EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路的影响

目的:基于HMGB1/Beclin-1信号通路探究EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体的作用机制。方法:40只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常(A)组、模型(B)组、二甲双胍(C)组、EPO(D)组,每组10只,对B、C、D组采用高脂饲料及链脲佐菌素进行糖尿病肾病建模。建模成功后,对C组灌胃100 mg/kg二甲双胍,对D组腹腔内注射100 U/kg EPO,A组、B组同期灌胃等体积生理盐水;另取20只大鼠建模,建模成功后,随机分为E组、F组,E组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂,F组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂和腹腔内注射100 U/kg EPO;取HK-2细胞,分为高糖+HK-2细胞(HH)组、EPO+高糖+HK-2细胞(EH)组、甘草酸苷L+高糖+HK-2细胞(LH)组,葡萄糖培养后进行细胞实验。血糖仪检测大鼠血糖,全自动生化分析仪检测大鼠生化指标,PAS染色法检测大鼠肾组织病理形态,免疫印迹法检测HMGB1/Beclin-1蛋白表达,RT-PCR及免疫组化法检测NK细胞活化性受体表达。结果:与A组比较,B组血糖及血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),体质量明显降低(P<0.05);与B组比较,C组、D组血糖及24 h尿量、血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05),体质量明显升高(P<0.05),肾脏病理学明显改善,且D组较C组变化显著(P<0.05);与A组比较,B组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达显著升高(P<0.05),与B组相比,C、D、E、F组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),且D组HMGB1/Beclin-1蛋白表达与C组相比降低明显(P<0.05),E组与D组无明显差异,F组较E组降低明显;HMGB1/Beclin-1蛋白表达与NKp30、NKp44、NKp46mRNA均呈正相关(P<0.05);与HH组相比,EH、LH组细胞增殖率显著升高(P<0.05),凋亡率及HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),而LH组与EH组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EPO可有效降低糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体表达,抑制HMGB1/Beclin-1信号通路,提示EPO可能通过调控NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路发挥作用,而NK细胞活化性受体表达与HMGB1/Beclin-1信号通路呈正相关。

血清NK细胞活化性受体、γ干扰素与非小细胞肺癌患者病情程度、预后的相关性分析

目的分析血清NK细胞活化性受体(NKG2D)、γ干扰素(IFN-γ)与非小细胞肺癌(NSCLC)患者病情程度、预后的相关性。方法选取沧州市中心医院2020年5月—2021年5月收治的NSCLC患者150例为研究对象,根据TNM分期标准分为Ⅰ、Ⅱ期组50例和Ⅲ、Ⅳ期组100例。比较两组患者的血清NKG2D、IFN-γ、肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)]及6个月内病死率;采用Pearson法检验血清NKG2D、IFN-γ与肿瘤标志物的相关性;比较不同预后NSCLC患者血清NKG2D、IFN-γ;绘制ROC曲线,分析血清NKG2D、IFN-γ及两者联合预测NSCLC患者预后的价值。结果Ⅲ、Ⅳ期组血清NKG2D[(67.12±5.28)%]低于Ⅰ、Ⅱ期组[(81.50±7.33)%](P<0.05),血清IFN-γ[(23.67±5.74)ng/mL]、CEA[(43.76±6.48)ng/mL]、CA125[(35.62±6.03)u/mL]、CYFRA21-1[(11.69±1.86)ng/mL]高于Ⅰ、Ⅱ期组[(17.91±4.82)ng/mL、(21.53±4.62)ng/mL、(23.59±5.17)u/mL、(6.84±1.12)ng/mL](P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清NKG2D与CEA(r=-0.683)、CA125(r=-0.615)、CYFRA21-1(r=-0.704)均呈负相关(P<0.05);IFN-γ与CEA(r=0.512)、CA125(r=0.439)、CYFRA21-1(r=0.543)均呈正相关(P<0.05)。150例NSCLC患者病死率为22.67%(34/150)。Ⅲ、Ⅳ期组6个月内病死率为28.00%(28/100),Ⅰ、Ⅱ期组6个月内病死率为12.00%(6/50),经χ^(2)检验,差异有统计学意义(χ^(2)=4.868,P=0.027)。死亡组血清NKG2D[(58.58±5.62)%]低于非死亡组[(84.23±4.39)%](P<0.05),血清IFN-γ[(29.93±3.17)ng/mL]高于非死亡组[(20.95±2.20)ng/mL](P<0.05)。ROC曲线显示,IFN-γ、NKG2D及两者联合预测NSCLC患者预后的AUC分别为0.780(95%CI:0.673,0.942)、0.820(95%CI:0.675,0.955)、0.860(95%CI:0.761,0.984),敏感性分别为78.1%(95%CI:0.648,0.892)、82.6%(95%CI:0.713,0.955)、86.5%(95%CI:0.752,0.978),特异性为51.3%(95%CI:0.443,0.714)、53.6%(95%CI:0.467,0.735)、41.5%(95%CI:0.328,0.616)。结论血清NKG2D、IFN-γ与NSCLC患者病情程度、肿瘤标志物水平有关,且两者联合检测可有效预测患者早期预后。

活化NK细胞抗结核分枝杆菌感染的实验研究

目的探讨活化的NK细胞的抗结核分枝杆菌作用,为建立一种新型安全的以NK细胞源性外泌体(exosome)为基础的抗结核免疫疗法提供基础。方法将从外周血分离纯化的NK细胞活化后直接作用于结核分枝杆菌(Mtb)感染的巨噬细胞,通过观察细胞形态变化,细菌抑菌率,乳酸脱氢酶(LDH)活性等评价NK细胞的抗Mtb作用。结果流式细胞术检测活化NK细胞纯度为95%;Mtb感染后的Ana-1巨噬细胞形态成多形性;Mtb感染的巨噬细胞受活化NK细胞作用6、12、24h的抑菌率分别为(39.1±4.2)%、(73.9±6.4)%和(91.3±5.7)%,其中以作用24h的抑制率最好;LDH释放率与活化NK细胞作用时间成正比。结论 NK细胞在体外有抗Mtb的作用,为研究更为安全的NK源性exosome的抗Mtb作用奠定了基础。

NK细胞活化性受体及其配体在缺血性脑卒中模型小鼠脑组织中的表达变化

目的探讨NK细胞活化性受体(NKG2D)信号通路在缺血脑组织中的表达及其在缺血性脑损伤中的潜在作用。方法采用双侧颈总动脉持久性结扎法(2VO),构建C57BL/6雄性小鼠全脑缺血再灌注损伤模型组(2VO组)和假手术对照组(Sham组),每组12只。脑缺血20 min、再灌注72 h后,处死小鼠收集大脑,Nissl染色观察海马CA1区和纹状体CPu区神经元的损伤程度,实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹技术检测缺血脑组织中NKG2D及其配体(H60、Rae-1、Mult1)的表达,实时荧光定量PCR法检测NKG2D受体下游接头蛋白DAP10及促炎因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS)的mRNA表达。结果Nissl染色结果显示,2VO组小鼠海马CA1区和纹状体CPu区的神经元严重损伤(P<0.001);2VO组小鼠缺血脑组织中NKG2D及其3种配体的mRNA水平和蛋白表达水平均高于Sham组(P<0.05);下游接头蛋白DAP10以及促炎因子的mRNA水平均明显高于Sham组(P<0.05)。结论脑缺血介导的NKG2D受体信号通路激活可能在小鼠脑缺血损伤炎症反应中发挥重要作用。

NK细胞杀伤人胶质瘤起始细胞的体外研究

背景与目的:越来越多的证据支持人脑胶质瘤来源于胶质瘤起始细胞/干细胞(glioma initiating cell/stem cell,GIC/GSC)的假说,鉴于干细胞特性,常规手术和放化疗难以清除GIC,本研究试图用体外活化的自然杀伤(natural killer,NK)细胞对GIC细胞进行杀伤研究。方法:以体外长期培养于干细胞培养基的CD133阳性胶质瘤细胞作为GIC,用免疫磁珠从胶质瘤患者(或健康人)的外周血中分离NK细胞,常规IL2/PHA活化NK细胞后,应用LDH释放法检测其体外杀伤GIC细胞的活性,以K562细胞为阳性对照。结果:体外实验中,异体NK细胞可以在GIC的培养基里生长和活化,且其杀伤GIC细胞的能力随效靶比增高而增强,同一效靶比时,活化的NK细胞杀伤GIC细胞的活性明显高于未活化(静止)NK细胞的活性(P<0.01)。结论:异体NK细胞可以在GIC的培养环境中活化并表现出针对GIC的杀伤能力,为NK细胞用于脑胶质瘤起始细胞的临床清除提供可能性。

胃癌组织VIP与癌组织炎性细胞内NKG2D、PI3K p85α、NF-κB p65表达的关系

目的分析胃癌组织中血管活性肠肽(VIP)与癌组织炎性细胞内NKG2D、磷酸肌醇3激酶(PI3K)p85α、核转录因子κB(NF-κB)p65的关系。方法采用免疫组化法检测72例胃癌患者的癌组织及癌旁正常组织中的VIP,以及相应组织中炎性细胞内的NKG2D、PI3K p85α、NF-κB p65。结果胃癌组织中VIP阳性表达率与癌旁正常组织无明显差异,而表达强度显著高于癌旁正常组织(P<0.01);胃癌组织炎性细胞内NKG2D、PI3K p85α、NF-κB p65在阳性表达率及表达强度均高于癌旁正常组织(P均<0.01)。VIP、NKG2D、PI3K p85α、NF-κB p65表达强度与胃癌的组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P均<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位无关(P均>0.05);胃癌组织VIP表达与癌组织炎性细胞内NKG2D、PI3K p85α、NF-κB p65表达均呈负相关(r分别为-0.341、-0.245、-0.249,P均<0.05)。结论 VIP可能通过PI3K/NF-κB途径作用于免疫细胞NKG2D,抑制免疫监视,促进胃癌的免疫逃逸。

生长激素对人外周血来源NK细胞杀伤活性的影响及机制探讨

目的观察生长激素(GH)对人外周血来源自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响,并探讨其机制。方法选取10名健康志愿者,采用免疫磁珠法分离并培养其外周血NK细胞。将NK细胞分为A、B、C组,分别与终浓度0、5、20μg/mL的重组人GH共培养48 h。以人类髓性白血病K562细胞为靶细胞,NK细胞为效应细胞,按不同的效靶比(25∶1、50∶1、100∶1)混合,采用CCK-8法检测NK细胞对K562细胞的杀伤率;取各组培养48 h的NK细胞,分别采用流式细胞术和Real-time RT-PCR法检测NK细胞表面活化受体NKG2D蛋白及基因。结果三个不同效靶比下,B、C组NK细胞对K562细胞的杀伤率高于A组,且C组高于B组(P均<0.01)。A、B、C组NKG2D阳性表达的NK细胞百分数分别为78.8%±2.8%、87.5%±3.1%、91.8%±3.3%,B、C组NKG2D阳性表达的NK细胞百分数高于A组(P均<0.05)。A、B、C组NKG2D mRNA相对表达量分别为1±0.01、5±2.32、10±3.21,B、C组NKG2D mRNA相对表达量高于A组,且C组高于B组(P均<0.05)。结论 GH可通过上调NK细胞NKG2D的表达,增强其杀伤活性。

温针灸对胃癌手术后化疗患者NK细胞数量及其生物学活性的影响

目的验证温针灸促进胃癌手术后化疗患者免疫功能恢复的效果。方法选取淄博市中心医院肿瘤科2016年10月至2017年10月收治的胃癌患者160例,并将患者按是否接受温针灸分为实验组(80例)与对照组(80例)。两组均给予5-氟尿嘧啶加顺铂化疗方案,实验组于每次化疗后第一天行温针灸治疗,穴取双侧足三里与气海穴,每日1次,连续治疗10天。观察患者外周血象变化,流式细胞术检测自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)的变化。结果实验组温针灸治疗后外周血白细胞(white blood cell,WBC)、中性粒细胞(neutrophils,N)、血小板计数(platelet,PLT)及血红蛋白(hemoglobin,Hb)与化疗前相比差异无统计学意义(P>0.05),但对照组治疗后,WBC、N、PLT、Hb的表达水平均较化疗前明显降低[(4.86±1.55)×10^(9)/L比(5.60±1.62)×10^(9)/L;(0.57±0.21)×10^(9)/L比(0.69±0.30)×10^(9)/L;(179.00±47.60)×10^(9)/L比(194.00±55.80)×10^(9)/L;(102.00±17.50)g/L比(113.00±16.90)g/L;t值分别为2.572、2.337、2.134和2.623,P值均<0.05)],差异具有统计学意义。与对照组相比,实验组温针灸治疗后NK细胞数量、NK细胞表达γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平及表达NK细胞活化型受体(natural-killer group 2,member D,NKG2D)水平皆升高[(8.40±2.29)%比(11.86±3.29)%,(9.23±2.51)%比(17.50±4.97)%,(7.50±3.59)%比(11.38±3.16)%,t值分别为2.441、2.355和2.293,P值均<0.05)],差异具有统计学意义。结论温针灸对恢复胃癌术后化疗患者骨髓抑制情况有较好的疗效,并可通过调节NK细胞活性,从而提高机体免疫功能。