活化诱导的胞嘧啶核苷脱氨酶与免疫球蛋白基因多样性及免疫性疾病的关系

类别转换重组(CSR)和体细胞高频突变(SHM)是活化的B淋巴细胞在免疫球蛋白基因组中启动第2次多样化进程的2个重要过程,然而活化诱导的胞嘧啶核苷脱氨酶(AID)是CSR和SHM过程中必需的酶。研究发现,AID在免疫球蛋白基因多样性中发挥重要作用,并且与免疫性疾病有关。现就AID与免疫球蛋白基因多样性及免疫性疾病之间的关系进行综述。

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶、P53在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨结直肠癌组织中活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶(AID)和P53的表达水平及其与临床病理特征的相关性.方法:采用免疫组织化学对101例结直肠癌组织中AID、P53的表达进行检测,分析其与肿瘤临床病理特征的相关性.采用免疫印迹检测12例新鲜结直肠癌标本中癌组织及癌旁组织中AID蛋白的表达.结果:结直肠癌组织中AID、P53阳性表达率分别为47.5％和61.4％.AID的表达在结直肠癌分化程度、病理分期、性别及肿瘤大小各组别中的差异无统计学意义,AID蛋白的表达在淋巴结有无转移及P53阴阳性表达组间的差异有统计学意义,AID表达与P53的表达呈正相关性;免疫印迹也证实AID在结直肠癌组织中的表达高于癌旁组织.结论:AID可能参与了结直肠癌的发生、发展,但是具体机制仍需进一步研究.

活化诱导胞嘧啶核苷酸脱氨酶对膀胱癌T24细胞表型的影响

目的探讨AID(活化诱导胞嘧啶核苷酸脱氨酶)在人体膀胱癌、癌旁组织中的表达情况以及AID对膀胱癌细胞株T24增殖、侵袭、迁移以及凋亡的影响。方法运用Western bolt以及免疫组织化学染色法检测16例临床膀胱癌组织以及癌旁组织中AID的相对表达量;将携带有抑制AID表达的shRNA序列(shAICDA-T24组)或空载序列(NC-T24组)以慢病毒为载体对T24细胞进行感染,利用Western bolt对T24、NC-T24以及shAICDA-T24组进行AID表达量的检测;因为转染后的多克隆细胞株AID的表达抑制效果有限,随后我们对转染的T24细胞进行单克隆细胞筛选,通过Western bolt结果选取抑制效果最明显的组别用于后续试验;然后运用细胞增值试验(CCK8)、流式细胞术(凋亡)、细胞划痕实验以及细胞小室实验(Transwell)检测抑制AID的表达对T24细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。结果人体膀胱癌组织中存在AID的表达,并且膀胱癌组织中AID的表达显著高于癌旁组织(P<0.05);通过RNA干扰技术(RNAi)抑制AID的表达可显著降低膀胱癌细胞株T24的增殖、侵袭和迁移能力,并且增加了T24细胞的凋亡率(P<0.05)。结论抑制AID的表达可显著降低T24细胞增殖、侵袭以及迁移能力,并且增加T24细胞的凋亡,其表达可能与膀胱癌的进展具有相关性。

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶基因多态性与成人哮喘及IgE的相关性研究

目的:探讨活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶(Activation-induced ey-tidine deaminase.AICDA)8408C/T基因的多态性与成人哮喘及血浆总IgE的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)检测AICDA基因多态性。结果:成人哮喘患者AICDA 8408位T/T基因型频率与对照组相比较差异有显著性(P<0.05),T等位基因频率与对照组相比较差异无显著性(P>0.05)。成人哮喘组T/T基因型血浆总IgE高于C/C、C/T基因型(P<0.05)。结论:成人哮喘患者AICDA 8408位T/T基因型与成人哮喘的发病及高血浆总IgE均相关。

活化诱导胞嘧啶脱氨酶在HBV相关弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的 探讨活化诱导胞嘧啶脱氨酶(AID)在乙肝病毒(HBV)相关弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达及临床意义。方法 回顾性分析94例初治DLBCL患者HBV感染等临床资料,通过免疫组化检测DLBCL组织中AID、B淋巴细胞瘤-2(BCL2)、BCL6蛋白的表达,分析AID蛋白表达与DLBCL患者临床特征的关系、与BCL2、BCL6蛋白表达的相关性,并对DLBCL患者生存及预后进行分析。结果 ①在HBsAg(+)DLBCL组,AID蛋白表达阳性率高于HBsAg(-)组(86.7%vs 64.7%,P=0.032);②DLBCL中AID蛋白的表达与临床特征(年龄、性别、免疫学亚型、疾病分期、国际预后指数(IPI评分)、肿块直径、乳酸脱氢酶(LDH)水平无关;③AID与BCL6蛋白表达有相关性(P<0.001);与BCL2蛋白表达无相关性;④69例具有完整随访资料DLBCL患者中,AID(+)组比AID(-)组3年累积生存率低(66. 3%vs 68. 2%,P=0. 805);在生发中心(GCB)型中,AID(+)组比AID(-)组3年累积生存率高(82. 4%vs77. 8%,P=0. 922);在非生发中心(non-GCB)型中,AID(+)组比AID(-)组3年累积生存率低(48. 1%vs 80. 0%,P=0. 046);⑤单因素生存分析:HBsA g(+)、AID/HBsA g共阳性、免疫学亚型、IPI评分均为DLBCL患者OS的不良预后因素。多因素COX回归分析:AID/HBsA g共阳性、免疫学亚型、IPI评分均为DLBCL患者OS的独立的不良预后因素。结论① AID蛋白在HBV相关DLBCL中表达高,且与不良预后有关,在non-GCB型尤为显著,将有助于进一步研究AID在HBV相关DLBCL中的发生发展中的作用;② DLBCL中AID与BCL6蛋白表达有相关性。

活化诱导的胞嘧啶脱氨酶的表达调控与肿瘤的关系

活化诱导的胞嘧啶脱氨酶(activation-induced cytidine deaminase,AID)最初是一种抗体类别转化和体细胞高频突变的关键因子,主要存在于生发中心B细胞中。AID具有基因突变活性,其表达受到体内多种因子的严格调控,如转录调控、转录后调控和翻译后调控。在细胞中,如果AID表达调控紊乱,或者某些外源性的因子持续激活AID的表达,都可能导致Ig H以外的基因发生突变,最终激活原癌基因或抑制抑癌基因,进而导致肿瘤的发生、发展及转移。

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶基因多态性与儿童哮喘的关系

目的 活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶 (activation inducedcytidinedeaminase ,AICDA)是一种RNA编辑脱氨酶 ,在免疫球蛋白类别转换中起重要作用。本文探讨AICDA基因 840 8C T基因多态性与儿童哮喘及血浆总IgE的关系。方法 采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析技术(PCR RFLP)检测AICDA基因多态性。结果 10 2例哮喘患儿AICDA 840 8位T T基因型频率显著高于72例对照组 ( χ2 =10 .31,P <0 .0 1) ,哮喘患者AICDAT T基因型的相对危险度 (RR)为 4.6 ,T等位基因频率也显著高于对照组 ( χ2 =7.736 ,P <0 .0 1) ,5岁以上T T基因型儿童哮喘患者血浆总IgE显著高于C C和C T基因型患者 (P <0 .0 5 )。结论 AICDA 840 8位T T基因型和T等位基因与儿童哮喘发病相关 ;5岁以上儿童哮喘患者T T基因型与高血浆总IgE相关。

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶在肠型胃癌组织中的表达及与幽门螺杆菌感染的关系

目的检测活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶(AID)蛋白在肠型胃癌发展过程中的表达及与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系,探讨其在肠型胃癌发生中的作用及H.pylori的致癌机制。方法采用免疫组织化学方法分别检测了AID蛋白在H.pylori阳性及阴性浅表性胃炎、萎缩性胃炎肠化生和肠型胃癌中的表达情况,同时检测其与CDX2蛋白表达的相关性。结果 H.pylori阳性慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎肠化生、肠型胃癌组胃黏膜AID的表达率高于相应的H.pylori阴性组(P<0.05),萎缩性胃炎肠化生和肠型胃癌组胃黏膜AID的表达率高于慢性浅表性胃炎的表达率(P<0.05),萎缩性胃炎肠化生和肠型胃癌组AID的表达与CDX2表达均呈正相关(r=0.310,P<0.05;r=0.324,P<0.05)。结论 H.pylori慢性感染能导致胃黏膜上皮AID的异常表达,AID的异常表达可能参与了胃黏膜的肠化生及癌变。

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶基因在白血病中的表达

目的：探讨活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶（AID）在急性白血病（AL）、慢性粒细胞白血病慢性期（CML-CP）和急变期（CML-BC）患者及白血病细胞株中的表达特点。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测89例初诊急性淋巴细胞白血病（ALL）患者、79例初诊急性髓系白血病（AML）患者、5例 CML-BC 患者、5例 CML-CP 患者和白血病细胞株 NB4、THP-1、KG-1、Raji、K562中 AID mRNA 的表达，以16名健康供者骨髓单个核细胞作为对照。结果89例 ALL 患者和79例 AML 患者 AID mRNA的中位表达水平分别为3.785（0.006～7463.175）、1.812（0.005～69.107），健康对照组 AID mRNA 的表达水平为1.483（0.146～4.707）。 ALL、B-ALL、伯基特型白血病、Raji 细胞株和 M4的 AID mRNA 表达水平较健康对照组升高，差异均有统计学意义（均 P＜0.05），而 M3、NB4和 KG-1细胞株的 AID mRNA 表达水平较健康对照组下降，差异均有统计学意义（均 P＜0.05）。 K562细胞株的 AID mRNA 表达水平较 CML-CP患者升高，差异有统计学意义（P＜0.001）。 CML-BC、CML 淋系急性变（CML-LBC）和 CML 髓系急性变（CML-MBC）患者的 AID mRNA 表达水平也高于 CML-CP 患者。结论 AID 在 B-ALL、伯基特型白血病、M4中呈高水平，在 M3和 KG-1细胞株中呈低表达，在 CML-BC 中出现表达水平的显著升高。

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶与白血病关系的研究进展

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶（AID）作为基因的诱导突变体，将胞嘧啶脱氧核糖核苷酸脱氨转变为尿嘧啶脱氧核糖核苷酸，从而引起基因突变。相关文献报道，AID在白血病的发生、发展中起重要作用。近年，针对AID的蛋白结构及其在白血病中的作用机制、表达特点、预后意义，以及伊马替尼耐药等方面的研究取得了一定进展。笔者拟就AID的上述几个方面内容进行综述。

活化诱导的胞嘧啶脱氨酶（AID）抗病毒作用研究进展

APOBEC （ apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like protein ）家族为载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白，具有脱氨酶功能，到目前为止共发现了11种该家族成员：APOBEC1、APOBEC2、APOBEC3s（A～C，DE，F～H）、APOBEC4、AID。 APOBEC家族成员可以通过固有免疫和适应性免疫作用抑制病毒感染和限制病毒复制。作为APOBEC家族成员之一，活化诱导的胞嘧啶脱氨酶（ ac-tivation induced cytidine deaminase ， AID）主要通过介导免疫球蛋白基因类别转换（ gene class switch DNA recombination ， CSR）和体细胞高频突变（somatic hypermutation，SHM）产生高亲和力抗体参与机体的适应性免疫功能，近年来研究发现AID可以通过介导病毒感染细胞凋亡或病毒基因组降解等方式发挥抗病毒作用。本文主要对AID在抗病毒中发挥作用进行综述。

消痰通腑方对结直肠癌前病变小鼠IL-6、AICD表达的影响

目的探讨白细胞介素6(IL-6)与活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶(AICD)在结直肠癌前病变表达的关系及消痰通腑方的干预作用。方法 AOM/DSS联合造模法复制小鼠结直肠癌前病变模型,随机分为空白组、模型组、中药组、西药组、中西医结合组。空白组、模型组给予等量蒸馏水;中药组给予消痰通腑方(26 g·kg-1·d-1)浓缩液0.2 ml/d;西药组每只小鼠给予柳氮磺吡啶(7.8 mg/d);中西医结合组同时给予消痰通腑方和柳氮磺吡啶。各组均连续给药12周,HE染色观察小鼠肠黏膜上皮组织形态及不典型增生,免疫组化及酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测IL-6、AICD表达情况。结果与正常组比较,模型组IL-6和AICD免疫组化指数、血清蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,18周中药组、西药组、中西医结合组IL-6和AICD免疫组化指数、血清蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与西药组比较,18周中药组AICD的免疫组化指数表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论消痰通腑方能够降低肠道内炎症因子IL-6及AICD的表达,从而降低发生体细胞高频突变(SHM)和类别转换重组(CSR)的机率,达到防治结直肠癌前病变的作用。

消痰通腑方对结直肠癌前病变模型小鼠结直肠黏膜上皮NF-κB/IL-6/STAT3和AICD蛋白表达水平的影响

目的探讨消痰通腑方对结直肠癌前病变模型小鼠结直肠黏膜上皮核转录因子-κB(NF-κB)/白介素-6(IL-6)/信号传导与转录激活因子3(STAT3)和活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶(AICD)蛋白表达水平的影响。方法 C57BL/6小鼠90只,按随机数字表法分为空白组、模型组、西药组(柳氮磺胺吡啶组)、中药组(消痰通腑方组)和中西医结合组(柳氮磺胺吡啶加消痰通腑方组)。除空白组外,其余四组采用AOM/DSS"四步三循环法"造模。观察各组小鼠一般状况及结直肠黏膜上皮病理情况,计算结直肠癌前病变成瘤率,Western blotting法检测造模过程中(6周、14周、18周)小鼠结直肠黏膜上皮中NF-κB/IL-6/STAT3及AICD的蛋白表达水平。结果运用消痰通腑方后,小鼠一般状况较模型组好。中西医结合组的成瘤率(33.33%)低于模型组成瘤率(50.00%)。在14周和18周,与西药组比较,中药组和中西医结合组的NF-κB表达水平变化不显著,而IL-6、STAT3和AICD表达水平均下调;与中药组比较,中西医结合组在IL-6和STAT3表达上差异不明显,但AICD表达显著低于中药组。结论消痰通腑方能够改善小鼠一般状况,降低结直肠癌前病变的发生率,下调结直肠癌前病变小鼠直肠黏膜上皮中IL-6/STAT3蛋白的表达水平,下调AICD蛋白表达水平,此作用途径可能是其降低结直肠癌前病变发生率、预防结直肠癌发生的机制之一。

哺乳动物中的DNA主动去甲基化

DNA甲基化是一种相对稳定且可遗传的表观遗传标记,在植物和动物细胞中均发现有DNA主动去甲基化现象,其机制在植物中已基本得到阐释,但在哺乳动物中尚未鉴定出一种有效的DNA去甲基化酶,并且DNA主动去甲基化途径也存在争议。文章综合分析了近期的文献资料,阐述了哺乳动物中发生DNA主动去甲基化的时空特异性,并从细胞和组织特异性角度介绍DNA主动去甲基化的可能通路和机制,即5-甲基胞嘧啶的氧化作用、5-甲基胞嘧啶脱氨基以及DNA修复等,旨在为破译表观遗传重编程过程提供理论依据。

HBV相关DLBCL患者的病理学特点及AID表达差异及与预后关系的多因素分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)患者病理学特点及活化诱导胞嘧啶脱氨酶(AID)表达差异及与预后关系的多因素分析。方法选取2018年1月至2020年3月在我院治疗的DLBCL患者110例,其中伴HBsAg感染31例,无HBsAg感染79例,采用免疫组化法检测AID表达,分析组间差异等。结果伴HBsAg感染患者年龄<50岁、临床分期Ⅲ~Ⅳ、ALT>40 U/L、AST>40 U/L、脾脏受累的比例分别为83.87%、67.74%、64.52%、67.74%和22.58%,明显高于不伴HBsAg感染患者(P<0.05);伴HBsAg感染患者AID阳性表达率为77.42%,明显高于不伴HBsAg感染患者(P<0.05);HBsAg(+)和AID(+)患者中位生存时间为23个月(95%CI:21.68~24.32),明显少于HBsAg(+)和AID(-)、HBsAg(-)和AID(+)、HBsAg(-)和AID(-)患者(P<0.05);Cox比例风险回归分析,结果显示:HbsAg和AID双阳性、临床分期和IPI评分是DLBCL患者预后的影响因素(HR=2.101、1.882和2.011,P<0.05)。结论伴HBV感染和不伴HBV感染DLBCL患者临床病理学特征有所差异;伴HBV感染DLBCL患者AID表达上调,HBV感染和AID表达与患者预后有关。

新生儿脐血IgE与AICDA基因多态性的相关性

目的探讨AICDA基因多态性与新生儿脐血总IgE水平的相关性。方法选取无过敏史足月产妇97例,有过敏史足月产妇70例,提取脐血基因组DNA,采用聚合酶链反应-高温连接酶反应(PCR-LDR)检测AICDA基因rs2518144、rs2028373、rs11046349位点的基因型。同时,采用电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测新生儿脐血总IgE水平。结果新生儿脐血AICDA基因rs2518144位点3组基因型(AA/AG/GG)及rs11046349位点3组基因型(TT/TG/GG)分布频率及等位基因频率在无过敏史组和有过敏史组产妇间差异无统计学意义(P均>0.05)。rs2028373位点3组基因型(AA/AG/GG)及等位基因分布频率与对照组比较有明显差异(P值分别为0.020和0.006)。各位点基因型与脐血IgE水平无相关性(P均>0.05)。结论新生儿脐血rs2028373基因多态性与母亲过敏史有一定相关性;但rs2518144、rs2028373、rs11046349位点基因型与脐血IgE水平无相关性。

脐血IL-13、AICDA和TSLP基因位点与IgE的相关性

目的探讨新生儿脐血白细胞介素(IL)13、活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶(AICDA)和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)基因位点与免疫球蛋白E(IgE)水平的相关性。方法收集779名新生儿的脐血。提取脐血基因组DNA后采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)检测IL-13、AICDA和TSLP基因的16个位点(IL-13基因rs20541、rs1800925、rs848、rs1295686和rs2069743位点;AICDA基因rs2518144、rs17792729、rs2580873、 rs2028373和rs7304723位点;TSLP基因rs3806933、rs1545169、rs764917、rs1837253、rs2289276和rs11466749位点),同时检测脐血IgE水平。结果 IL-13基因的rs1295686位点(β=0.087,P=0.02)、AICDA基因的rs2028373位点(β=-0.082,P=0.02)和TSLP基因的rs2289276、rs764917、rs1837253位点(β值分别为-0.126、-0.083、0.188,P值分别为0.01、0.03、0.00)与脐血IgE相关。结论脐血IL-13基因rs1295686位点、AICDA基因rs2028373位点及TSLP基因rs2289276、rs764917、rs1837253位点可能是过敏易感基因位点。

鸡源AID基因的克隆及其抗新城疫病毒作用

APOBEC家族成员中AID蛋白具有DNA/RNA编辑酶功能,同时具有抑制病毒增殖的作用,但具体机制尚不明了。本研究首先根据NCBI公布的鸡全基因组序列进行生物信息学分析,预测鸡AID的基因序列并通过设计PCR引物,成功在鸡法氏囊cDNA样品中扩增出鸡AID基因(chAID)。通过建立并优化chAID的实时定量RT-PCR(rRT-PCR)检测方法,对鸡体内AID基因的表达以及其分布情况进行检测;同时通过Western blot试验对chAID蛋白在鸡细胞中的表达进行检测。试验显示,chAID基因能够在鸡细胞以及组织脏器中正常表达。新城疫病毒(NDV)感染鸡原代成纤维细胞、淋巴细胞后能够引起内源性chAID基因水平的上调;SPF鸡感染NDV后,chAID基因在不同组织脏器中均出现上调现象,以免疫器官最为显著。为了进一步验证chAID基因对NDV增殖的影响,进一步检测在细胞中过表达chAID基因对NDV增殖的影响。研究结果表明:重组chAID蛋白具有抗NDV病毒活性,本研究为进一步研究鸡chAID奠定了基础。

AID对激素性股骨头坏死骨髓间充质干细胞的影响

[目的]探讨活化诱导胞喃陡核苷酸脱氨酶(activation-induced cytidine deaminase,AID)对激素性股骨头坏死(glucocorticoid-induced osteonecrosis of the femoral head,GC-ONFH)骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-SCs)的影响。[方法]采集16例GC-ONFH和16例股骨颈骨折患者的股骨骨髓,分离培养BMSCs至第3代。细胞分为4组:A组为GC-ONFH源BMSCs,B组为GC-ONFH源BMSCs并经AID重组慢病毒转染,C组为GC-ONFH源BMSCs经慢病毒空载体转染,D组为股骨颈骨折BMSCs。检测比较4组的细胞增殖、线粒体膜电位、细胞内活性氧水平、ABCB1启动子区甲基化,以及AID和ABCB1的mRNA和蛋白表达水平。[结果]8组MTT检测OD值显著高于A和C组(P<0.05),但仍低于D组(P<0.05)。B组线粒体膜电位较A、C组明显提高(P<0.05),但仍低于D组(P<0.05)。B组的ROS水平较A、C组显著降低(P<0.05),但仍显著高于D组(P<0.05)。B组ABCB1启动子区甲基化率较A、C组明显降低(P<0.05),接近于D组水平(P>0.05)。B组的AID和P-gp蛋白表达显著高于A组及C组(P<0.05),稍低于D组(P>0.05)。B组AIDmRNA和AB-CB1 mRNA表达量显著高于A组和C组(P<0.05),接近D组水平(P>0.05)。[结论]与股骨颈骨折相比,激素性股骨头坏死AID表达明显降低,过表达AID能显著地降低ABCB1过甲基化修饰并改善细胞功能。