连接蛋白30在运动型星形胶质细胞中局部调控肌动蛋白细胞骨架和机械重构

在大脑成熟过程中,星形胶质细胞形成了复杂的形态结构,展现出强烈的结构可塑性。连接蛋白30(Cx30),是一种在出生后表达的缝隙连接通道形成蛋白,在发育过程中通过控制细枝状突起的分支和延伸来动态调节星形胶质细胞的形态特性。然而,其背后的机制尚未被探索。我们在体外发现Cx30在星形胶质细胞中与肌动蛋白细胞骨架相互作用,并在细胞迁移期间抑制其结构重组和动态变化。

骨桥蛋白、CD44v6、膜细胞骨架连接蛋白在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨骨桥蛋白(OPN)、CD44v6、膜细胞骨架连接蛋白(Ezrin)在胃癌组织中的表达,并分析OPN、CD44v6、Ezrin与胃癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学方法检测OPN、CD44v6、Ezrin在48例胃癌组织中的表达。结果OPN、CD44v6、Ezrin在胃癌组织中阳性表达率分别为68.8%、60.4%、64.6%。伴有淋巴结转移者中OPN表达阳性为21例(87.5%),在无淋巴结转移者中OPN表达阳性为13例(54.2%),P<0.05。伴有淋巴结转移者中CD44v6表达阳性为19例(79.2%),在无淋巴结转移者中CD44v6表达阳性为12例(50.0%),P<0.05。伴有淋巴结转移者中Ezrin表达阳性为20例(83.3%),在无淋巴结转移者中Ezrin表达阳性为11例(45.8%),P<0.05。对OPN、CD44v6、Ezrin的表达情况两两之间行Spearman等级相关分析,结果表明在48例胃癌标本中,OPN、CD44v6、Ezrin两两之间的表达均呈正相关。结论OPN、CD44v6、Ezrin在胃癌浸润、转移中起着协同作用,它们可以作为胃癌浸润、转移及评估预后的指标。

不同固定液对胃癌细胞骨架及连接蛋白荧光染色标记效果的比较

目的通过激光共聚焦技术,观察SGC-7901胃癌细胞系在不同固定液作用下的细胞骨架及连接蛋白荧光染色。方法接种SGC-7901细胞24 h后,分别用4%多聚甲醛、2.5%戊二醛及95%乙醇室温固定20 min,5%BSA(含0.2%Triton X-100)封闭透膜1 h,直标荧光一抗避光37℃孵育1 h,DAPI室温染核15 min,激光共聚焦扫描显微镜扫描。结果 4%多聚甲醛对细胞骨架微丝结构及连接蛋白Zo-1细胞膜定位均有较好的固定作用,2.5%戊二醛对微丝结构基本起到固定作用,而95%乙醇对于微丝的固定效果略差。后两种固定液固定细胞均出现连接蛋白胞质表达的非特异染色现象。结论 4%多聚甲醛对细胞骨架及细胞间连接蛋白的固定效果较优,荧光染色标记结果为后续研究提供依据。

肝癌组织细胞骨架连接蛋白和焦点黏附激酶的表达及其意义

目的:检测细胞骨架连接蛋白(membrane cytoskeleton cross linker protein,Ezrin)、焦点黏附激酶(focal ad-hesion kinase,FAK)在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法:手术切除肝癌标本79例(其中62例附癌旁正常组织),应用免疫组化检测Ezrin,FAK的表达。结果:免疫组化染色显示,Ezrin和FAK的表达与肝癌的浸润、转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。结论:Ezrin,FAK的高表达与肝细胞癌的侵袭转移关系密切,它们可能是影响肝癌患者预后以及癌细胞转移的重要因素。

膜-细胞骨架连接蛋白在子宫内膜癌组织中表达研究

目的:探讨膜-细胞骨架连接蛋白(Ezrin)在子宫内膜癌组织中表达及临床意义。方法:选取70例子宫内膜癌患者,均进行子宫内膜癌切除术,手术中取肿瘤组织和癌旁组织,检测其Ezrin表达情况,并探讨Ezrin与子宫内膜癌患者病理特征的关系。结果:子宫内膜癌组织Ezrin阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05);FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期的患者Ezrin阳性表达率高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者,肌层浸润深度>1/2的患者Ezrin阳性表达率高于肌层浸润深度≤1/2的患者,高+中分化患者Ezrin阳性表达率高于低分化患者,淋巴结转移患者Ezrin阳性表达率高于淋巴结未转移患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ezrin阳性表达与子宫内膜癌FIGO分期、肌层浸润深度、肿瘤分化程度及与淋巴结转移均呈正相关(P<0.05)。结论:Ezrin在子宫内膜癌组织中呈高表达,其表达水平与子宫内膜癌分化程度和浸润转移存在明显相关性,可作为子宫内膜癌进展和预后重要评估指标。

基于NF-κB炎性通路探讨纤维连接蛋白在冠心病血瘀证的作用

目的利用蛋白质组学寻找抑制冠心病血瘀证的关键蛋白,并基于核因子(nuclear factoer,NF)-κB炎性信号通路和内皮细胞活化模型验证关键蛋白纤维连接蛋白(fibronectin 1,Fn)对冠心病血瘀证的作用。方法将冠心病血瘀证组患者和健康组受试者的血清进行相对定量和绝对定量的等比标记(isobaic tag for relative and absolute quantitation,ITRAQ)蛋白质组学分析,将差异蛋白进行GO和KEGG功能富集,从与冠心病密切相关的富集通路中筛选出关键蛋白Fn。利用60μg/mL的氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)构建内皮细胞活化模型,在内皮细胞活化模型中加入5μg/cm 2、10μg/cm 2、20μg/cm 23个浓度的血浆Fn或敲减内皮细胞来源Fn的方法进行干预。分组为空白组、模型组、对照组、Fn EC-KD组、Fn5组、Fn10组、Fn20组。细胞免疫荧光法和免疫印迹法检测各组NF-κB核位移和NF-κB蛋白表达水平,ELISA检测培养上清的细胞间黏附分子(intercellular cell adhesion molecule,ICAM)-1、血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM)-1、前列环素I-2(Proataglandin-I-2,PGI2)、内皮素的蛋白含量。结果血清蛋白质组学结果显示健康组和冠心病血瘀证组存在121种差异蛋白,51种血瘀证组下调蛋白集中在补体与凝血级联、肌动蛋白细胞骨架的调节、细胞外基质-受体相互作用途径,70种血瘀证组上调蛋白集中在补体与凝血级联、肌动蛋白细胞骨架的调节、血小板活化、吞噬体途径。Fn与冠心病密切相关且在血瘀证患者中下调。细胞实验发现各组NF-κB总蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较模型组NF-κB核位移增强,ICAM-1、VCAM-1、内皮素表达上调,PGI2分泌下调(P<0.05);与模型组比较,Fn5组、Fn10组、Fn20组NF-κB核位移减弱,VCAM-1、ICAM-1、内皮素分泌下调(P<0.05),PGI2分泌显著上调(P<0.05);与模型组比较,Fn EC-KD组NF-κB核位移减弱,VCAM-1、ICAM-1、内皮素表达含量明显降低(P<0.05),PGI2表达明显增加(P<0.05)。结论血浆Fn抑制内皮细胞活化和功能障碍,内皮细胞来源的Fn促进内皮细胞活化和功能障碍。

膜细胞骨架连接蛋白和α-连接蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨膜细胞骨架连接蛋白(Ezrin)和α-连接蛋白(α-cat)在胃癌组织及正常胃粘膜组织中的表达并分析该表达与胃癌生物学行为的关系。方法用免疫组化方法检测128例胃癌组织标本与30例正常胃粘膜组织标本中Ezrin和α-cat的表达。其中胃癌组织标本根据其是否存在淋巴结转移及远处转移另行分组进行相关性分析。结果 Ezrin在胃癌组织和正常胃粘膜组织中表达阳性率分别为63.3%和33.3%(P<0.01),α-cat则为26.6%和100%(P<0.01)。Ezrin在胃癌组织中的表达与淋巴结转移及远处转移呈正相关,而α-cat在胃癌组织中的表达与淋巴结转移及远处转移呈负相关。结论 Ezrin与α-cat在胃粘膜组织中的表达与胃癌的发生有关,它们对胃癌的诊断及其恶性程度的评估有所帮助。

肝癌中膜细胞骨架连接蛋白的表达及意义

目的探讨膜细胞骨架连接蛋白(Ezrin)在肝癌中的表达情况及其临床病理意义。方法手术切除肝癌标本79例(其中62例附癌旁正常组织),应用免疫组化检测Ezrin的表达。结果免疫组化染色显示:Ezrin的表达与肝癌的浸润、转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。结论Ezrin的过度表达与肝细胞癌的发生与进展关系密切。

与膜-细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50对血管内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响

目的探讨与膜-细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50(EBP50)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内Akt1磷酸化水平、细胞分泌明胶酶的活性以及细胞骨架表达和分布的影响,阐明其影响人血管内皮细胞增殖、迁移及成管的分子机制。方法构建EBP50的真核重组表达载体,将重组质粒分别稳定转染HUVEC细胞系,经Western blot法验证后,采用MTT法检测细胞的增殖活性;应用划痕法检测细胞的迁移能力;应用Matrigel法检测细胞的成管能力;应用Western blot检测EBP50对Akt1磷酸化水平的影响;应用明胶酶谱法检测HUVEC细胞分泌的明胶酶活性;应用免疫荧光观察细胞骨架的分布。结果转染的外源性EBP50 cDNA片段已整合到基因组中;与对照组细胞比较,EBP50能显著抑制细胞的增殖、迁移及成管能力,并且EBP50明显下调Akt1的磷酸化水平(t=2.98,P<0.01);同时使HUVEC分泌的MMP2活性下降,并影响血管内皮细胞内细胞骨架的分布。结论EBP50可以抑制HUVEC细胞的增殖、迁移及成管,其机制可能与调整Akt1的磷酸化水平、调节细胞分泌明胶酶的活性及影响微丝细胞骨架分布有关。

T细胞活化连接蛋白脂筏定位功能缺失影响T细胞内CD59信号转导的功能

目的用前期构建好的T细胞活化连接蛋白(LAT)-EGFP质粒,基因点突变技术使LAT-EGFP的棕榈酰化位点突变,使LAT-EGFP-M(棕榈酰化位点突变的LAT-EGFP)的细胞膜定位功能缺失,抗体交联CD59后观察T细胞信号活化状态的改变。方法采用电转染的方法转染Jurkat细胞,抗体交联CD59后,共聚焦荧光显微镜下观察LAT分布情况的变化;用噻唑蓝(MTT)比色法检测抗体交联前后各组Jurkat细胞增殖情况差别;应用ELISA检测各组细胞上清中IL-2的变化水平;用Western blot技术检测抗体交联后LAT-EGFP和LAT-EGFP-M的磷酸化程度。结果抗体交联CD59之后,LAT-EGFP-M较LAT-EGFP相比不能定位聚集于CD59所在的脂筏区域,并且转染了突变LAT-EGFP-M质粒的Jurkat细胞增殖速度和IL-2分泌能力低于转染LAT-EGFP质粒、转染空载体EGFP-N3及未转染的细胞。LAT-EGFP-M的磷酸化程度远低于LAT-EGFP。结论棕榈酰化位点缺失的LAT会减弱CD59在T细胞中的信号转导功能。

RhoGTP酶活化蛋白在上皮细胞间质转化中作用的研究进展

上皮细胞间质转化(EMT)是指上皮细胞在形态上发生向间(充)质细胞表型的转变,并获得迁移能力,其在肿瘤细胞侵袭及纤维化疾病的形成中起着重要作用。RhoGTP酶活化蛋白(RhoGAP)可以通过参与调控细胞表面受体同肌动蛋白细胞骨架的信号传导,影响EMT相关的肿瘤转移及组织纤维化转归,为后续寻找抗肿瘤及抗纤维化的治疗靶点提供分子诊疗思路。

孤雌活化诱导恢复的小鼠减数分裂期间细胞骨架的动态与作用

减数分裂的顺利完成是胞质分裂和核分裂在时间和空间上的协调结果,细胞骨架系统在减数分裂的一系列事件中具有重要的调节作用.实验通过孤雌活化诱导小鼠MⅡ期卵减数分裂恢复,采用激光共聚焦显微术检测了减数分裂期间的微管、微丝和核的动态变化,并通过细胞骨架药物处理,以分析微管和微丝在减数分裂事件中的不同作用.结果显示:纺锤体微管为核的定位、分离和运动所必需;纺锤体从与质膜平行旋转至与质膜垂直是极体排放的前提;微丝是控制纺锤体旋转的关键因素;纺锤体旋转完成后微丝随即解聚,不参与极体的最后排出。

细胞骨架与丝裂原活化蛋白激酶关系的研究进展

细胞骨架(cytoskeleton)是维持细胞形态并参与各种重要细胞活动的由纤维蛋白组成的复杂网络。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路是真核细胞中的重要信号转导系统。细胞骨架通过影响MAPK的活化状态与在亚细胞定位而影响其生物学功能,对两者关系的阐明有助于进一步了解MAPK的生物学功能以及细胞的一些基本活动的机制。

TGF-β1通过p38MAPK信号通路调控肾小球系膜细胞分泌纤维连接蛋白的研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾小球系膜细胞(MC)分泌纤维连接蛋白(FN)过程中的作用。方法应用WesternBlot法检测系膜细胞内p38MAPK活性;应用ELISA法检测培养上清中FN。结果TGF-β1可诱导MC内p38MAPK活化,刺激15minp38MAPK活性增加,30min后,p38MAPK活性达高峰,1h后几乎恢复至正常水平,2h后再次升高,24h时仍高于正常。TGF-β1可促进MC分泌FN,p38MAPK特异性抑制剂SB203580显著抑制TGF-β1诱导的MC分泌FN。结论p38MAPK通路在TGF-β1引起的系膜细胞外基质成分之一的FN分泌增加中发挥一定的作用。SB203580能部分抑制TGF-β1诱导的FN的合成,可能对糖尿病肾病具有一定的治疗作用。

淋巴结基质刚度通过整合素介导细胞核形变进而促进T细胞活化

目的明确基质刚度在淋巴结中的变化,这种变化是否会通过力敏感受体整合素来影响T细胞的活化程度,以及这种机械力调控T细胞活化的力学生物学机制。方法针对淋巴结肿瘤转移的疾病背景,首先通过CT影像Hu值测量及纳米压痕仪和旋转流变仪离体检测,获得淋巴结刚度的变化范围。然后利用PEG水凝胶模拟淋巴结力学微环境,构建T细胞活化的调控体系,实现对于基质刚度和整合素介导力学黏附的独立可控。进一步通过免疫荧光、免疫蛋白印迹、酶联免疫吸附等实验探索基质刚度调控T细胞活化的规律及力学生物学机制,最后借助于力学模型对T细胞核的受力进行分析。结果通过对于刚度大小与配体黏附的独立调控,发现磷酸化Zap 70和IL-2的表达水平随着刚度的增加而升高,并且受整合素黏附作用的正向调控。进一步研究发现基质刚度增高时,整合素介导肌动蛋白细胞聚合增加,细胞核扁平化程度增大,促进YAP的核易位,最终增强了T细胞活化。并且通过对于皮质层肌动蛋白聚合力等力学载荷进行数值模拟,发现肌动蛋白聚合是T细胞核形变的主要原因。结论基质刚度通过整合素介导肌动蛋白细胞骨架聚合,进而诱导细胞核形变促进T细胞激活相关转录因子YAP的核易位,最终增强了T细胞活化。

T细胞活化中微丝骨架及肌动蛋白相关蛋白的调控

细胞形态是细胞行使功能的前提,微丝骨架是维持细胞形态的主角。在T细胞中,微丝具有响应T细胞抗原受体介导的信号、促使T细胞极化、协助T细胞受体募集、稳定信号分子等作用。T细胞活化是其行使功能的必要步骤,需要两种信号协同刺激,刺激信号促使微丝骨架重构使T细胞极化,形成免疫突触,便于信号转导。这些过程均离不开微丝骨架及肌动蛋白相关蛋白(actin related proteins,Arps)的参与和调节。因此,本文着重介绍微丝骨架及肌动蛋白相关蛋白在T细胞活化中的调控作用。

纤维连接蛋白诱导人胚胎肺纤维细胞增殖的MAPK信号转导通路研究

目的探讨纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺纤维细胞(HFL1)增殖的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路。方法采用不同浓度FN刺激HFL1,观察细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059、p38蛋白激酶抑制剂SB203580对FN诱导HFL1增殖作用的影响。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况。结果FN对HFL1诱导增殖作用呈剂量依赖性升高趋势,在50ng/ml时作用显著;PD98059和SB203580可抑制FN诱导的HFL1细胞增殖。结论FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过MAPK信号转导途径实现。

银杏内酯B对血小板活化因子引起的巨噬细胞趋化及细胞骨架改变的影响

目的考察银杏内酯B（BN52021）对血小板活化因子（PAF）引起的小鼠腹腔巨噬细胞趋化功能的影响，并观察在有无钙离子存在的条件下PAF对与细胞骨架改变相关的丝状肌动蛋白（F—actin）聚合作用的影响，以及BN52021的作用。方法采用Boyden小室法检测化合物对小鼠腹腔巨噬细胞趋化的影响；流式细胞术检测特异性标记的巨噬细胞中F—actin的瞬时变化。结果：PAF可显著刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生趋化效应，同时可促进巨噬细胞丝状肌动蛋白的聚合，其中均以1×10^-8mol／L浓度时的作用最强。

纤维连接蛋白EDA片段与肿瘤相关细胞信号转导通路

纤维连接蛋白(fibronectin,FN)EDA片段与组织发生、创伤和肿瘤形成有关。本文对EDA影响肿瘤生物学行为相关的细胞信号通路研究等进行综述。

人参皂甙Rb1对心力衰竭大鼠心肌缝隙连接蛋白43的影响

目的探讨人参皂甙Rb1(Gs-Rb1)改善阿霉素(Dox)所致心力衰竭(HF)效应是否与调整缝隙连接蛋白43(CX43)有关以及调节CX43的可能机制。方法 Dox诱导的HF大鼠被随机分为Dox组(n=15)和Gs-Rb1组[70mg/(kg·d),n=17],同龄健康鼠作为对照组(n=10);体外Dox干预的心肌细胞亦被随机分为Dox组、Gs-Rb1组和对照组。干预完成后,分别行心脏超声和流式细胞仪(FCM)检查;Westernbolt或RT-PCR检测p21蛋白活化激酶l(PAK1)、蛋白质磷酸酶-2A(PP2A)和CX43等的表达。结果 Gs-Rb1显著改善HF大鼠心功能、显著降低左室质量指数和显著降低Dox所致的心肌细胞凋亡。Dox组CX43mRNA和CX43蛋白显著低于对照组,而Gs-Rb1可显著升高CX43,但仍显著低于对照组。Dox组PAK1与对照组差异无统计学意义(P>0.05),而Gs-Rb1显著上调PAK1表达。Dox组PP2A的表达显著高于对照组,而Gs-Rb1组PP2A的表达显著高于Dox组。结论 Gs-Rb1通过调节CX43改善Dox的心肌损害效应,该效应可能受PAK1-PP2A调节。