氟唑活化酯对黄瓜抗枯萎病的诱导作用

【目的】诱导抗病剂可以诱导寄主植物的系统抗病性作用,具有持效性和广谱性的特点,研究旨在明确新型诱导抗病剂氟唑活化酯(fluoro-substituted benzothiadiazole derivatives,FBT)对黄瓜抗枯萎病的诱导作用,为该化合物的诱导抗病性机理的深入研究提供参考。【方法】利用50 mg·L-1FBT在黄瓜苗期移栽前3—4片真叶时喷雾诱导1次,3 d后移栽定植于含有黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum Owen)的土壤中,缓苗后以叶面喷雾的方式进行第2次诱导,之后每隔7 d喷雾诱导1次,共诱导3次,对照诱导抗病剂苯并噻二唑(BTH)也采用同样的诱导方法,对照杀菌剂70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1 500倍液则采用灌根施药,通过调查病情指数以评价其对枯萎病的抗病作用;研究FBT对枯萎病菌侵染黄瓜的影响,将供试黄瓜催芽至0.5 cm胚根后,浸泡于50 mg·L-1FBT中胚根诱导1次,待播种后黄瓜生长至2片子叶期开始第2次诱导,以后每隔7 d诱导1次,共诱导3次,第3次诱导后24 h灌根接种黄瓜枯萎病菌,并于接种后1、3、5、7、9、11、14、16、20、24、29 d分别取黄瓜根组织,于冰水中清洗,利用酸性品红染色技术评价FBT诱导黄瓜后对枯萎病菌侵染的影响,利用Maule反应和甲苯胺蓝染色技术评价FBT对黄瓜根组织中木质素和酚类物质的沉积情况的影响,利用分光光度-比色法测定FBT诱导黄瓜后根组织中富含羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)及β-1,3-葡聚糖酶活性,以分析FBT诱导黄瓜后根组织抗病性变化情况。【结果】诱导抗病性表达发现,50 mg·L-1的FBT对黄瓜抗枯萎病的诱导效果可达62.01%,高于对照诱导抗病剂BTH和杀菌剂70%甲基硫菌灵可湿性粉剂的防治效果。FBT诱导后的黄瓜在接种后7 d开始有枯萎病菌的侵染,此时未诱导只接种的黄瓜根组织因受枯萎病菌侵染,已经出现大量菌丝及孢子,FBT的诱导增强了寄主的抗病性反应,从而抑制了病原菌的侵染。同时经FBT诱导后4 d未接种及诱导后接种两个处理的根组织中具有大量褐色木质素沉积,尤其是根表皮细胞壁及韧皮部木质素沉降量明显,表现深褐色。对酚类物质的观察发现,在FBT诱导后2 d开始出现酚类物质沉积,诱导后4和6 d时,根组织中荧光信号较强,酚类物质沉积量较大,诱导后8 d时,根组织中荧光信号消失,酚类无明显沉积,木质素和酚类物质积累量的增加,以达到增强细胞壁的抗性,抵御病原菌的侵染的作用。在FBT诱导后1 d抗病相关蛋白HRGP和β-1,3-葡聚糖酶活性也明显增强,并一直保持在较高水平,为抵御病原菌侵染做准备。【结论】FBT诱导黄瓜产生了对枯萎病的抗病作用,同时黄瓜根组织通过次生代谢物质沉积量的增加及抗病相关蛋白活性增强,达到增强寄主根组织细胞壁的抗性,从而抵御病原菌的侵染,是具有发展前途的新型诱导抗病剂。

活化酯诱导黄瓜产生对霜霉病的抗病性

田间试验结果表明,对已发生霜霉病的黄瓜植株,于初花期叶面喷施化学诱抗剂活化酯(50μg／ml),病害发展可得到有效控制。活化酯处理后13d,防治效果达85.8％,发病情况明显减轻;处理后27d,防治效果为78.7％,病害发展得到了有效控制,处理后41d,防效仍可达60.5％。这表明活化酯可以诱导黄瓜产生对霜霉病的抗性,因而能够替代化学农药控制病害,达到无污染、无农药残留、无公害生产的目的。

氟唑活化酯诱导大白菜抗根肿病的研究

本文研究了我国具有自主知识产权的新型化合物氟唑活化酯诱导大白菜对根肿病的抗病效果及诱导技术。荧光染色观察发现该化合物对根肿菌休眠孢子没有明显的杀死作用,但具有明显的诱导抗病效果。不同的诱导浓度、诱导间隔期和诱导次数对根肿病的诱抗效果均不同。温室盆栽试验结果显示,25 mg/L的氟唑活化酯间隔7 d诱导大白菜3次,对根肿病的防病效果最好,达到71.33%,与诱抗剂苯并噻二唑效果相当,显著高于杀菌药剂50%氟啶胺悬浮剂拌土的防效(63.32%)。田间从苗期开始用氟唑活化酯25 mg/L诱导大白菜3次,诱导间隔期为7 d,对根肿病的诱抗效果最好达69.99%±2.01%,略低于对照杀菌剂氟啶胺拌土施药。本文明确了新型诱抗剂氟唑活化酯诱导大白菜对根肿病的抗病效果,并系统研究了施药技术,为白菜根肿病的防治提供了新手段。

氟唑活化酯诱导黄瓜抗猝倒病及其对黄瓜苗期生理指标的影响

采用室内盆栽法,测定了5%氟唑活化酯(2,2,2-三氟乙基苯并[1,2,3]噻二唑-7-甲酸酯,FBT)乳油对黄瓜猝倒病的诱导抗病作用,同时测定了其分别以喷雾和灌根处理对黄瓜苗期生理指标的影响。结果表明:氟唑活化酯以有效成分25 mg/L,间隔期7 d喷雾施药3次,对黄瓜猝倒病的防效可达77.28%。氟唑活化酯以有效成分15、25和50 mg/L的剂量喷雾或灌根处理,对黄瓜苗期的株高、节间距、鲜重和干重均有不同程度的抑制作用;以有效成分15、25 mg/L的剂量喷雾或灌根处理,对黄瓜苗期茎粗和根冠比有促进作用,但50 mg/L的剂量处理则对茎粗和根冠比表现出抑制作用。试验表明,氟唑活化酯对黄瓜猝倒病有较好的诱导抗病作用,并对黄瓜苗期的生理指标有一定影响。

多肽合成中氨基酸活化酯的制备研究

氨基酸活化反应对合成多肽的产率及纯度具有重要影响。以芴甲氧羰基-缬氨酸为研究对象,首次采用反相高效液相色谱法检测活化反应过程,建立了芴甲氧羰基-缬氨酸活化酯的分析方法,优化了氨基酸活化酯的制备条件,并引入了新的用于Fmoc策略合成多肽的溶剂体系——四氢呋喃。结果表明:溶剂和活化试剂对活化酯的产率影响显著;活化酯制备的最佳反应条件为n(Fmoc-Val-OH)∶n(HOBt)∶n(DCC)=1∶1∶1.2,溶剂为THF,反应温度为25℃。

聚乙二醇活化酯修饰重组人白细胞介素-2

目的研究单甲氧聚乙二醇三聚氯氰(Methoxypolyethylene Glycol activated with cyanuric chloride,CC-mPEG)和单甲氧聚乙二醇硝基苯基碳酸盐(Methoxypolyethylene Glycol p-nitrophenyl carbonate,NC-mPEG)两种PEG活化酯修饰重组人白细胞介素-2(rhIL-2)的修饰条件和修饰后的性质。方法在不同反应条件下用CTLL-2细胞/MTT法测定rhIL-2修饰后的生物学活性。结果随着PEG活化酯的摩尔比提高,修饰率增加,用CC-mPEG修饰rhIL-2后生物学活性损失很大,PEG400的加入可以降低CC-mPEG的投料摩尔比;NC-mPEG修饰的rhIL-2后生物学活性基本保留。

气相色谱法检测黄瓜和土壤中氟唑活化酯残留

建立一种基于气相色谱测定黄瓜和土壤中氟唑活化酯的方法。结果显示,当添加水平为0.02~2.0 mg·kg^-1时,所建立的方法对黄瓜和土壤中氟唑活化酯的添加回收率在92.1%~106.8%,相对标准偏差为1.7%~6.1%。仪器对氟唑活化酯的最小检出量为1.0×10^-12 g,该方法在黄瓜和土壤中的最低检出浓度为0.02 mg·kg^-1。在浙江杭州、山东淄博和湖北武汉3地开展的2 a田间试验结果表明,当用药量为20~30 mg·kg^-1,施药5~6次,施药间隔7 d时,距末次施药3 d,黄瓜和土壤中氟唑活化酯的最终残留量均<0.02 mg·kg^-1。氟唑活化酯在黄瓜和土壤中消解较快,不易对周围环境及地下水造成风险。

植物诱抗剂活化酯的研究

活化酯是商品化最为成功的一种植物诱抗剂,其本身对病原菌无直接杀灭活性,但能够诱导植物自身产生对病原菌广谱而持久的抗性。活化酯的成功开发,开创了病虫害防治的新纪元。本文着重介绍了植物诱抗剂的概念与特点,活化酯的特性、合成方法、抗病机理、应用范围,预测了未来农药开发和病虫害防治的方向。

5%氟唑活化酯乳油对西瓜甜瓜白粉病的诱导抗病效果评价

【目的】通过田间药效试验评价新型诱导抗病激活剂5%氟唑活化酯EC对西瓜甜瓜白粉病的诱导抗病效果,为合理使用5%氟唑活化酯EC提供依据。【方法】采用叶面喷雾法对西瓜甜瓜进行诱导施药,分别于2016年及2017年在北京顺义杨镇、北京延庆县康庄镇小丰营村及北京市海淀区中国农业科学院蔬菜花卉研究所所区农场3地7个点进行田间西瓜甜瓜白粉病的诱导抗病试验。【结果】综合2 a(年)多的试验发现,5%氟唑活化酯EC对西瓜甜瓜白粉病的诱导抗病效果随质量分数增大有增高趋势,随施药次数增多有增高趋势。对于甜瓜白粉病,100、50和25 mg·kg^(-1)的5%氟唑活化酯EC诱抗效果显著高于杀菌剂40%氟硅唑EC;对于西瓜白粉病,100、50 mg·kg^(-1)的5%氟唑活化酯EC诱抗效果显著高于杀菌剂40%氟硅唑EC。但100、50 mg·kg^(-1)质量分数下有药害问题,产量也会受到影响。5%氟唑活化酯EC在质量分数为10 mg·kg^(-1)、诱导5次、诱导间隔期7 d条件下,对西瓜白粉病的诱导抗病效果最好,为97.5%,与对照诱导抗病激活剂苯并噻二唑(BTH)及杀菌剂42.8%氟菌·肟菌酯悬浮剂无显著差异。5%氟唑活化酯EC在质量分数10 mg·kg^(-1)、诱导5次、诱导间隔期7 d条件下,对甜瓜白粉病的诱导抗病效果最好,为63.89%。5%氟唑活化酯EC在质量分数10 mg·kg^(-1)、诱导5次、诱导间隔期7 d条件下,对西瓜白粉病的诱导抗病效果最好,为69.16%。【结论】5%氟唑活化酯EC对西瓜甜瓜白粉病有较好的诱导抗病效果,其最佳诱导质量分数为10~25 mg·kg^(-1),最佳诱导次数为5次,可以取代杀菌剂施用,效果与BTH等同。

植物生长调节剂活化酯的合成

本文简述了植物生长调节剂活化酯的性质、用途等,重点论述了活化酯的合成方法。

热重分析法测定氟唑活化酯的饱和蒸气压

基于自由蒸发过程的Langmuir关系,利用梅特勒-托利多TGA/DSC1/1100LF型热重分析仪,建立采用热失重法快速测定化合物氟唑活化酯的低温饱和蒸气压的方法。采取阶梯升温方式,先在测定温度范围内较低的温度点恒温一定时间,获得满足测定精度所需要的质量损失,升温到下一温度进行测定,直至所需的最高温度。氟唑活化酯25℃时的饱和蒸气压为3.31×10^(-4)Pa。结果表明,利用热重法测定化合物的较低蒸气压,是传统蒸气压测定方法的很好补充,其结果与文献数据符合较好。测定方法系统误差低于1%。

高效液相色谱法测定氟唑活化酯的研究

叙述了采用高效液相色谱外标法,以乙腈+水为流动相,使用C18不锈钢柱和二极管阵列检测器(检测波长260 nm)对氟唑活化酯进行分离和测定,结果表明该方法的标准偏差为0.15,变异系数为0.15%,平均加标回收率达到99.84%,线性相关系数为1。该方法具有快速、准确、简便等特点。

氟唑活化酯诱导玉米抗锈病的探讨

本文初步研究了氟唑活化酯对玉米锈病的诱导作用机制以及施药浓度、施药次数、接种天数对其防治玉米锈病的影响。结果表明,施用氟唑活化酯5～7 d后,植株体内POD、PAL酶的活性有了显著的升高,说明是氟唑活化酯诱导的生理机制之一。通过三因素方差分析表明,药剂浓度及接种天数对氟唑活化酯诱导活性的影响极显著。在氟唑活化酯的应用过程中,早施药及选择合适的浓度是关键。

氟唑活化酯诱导大白菜抗根肿病效果与机理初步研究

为明确新型植物诱导抗病剂氟唑活化酯对大白菜根肿病的诱导抗病效果及抗病机理，研究了氟唑活化酯的诱导浓度、在白菜根部的运输过程以及氟唑活化酯诱导白菜后相关防御基因的表达情况。

QuEChERS-液相色谱-串联质谱法测定乳及乳制品中活化酯及其代谢物阿拉酸式苯含量

该文研究了高效液相色谱-三重四级杆质谱法(HPLC-MS/MS)测定乳及乳制品中活化酯和阿拉酸式苯的测试方法。样品经甲酸乙腈(含1%甲酸(V/V))涡旋提取,分析液经QuEChERSdSPE EMR-Lipid除脂专用管净化,离心后过膜上机检测。测试方法以甲醇-0.1%甲酸水(V/V)为流动相,流速设置为0.2 mL/min,应用梯度洗脱程序,采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱进行分离,电喷雾正、负离子模式(活化酯为ESI+、阿拉酸式苯为ESI-),多反应离子监测模式(MRM)检测,基质匹配外标法进行定量。对于乳及乳制品基质,活化酯和阿拉酸式苯在1~30 ng/mL 2的质量浓度与其相对应的峰面积之间线性关系良好,R^(2)均大于0.996,在0.01、0.02和0.1 mg/kg 3种不同浓度添加水平下,活化酯和阿拉酸式苯的平均回收率在91.8%~109.6%之间,相对标准偏差在1.3%~11.5%之间。该方法可满足残留检测的准确度、精密度和灵敏度的要求。

氟唑活化酯诱导黄瓜猝倒病的抗性

[目的]探索氟唑活化酯对黄瓜猝倒病的诱导抗病效果。[方法]采用喷雾、涂抹和灌根等施药方法确定其最佳诱导方式和防治效果。[结果]15、25 mg/L的氟唑活化酯对黄瓜猝倒病的防效为56.53%-88.71%,灌根与喷雾处理防效相当,涂抹相对较差。[结论]氟唑活化酯可诱导黄瓜猝倒病的抗性,叶面施药方式为其防治提供了一条有效途径。

以静电纺PAA/PVA纤维膜为载体活化酯法固定葡萄糖淀粉酶

以高压静电纺聚丙烯酸(PAA)/聚乙烯醇(PVA)纤维膜为载体,以羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺为基团偶联剂和活化剂,采用活化酯法固定葡萄糖淀粉酶.结果表明,葡萄糖淀粉酶可固定于高压静电纺PAA/PVA纤维膜表面,固载后纤维直径约为435 nm,固定化酶的最大反应速率为5.77 g/(L×h),米氏常数Km=10.45 g/L;游离酶与固定化酶的最适pH值和温度基本相同,贮存12 d固定酶活力为新鲜酶的62%,游离酶活力约为新鲜酶的40%;固定化酶重复使用10次仍能保持40.5%活性.

氟唑活化酯诱导大白菜抗根肿病效果与机理初步研究

为明确新型植物诱导抗病剂氟唑活化酯对大白菜根肿病的诱导抗病效果及抗病机理,研究了氟唑活化酯的诱导浓度、在白菜根部的运输过程以及氟唑活化酯诱导白菜后相关防御基因的表达情况。结果显示以氟唑活化酯25 mg·L-1对大白菜进行叶面喷雾诱导时根肿病的病情指数最低。通过台盼蓝(Trypan blue)染色观察到氟唑活化酯诱导大白菜叶片后,根部对根肿菌也产生了一定的抗性。利用Real-time PCR技术检测大白菜防御相关基因的表达,发现氟唑活化酯诱导大白菜2 h后JA途径中的COI1和LOX2基因以及SA途径中的PR-1基因都有显著的过量表达,其中JA信号途径相关基因表达变化更明显。结果说明氟唑活化酯可以诱导大白菜产生系统获得抗性,两种信号传导途径都参与了抗病过程,但以JA途径为主,SA途径为辅。

双酯型乌头碱完全抗原的制备与鉴定

为制备双酯型乌头碱(DAC)的完全抗原,通过活化酯法将小分子的DAC偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA),合成免疫原DAC-BSA、检测原DAC-OVA,采用紫外扫描光谱法、BCA试剂盒法、酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定偶联结果。结果表明,免疫原和检测原均偶联成功;按100μg/只的剂量每2周免疫一次小鼠,共免疫5次,最后一次免疫4d后,眼眶静脉采血,测定多抗血清的效价均达到1∶25 600,且第2组小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为30ng/mL,最低检出限为1ng/mL,与其他药物的交叉反应率均小于1%,具有很好的特异性。成功合成了DAC人工抗原,并得到了敏感性高、特异性好的多抗血清。

乙肝合并肝纤维化对内外源性代谢的影响及治疗学启示

目的:研究乙肝合并肝纤维化对肝脏内外源性代谢的影响及甘草酸-替诺福韦(TFV)酯联用对抗乙型肝炎病毒(HBV)药效的影响。方法:慢性CCl_(4)诱导HBV小鼠形成乙肝合并肝纤维化模型。H&E染色、天狼星红染色、α-SMA免疫组化用于检测肝组织病理学变化。运用代谢组学检测乙肝合并肝纤维化小鼠肝脏内源性代谢的改变。采用LC-MS/MS检测TFV及其有活性的代谢物(TFV-DP)的血浆及肝脏浓度,考察外源性代谢的变化。结果:HBV+CCl_(4)小鼠出现肝损伤、胶原沉积等肝纤维化症状;乙肝合并肝纤维化影响肝脏核苷酸代谢、氨基酸代谢以及三羧酸循环、磷酸戊糖通路等内源性代谢,减少肝脏中TFV-DP含量,降低抗病毒药效。通过与甘草酸联用或形成自组装制剂,TFV在肝脏中的有活性的代谢物TFV-DP水平提高,抗病毒药效增强。结论:乙肝合并肝纤维化可影响肝脏内外源性代谢,通过不同形式的甘草酸-TFV联用,可提高肝脏TFV-DP含量以及抗病毒药效。