高迁移率蛋白B1与活化T细胞核因子2协同促进白细胞介素-2报告基因转录表达

目的探讨高迁移率蛋白B1(HMGB1)促进白细胞介素(IL)-2转录表达免疫效应的分子机制。方法构建HMGB1和活化T细胞核因子2(NFAT2)的真核表达质粒,分别单独转染以及共同转染人胚胎肾细胞系293T、人子宫颈癌细胞系Hela,同时转染IL-2报告基因,检测IL-2报告基因的表达活性。观察当HMGB1与NFAT2质粒共同转染细胞时,是否能协同促进IL-2报告基因的活性。结果在293T细胞中,HMGB1或NFAT2单独转染可提高活性倍数相加为6.8倍,而二者共转时报告基因活性与未刺激对照组相比提高了18.4倍。在Hela细胞中,二者单独转染可提高活性倍数相加为49.9倍,而二者共转时报告基因活性与未刺激对照组相比提高了117.7倍。结论HMGB1可与NFAT2可协同促进IL-2报告基因转录表达。

细胞核因子-κB在睾丸生精细胞凋亡过程中的活化作用

细胞凋亡在精子发生过程中限制睾丸生精细胞总数起着重要的作用,它的调控异常与男性不育密切相关。越来越多的证据显示细胞核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)对睾丸生精细胞凋亡起着调控作用,这促使我们研究人类正常睾丸组织NF-κB的活性及在离体状态下睾丸组织过度凋亡过程中的作用。用电泳迁移率变更分析(EMSA)测定,发现低水平NF-κB组成性DNA结合活性,且通过对NF-κB的亚单位RelA和p50的免疫染色发现,NF-κB定位于Sertoli细胞核内。在体外诱导的睾丸凋亡过程中,Sertoli细胞(睾丸支持细胞)核NF-κB水平和整个生精小管NF-κB DNA结合活性的增加先于检测到发生凋亡的生精细胞。抗炎药物sulfasalazine可有效抑制应激诱导的NF-κB DNA结合力和NF-κB介导的IBa基因表达。更为重要的是,sulfasalazine抑制NF-κB的同时抑制生精细胞凋亡。因此,有可能通过药物抑制NF-κB,治疗短暂应激条件下引起的生精细胞的过度凋亡。

Toll样受体2和4在脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞表达细胞核因子-κB受体活化因子配基中的作用

目的观察在脂多糖(LPS)刺激下,人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)中Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)表达水平的抑制对其表达细胞核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)的影响。方法选用100 ng.mL-1、1μg.mL-1、10μg.mL-1大肠杆菌LPS分别刺激HPDLFs,刺激6、12、24、48 h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HPDLFs表达RANKL的水平。分别运用不同滴度的anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体预处理HPDLFs,观察1μg.mL-1LPS刺激下,其RANKL表达水平的变化。结果 LPS刺激HPDLFs 6 h后,即可检测到RANKL的表达,24h达到顶峰,然后逐渐下降;各LPS质量浓度组的规律基本一致。分别用anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体预处理HPDLFs,在1μg.mL-1LPS刺激下,其产生RANKL的水平明显下降(P<0.05);3组中,RANKL的表达水平有明显差异(P<0.05),其中anti-TLR2+anti-TLR4抗体处理组RANKL表达量最少,anti-TLR4抗体处理组次之,anti-TLR2抗体处理组RANKL的表达量最高。结论 TLR2、TLR4均参与了LPS诱导HPDLFs表达RANKL的过程;与anti-TLR2抗体相比,anti-TLR4抗体能更有效地抑制LPS刺激后HPDLFs表达RANKL的能力。

丹参素对牙槽骨成骨细胞细胞核因子-κB受体活化因子配体/骨保护素表达的影响研究

目的:探讨丹参素对大鼠牙槽骨成骨细胞的细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法:采用体外牙槽骨成骨细胞培养,用含不同浓度(0.10、0.50、1.00、5.00 mg/L)的丹参素血清分别作用于第4代牙槽骨成骨细胞,培养1、3和5 d后,分别通过噻唑蓝(methyl thiazol tetrazolium,MTT)、逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot法检测成骨细胞增殖率、OGP和RANKL mRNA及蛋白表达水平。结果:丹参素对牙槽骨成骨细胞增殖的影响随药物浓度和时间变化而改变,其中含5.00 mg/L丹参素的血清作用3 d后牙槽骨成骨细胞增殖率最高,OGP mRNA和蛋白表达增加( P <0.05)。结论:丹参素能通过增加OGP mRNA和蛋白表达进而促进牙槽骨成骨细胞增殖。

白鹤冲剂对肿瘤坏死因子-α刺激的血管内皮细胞核因子-kB激活的影响

目的:研究白鹤冲剂对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中核因子-κB(NF-κB)活化、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,以探讨白鹤冲剂治疗血管炎的机制。方法:以细胞 ELISA 法、间接免疫荧光法分别观察白鹤冲剂对 HUVEC 中 NF-κB活化以及 ICAM-1表达的影响。结果:白鹤冲剂能抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激的 HUVEC 的 NF-κB的活化及 ICAM-1表达。结论:白鹤冲剂可能通过抑制 NF-κB活化从而有效地调控与炎症过程密切相关的黏附分子的基因表达,发挥治疗血管炎的重要作用。

NF-κB亚单位p50/p65激活促进肺腺癌H1650细胞吉非替尼耐药

目的探究NF-κB经典通路激活与人肺腺癌H1650细胞吉非替尼耐药的内在联系。方法选择肺腺癌HCC827和H1650亲代细胞株,吉非替尼连续处理60 d,检测细胞株生长情况和各细胞株595nm吸光度,确定各细胞株细胞存活率和H1650亲代细胞被诱导成H1650耐药细胞株。Western blot检测各细胞株P-IκBα、NF-κB P-p50和P-p65表达量,Image J灰度仪计算出胞浆和胞核P-p50和P-p65与内参蛋白灰度比值,比较吉非替尼和吉非替尼加吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)联合用药状态下,各细胞株细胞存活率和P-IκB、P-p50和P-p65的表达。结果在无吉非替尼和吉非替尼加PDTC药物干预下,H1650耐药细胞PIκBα表达增加,胞浆和胞核P-p50和P-p65表达,H1650耐药细胞株>H1650亲本细胞株>吉非替尼敏感HCC827细胞株(P<0.05,P<0.01);单独使用吉非替尼干预,H1650耐药细胞株细胞抑制率较H1650亲本细胞株和HCC827细胞株降低(P<0.05,P<0.01),H1650耐药细胞株P-p50和P-p65表达较其他两类细胞株升高(P<0.05);与无吉非替尼干预比较,H1650亲代和耐药细胞P-p50和P-p65均有显著降低(P<0.05,P<0.01);吉非替尼联合PDTC干预,显示H1650亲代和耐药细胞存活率、胞浆和胞核Pp50和P-p65表达均较吉非替尼组降低(P<0.01,P<0.01)。结论 NF-κB经典传导通路激活是H1650亲代细胞残存和转化为吉非替尼耐药细胞的主要因素之一,吉非替尼联合PDTC用药可抑制P-IκBα生成和P-p50、P-p65的激活,从而降低H1650残存细胞生存率和耐药细胞的产生。

趋化因子CXCL13对TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞RANKL表达的影响

目的探讨趋化因子CXCL13对TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞调控细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法 (1)体外培养人骨关节滑膜细胞,并给予10μg/m L TNF-α处理,分别在培养0、6、12、24 h时采用免疫荧光法检测CXCL13表达。(2)人滑膜细胞给予10μg/m L TNF-α处理24 h,将培养液更换为含0、5、10、25 ng/m L CXCL13的培养液继续培养24 h,或将培养液更换为含25 ng/m L CXCL13的培养液分别作用0、1、3、6、24 h;以不加TNF-α及CXCL13处理的常规培养细胞作为对照细胞。收集各浓度、各时间点细胞,采用Western blotting法检测RANKL蛋白相对表达量。结果 (1)TNF-α作用0、6、12、24 h时细胞CXCL13相对表达量(荧光强度)分别为0.907±0.350、0.823±0.730、0.710±0.660、0.653±0.850,组间比较P均<0.05。(2)对照细胞RANKL蛋白相对表达量为0.956±0.014,25 ng/m L CXCL13处理0、1、3、6、24 h时RANKL蛋白相对表达量分别为1.543±0.047、1.366±0.026、0.883±0.026、0.367±0.034、0.246±0.015;0、5、10、25 ng/m L CXCL13作用24 h时RANKL蛋白相对表达量分别为0.287±0.007、0.189±0.008、0.069±0.004、0.022±0.002;上述各组、各时间及各浓度细胞比较P均<0.05。结论趋化因子CXCL13能够在一定浓度和时间内抑制TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞RANKL蛋白表达。

姜黄素对类风湿关节炎破骨细胞分化中NF-κB p65和NFATc1表达的影响

目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)破骨细胞(osteoclast,OC)分化中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65、活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells cytoplasmic 1,NFATc1)表达的影响。方法密度梯度离心法分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),经核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)诱导培养为OC,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色及骨吸收功能检测鉴定OC,分别用不同浓度(0、2.5、5及10μmol/L)的Cur进行干预。采用CCK-8法进行Cur细胞毒性检测;计数TRAP染色阳性细胞数;Western-blotting检测NF-κB p65、NFATc1蛋白的表达;免疫荧光染色检测NF-κB p65核易位。结果 CCK-8结果示,Cur2.5、5和10μmol/L的浓度对PBMC未产生细胞毒性;TRAP染色结果示,Cur抑制RANKL诱导的RA-OC分化;Westernblotting结果示,经不同浓度Cur干预后,NF-κB p65在细胞浆中的表达明显升高,在细胞核中的表达明显降低,NFATc1的蛋白表达明显降低;免疫荧光染色结果示Cur抑制NF-κB p65核易位。结论 Cur能明显抑制NF-κB的入核表达,降低NFATc1的表达,从而抑制RA-OC的分化。

巴戟天含药血清对成骨-破骨细胞共育体系OPGmRNA、RANKLmRNA表达的影响

目的探讨不同浓度巴戟天含药血清对体外成骨-破骨细胞共育体系OPG、RANKLmRNA表达的影响方法取健康5周龄SD大鼠12只,体重165-172 g。随机分4组,分别予生理盐水及低中高三种浓度巴戟天溶液灌胃,分离血清。取健康5周龄SD大鼠6只,体重165-172 g,取四肢长骨骨髓基质细胞,诱导培养破骨细胞;用24 h内新生SD乳鼠4只,体重5~6 g,头盖骨分离体外培养成骨细胞。将成骨细胞加入含有培养5 d的破骨细胞中,共育2 d后分别改用不同浓度巴戟天含药血清与不含药血清的培养基培养,设低、中、高浓度组及对照组,培养3d后提取各组总RNA,应用RT-PCR检测各组OPGmRNA、RANKLmRNA表达。结果 RT-PCR结果示,中、高浓度组RANKLmRNA表达量均低于对照组（P〈0.05）,而OPGmRNA表达量显著高于对照组（P〈0.001）。结论巴戟天含药血清可上调共育体系中OPGmRNA表达,并下调RANKLmRNA表达,从而降低破骨细胞分化成熟及骨吸收活性。

活化T细胞核因子-2可介导高迁移率族蛋白B1促进白细胞介素-2转录表达

目的 观察活化T细胞核因子-2（NFAT2）在高迁移率族蛋白B1（HMGB1）促进白细胞介素-2（IL-2）转录表达中的介导作用.方法 将构建好的HMGB1和NFAT2质粒单独或共同转染人胚胎肾细胞株293T,同时转染IL-2报告基因,并在此基础上应用小分子干扰RNA（siRNA）质粒对内源性及外源性NFAT2表达进行特异性抑制,观察对IL-2报告基因活性的影响.结果 在293T细胞中,内源性转染实验促使IL-2报告基因活性增加到17.81±1.49,但随着siRNA质粒转染剂量从0 μg/孔逐渐增加到4.8μg/孔,IL-2报告基因活性在内源性抑制实验中降低最小到1.42±0.17,在外源性抑制实验中活性最高为54.16±5.49,受抑制后降低最小到2.97±0.34.结论 NFAT2介导HMGB1促进IL-2报告基因转录表达.

破骨细胞和骨保护素／细胞核因子-κB受体活化因子配体系统在银屑病关节炎骨质破坏中的作用

目的探讨银屑病关节炎（PSA）患者体内破骨细胞和骨保护素／细胞核因子-κB受体活化因子配体（OPG／RANKL）系统的水平与骨质破坏的关系。方法分离41例PSA患者、20例骨关节炎患者及24名健康对照者的外周血单个核细胞诱导生成破骨细胞，采用耐酒石酸酸性磷酸酶染色法进行鉴定。运用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定3组患者血清中的骨保护素和RANKL的水平，同时收集PSA患者的临床实验室资料。采用单因素方差分析和直线回归分析进行统计学处理。结果PSA组的破骨细胞数目[（17．7±4．8）个／视野]明显多于骨关节炎组[（6．5±1．6）个／视野]和健康对照组[（6．4±1．6）个／视野]，差异有统计学意义（P〈0．05）。PSA组的RANKL水平[（178±38）pg／ml]明显高于骨关节炎组[（32±4）pg／ml]和健康对照组[（67±17）pg／ml]，差异有统计学意义（P〈0．05）。与无骨质破坏的PsA组相比较，破骨细胞和RANKL的水平在有骨质破坏的PSA组中明显增高[（17．6±0．9）个，视野与（7．9±1．3）个，视野和（199±72）pg／ml]与（128±44）pg／ml]，差异有统计学意义（P〈0．01）。PSA患者的影像学评分和破骨细胞、RANKL的水平呈正相关（r=0．83，0．76；P〈0．05）。结论PSA患者外周血中的破骨细胞数目和RANKL水平显著升高，PSA患者体内的破骨细胞和RANKL水平升高与骨质破坏相关密切，提示破骨细胞及RANKL水平的变化可以反映骨质破坏的严重程度。

山莨菪碱联合碘解磷定对急性有机磷农药中毒患者乳酸、NF-κB及内皮功能的影响

目的观察山莨菪碱联合碘解磷定对急性有机磷农药中毒患者乳酸、核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)的影响。方法选择2009年2月—2017年3月新疆医科大学第一附属医院急救·创伤中心急诊内科收治的急性有机磷农药中毒患者128例作为研究对象,随机数字表法分为对照组和观察组各64例。2组患者均给予常规治疗,对照组患者另予碘解磷定治疗,观察组另加山莨菪碱联合碘解磷定治疗。比较2组患者临床疗效,检测治疗前后血清乳酸、NF-κB、内皮功能指标及血清胆碱酯酶水平变化,比较不良反应发生率。结果观察组患者临床治疗总有效率明显高于对照组(96.88%vs.81.25%,χ^2/P=8.020/0.005)。与治疗前比较,2组患者血清NO明显升高,乳酸、NF-κB及ET-1明显降低,且观察组改善程度较对照组更显著(t/P=12.546/0.000,10.710/0.000,14.409/0.000,22.916/0.000)。治疗后,2组血清胆碱酯酶水平逐渐升高,且观察组患者在各个时间点均高于对照组(t/P=15.760/0.000,13.061/0.000,5.637/0.000)。结论山莨菪碱联合碘解磷定治疗急性有机磷农药中毒患者,可以有效降低其血清乳酸、NF-κB水平,升高胆碱酯酶水平,改善机体内皮功能,疗效显著。

四君子汤对胃癌MGC803细胞NFAT5及凋亡因子表达的影响

目的观察四君子汤含药血清对胃癌MGC803细胞活化T细胞核因子5(Nuclear factor of the activated T cell 5,NFAT5)及凋亡因子表达的影响,进一步探讨四君子汤抗肿瘤的作用机制。方法SD大鼠随机分为4组,依次为空白对照组(生理盐水等体积剂量灌胃),四君子汤低剂量组(0.246 g·kg^(-1))、中剂量组(0.492 g·kg^(-1))和高剂量组(0.984 g·kg^(-1)),各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,行腹主动脉取血,收集血清,过滤后制备高、中、低剂量四君子汤含药血清。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组MGC803细胞增殖水平,流式细胞术检测各组MGC803细胞凋亡率,Real-time PCR法检测各组MGC803细胞B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及NFAT5 mRNA的表达。结果与空白对照组比较,四君子汤中、高剂量组含药血清在24、48、72 h均能降低细胞增殖能力(P<0.05),且48、72 h抑制效果更为显著。与空白对照组比较,四君子汤中、高剂量组含药血清细胞凋亡率升高(P<0.05)。与空白对照组比较,四君子汤低、中、高剂量组含药血清的Bcl-2 mRNA表达降低,四君子汤低、中、高剂量组含药血清的Caspase-3 mRNA表达升高,四君子汤中、高剂量组含药血清的NFAT5 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论中、高剂量四君子汤含药血清能够促进Caspase-3表达,抑制NFAT5 mRNA、Bcl-2 mRNA的表达,抑制胃癌MGC803细胞增殖并促进其凋亡发生,发挥抗肿瘤作用。

灯盏花对成骨细胞及破骨前体细胞OPG/RANKL/RANK表达的影响

目的研究不同浓度和不同作用时间的灯盏花对体外培养的成骨细胞和破骨前体细胞中OPG/RANKL/RANK mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花对骨改建的作用及其机制。方法体外培养人MG63细胞和小鼠RAW264.7细胞,分别取第三代细胞分为对照组和不同的实验组,分别应用不同浓度的灯盏花(0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL)干预48 h后提取总RNA和蛋白质,同时单独对0、1 mg组设12、24、48 h时间点提取蛋白质,采用半定量RT-PCR方法检测MG63细胞OPG mRNA和RANKL mRNA的表达以及RAW264.7细胞RANK mRNA的表达,采用Western blot法检测MG63细胞OPG蛋白和RANKL蛋白的表达以及RAW264.7细胞RANK蛋白的表达。结果灯盏花随浓度(0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL)增高,干预48 h后MG63细胞OPG mRNA和蛋白表达逐步降低(P<0.05);MG63细胞RANKL mRNA和蛋白表达逐步增加(P<0.05);RAW264.7细胞RANK mRNA表达增加(P<0.05),但0.1 mg/mL组较0.01 mg/mL组mRNA表达稍降低,RANK蛋白表达逐步增加(P<0.05)。1 mg/mL灯盏花干预12、24、48 h后MG63细胞OPG蛋白表达随时间逐步降低(P<0.05)、RANKL蛋白表达随时间逐步增加(P<0.05);RAW264.7细胞RANK蛋白表达随时间逐步增加(P<0.05)。结论灯盏花大致上呈剂量和时间依赖性抑制成骨细胞OPG表达,促进成骨细胞RANKL的表达和破骨前体细胞RANK的表达,灯盏花可能有促进骨吸收的作用。

不同咀嚼压力对大鼠正畸移动牙压力侧牙槽骨改建的影响

目的 研究不同咀嚼压力对大鼠正畸移动牙压力侧牙槽骨改建的影响。方法 选取8周龄雄性SD大鼠45只,按随机数字表法分为基线组5只、软食组20只和硬食组20只。基线组大鼠在实验初始处死、取材。软食组和硬食组建立上颌右侧第一磨牙近中移动模型,左侧不加力作为对照。各组喂以相应饮食,分别于加力后第3、5、7、14天各处死5只大鼠,取双侧上颌骨。Micro CT测量加力磨牙近中移动距离及压力侧牙槽骨骨体积/组织体积(BV/TV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和骨小梁厚度(Tb.Th)。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数破骨细胞数量;原位杂交染色观察细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)mRNA表达随时间变化情况。结果 第14天时软食加力组牙齿移动距离小于硬食加力组(P<0.05)。软食加力组与硬食加力组压力侧牙槽骨BV/TV、Tb.Sp、Tb.Th差异无统计学意义。细胞计数和原位杂交结果显示,在第5、7天,软食加力组的破骨细胞数量和RANKL/OPG比值均低于硬食加力组(P<0.05)。结论 较小的咀嚼压力会减低大鼠正畸牙压力侧牙槽骨中的破骨活动,减小牙齿移动距离。

基于RANKL-RANK-OPG轴研究丹参素防治牙槽骨骨质疏松的作用

目的:探讨RANKL-RANK-OPG轴在丹参素防治牙槽骨骨质疏松中的作用。方法:SD大鼠随机分为3组:对照组、去卵巢组和丹参素治疗组。实验90d后取大鼠牙槽骨,HE染色观察牙槽骨组织形态学改变,组织化学染色方法检测牙槽骨组织中TRAP的活性,免疫组化的方法检测牙槽骨组织中RANKL和OPG的表达情况。结果:与去卵巢组相比:丹参素治疗组牙槽骨骨量明显增多,TRAP阳性的破骨细胞数减少,RANKL/OPG减小。结论:丹参素防治牙槽骨骨质疏松可能与其调控RANKL-RANK-OPG轴有关。

雷公藤多苷对rmMIF诱导大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及RANKL/OPG表达的影响

目的观察雷公藤多苷(tripterygium glycoside,TG)对重组鼠巨噬细胞移动抑制因子(recombinantmouse macrophage migration inhibitory factor,rmMIF)诱导大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖及其细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappaB ligand,RANKL)、骨保护素(osteo-protegerin,OPG)表达的干预作用。方法采用大鼠FLS细胞株RSC-364,常规方法复苏、培养、传代,实验用3～5代FLS。分为4组:空白对照组加入200μl DMEM培养液,另3组分别加入200μl含rmMIF(200 ng/ml)(MIF组)、rm-MIF(200 ng/ml)+TG(20μg/ml)(MIF+TG组)、rmMIF(200ng/ml)+MTX(0.5μg/ml)(MIF+MTX组)的DMEM培养液。置37℃、5%CO2孵箱培养48 h。MTT法检测FLS的增殖活性;免疫组化法检测滑膜细胞OPG/RANKL的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测FLS上清液OPG、RANKL表达。结果 MIF组增殖活性高于空白对照组,MIF+TG组、MIF+MTX组增殖活性低于空白对照组和MIF组(P<0.01)。MIF+TG组和MIF+MTX组细胞OPG标记指数均高于空白对照组和MIF组,MIF+TG组OPG标记指数高于MIF+MTX组(P<0.01,P<0.05)。MIF组细胞RANKL标记指数高于空白对照组,MIF+TG组、MIF+MTX组RANKL标记指数均低于MIF组(P<0.05,P<0.01)。MIF组上清液RANKL浓度和RANKL/OPG值均高于空白对照组,MIF+MTX组上清液RANKL浓度低于空白对照组(P<0.05,P<0.01);MIF+TG组和MIF+MTX组上清液RANKL浓度和RANKL/OPG值均低于MIF组(P<0.01)。结论 rmMIF可促进体外培养大鼠FLS增殖,上调FLS的RANKL表达和RANKL/OPG值;TG抑制rmMIF诱导的大鼠FLS增殖、降低rmMIF诱导大鼠FLS分泌RANKL、下调FLS的RANKL表达和RANKL/OPG比值,可能是其治疗类风湿关节炎的骨免疫学机制之一。

Capn4通过黏着斑激酶磷酸化激活核转录因子-κB信号调控人肾癌细胞增殖

目的探讨钙蛋白酶小亚基1（Capn4）的表达对肾透明细胞癌（ccRCC）增殖、迁移、侵袭的影响及其分子作用机制。方法选取Capn4高表达ccRCC细胞株786-0和低表达的Caki-1细胞株，采用慢病毒转染技术构建Capn4稳定低表达的786-0细胞株（786-0-shCapn4）和稳定过表达Capn4的Caki-1细胞株（Caki-1-Capn4），通过荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）验证Capn4在转染肾细胞癌（RCC）细胞株中的表达。通过细胞增殖实验、划痕实验及Transwell实验观察Capn4对肾癌细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。通过Westernblot法验证黏着斑激酶（FAK）、磷酸化FAK、核转录因子-κB（NF-κB）和磷酸化NF-κB的表达。结果细胞计数试剂盒（CCK-8）结果显示，Capn4过表达后细胞增殖能力过表达组高于对照组（P=0．010），而转染Capn4短发卡RNA（shRNA）后细胞增殖能力下调组低于对照组（P=0．010）；划痕实验结果表明，24hCakil-Capn4细胞的迁移距离过表达组高于对照组（P=0．001），786-O-shCapn4细胞的迁移距离下调组低于对照组（P=0．001）；Transwell结果表明，24hCakil-Capn4细胞的侵袭细胞数量过表达组高于对照组（P=0．001），786-0-shCapn4细胞的迁移距离下调组低于对照组（P=0．001）；Westernblot结果显示：Cakil-Capn4组FAK及NF-κB磷酸化水平较各自对照组上调（P=0．010），而786-0-shCapn4组FAK及NF-κB磷酸化水平较各自对照组下调（P=0．010）；FAK特异性抑制剂（PF573228）或者NF-κB抑制剂QNZ均可抑制由Capn4过表达引起的癌细胞生长速度的增加。结论Capn4通过激活FAK和下游信号通路，从而激活NF-κB，进而促进RCC细胞生长。