癫癎小鼠海马内活化素βA mRNA表达的变化

目的 探讨匹鲁卡品(pilocarpine,PC)诱导的癫癎小鼠海马内活化素(activin,ACT)β A mRNA表达的变化。方法 应用逆转录-聚合酶链反应研究癫癎持续状态(status epilepticus,SE)与非持续状态(NSE)小鼠不同时间海马ACTβA mRNA的表达;原位杂交技术研究SE后不同时间小鼠海马ACTβmRNA表达的分布。结果 NSE组各时间点间及与相应对照组间ACTβA mRNA表达无显著差异(P>0.05);SE开始前(0 h)的抽搐小鼠ACTβAmRNA表达显著低于正常与相应NSE组,在SE 1 h时已较0 h显著增高(P<0.01),但与正常及相应NSE组无差异。于SE 1 h控制癫癎发作之后仍继续增高,6 h达高峰,48 h下降至略高于对照水平。与对照组及NSE组相比,3、6、24 h增高有极显著差异(6 h P<0.001,3、24 h P≤0.01)。ACT βAmRNA表达明显上调的部位最早于SE后3 h出现于海马CA2与DG区,6 h后CA3区也见明显表达,24 h后仅CA2、CA3区有表达,48 h后与对照组相似未见明显表达。结论 PC诱导的SE能明显上调海马ACTβAmRNA的表达,而NSE对之无明显上调作用;ACTβA mRNA表达的上调很可能是神经元对抗兴奋性损害的一种内源性保护效应。

亚洲黑熊活化素βA亚基基因克隆及分子进化分析

借鉴互联网中已克隆的活化素βA亚基基因的序列,设计并合成一对兼并引物,首次扩增和克隆到亚洲黑熊βA亚基基因的357 bp片段,以水作为阴性对照排除污染,多次重复实验获得一致稳定结果.序列分析显示此片段在处于不同进化程度的物种之间,仍然具有高度的保守性,亚洲黑熊βA亚基基因与人相比有29个核苷酸差异,一致性高达91.6%;与亲缘关系较近的大熊猫、小熊猫和马来熊相比,分别有4、20、3个核苷酸差异,一致性分别为98.9%、94.4%、99.2%.系统发育分析和酶切图谱分析显示亚洲黑熊、大熊猫和马来熊具有较近的亲缘关系,而它们与小熊猫的亲缘关系较远.

鸭各级卵泡中抑制素α和抑制素/活化素β_A亚基信使RNA表达丰度的研究

采用非常灵敏的定量竞争 ＲＴ－ＰＣＲ技术对鸭各级卵泡中抑制素α和βＡ亚基的ｍＲＮＡ表达丰度作了研究，发现在各级卵泡中均有此两亚基ｍＲＮＡ的表达，大卵泡中的α亚基表达量要高于βＡ亚基。α亚基ｍＲＮＡ在小黄卵泡（ＳＹＦ）中表达量最高，以其ｍＲＮＡ的平均相对丰度为１．００，则Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４／５、ＬＷＦ（大白卵泡）中α亚基ｍＲＮＡ的平均相对含量分别为： ０.２６±０．０５、０．２８±０．０７、０．５７±０．１２、０．９８±０．０９、０．０２６±０．００６。βＡ亚基 ｍＲＮＡ在Ｆ１中表达量最高，以其ｍＲＮＡ的平均相对丰度为１．００，则 Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４／５、ＳＹＥ、ＬＷＦ中βＡ亚基ｍＲＮＡ的平均相对含量分别为：０．２１８±０．０９、０．１１１±０．０３、０．０５８±０．０１１、０．０５３±０．０１３、０．００５±０．００２。结果显示，随着卵泡的增大α亚基表达量降低， βＡ亚基却增加，说明在卵泡发育过程中， α和βＡ亚基的表达是独立调节的，另外，βＡ亚基在Ｆ１中的大量表达，说明Ｆ１可能是形成二聚体抑制素／活化素的主要场所。

小鼠急性致痫间后海马活化素βA基因表达的变化与意义初探

目的探讨小鼠癫持续状态(Statusepilepticus,SE)后海马活化素βA基因的表达与意义。方法采用毛果芸香碱诱导的SE小鼠模型,应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)及原位杂交观察SE后海马活化素βA基因表达的动态变化;应用尼氏染色观察海马病理形态结构的变化。结果SE后3h海马活化素βAmRNA表达即显著增高,6h达高峰,持续至约24h后开始回落,48h恢复近正常水平;活化素βAmRNA表达最先在海马CA2及DG区上调,高峰时CA3区亦见明显表达,48h后仅CA2区仍可见阳性表达;海马活化素βAmRNA水平与神经元抗损伤力有关。结论毛果芸香碱诱导的SE能明显上调海马活化素βAmRNA表达,其水平的上调可能有助于增强海马神经元抗兴奋性损伤的能力。

鸭卵泡及精巢中卵泡抑素和抑制素/活化素β_B亚基mRNA表达的研究

卵泡抑素是与抑制素／活化素功能密切相关的一种糖蛋白激素，采用定量竞争ＲＴ－ＰＣＲ 技术对鸭各级卵泡及成熟与未成熟精巢中的卵泡抑素和抑制素／活化素βＢ亚基的ｍＲＮＡ表达 丰度进行了研究，发现在上述组织中均有此两基因ｍＲＮＡ的表达，且只在小卵泡中表达较丰 富。卵泡抑素在小黄卵泡（ＳＹＦ）中表达量最高，以其ｍＲＮＡ的平均相对丰度为１．００，则Ｆ１（最 大卵泡）、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６～８、ＬＷＦ（大白卵泡）、ＴＩ（未成熟精巢）和ＴＭ（成熟精巢）中卵泡抑素 ｍＲＮＡ的平均相对含量分别为０．０１１±０．００４、０．０１９±０．００６、０．０２１±０．００９、０．０２８±０．００７、 ０．０７５ ± ０．０２３、０．１５ ± ０．０７２、０．２９ ± ０．０６８、０．０３７ ± ０．０１１和０．０１２±０．００４。βＢ亚基也在小黄卵 泡中表达量最高，以其ｍＲＮＡ的平均相对丰度为１．００，则 Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６－８、ＬＷＦ、ＴＩ和ＴＭ 中βＢ亚基ｍＲＮＡ的平均相对含量分别为：０．００９ ± ０．００３、０．０１３±０．００５、０．０１９ ± ０．００７、０．０２３ ± ０．００６、０．２９±０．０８４、０．８４±０．

大熊猫及其近种活化素基因β_A亚基成熟肽序列的克隆分析及其在分类地位上的应用

借鉴互联网中已经克隆到的Activin基因 βA 亚基成熟肽序列 ,设计并合成 1对兼并引物 ,利用PCR技术从大熊猫、小熊猫、马来熊的基因组DNA中直接扩增目的基因片段 ,并分别克隆到大肠杆菌载体pBlueScript+ 当中 ,然后对培养产物进行序列测定。DNA序列分析表明 ,三种物种的Activin基因 βA 亚基成熟肽序列长度均为 35 9bp ,无内含子。基因片段编码一个含有 119个氨基酸残基的肽段。大熊猫、小熊猫、马来熊在该成熟肽核苷酸和氨基酸序列上表现出高度的同源性 ,其中核苷酸同源性为 93.9% ,氨基酸同源性高达 99%以上。此外 ,3种动物的核酸限制性酶切图谱也高度相似。与GenBank中收录的其他物种Activin基因 βA 亚基成熟肽序列相比较 ,显示此片段在处于不同进化程度的物种之间仍具有高度保守性。运用系统发育与进化树软件包PHILIP ,并结合克隆序列对大熊猫、小熊猫、马来熊进化与分类地位进行了探讨。采用不同的统计学分析方法 ,所得到的 3个物种系统发育进化树的拓扑结构完全一致。相比较而言 ,大熊猫与马来熊有着较近的亲缘关系 ,而小熊猫与上述两个物种的亲缘关系相对疏远。结果支持将大熊猫与马来熊归为熊科、而将小熊猫单列成科的学术观点。这是首次以生殖相关的核基因作为研究对象 。

抑制素、活化素和卵泡抑素研究进展

抑制素、卵泡抑素和活化素是3种参与垂体促卵泡素调控过程的糖蛋白激素,随着对促卵泡素调控过程的深入了解,发现这3种蛋白在动物生殖周期中发挥着重要的作用。文章主要就抑制素、卵泡抑素和活化素的结构特征、生理功能以及抑制素和卵泡抑素对活化素生物学活性的抑制机理进行了综述。

孔雀活化素基因(activin)β_A 亚基成熟肽序列的分子克隆及其对白孔雀起源与分类的佐证分析

参考已经克隆的活化素(activin)基因βA 亚基成熟肽序列,设计一对兼并引物,从绿孔雀(pavo muticus)、蓝孔雀(pavo cristatus)和白孔雀基因组中克隆到活化素基因βA 亚基成熟肽序列。测序结果表明,活化素基因βA 亚基成熟肽序列长345 bp,编码115个氨基酸。序列分析表明,蓝孔雀与绿孔雀核苷酸同源性为98.0%,而蓝孔雀与白孔雀核苷酸同源性为98.8%。NCBI搜索结果显示,活化素基因βA 亚基成熟肽序列在不同物种间都非常保守。氨基酸功能位点分析表明,活化素βA 亚基成熟肽可能在细胞信号传递过程中发挥了很重要的作用。另外,利用活化素基因βA 亚基成熟肽序列构建了3种孔雀的限制性酶切图谱及系统发生树。结果显示,白孔雀与蓝孔雀的亲源关系比与绿孔雀的亲源关系近。认为,白孔雀来源于蓝孔雀,很可能是蓝孔雀一个杂交后代或亚种,而不是人们通常所认为的仅仅是蓝孔雀的一个颜色突变体。

活化素A在未足月胎膜早破合并羊膜腔感染中的表达及临床意义

目的探讨活化素A在未足月胎膜早破合并羊膜腔感染中的表达水平及其临床意义。方法将我院妇产科2014年4月至2015年3月收治的30例未足月胎膜早破合并羊膜腔感染(IAI)患者作为观察组,另选同期30例未足月胎膜早破患者为对照组,在征得两组患者知情同意下对其活化素A表达水平进行测定及比较,以分析活化素A在未足月胎膜早破合并羊膜腔感染诊断中的应用价值。结果观察组患者的血清活化素A表达水平和羊水中活化素A表达水平分别为(245.35±12.85)pg/m L、(396.21±5.33)pg/m L,均明显高于对照组的(132.44±11.46)pg/m L、(277.65±5.21)pg/m L,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);观察组中轻度未足月胎膜早破合并羊膜腔感染者血清、羊水中活化素A表达水平分别为(120.85±11.84)pg/m L、(360.72±5.50)pg/m L,均低于中、重度未足月胎膜早破合并羊膜腔感染者的(370.44±12.92)pg/m L、(500.24±5.75)pg/m L,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论活化素A表达水平与未足月胎膜早破合并羊膜腔感染息息相关,膜腔感染程度越高,则其表达水平越高,可作为临床判定是否发生羊膜腔感染以及感染程度的重要参照指标。

活化素和卵泡抑素对绍鸭卵泡颗粒细胞FSH受体mRNA表达作用的研究

分别用活化素 (Activin)、卵泡抑素 (FSP)及其组合 (Activin +FSP)来处理培养的鸭未成熟卵泡颗粒细胞 ,发现在FSH存在与不存在的情况下 ,Activin均能促进FSH受体mRNA的表达 ,且随着Activin浓度的增大 ,其刺激作用增强。FSP自身对FSH受体产生无显著作用 ,但能中和Activin对该受体产生的促进作用。这说明FSP和Activin对颗粒细胞具有自分泌作用 ,二者通过调节FSH受体mRNA的表达而在卵泡的生长发育过程中起着重要作用。

探讨活化素B在皮肤创伤愈合中的作用

目的探讨活化素B(activinB)在离体(In vitro)和载体(In vivo)上对小鼠皮肤创伤愈合的影响。方法利用原代角朊细胞创伤划痕实验在细胞水平上探索不同浓度activinB对细胞划痕愈合的作用,进一步观察activinB对小鼠皮肤创伤模型愈合的影响。每日观察小鼠伤口并记录小鼠创伤愈合面积,断髓处死小鼠取材制作石蜡切片,HE染色,光镜下观察小鼠皮肤动态愈合过程。结果用浓度为10 ng/mL的activinB刺激细胞,发现细胞创伤愈合的速度最快,而100 ng/mL孵育细胞,反而对细胞创伤划痕有抑制作用。进一步利用细胞上的最佳浓度10 ng/mL的activinB刺激小鼠创伤切口,发现其能加速小鼠皮肤创伤愈合。创面闭合率数据:实验组创面愈合速度明显快于对照组(F=70.462,P=0.000)。相同时间点比较实验组创面闭合率优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。肉眼大体观察实验组创面较对照组愈合速度快,HE染色光镜观察显示实验组上皮化速度要快于对照组,至创伤后第5天时,实验组上皮化已经完成,而对照组尚未完成,并且activinB能促进毛囊生长。结论activinB对皮肤角朊细胞创伤愈合有浓度依赖性;适中浓度的细胞因子activinB(10 ng/mL)有加速皮肤创伤愈合,促进毛囊生长的作用。

人活化素结合蛋白的分离及纯化

为了进一步研究人活化素结合蛋白的免疫生物学活性，从人卵泡液中提取了活化素结合蛋白，采用亲和层析及高效液相层析法，最终获得35KDa，SDS－PAGE显示为一条带的人活化素结合蛋白，经免疫活性测定、激活素结合试验以及FSH分泌抑制试验证实，所纯化的人活化素结合蛋白为具有生物学活性的天然活化素结合蛋白，可供进一步的免疫生物学研究用。

仙居鸡抑制素/活化素β_A亚基成熟区的cDNA克隆及序列分析

本研究根据发表的来航鸡抑制素 /活化素βA 亚基序列设计引物 ,运用RT PCR技术从仙居鸡卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素 /活化素βA 亚基成熟区序列 ,并进行了克隆和测序。结果显示 ,所测鸡成熟βA 亚基是由 116个氨基酸 (aa)残基组成的蛋白质 ,共有 9个半胱氨酸残基 ,与发表的鸡及哺乳类相应序列对比 ,其核苷酸序列的同源性分别为 99.2 %和 81%～ 85 .2 % ,其预测氨基酸序列的同源性分别为 10 0 %和 96 .6 %～ 97.4 % ,且所测鸡 βA 亚基成熟区半胱氨酸残基的数目和位置与发表的鸡和哺乳类相同 ,说明该亚基的序列及结构在不同物种间具高度保守性 。

广西巴马小型猪活化素β_A/β_B基因cDNA克隆与序列分析

目的通过克隆广西巴马小型猪活化素(activin)βA/βB基因cDNA,分析其序列,为研究活化素的生物学功能打下基础。方法提取广西巴马小型猪发情母猪的卵巢总RNA,并以其为模板,以下游特异性引物为反转录引物,在AMV酶作用下合成cDNA;用LA-Taq进行PCR扩增出包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列,把两个序列分别连接到PMD-18载体进行克隆和序列分析。结果包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列长度分别为964 bp和791 bp,两个亚基的序列比较保守,与GenBank上发表的猪activin两个亚基同源性达到99.79%和99.62%。activinβA基因有两个碱基发生突变,其中一个在成熟肽序列上,一个在非编码序列上;βB基因信号肽序列上有三个碱基发生突变,其中一个是同义突变。

抑制活化素受体样激酶5对增生性瘢痕成纤维细胞中胶原蛋白沉积的影响

目的研究抑制活化素受体样激酶(ALK)5对增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白(COL1A2)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法手术取增生性瘢痕组织进行成纤维细胞体外原代培养,采用不同浓度(1、5、10μM)的ALK5抑制剂CP-639180对增生性瘢痕成纤维细胞干预3 h后,分别采用定量逆转录PCR和Western blot方法检测Ⅰ型胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白的表达。结果与对照组比较,ALK5抑制剂处理后,成纤维细胞中COL1A2的mRNA和蛋白含量均明显降低,且COL1A2的mRNA和蛋白水平与抑制剂的浓度呈反比(P<0.05,P<0.01)。同样,ALK5抑制剂在转录水平和蛋白翻译水平降低了瘢痕成纤维细胞中α-SMA的表达(P均<0.05)。结论应用小分子ALK5抑制剂CP-639180可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA,进一步抑制胶原纤维的合成,为增生性瘢痕治疗研究提供新的思路。

东北白鹅抑制素/活化素β_B亚基成熟区cDNA的克隆

利用RT-PCR技术从东北白鹅卵泡的总RNA中扩增出了抑制素βB亚基成熟区序列,经RCR扩增出357bp片段,该片段与pMD18-T载体连接,转化到JM109感受态细胞,所得阳性克隆进行双酶切鉴定和PCR鉴定,并进行了测序分析,获得的克隆序列与设计的序列一致。

抑制素/活化素和卵泡抑素对卵巢功能的调节

抑制素 /活化素和卵泡抑素是重要的糖蛋白激素 ,对卵巢功能具有局部调节作用。本文简述了抑制素 /活化素和卵泡抑素对颗粒细胞增殖与分裂、卵子成熟、类固醇激素合成及黄体功能调节研究的进展情况 ,指出了目前研究中存在的关键问题 。

仙居鸡抑制素/活化素β_B亚基成熟区cDNA的克隆及序列分析

根据发表的哺乳类抑制素 /活化素 βB亚基 c DNA序列设计引物 ,运用 RT- PCR技术从仙居鸡卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素 /活化素βB亚基成熟区序列 ,并进行了克隆和测序。结果显示 ,鸡成熟βB亚基是由 115个氨基酸(aa)残基组成的蛋白质 ,具有 9个半胱氨酸残基 ,与发表的哺乳类相应序列对比 ,其核苷酸序列的同源性为 79.7%～82 .9%,其编码氨基酸序列的同源性为 95 .7%～ 98.3%。 βB亚基成熟区半胱氨酸残基的数目和位置与发表的哺乳类相同。说明该亚基的序列及结构在不同物种间具高度保守性 ,提示抑制素 /活化素 βB亚基可能具重要的生理功能。

主动免疫猪活化素重组融合蛋白疫苗对巴马小型猪生长性能的影响研究

以含有巴马小型猪活化素成熟肽基因的重组质粒pRSETA-ACTA和pRSETA-ACTB的重组融合蛋白疫苗,对60日龄的巴马小型猪进行免疫,以探讨活化素免疫调控动物生长性能的作用机理。结果表明:主动免疫重组融合蛋白疫苗ACTA对巴马小型猪的日增重无显著影响(P>0.05);而主动免疫重组融合蛋白疫苗ACTB后1～28d、29～56d、1～56d,试验组日增重比对照组分别提高了5.3%(P>0.05)、17.4%(P<0.05)和14.2%(P<0.05)。ELISA检测结果发现,试验猪主动免疫ACTA或ACTB重组融合蛋白疫苗后均能显著产生抗活化素抗体(P<0.05);主动免疫ACTB重组融合蛋白疫苗极显著地提高了血清中卵泡抑制素(FS)的浓度(P<0.01)。可见,该研究制备的ACTB重组融合蛋白疫苗可有效促进巴马小型生长猪的生长、提高血清中FS的浓度。