凋亡蛋白酶活化因子-1和星形细胞上调基因-1在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)和星形细胞上调基因-1(AEG-1)在胃癌中的表达及临床意义。方法选取2015年9月至2017年12月于新余市人民医院行胃癌切除术及病理证实的50例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法测定胃癌及癌旁组织中Apaf-1、AEG-1表达水平,分析Apaf-1、AEG-1表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系及Apaf-1与AEG-1表达水平的相关性。结果癌旁组织中Apaf-1阳性表达率(78.00%)高于胃癌组织(20.00%),胃癌组织中AEG-1阳性表达率(82.00%)明显高于癌旁组织(26.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中Apaf-1、AEG-1表达水平均与肿瘤分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位无关;经Spearman相关性分析结果显示,胃癌组织中Apaf-1表达水平与AEG-1表达水平呈显著负相关(r<0,P<0.05)。结论胃癌组织中AEG-1呈高表达,Apaf-1呈低表达,二者与胃癌的疾病进展密切相关,Apaf-1和AEG-1的肿瘤基因检测可能成为治疗胃癌的新靶点,具有较高的研究价值。

凋亡蛋白酶活化因子-1基因在贲门腺癌中的甲基化状态及其临床意义

目的:探讨贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptosis protease activatingfactor-1,Apaf-1)基因启动子区甲基化状态及其与果蝇zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)蛋白表达之间的相关性。方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测GCA组织及癌旁组织中Apaf-1基因甲基化状态,应用免疫组织化学法检测GCA组织及癌旁组织中Apaf-1和EZH2蛋白的表达情况。结果:GCA组织中Apaf-1基因甲基化率显著高于癌旁组织[49.6%(62/125)vs 4.0%(5/125),P<0.01],Ⅲ期和Ⅳ期GCA组织中Apaf-1基因甲基化率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期(58.8%vs 38.6%,P<0.05),但GCA组织中Apaf-1基因甲基化率与GCA的组织学分化程度无关(P>0.05)。GCA组织中Apaf-1蛋白表达阳性率显著低于相应癌旁组织(39.2%vs 96.0%,P<0.01),且与Apaf-1基因甲基化状态相关。GCA组织中EZH2蛋白表达阳性率显著高于相应癌旁组织(74.4%vs 11.2%,P<0.01),且与Apaf-1蛋白的表达呈负相关。结论:GCA组织中Apaf-1基因启动子区呈高甲基化,Apaf-1和EZH2蛋白可能共同参与了GCA的发展。

活血清下中药对大鼠缺血-再灌注小肠凋亡蛋白酶活化因子-1表达的影响

目的:利用小肠缺血-再灌注动物模型,观察中药对小肠黏膜细胞凋亡的干预作用及对肠屏障的影响。方法:选用健康Wistar大鼠,随机分为正常对照组、模型组、承气合剂治疗组、复方丹参合剂治疗组、活血承气合剂(承气合剂+复方丹参合剂)治疗组。对动物模型再灌注6h、24h、72h时血浆内毒素、小肠黏膜上皮细胞凋亡情况、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)的表达分别进行检测和观察。结果:与模型组比较,各治疗组对于肠黏膜上皮细胞凋亡均有不同程度的抑制作用,其中活血承气治疗组各观察指标降低明显(P<0.01),效果最佳。结论:小肠缺血-再灌注早期肠黏膜上皮细胞凋亡是造成血中内毒素明显升高、肠屏障功能损伤的主要原因之一。活血清下法可以通过抑制Apaf-1表达来减弱肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而达到降低内毒素水平,保护肠屏障功能的作用。

凋亡蛋白酶活化因子1基因在脂肪细胞诱导分化中表达及肿瘤坏死因子-α对其调节作用

目的观察3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中（0～10d）凋亡蛋白酶活化因子1（APAF1）基因表达水平的变化趋势，探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对成熟脂肪细胞中APAF1基因表达水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1脂肪前体细胞，通过油红O染色鉴定其分化成熟的基础上，应用人重组TNF-α．1．0ng·mL^-1干预分化成熟的脂肪细胞，抽提脂肪细胞总RNA和总蛋白后，采用RT-PCR及Westernblot技术检测诱导分化不同时段及TNF-α干预后不同时间（2、6、12和24h）脂肪细胞中APAF1基因的表达水平。结果①3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化过程中（0～10d），APAF1基因表达水平呈现逐渐减低的趋势；②人重组TNF-α对成熟脂肪细胞中APAF1基因的表达具有显著的增强作用，且TNF-α对APAF1基因表达的上调作用呈现随刺激时间延长而明显增强的总体趋势。结论①在3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中，APAF1基因的表达逐渐下调可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚；②APAF1基因在人重组TNF-α刺激成熟脂肪细胞过程中呈明显上调趋势，这种上调可能具有协同TNF-α促进成熟脂肪细胞去分化的作用。

凋亡蛋白酶活化因子-1与肿瘤相关性的研究进展

凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)作为细胞凋亡的核心因子,在线粒体凋亡途径中起着极其关键的作用.Apaf-1启动子甲基化和杂合性缺失是肿瘤发生的最主要因素,Apaf-1表达下调与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关,其表达情况可作为肿瘤浸润深度、淋巴结转移及肿瘤分化不良等预后不佳的标志物,Apaf-1也可作为抗癌治疗和判断预后的靶分子.对其深入研究将有助于对抗肿瘤药物的研制.本文就Apaf-1的生化结构和功能、信号转导通路以及近年来关于Apaf-1在多种肿瘤中的表达、肿瘤的发生机制及其在肿瘤的耐药与治疗中的作用等方面的最新研究进展作一综述.

染锰大鼠生精细胞凋亡中caspase-3 mRNA、凋亡蛋白酶活化因子-1及多聚ADP核糖聚合酶的表达变化

目的:研究染锰诱导的大鼠生精细胞凋亡过程中,天冬氨酸特异性半胱氨酸酶-3(caspase-3)mRNA和凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达及其关系,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠,设立空白对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组。实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测生精细胞凋亡,原位杂交法和免疫组织化学法检测生精细胞caspase-3 mRNA、Apaf-1和PARP的表达。结果:与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)和caspase-3mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。染锰剂量相同,6周与4周组比较,以及染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞AI和caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与Apaf-1和PARP阳性细胞率呈负相关。结论:锰可影响大鼠生精细胞caspase-3 mRNA表达,促进Apaf-1和PARP分解,导致生精细胞凋亡,产生生殖毒性效应。

口腔鳞状细胞癌中凋亡蛋白酶活化因子甲基化的研究

目的:探讨凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)基因的启动子区甲基化状态与口腔鳞状细胞癌(OSCC)的关系。方法:采用甲基特异性PCR的方法分别检测23例正常口腔黏膜组织和53例OSCC组织中APAF1基因的启动子区甲基化情况。结果:23例正常口腔黏膜组织中无1例检测到APAF1基因启动子区的甲基化,53例OSCC组织中有41例(77.36%)APAF1基因启动子区完全甲基化,5例(9.43%)APAF1基因部分甲基化,总甲基化率为86.79%(46/53),与正常口腔黏膜组织甲基化率比较差异有显著性(P<0.01)。APAF1基因的甲基化与病理分级、年龄、性别无关。结论:APAF1基因启动子区的甲基化是该基因在OSCC组织中表达降低的机制之一,基因甲基化引起的基因功能静默可能与OSCC的发生有关。

半定量PCR检测口腔鳞状细胞癌凋亡蛋白酶活化因子的表达

目的:探讨凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)基因的表达与口腔鳞状细胞癌(OSCC)的关系。方法:用半定量RT-PCR的方法检测18例正常口腔黏膜组织和32例OSCC组织中APAF1的表达情况。结果:OSCC组织中APAF1的表达显著低于正常口腔黏膜(P<0.01)。结论:APAF1基因可能与OSCC的发生、发展有关,可作为OSCC诊断的检测指标。

miR-23a和APAF-1在子宫内膜癌中的表达及意义

目的观察子宫内膜癌组织中微小RNA-23a(miR-23a)与凋亡蛋白酶活化因子-1(APAF-1)的表达变化并分析其临床意义。方法选取2018年5月至2020年5月于我院进行子宫内膜癌切除手术的123例标本为子宫内膜癌组,另选取其癌旁组织为正常组。检测子宫内膜组织中miR-23a与APAF-1的表达情况;分析miR-23a和APAF-1与患者临床病理的关系及二者的相关性,Kaplan-Meier法分析两指标对患者的生存情况的影响。结果与正常组相比,子宫内膜癌组miR-23a的表达升高,APAF-1 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05);miR-23a、APAF-1均与临床分期、组织分化程度及肌层浸润显著相关(P<0.05);miR-23a与APAF-1呈显著负相关(P<0.05);Kaplan-Meier曲线显示miR-23a低表达组与APAF-1阳性表达组中的PFS、OS显著高于miR-23a高表达组和APAF-1阴性表达组(P<0.05)。结论子宫内膜癌中miR-23a表达升高,APAF-1降低,二者与子宫内膜癌的发展及患者预后相关,有望成为临床上评估早期患者疾病进展及预后的生物标记物。

塞来昔布对大鼠重型颅脑创伤后运动功能及Apaf-1蛋白表达的影响

目的探讨在大鼠重型颅脑创伤模型中,塞来昔布对环氧合酶(COX)-2和凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)蛋白表达及运动功能的影响。方法 48只成年雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机等量分为4组。正常对照组不做任何处理,假手术组给予头皮切开并缝合,损伤组采用Foda法建立大鼠重型闭合性颅脑创伤模型,治疗组在损伤组基础上立即腹腔注入塞来昔布(250 mg/kg,给药间隔6 h/次),其余3组在同等条件下给予等量生理盐水,72 h后统一取材。应用免疫组化法和Western blot法分别检测COX-2及Apaf-1蛋白表达变化。同上述分组方法每组另取6只,经10 d恢复后应用神经功能损害评分(NSS)对大鼠运动功能进行检测。结果损伤组COX-2和Apaf-1蛋白表达水平明显高于其他组,治疗组与损伤组比较能有效降低蛋白表达,但仍高于假手术组和正常组(P<0.05);NSS评分显示治疗组与损伤组比较能有效改善大鼠的运动功能障碍(P<0.05),但与假手术组和正常对照组比较仍有差距(P<0.05)。结论塞来昔布可通过对COX-2蛋白的特异性抑制,减少由其引发的炎症反应,进一步降低Apaf-1蛋白的表达,从而减少神经细胞的凋亡,并改善大鼠脑创伤后的运动功能障碍。

食管鳞状细胞癌中Apaf-1基因启动子区甲基化状态及其与EZH2蛋白表达的关系

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)启动子区的甲基化状态及其与EZH2蛋白表达之间的相关性。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测128例食管鳞癌患者癌灶组织及相应癌旁组织的Apaf-1基因甲基化情况,应用免疫组织化学方法检测Apaf-1和EZH2的蛋白表达情况。结果 Apaf-1基因在食管鳞癌组织中的甲基化率为52.3%,显著高于癌旁正常组织的4.7%(P<0.01),不同肿瘤TNM分期患者的Apaf-1基因甲基化率差异有统计学意义(P<0.01)。食管鳞癌组织Apaf-1蛋白表达阳性率为41.4%,显著低于相应癌旁正常组织的94.5%(P<0.01)。食管鳞癌组织EZH2蛋白表达阳性率为72.7%,显著高于相应癌旁正常组织的12.5%(P<0.01),不同肿瘤TNM分期和组织分化程度患者的Apaf-1和EZH2蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01)。食管鳞癌中Apaf-1基因甲基化与其蛋白阳性表达率呈负相关(r=-0.722),Apaf-1与EZH2的蛋白表达呈明显的负相关(r=-0.232)。结论 Apaf-1和EZH2可能共同参与了食管鳞癌的发生发展,Apaf-1基因启动子区的异常高甲基化可能是食管鳞癌中此基因失活的重要原因之一。

NF-κB Apaf-1蛋白在胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨核转录因子-κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)和凋亡蛋白酶活化因1(Apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)在胃癌组织中的表达及意义,为胃癌的临床治疗开辟新思路。方法:收集50例胃癌患者的胃癌组织及其癌旁正常组织,采用免疫组化SP法检测NF-κB和Apaf-1蛋白的表达情况,分析二者与临床病理特征的关系和二者间相关性。结果:NF-κB蛋白在胃癌组织中的表达高于癌旁正常组织,而Apaf-1蛋白的表达低于癌旁组织,二者蛋白表达变化与分化程度、TNM分期、浸润深度及淋巴转移均有关(P<0.05)。相关性分析显示胃癌组织中NF-κB蛋白和Apaf-1蛋白表达为负相关(rs=-0.36,P<0.05)。结论:胃癌组织中NF-κB蛋白和Apaf-1蛋白表达异常,参与了胃癌的发生、发展,有望为胃癌的诊断及治疗提供参考。

食管鳞癌中凋亡相关蛋白激酶1基因甲基化及其蛋白表达

目的探讨食管鳞癌中凋亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因CpG岛甲基化及其蛋白表达与食管癌的相关性。方法收集食管鳞癌组织58例及癌旁上皮组织30例。采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)法检测DAPK1蛋白表达,甲基化特异性聚合酶联反应(MSP)法检测基因CpG岛甲基化状态。结果DAPK1在癌组织的阳性表达率明显低于癌旁组织(36.2%vs 63.3%,P<0.05);癌组织中DAPK1甲基化率明显高于癌旁组织(60.3%vs 33.3%,P<0.05),提示DAPK1基因启动子甲基化与DAPK1蛋白表达呈负相关(χ2=18.362,P=0.000,r=-0.563)。结论DAPK1基因启动子甲基化减少其蛋白的表达,可能与食管癌的发生发展相关。

微小RNA-221靶向凋亡蛋白酶活化因子1对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-221对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法选取2015年6月到2018年9月期间南阳市中心医院和河南中医药大学第一附属医院手术切除的脑胶质瘤和相应的癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织中miR-221的表达水平。在脑胶质瘤细胞株U251建立miR-221沉默细胞株(miR-221沉默组)和对照细胞株(miR-control组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色测定miR-control组和miR-221沉默组细胞的增殖能力。体外移植瘤实验测定两组细胞在裸鼠体内的生长速度。采用凋亡检测试剂盒测定两组细胞的凋亡水平。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-221的靶基因。组间数据比较采用t检验。结果与癌旁组织(1.21±0.16)比较,脑胶质瘤组织中miR-221表达水平(3.01±0.19)显著增加,差异有统计学意义(t=2.991,P<0.05)。与miR-control组细胞(1.89±0.22)比较,miR-221沉默组细胞增殖能力(1.16±0.18)明显下降,差异有统计学意义(F=2.618,P<0.05)。与miR-control组细胞EdU染色阳性率(56.33±9.18)%比较,miR-221沉默组细胞EdU染色阳性率(22.12±7.10)%显著下降,差异有统计学意义(F=2.418,P<0.05)。miR-control组细胞在裸鼠体内生长速度明显高于miR-221沉默组细胞,差异有统计学意义(F=2.011,P<0.05)。与miR-control组细胞凋亡率(3.17±0.78)%比较,miR-221沉默组细胞凋亡水平(21.33±3.09)%明显增加,差异有统计学意义(t=3.712,P<0.05)。生物信息学分析显示凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)是miR-221的靶基因。与miR-control组(0.78±0.13)比较,miR-221沉默组细胞APAF1蛋白表达水平(2.39±4.91)显著增加,差异有统计学意义(t=3.991,P<0.05)。结论miR-221通过靶向凋亡激活蛋白APAF1,调节脑胶质瘤细胞的增殖和凋亡。

前列腺癌组织凋亡蛋白酶活化因子1和bax的表达及其临床意义

目的：探讨凋亡蛋白酶活化因子1（Apaf-1）和bax在前列腺癌和前列腺增生组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法检测45例前列腺癌患者和60例前列腺增生患者Apaf-1和bax的表达。结果前列腺癌中Apaf-1和bax的阳性率分别为22.22%（10／45）、20.00%（9／45），低于前列腺增生组织的48.33%（29／60）、46.67%（28／60），差异均有统计学意义（χ2值分别为7.509、8.013，均P＜0.05）。 Apaf-1和bax的表达和前列腺癌患者年龄及是否远处转移无关（P＞0.05），与病理分级及临床分期相关（P＜0.05），Apaf-1和bax在前列腺癌组织中的表达呈正相关性（r＝0.535， P＜0.001）。结论 Apaf-1和bax可能与前列腺癌的发生、发展密切相关。

凋亡蛋白酶活化因子-1基因甲基化在骨肉瘤细胞株中的作用

目的检测骨肉瘤细胞株中凋亡蛋白酶活化因子（APAF）-1基因启动子区域甲基化状态及该基因mRNA表达，观察APAF-1基因对骨肉瘤形成的影响。方法以骨肉瘤细胞株MG63和Hs888T为研究对象，提取DNA，经重亚硫酸钠处理后，采用限制性酶切图谱分析（COBRA）检测APAF-1基因CpG岛的甲基化情况，使用不同浓度（0、1×10^-7、3×10^-7moL／L）的DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂2′-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）处理骨肉瘤细胞株4、10、20d，采用实时定量聚合酶链反应（QT-PCR）检测Apaf-1 mRNA表达水平的变化。结果在Hs888T细胞株中APAF-1基因存在CpG岛甲基化并且随着5-Aza—CdR浓度的增加Apaf-1 mRNA表达水平也在增加。3×10^-7moL／L的5-Aza—CdR处理Hs888T细胞株20d与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Hs888T细胞株中APAF-1基因异常表达与APAF-1基因启动子区域CpG岛甲基化有关，提示APAF-1基因甲基化可能参与某些骨肉瘤的发生。

X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用

目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关。结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

地西他滨对急性白血病患者甲基化凋亡蛋白酶活化因子1基因的去甲基化作用

目的探讨地西他滨去甲基化作用治疗急性白血病患者的有效性。方法通过甲基化特异性PCR选取10例凋亡蛋白酶活化因子1（Apaf-1）基因启动子发生甲基化的患者，经地西他滨治疗后，通过甲基化特异性PCR检测患者Apaf-1基因去甲基化状态。通过反转录PCR检测lO例患者经地西他滨治疗前后骨髓单个核细胞Apaf-1基因mRNA表达情况。结果甲基化特异性PCR检测示，10例患者经地西他滨治疗后，6例发生了去甲基化。治疗前10例患者因甲基化Apaf-1mRNA均表达缺失，经地西他滨治疗后，4例重新表达，6例未表达。治疗后6例Apaf-1 mRNA表达缺失的患者中，4例Apaf-1基因未发生去甲基化，2例发生去甲基化，考虑可能与等位基因缺失或突变有关。结论地西他滨通过使Apaf-1基因启动子去甲基化恢复抑癌基因的表达，发挥其凋亡中的关键因子作用。