ 中间体的存在 ,可能有利于FX上的活化肽的脱去 .通过检测酶活性的方法 ,研究了表没食子基儿茶素没食子酸酯 (EGCG)对活化的凝血因子X(FXa)的作用 ,发现EGCG对FXa 有显著的抑制作用 ,其抑制作用随EGCG浓度变化而呈正相关性 ,表明EGCG是一种潜在的抗血栓和抗肿瘤新药 .

钙(Ⅱ)对尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅰ的抗凝血活性的影响

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子I（ACF I）不具有酶的活性，通过与活化凝血因子X（FXa）结合成1：1的复合物来延长凝血时间。用高效液相色谱分析方法，发现 ACF I与FXa的结合反应依赖于 Ca2+浓度，ACF I与 FXa的最大结合反应所需要的 Ca2+浓度为 1mol· L-1 。稀土和过渡金属离子对ACF I的荧光有淬灭作用，相反， Ca2+对 ACF I的荧光有增强效应。 Ca2+对维持 ACF I的特定构象起着重要作用。 Ca2+诱导的 ACF I构象变化可能是ACF I与 FXa结合的必要条件。

血必净注射液经肌醇需求酶1α信号通路影响组织因子凝血活性

目的：探讨不同浓度血必净注射液对内毒素诱导大鼠内皮细胞组织因子（tissue factor, TF）凝血活性的影响。方法：随机将内皮细胞分为对照组、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）组（500 ng/ml）、血必净组（1、5、25 μl /ml）、LPS＋血必净组（1、5、25 μl/ml），培养24、48和72 h后采用CCK-8法检测细胞增殖；留取上清，检测乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase，LDH）释放量；以刺激72 h为观察点，采用Western blot技术检测肌醇需求酶1α（inositol-requiring enzyme 1α，IRE1α）、未剪接型X盒结合蛋白（unspliced-box binding protein-1, uXBP-1）、剪接型X盒结合蛋白（spliced-box binding protein-1, sXBP-1）及蛋白质二硫化物异构酶（protein disulfide isomerase，PDI）的表达水平；加入Ca2＋、凝血因子（coagulation factor，F）Ⅶ和FⅩ，用发色底物法检测活化FⅩa水平。结果：与对照组相比，LPS组细胞增殖能力下降，LDH释放增多（P〈0.05）, IRE1α、uXBP1、sXBP1、PDI表达均上调，差异具有统计学意义（P〈0.05）。与对照组相比，血必净组细胞增殖能力增强，LDH释放减少（P〈0.05或P〈0.01），随着时间增加，此效应逐渐增强；LPS＋血必净组较LPS组细胞增殖活性升高，LDH释放下降（P〈0.05或P〈0.01），RE1α、uXBP1、sXBP1和PDI表达均明显减弱（P〈0.01），FⅩa产生随IRE1α、XBP1、PDI表达水平降低而减少（P〈0.05），其中LPS＋5 μl/ml血必净组降低FⅩa效果尤为明显（P〈0.05）。结论：血必净注射液能通过阻断IRE1α-XBP1通路，降低PDI的表达，影响内皮细胞TF凝血活性。

D-二聚体的检测及其临床应用

D-二聚体（D—dimer，D—D）是纤维蛋白（原）降解的产物。当体内凝血系统激活后生成凝血酶．凝血酶催化纤维蛋白原生成可溶性纤维蛋白单体，后者在活化凝血因子x III（actirated coagulation factor，FXma）的作用下生成稳定的纤维蛋白，使血液发生凝固；在纤溶酶的作用下，纤维蛋白（原）生成一系列的降解产物，而最终的产物是D—D。因此，

低分子量肝素治疗的临床实验监测

目的 进一步探讨活化的部分凝血活酶时间 (APTT)对低分子量肝素 (LMWH)治疗的实验监测价值。方法 对LMWH治疗前及治疗后的 2 6 2份血浆标本进行了APTT和抗 Ⅹa的测定 ,观察不同抗 Ⅹa活性水平的LMWH对APTT的影响。结果 当LMWH的抗 Ⅹa活性在 0 .8～ 1.2U/ml时 ,APTT中度延长 ,当LMWH的抗 Ⅹa活性大于 1.2U/ml时 ,APTT明显延长。结论 当使用治疗剂量的LMWH ,特别是剂量≥ 1mg/kg体重时 ,须常规监测APTT作为安全用药的实验检测指标。