α_(1A)-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2稳定共表达细胞的构建

目的建立α_(1A)-肾上腺素能受体(α_(1A)-AR)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)稳定共表达细胞。方法①将pcDNA3.1-α_(1A)-AR-3×FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFPNFAT2细胞,经潮霉素B(Hygro-B)200 mg·L^(-1)压力筛选后加入α_(1A)-AR激动剂去甲肾上腺素(NE,10μmol·L^(-1))孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测细胞核内绿色荧光强度,验证EGFP-NFAT2核转位,筛选得到稳定表达α_(1A)-AR的U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞。②采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法检测该细胞和对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中α_(1A)-AR mRNA和蛋白的表达水平。③将U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞接种于96孔板,分别加入NE(10^(-8)~10^(-5) mol·L^(-1))或α2-AR激动剂右美托咪定(DMED,10^^(-8.8)~10^(-5) mol·L^(-1))孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位。④将U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞分为溶剂对照组、α1-AR拮抗剂萘派地尔(1μmol·L^(-1))组、NE(1μmol·L^(-1))组、萘派地尔+NE(各1μmol·L^(-1)共孵育)组、α2-AR拮抗剂阿替美唑(0.1μmol·L^(-1))组、DMED(0.1μmol·L^(-1))组、阿替美唑+DMED(各0.1μmol·L^(-1)共孵育)组和萘派地尔+DMED(萘派地尔1μmol·L^(-1)与DMED 0.1μmol·L^(-1)共孵育)组,药物孵育时间均为30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位,验证该细胞α_(1A)-AR功能的特异性。结果①Hygro-B压力筛选得到58株U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞,NE 10μmol·L^(-1)孵育后,其中50号细胞核内绿色荧光强度最强,故选定其为稳定共表达α_(1A)-AR和EGFPNFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞。②Western印迹法结果显示,U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞可明显表达α_(1A)-AR蛋白,而对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中未见α_(1A)-AR蛋白表达。RT-qPCR结果显示,该细胞在传代5~20代内α_(1A)-AR mRNA均稳定表达,其表达水平为对照细胞的500~800倍。③NE或DMED使U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞中EGFP-NFAT2核转位明显增加,半数有效浓度(EC50)分别为5.94×10^(-7)和6.15×10^(-8) mol·L^(-1)。④与溶剂对照组和萘派地尔组比较,NE组U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),而萘派地尔+NE组EGFP-NFAT2核转位较NE组明显减弱(P<0.01)。与溶剂对照组和阿替美唑组比较,DMED组EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),阿替美唑+DMED组EGFP-NFAT2核转位与DMED组比较无明显差别,而萘派地尔+DMED组EGFP-NFAT2核转位较DMED组明显减弱(P<0.01)。结论成功构建稳定共表达α_(1A)-AR和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFPNFAT2-α_(1A)-AR细胞,可用于靶向α_(1A)-AR化合物筛选和受体分子机制研究。

硫氧还蛋白1、活化T细胞趋化因子在脑梗死病人血清中的水平及与认知功能、预后的关系

目的探究硫氧还蛋白1(Trx1)、活化T细胞趋化因子(RANTES)在脑梗死病人血清中的水平及与认知功能、预后的关系。方法选取2020年3月至2022年6月在无锡市人民医院诊治的168例脑梗死病人作为观察组,及同期165例健康体检志愿者作为对照组进行研究。参照蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分对所有病人的认知能力进行评估,分为认知功能障碍组112例,认知功能正常组56例;根据改良Rankin量表(MRS)评分分为预后良好组90例,预后不良组78例。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清Trx1、RANTES水平;Spearman法分析脑梗死病人血清中Trx1、RANTES水平与MoCA评分的相关性;对影响脑梗死病人发生认知功能障碍及预后的因素进行logistic回归分析;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清Trx1、RANTES水平对脑梗死病人发生认知功能障碍的诊断价值。结果与对照组相比,观察组病人血清Trx1水平显著降低[(6.78±1.62)μg/L比(11.05±1.89)μg/L,P<0.05],RANTES水平明显升高[(35.12±4.84)ng/L比(23.51±3.28)ng/L,P<0.05];认知功能障碍组脑梗死病人血清Trx1水平明显低于认知功能正常组[(6.02±1.59)μg/L比(8.30±1.68)μg/L,P<0.05],RANTES水平显著高于认知功能正常组[(38.57±5.25)ng/L比(28.22±4.02)ng/L,P<0.05];与预后良好组对比,预后不良组脑梗死病人血清Trx1水平明显降低[(5.42±1.55)μg/L比(7.96±1.68)μg/L,P<0.05],血清RANTES水平显著升高[(38.58±5.29)ng/L比(32.12±4.45)ng/L,P<0.05];脑梗死病人血清Trx1水平与MoCA评分呈正相关(rs=0.40,P<0.05),RANTES水平与MoCA评分呈负相关(rs=−0.56,P<0.05);logistic回归分析显示,受教育程度、Trx1是影响脑梗死病人发生认知功能障碍及预后的保护因素(P<0.05),脑梗死区域、RANTES是影响脑梗死病人发生认知功能障碍及预后的危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清Trx1、RANTES、二者联合诊断脑梗死病人发生认知功能障碍的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.82、0.94、0.97,二者联合诊断均优于其各自单独诊断(Z_(二者联合-Trx1)=4.00,P<0.001;Z_(二者联合-RANTES)=2.03,P=0.021)。结论脑梗死病人血清Trx1水平降低,RANTES水平升高,二者均与认知功能及预后有密切关系。

梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3和Toll样受体4表达与Th1/Th2相关细胞因子的相关性研究

目的探究梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)表达与辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)相关细胞因子的相关性。方法选取2021年2月至2022年4月川北医学院附属三台医院收治的197例梅毒患者作为研究对象。将进行驱梅治疗后血清转阴者纳入转阴组(n=88),未进行驱梅治疗者纳入梅毒组(n=45),接受驱梅治疗后血清固定者纳入固定组(n=64)。另选取同期进行体检的健康人作为对照组(n=53)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3、TLR4 mRNA相对表达水平;采用酶联免疫吸附试验法检测Th1/Th2相关细胞因子的表达水平;采用Pearson法分析TLR4、NLRP3 mRNA与Th1/Th2相关细胞因子的相关性。结果各组PBMCs中TLR4、NLRP3 mRNA表达水平比较,梅毒组>转阴组>对照组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组白介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)水平比较,对照组>转阴组>梅毒组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组IL-1β、IL-4、IL-10及IL-18水平比较,对照组<转阴组<梅毒组<固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);梅毒血清固定患者TLR4、NLRP3 mRNA表达与IFN-γ、IL-2呈正相关,与IL-1β、IL-4、IL-10、IL-18呈负相关(P<0.05)。结论梅毒血清固定患者NLRP3、TLR4 mRNA表达水平显著降低,且与Th1/Th2相关细胞因子密切相关。

基于胸腺基质淋巴细胞生成素/蛋白酶激活受体2/瞬时电位受体香草酸受体1/活化T细胞的核因子信号通路探讨麻荆止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制

目的:通过麻荆止咳颗粒调控胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)/蛋白酶激活受体2(Proteinase Activated Receptor-2,PAR2)/瞬时电位感受器香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)/活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFAT)信号通路的动物实验,探讨其治疗咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)的疗效机制。方法:将豚鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组和地塞米松组,构建CVA豚鼠模型,药物干预10天,采用辣椒素激发各组豚鼠,观察咳嗽情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法观察各组肺组织病理学变化;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Method,ELISA)法检测各组血清TSLP含量;免疫组化染色及实时定量聚合酶链反应(quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)法检测肺组织PAR2、TRPV1、NFAT的表达。结果:与模型组对比,中药组和地塞米松组药物干预后咳嗽次数明显减少;血清TSLP含量显著降低;且肺组织病理变化较模型组明显减轻;PAR2、TRPV1和NFAT的蛋白与mRNA表达均下调。结论:麻荆止咳颗粒可通过抑制CVA模型豚鼠TSLP/PAR2/TRPV1/NFAT信号通路表达,降低气道敏感性及改善气道炎症,达到止咳效果。

活化T细胞核因子和单核细胞趋化蛋白-1及该蛋白2518G/A基因多态性与冠心病的关系

目的:研究活化T细胞核因子和单核细胞趋化蛋白-1及该蛋白2518G/A基因多态性与冠心病病变程度的相关性。方法:选取冠心病患者300例,根据冠状动脉(冠脉)造影结果确诊为冠心病的患者分为急性冠脉综合征(ACS)组180例,稳定型心绞痛组120例。另选冠脉造影正常者为对照组60例。应用Gensini评分评定狭窄程度,酶联免疫法测定活化T细胞核因子(NFAT)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)浓度,多聚酶链反应--末端限制性片段长度多样性(PCR-RFLP)方法检测MCP-1 2518G/A基因多态性。结果:①急性冠脉综合征组的NFAT、MCP-1浓度显著高于稳定型心绞痛组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05),MCP-1浓度与NFAT呈正相关(r=0.65,P<0.05)。②冠脉病变Gensini评分与NFAT、MCP-1、低密度脂蛋白胆固醇、血糖呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关。③MCP-1 2518G/A基因有三个基因型,GG型的MCP-1浓度较AG型及AA型升高(P<0.05),ACS组GG型基因和G等位基因频率较稳定型心绞痛组及对照组增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:冠心病患者血浆NFAT与MCP-1水平的升高及MCP-1 2518G/A基因多态性与冠脉病变程度相关。

高迁移率蛋白B1与活化T细胞核因子2协同促进白细胞介素-2报告基因转录表达

目的探讨高迁移率蛋白B1(HMGB1)促进白细胞介素(IL)-2转录表达免疫效应的分子机制。方法构建HMGB1和活化T细胞核因子2(NFAT2)的真核表达质粒,分别单独转染以及共同转染人胚胎肾细胞系293T、人子宫颈癌细胞系Hela,同时转染IL-2报告基因,检测IL-2报告基因的表达活性。观察当HMGB1与NFAT2质粒共同转染细胞时,是否能协同促进IL-2报告基因的活性。结果在293T细胞中,HMGB1或NFAT2单独转染可提高活性倍数相加为6.8倍,而二者共转时报告基因活性与未刺激对照组相比提高了18.4倍。在Hela细胞中,二者单独转染可提高活性倍数相加为49.9倍,而二者共转时报告基因活性与未刺激对照组相比提高了117.7倍。结论HMGB1可与NFAT2可协同促进IL-2报告基因转录表达。

阿奇霉素联合大剂量维生素C治疗儿童肺炎支原体肺炎的临床效果及对外周血T淋巴细胞亚群、炎性因子及相关蛋白的影响

目的探讨阿奇霉素联合大剂量维生素C(VC)治疗儿童肺炎支原体肺炎(MPP)的临床效果及对外周血T淋巴细胞亚群、血清白细胞介素(IL)-17、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及外周血单个核细胞E2相关因子2(Nrf2)蛋白和咽拭子P1蛋白的影响。方法选取2020年6月—2023年6月收治的240例MPP患儿作为观察对象,随机分为大剂量VC组、小剂量VC组和对照组,每组80例。对照组予以阿奇霉素治疗,小剂量VC组予以阿奇霉素+小剂量VC治疗,大剂量VC组予以阿奇霉素+大剂量VC治疗,3组均治疗2周。记录3组患儿临床疗效、临床症状持续时间。采集3组治疗前后空腹静脉血和咽拭子。采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+));采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-17、hs-CRP、VC;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测外周血单个核细胞Nrf2蛋白和咽拭子P1蛋白mRNA表达水平。记录并对比3组治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后,大剂量VC组和小剂量VC组发热、咳嗽咯痰、肺部湿啰音持续时间和住院时间均短于对照组,大剂量VC组退热、咳嗽咯痰、肺部湿啰音持续时间和住院时间均短于小剂量VC组,差异有统计学意义(P<0.05)。3组患儿外周血T淋巴细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05);大剂量VC组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于小剂量VC组和对照组,小剂量VC组CD4^(+)水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。3组血清IL-17、hs-CRP水平均较治疗前下降,大剂量VC组血清IL-17、hs-CRP水平均低于小剂量VC和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);小剂量VC组IL-17、hs-CRP水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。大剂量VC组和小剂量VC组血清VC水平较治疗前上升,且大剂量VC组血清VC水平高于小剂量VC组,差异有统计学意义(P<0.05)。小剂量VC组IL-17、hs-CRP水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组外周血单个核细胞Nrf2、咽拭子P1蛋白mRNA表达水平均较治疗前下降,且大剂量VC组Nrf2 mRNA表达水平高于小剂量VC组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。3组PI蛋白mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组患儿治疗期间均未出现明显不良反应。结论阿奇霉素联合大剂量VC可有效改善MPP患儿临床症状,提高免疫力,降低IL-17、hs-CRP水平,维持Nrf2 mRNA水平,提高临床疗效,且安全性较高。

骨髓分化因子88通过核因子-κB/活化蛋白-1信号通路调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨骨髓分化因子88(MyD88)在结直肠癌发生发展中的功能和潜在机制。方法在SW480细胞中稳定敲低MyD88。采用CCK-8实验检测细胞的增殖能力;采用Transwell和划痕实验检测结直肠癌细胞的迁移能力;采用Transwell实验分析结直肠癌的侵袭能力;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析MyD88的潜在调控机制。结果实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Western blot结果显示,本研究在结直肠癌细胞中成功敲低了MyD88的表达。结直肠癌细胞中MyD88的降低可以显著抑制细胞的生长和侵袭。进一步研究发现,在结直肠癌细胞中敲低MyD88可以显著抑制MyD88-NF-κB/AP-1信号通路的表达。结论MyD88基因在结直肠癌的发生发展中起着重要的作用,有望成为结直肠癌的潜在的诊断和预后生物标志物。

子痫前期患者血清腺苷活化蛋白激酶水平与可溶性血管内皮生长因子受体-1及氧化应激的相关性

目的 分析子痫前期(PE)患者血清腺苷活化蛋白激酶(AMPK)水平与可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)及氧化应激的相关性。方法 选取2020年6月至2023年4月在成都医学院第一附属医院治疗的67例PE患者为试验组,选择本院同期住院的正常分娩孕妇50名为对照组。比较两组AMPK、sFlt-1和氧化应激反应水平[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化物(SOD)];分析试验组不同严重程度的PE患者AMPK、sFlt-1、MDA、SOD水平差异;利用多变量逻辑回归方法对妊娠女性发病风险因子进行分析;分析试验组患者AMPK、sFlt-1与氧化应激的相关性。结果 试验组患者AMPK、sFlt-1、MDA水平均高于对照组,SOD水平低于对照组(P<0.05);轻度PE组的AMPK、sFlt-1、MDA水平均低于重度PE组,SOD高于重度PE组(P<0.05);两组妊娠期患糖尿病情况和AMPK、sFlt-1、MDA、SOD水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);经多元Logistic回归分析显示,妊娠期合并糖尿病和AMPK、sFlt-1、MDA、SOD水平是影响孕妇发生PE的危险因素(P<0.05);Pearson相关性分析显示,PE患者AMPK、sFlt-1与MDA水平呈正相关,与SOD水平呈负相关(P<0.05)。结论 PE患者AMPK、sFlt-1水平出现异常升高,AMPK、sFlt-1水平与氧化应激指标存在一定相关性。

活化T细胞核因子2可抑制高迁移率蛋白1的释放

目的探讨活化T细胞核因子2(NFAT2)对炎症因子高迁移率蛋白1(HMGB1)释放的抑制效应。方法观察脂多糖刺激可增加HMGB1向胞外释放,在脂多糖刺激的不同时间点收集细胞及其培养上清,应用蛋白印迹法及酶联免疫法检测细胞内及培养上清中HMGB1蛋白水平的变化;另一方面,探讨脂多糖刺激对NFAT2与HMGB1在胞浆中的结合的影响,在脂多糖刺激的不同时间点收集THP-1细胞,提取蛋白后应用免疫共沉淀观察二者的结合情况;应用小RNA干扰技术抑制NFAT2的表达,检测对HMGB1合成释放的影响。结果脂多糖刺激THP-1细胞时间越长,细胞培养上清的HMGB1浓度增加,而细胞浆内与NFAT2结合的HMGB1水平下降,细胞核内没有检测到二者的相互作用。NFAT2的小RNA干扰质粒转染后,THP-1细胞内NFAT2浓度下降,同时细胞上清中HMGB1的水平上升。结论 NFAT2可抑制HMGB1的合成释放。

饲粮蛋白质水平对肥育猪肌肉嫩度及背最长肌钙调磷酸酶-活化T细胞核因子信号途径的影响

本试验旨在研究饲粮理想蛋白质水平对背最长肌嫩度及钙调磷酸酶-活化T细胞核因子(CaN-NFAT)信号途径相关蛋白和钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)mRNA表达量的影响。选择初始重约50kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪90头,随机分配到3个处理,每个处理3个重复,每个重复10头,公母各占1/2。3个处理分别采用12%、16%、20%理想蛋白质水平的饲粮,饲粮能量水平相同。正试期58d,结束后屠宰取样,测定肌肉剪切力并利用实时定量PCR法测定猪背最长肌CAST、CaN、钙调蛋白(CaM)和NFAT mRNA表达量。结果表明:1)饲粮高蛋白质水平显著提高背最长肌剪切力(P<0.05)、极显著提高CAST和CaN mRNA表达量(P<0.01)。2)背最长肌剪切力与CAST mRNA表达量正相关(相关系数为0.713,P<0.01);CaN、CaM与CAST mRNA表达量正相关(相关系数分别为0.594、0.596,P<0.05);NFAT、CaM与CaN mRNA表达量正相关(相关系数分别为0.536、0.546,P<0.05);CaM与NFAT mRNA表达量正相关(相关系数为0.623,P<0.05)。结果提示,饲粮高蛋白质水平显著降低背最长肌嫩度、提高CAST和CaN mRNA表达量;背最长肌嫩度与CAST mRNA表达量正相关,与CaN-NFAT信号途径无相关性。

IGF-1介导MAPKs通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用

目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐沉积情况,qRT-PCR法检测成骨特性因子核心结合因子α-1(RUNX2)、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平,Western Blot法检测MAPK通路蛋白磷酸化表达水平。对数期细胞分为空白组、IGF-1组、ERK通路抑制剂(PD98059)组、PD+IGF-1组、p38通路抑制剂(SB202192)组、SB+IGF-1组,qRT-PCR法检测成骨特性因子RUNX2、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平。结果不同浓度IGF-1组ALP显色加深,ALP活性升高,钙盐结节形成增多,RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平升高,磷酸化ERK、p38、JNK蛋白表达增加,具有剂量效应(P<0.05)。与空白组比较,PD组、SB组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05);但与IGF-1组比较,PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论IGF-1促进C3H10T1/2细胞成骨分化,其作用机制可能与激活ERK信号通路和p38 MAPK信号通路有关。

帕金森病患者免疫球蛋白、Th9亚群水平变化及其与IGF-1、S-100B蛋白的相关性

目的:研究帕金森病(PD)患者免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)、辅助性T细胞亚群Th9水平变化及其与胰岛素生长因子-1(IGF-1)、S-100B蛋白的相关性。方法:选取2020年12月至2022年12月期间在河北省中医院确诊的108例PD患者,将其作为研究组,并根据患者病变程度分为轻度组(35例)、中度组(44例)和重度组(29例);另选108例健康成人作为对照组。对比研究组和对照组免疫球蛋白和Th9亚群水平,以及轻度组、中度组及重度组免疫球蛋白、Th9亚群、IGF-1和S-100B蛋白水平,采用Pearson相关性分析免疫球蛋白、Th9亚群和IGF-1、S-100B蛋白的相关性。采用Spearman相关性分析PD患者疾病程度和所有差异指标间的相关性。结果:研究组IgM水平较对照组低,且重度组低于中度组,中度组低于轻度组(P<0.05);研究组IgG、IgA、IL-9和Th9亚群水平较对照组高,且重度组高于中度组,中度组高于轻度组(P<0.05)。重度组IGF-1水平低于中度组,中度组低于轻度组;重度组S-100B蛋白水平高于中度组,中度组高于轻度组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,PD患者IgM水平与IGF-1水平呈正相关,与S-100B蛋白水平呈负相关;IgG、IgA、IL-9和Th9亚群水平均与IGF-1水平呈负相关,与S-100B蛋白水平呈正相关(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,PD患者疾病程度与IgM、IGF-1水平呈负相关,与S-100B蛋白、IgG、IgA、IL-9和Th9亚群水平呈正相关(P<0.05)。结论:PD患者IgM水平降低,IgG、IgA、Th9亚群水平升高,且其水平变化与IGF-1、S-100B明显相关,可以用于评估病情的严重程度。

COPD急性加重期患者外周血单个核细胞SOCS-1、TLR4 mRNA及血清cTnT、尿酸水平变化分析

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期患者外周血单个核细胞中细胞因子信号抑制蛋白-1(SOCS-1)、Toll样受体4(TLR4)mRNA水平及血清心肌肌钙蛋白T(cTnT)、尿酸水平变化。方法收集COPD急性加重期(组)患者70例,COPD稳定期(组)患者40例,对照组健康志愿者40名。检测外周血单个核细胞SOCS-1、TLR4 mRNA水平及血清cTnT、尿酸浓度;行肺功能检查并记录相关指标(FEV1、FEV1%、FEV1/FVC%)。对COPD急性加重期患者进行1 a随访,分为预后不良组和预后良好组。对外周血单个核细胞SOCS-1、TLR4 mRNA水平、血清cTnT、尿酸浓度行Pearson相关性分析,并对COPD急性加重期患者预后评估价值进行ROC曲线分析。结果COPD急性加重期组SOCS-1 mRNA表达水平明显低于COPD稳定期组、对照组,TLR4 mRNA水平及血清cTnT、尿酸浓度明显高于COPD稳定期组和对照组(均P<0.01)。COPD急性加重期组FEV1、FEV1%、FEV1/FVC%明显低于COPD稳定期组和对照组(P<0.05)。COPD急性加重期患者FEV1/FVC%与外周血单个核细胞SOCS-1 mRNA表达水平呈正相关关系(P<0.01),与外周血单个核细胞TLR4 mRNA水平及血清cTnT、尿酸浓度呈负相关关系(P<0.01)。预后不良组SOCS-1 mRNA水平明显低于预后良好组,TLR4 mRNA水平及血清cTnT、尿酸浓度明显高于预后良好组(P<0.05)。外周血单个核细胞SOCS-1、TLR4 mRNA水平及血清cTnT、尿酸联合检测对COPD急性加重期患者预后具有较高的评估价值。结论COPD急性加重期患者SOCS-1低表达,TLR4、cTnT、尿酸高表达,且与肺功能水平密切相关,联合检测对患者预后具有较高的评估价值。

白藜芦醇通过调节SIRT1/AMPK信号通路介导自噬反应对膝关节骨性关节炎大鼠细胞凋亡的影响

目的:从沉默信息调节因子1(SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路介导自噬角度,探讨白藜芦醇对大鼠膝关节骨性关节炎(KOA)软骨细胞凋亡的影响。方法:50只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、白藜芦醇组、白藜芦醇+SIRT1抑制剂组、自噬激活剂组,每组10只。除对照组外其余大鼠均通过注射弗氏完全佐剂造模法复制KOA大鼠模型,白藜芦醇组、白藜芦醇+AMPK抑制剂组、自噬激活剂组分别使用10μmol/kg白藜芦醇、10μmol/kg白藜芦醇+10 mg/kg EX527、2 mg/kg雷帕霉素进行干预,4周后,观察大鼠Lequesne MG膝关节级别;测定大鼠膝关节液中IL-6、肿瘤坏死因子β(TNF-β)水平;HE染色与TUNEL染色观测大鼠膝关节软骨组织形态及凋亡情况;透射电子显微镜观察大鼠软骨细胞自噬情况;Western blot法检测SIRT1、p-AMPK、AMPK、LC3、Beclin-1蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组局部反应、步态反应、关节活动、关节肿胀程度加重(P<0.05);与模型组相比,白藜芦醇组、自噬激活剂组局部反应、步态反应、关节活动、关节肿胀程度减轻(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠软骨组织细胞排列紊乱,粗糙,存在纤维化变性、边缘丘状隆起,细胞器减少,可见空泡变性,自噬小体数目增多,膝关节液IL-6、TNF-β水平、软骨细胞凋亡率、Beclin-1和LC3B/A升高(P<0.05),软骨组织SIRT1、p-AMPK/AMPK降低(P<0.05);与模型组相比,白藜芦醇组、自噬激活剂组大鼠软骨组织细胞排列紊乱、边缘丘状隆起等现象有改善,自噬小体数目增多,膝关节液IL-6、TNF-β水平、软骨细胞凋亡率降低(P<0.05),软骨组织SIRT1、p-AMPK/AMPK、Beclin-1和LC3B/A水平升高(P<0.05);SIRT1抑制剂可逆转白藜芦醇组对大鼠软骨细胞的保护作用。结论:白藜芦醇可能是通过激活SIRT1/AMPK通路介导自噬KOA大鼠软骨细胞凋亡,SIRT1抑制剂可逆转此过程。

OX40-OX40L信号通过活化T细胞核因子c1调控ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样斑块形成

目的:探讨OX40-OX40L信号是否通过活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)调控动脉粥样硬化斑块的形成。方法:选取18只载脂蛋白基因敲除(Apo E^(-/-))小鼠,随机均分为3组(n=6):对照组(慢病毒对照预处理后腹腔注射Ig G2b 200μg)、OX40激动组(慢病毒对照预处理后腹腔注射激动型OX40抗体200μg)、沉默NFATc1组(si NFATc1慢病毒处理后腹腔注射激动型OX40抗体200μg),采用颈动脉硅胶圈快速置入法构建动脉粥样硬化斑块模型;HE及Masson染色检测动脉血管内膜病理改变;免疫组织化学和蛋白质印迹法检测动脉粥样硬化斑块内NFATc1表达。结果:HE及Masson染色结果显示,与对照组相比,OX40激动组小鼠颈动脉斑块面积增加,内膜增生明显,斑块内胶原纤维增生明显;沉默NFATc1组颈动脉斑块面积明显减少,内膜增生程度明显降低,斑块内胶原纤维增生减弱。免疫组织化学结果显示,与对照组比较,OX40激动组颈动脉斑块中NFATc1表达明显增加(t=9.896,P<0.01),而沉默NFATc1组表达明显减少(t=-3.167,P<0.05)。蛋白质印迹结果显示,OX40激动组颈动脉斑块中NFATc1表达较对照组明显增高(t=17.648,P<0.01),沉默NFATc1组颈动脉斑块中NFATc1蛋白表达量较OX40激动组表达明显减少(t=-4.747,P<0.05)。结论:OX40-OX40L信号通过NFATc1调控动脉粥样硬化斑块的形成。

单核细胞趋化蛋白-1和调节活化正常T细胞表达分泌因子与实验性变态反应性神经炎的关系

目的研究趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和调节活化正常T细胞表达分泌因子(RANTES)与实验性变态反应性神经炎(EAN)发病的关系,探讨EAN的免疫发病机制.方法给Wistar大鼠足垫皮下注射兔坐骨神经匀浆建立EAN模型,用免疫组化技术检测EAN大鼠发病不同时间坐骨神经MCP-1和RANTES的表达.结果EAN组的MCP-1表达第9 d达高峰,随后逐渐下降,第15 d、21 d、28 dMCP-1的表达与前一时间点比较差异均有显著性(均P＜0.01);第9 d、15 d、21 d MCP-1表达均显著高于对照组(均P＜0.001).EAN组第9 d、15 d、21d RANTES表达均显著高于对照组(P＜0.01～0.001),第15 d表达最高.结论MCP-1和RANTES在EAN的发病过程中发挥了重要作用,MCP-1可能起始动作用,RANTES可能与EAN的病情进展有关.

活化T细胞核因子c1检测联合血管内超声在冠心病风险评价中的作用

目的以血管内超声(IVUS)分析为参照,探讨活化T细胞核因子c1(NFATc1)对不稳定性斑块的预测意义。方法 183例冠心病患者根据IVUS结果分为不稳定性斑块组(98例)和稳定性斑块组(85例),另选46例冠状动脉造影结果阴性患者为对照组。流式细胞术检测淋巴细胞内NFATc1表达水平,通过受试者工作曲线(ROC)分析其对不稳定性斑块的诊断意义。结果冠心病患者NFATc1水平明显高于对照组,其中不稳定性斑块组NFATc1水平高于稳定性斑块组,NFATc1受试者工作曲线下面积为0.796,P=0.01,最佳界值平均荧光强度为17.5。结论 NFATc1是不稳定性斑块的活动性指标,能够评价冠心病风险,从而进一步预测急性冠状动脉事件的发生。

川崎病患儿血清CaN、NFATc1水平与免疫球蛋白治疗反应的相关性

目的探讨川崎病患儿血清钙调神经磷酸酶(CaN)、活化T细胞核因子c1(NFATc1)水平与免疫球蛋白(IVIG)治疗反应的相关性,以期为临床改善治疗效果提供理论参考。方法采用前瞻性研究,选取平顶山市第一人民医院2018年1月至2023年1月100例川崎病患儿作为研究对象,检测入院时患儿的血清CaN、NFATc1水平,同时收集患儿的一般资料,根据IVIG治疗反应情况分为IVIG治疗敏感组与IVIG治疗无反应组。比较两组患儿的血清CaN、NFATc1水平及一般资料,采用点二列相关性检验血清CaN、NFATc1水平与IVIG治疗反应之间的关系,并采用logistic回归性检验二者对IVIG治疗反应的影响。结果100例患儿中有20例为IVIG治疗无反应,占比为20%(20/100)。IVIG治疗无反应组患儿入院时血清CaN、NFATc1及C反应蛋白(CRP)水平高于IVIG治疗敏感组(P<0.05)。经点二列相关性检验显示血清CaN、NFATc1水平与川崎病患儿IVIG治疗无反应存在正相关关系(r>0,P<0.05)。经logistic回归性分析检验显示高水平血清CaN、血清NFATc1是导致患儿IVIG治疗无反应的影响因素(P<0.05)。结论川崎病患儿IVIG治疗无反应发生风险较高,且与血清CaN、血清NFATc1存在关系,二者的高水平表达是导致IVIG治疗无反应的影响因素。

微小RNA-30b通过下调活化T细胞核因子c1抑制大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的观察微小RNA(microRNA,miRNA)-30b通过调控活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T-cell c1,NFATc1)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的作用及机制。方法大鼠体外原代培养VSMCs,并分为正常组和高磷组。采用ELISA法测定各组VSMCs碱性磷酸酶(ALP)的活性;采用茜素红染色及钙含量检测各组VSMCs的钙化;采用实时荧光定量PCR测定各组VSMCs miR-30b及NFATc1和Runx2表达,Western blot检测NFATc1、Runx2的蛋白表达。为进一步验证miR-30b对VSMCs的作用,给予miR-30b的类似物mimic-30b和抑制物inhibitor-30b,检测VSMCs的钙化及NFATc1、Runx2的表达和ALP的活性变化。结果与正常组比较,高磷诱导的VSMCs钙化增加(t=-13.324,P<0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量升高(t值分别为-4.621、-4.684,P值分别为0.010、0.009);Runx2的RNA和蛋白表达量升高(t值分别为-4.340、-3.860,P值分别为0.005、0.018);ALP活性升高(t=-12.636,P<0.001);miR-30b的表达降低(t=3.822,P=0.019)。转染inhibitor-30b后,inhibitor-30b组较未转染组、inhibitor-NC组的钙含量升高(F=606.554,P<0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量升高(F值分别为36.427、22.512,P值分别为<0.001、0.002);Runx2的RNA和蛋白表达量升高(F值分别为44.225、42.832,P值分别为<0.001、<0.001);ALP活性升高(F=347.356,P<0.001)。转染mimic-30b后,钙化降低(F=93.341,P<0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量降低(F值分别为69.841、6.090,P值分别为<0.001、0.036);Runx2的RNA和蛋白表达量降低(F值分别为44.780、841.081,P值分别为0.005、<0.001);ALP活性降低(F=197.829,P<0.001)。结论miRNA-30b可抑制VSMCs钙化,可能是通过下调NFATc1,进而下调Runx2表达,从而使VSMCs表型转化减少实现的。