结核分枝杆菌早期分泌抗原对人单核细胞活化T细胞核因子5表达的影响

目的 研究MTB早期分泌靶抗原6/培养滤液蛋白10（ESAT-6/CFP-10）抗原对人单核细胞的活化T细胞核因子5（NFAT5）表达的影响.方法 收集解放军第三○九医院收治的活动性肺结核患者15例,男9例,女6例,年龄33 ～42岁,平均37岁.健康人来自解放军第三○九医院健康体检中心,共15名,男9名,女6名,年龄37 ～ 42岁,平均40岁.抽取患者和健康体检者的外周血,分离单核细胞,分别用H37Rv全菌裂解液和ESAT-6/CFP-10抗原多肽刺激,提取细胞总RNA,荧光定量PCR方法检测NFAT5 mRNA的表达,采用配对t检验分析刺激前后单核细胞NFAT5mRNA的表达差异.结果 活动性结核患者刺激前单核细胞NFAT5 mRNA的相对表达量为（0.23±0.15）,EAST-6/CFP-10抗原多肽刺激后为（0.18±0.12）,表达显著下调（t=2.591,P＜0.05）,而全菌裂解液刺激后表达量（0.28±0.25）没有显著变化（t=1.142,P＞0.05）.健康人刺激前单核细胞NFAT5 mRNA的相对表达量为（0.21 ±0.09）,EAST-6/CFP-10抗原多肽刺激后为（0.17±0.09）,表达显著下调（t=2.828,P＜0.05）,而全菌裂解液刺激后表达量（0.20±0.12）没有显著变化（t=0.452,P＞0.05）.结论 MTB分泌的ESAT-6/CFP-10抗原多肽能够抑制人单核细胞中NFAT5的表达.

四君子汤对胃癌MGC803细胞NFAT5及凋亡因子表达的影响

目的观察四君子汤含药血清对胃癌MGC803细胞活化T细胞核因子5(Nuclear factor of the activated T cell 5,NFAT5)及凋亡因子表达的影响,进一步探讨四君子汤抗肿瘤的作用机制。方法SD大鼠随机分为4组,依次为空白对照组(生理盐水等体积剂量灌胃),四君子汤低剂量组(0.246 g·kg^(-1))、中剂量组(0.492 g·kg^(-1))和高剂量组(0.984 g·kg^(-1)),各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,行腹主动脉取血,收集血清,过滤后制备高、中、低剂量四君子汤含药血清。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组MGC803细胞增殖水平,流式细胞术检测各组MGC803细胞凋亡率,Real-time PCR法检测各组MGC803细胞B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及NFAT5 mRNA的表达。结果与空白对照组比较,四君子汤中、高剂量组含药血清在24、48、72 h均能降低细胞增殖能力(P<0.05),且48、72 h抑制效果更为显著。与空白对照组比较,四君子汤中、高剂量组含药血清细胞凋亡率升高(P<0.05)。与空白对照组比较,四君子汤低、中、高剂量组含药血清的Bcl-2 mRNA表达降低,四君子汤低、中、高剂量组含药血清的Caspase-3 mRNA表达升高,四君子汤中、高剂量组含药血清的NFAT5 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论中、高剂量四君子汤含药血清能够促进Caspase-3表达,抑制NFAT5 mRNA、Bcl-2 mRNA的表达,抑制胃癌MGC803细胞增殖并促进其凋亡发生,发挥抗肿瘤作用。

NFAT5在肝细胞癌中表达的临床意义及其对IL-6、TNF-α表达的调控作用

目的探索活化T细胞核因子5(nuclear factor of activated T cells 5,NFAT5)在肝细胞癌中表达的临床意义及其对炎症相关因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的调控作用。方法用免疫组化检测76例肝癌患者组织及其癌旁组织标本中NFAT5的表达情况。将HuH-7细胞分为实验组和对照组,实验组细胞转染NFAT5-siRNA质粒,对照组细胞转染NC-siRNA质粒,荧光定量PCR检测各组细胞NFAT5 mRNA含量,蛋白质印迹法检测各组细胞的NFAT5、IL-6、TNF-α表达情况,CCK8检测各组细胞的增殖能力。结果肝癌患者组织NFAT5阳性率为81.58%(62/76),癌旁组织中表达率为6.58%(5/76),NFAT5在肝癌组织中的表达率显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.001)。转染siRNA后,实验组和对照组HuH-7细胞中NFAT5 mRNA表达量分别为1.03±0.19和0.33±0.11,NFAT5蛋白表达量分别为0.94±0.14和0.26±0.07,IL-6表达量分别为1.09±0.16和0.49±0.10,TNF-α表达量分别为1.21±0.13和0.28±0.08,IL-6、TNF-α的表达显著下降(均P<0.05)。实验组和对照组HuH-7细胞CCK8实验120 h的吸光度分别为2.21±0.12和1.12±0.11,实验组细胞增殖能力明显下降(P<0.05)。结论NFAT5在肝细胞肝癌中表达明显升高,可能与肝癌的恶性程度相关;且NFAT5通过调控IL-6、TNF-α的表达影响肝细胞肝癌细胞的增殖能力。

miR-29a对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-29a对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)活力和凋亡的影响。方法分离培养健康人FLS(n-FLS)和RA患者FLS(RA-FLS);Western blot检测n-FLS和RA-FLS中标志物CHI3L1蛋白表达;将miR-29a mimics、si-NFAT5及miR-29a+NFAT5转染RA-FLSs,转染48 h后,RT-qPCR检测miR-29a和NFAT5 mRNA表达;MTT法及流式细胞计量术分别检测各组细胞活力和凋亡率;Western blot检测p38、p-p38、cleaved-caspase3蛋白表达;通过双荧光报告基因检测系统检测过表达或抑制miR-29a后NFAT5表达,验证miR-29a和NFAT5的靶向关系。结果与n-FLS比较,RA-FLS中CHI3L1蛋白表达明显升高(P<0.05);过表达miR-29a或抑制NFAT5后,RA-FLS细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,p-p38表达明显降低,cleaved-caspase3表达明显升高(P<0.05)。miR-29a与野生型NFAT5 3′UTR共转染组RA-FLS的荧光素酶活性明显降低,而anti-miR-29a与野生型NFAT5 3′UTR共转染组荧光素酶活性明显升高(P<0.05);过表达miR-29a可明显下调RA-FLS中NFAT5表达,抑制miR-29a表达可明显上调NFAT5表达(P<0.05);过表达NFAT5可减弱过表达miR-29a对RA-FLS活力和凋亡的影响(P<0.05)。结论 miR-29a可通过靶向NFAT5下调p38MAPK信号通路抑制RA-FLS活力及诱导细胞凋亡。

NFAT5基因在食管癌组织中的表达情况及其对食管癌细胞迁移能力的影响

目的探索活化T细胞核因子5(nuclear factor of activated T cells 5,NFAT5)在食管癌组织中表达的临床意义及敲低其在食管癌细胞的表达对其迁移能力的影响。方法用免疫组化法检测所收集的26例食管癌患者组织及其癌旁组织标本中NFAT5的表达情况。将食管癌细胞ECA109分为实验组和对照组,实验组ECA109细胞转染NFAT5-siRNA质粒,对照组ECA109细胞转染MOCK-siRNA质粒,RT-PCR检测各组细胞NFAT5 mRNA的含量,蛋白免疫印迹法检测各组细胞的NFAT5、TLR4、MyD88表达情况,Transwell实验、细胞划痕实验检测实验组和对照组细胞的迁移(转移)能力。结果免疫组化实验结果显示食管癌患者组织NFAT5阳性率为80.77%(21/26),相应癌旁组织中表达率为15.38%(4/26),食管癌组织中NFAT5的阳性率显著高于癌旁组织(P<0.001)。实验组和对照组ECA109细胞转染相应siRNA后NFAT5 mRNA含量下降;实验组ECA109细胞NFAT5、TLR4、MyD88蛋白表达量分别为0.28±0.08、0.31±0.13、0.41±0.14;对照组ECA109细胞NFAT5、TLR4、MyD88蛋白表达量分别为0.95±0.15、0.84±0.22、1.04±0.26;实验组ECA109细胞TLR4、MyD88的表达明显下降(均P<0.05)。划痕实验结果表明,实验组细胞划痕愈合率为(52.67±5.21)%,对照组细胞为(82.91±7.26)%;Transwell实验结果表明,实验组成功迁移细胞数为(35±5)个,对照组成功迁移细胞数为(92±13)个,结果表明ECA109细胞低表达NFAT5后,细胞迁移能力显著下降(P<0.01)。结论NFAT5在食管癌中表达明显升高,可能与食管癌的恶性程度相关;且NFAT5通过调控TLR4/MyD88信号通路影响食管癌细胞的迁移能力。

抑制NFAT5对肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡能力的影响

目的:探讨活化T细胞核因子5(NFAT5)在肺腺癌组织及细胞中的表达以及抑制NFAT5对肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡能力的影响。方法:收集2017年6月至2019年6月在解放军联勤保障部队第九〇四医院接受诊断和治疗的61例肺腺癌患者的临床病理标本和癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺腺癌组织、癌旁组织中NFAT5的表达水平,并分析NFAT5的表达水平与患者临床病理特征的关系。将H1975细胞分为对照组(不作任何处理)、NC组(转染siRNA-NC)和si-NFAT5组(转染siRNA-NFAT5),采用qRT-PCR检测细胞株中NFAT5的表达水平,采用MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,Transwell和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达。结果:NFAT5 mRNA在肺腺癌组织中的表达量(3.22±0.20)显著高于癌旁组织(1.00±0.12),差异具有统计学意义(t=75.662,P<0.001);肺腺癌组织中NFAT5的表达水平与肿瘤TNM分期(χ^(2)=10.357,P=0.001)和淋巴结转移(χ^(2)=18.268,P<0.001)有关。NFAT5在对照组、NC组、si-NFAT5组中的相对表达量分别为1.00±0.06、1.01±0.05、0.31±0.06,差异具有统计学意义(F=140.498,P<0.001)。对照组、NC组和si-NFAT5组3组H1975细胞转染24 h后吸光度(A)值分别为0.70±0.01、0.55±0.01、0.35±0.01,48 h后分别为0.92±0.03、0.87±0.06、0.57±0.06,72 h后分别为1.05±0.01、0.90±0.01、0.66±0.01,差异均具有统计学意义(F=9.815,P=0.013;F=45.977,P<0.001;F=129.494,P<0.001),进一步两两比较,24、48、72 h si-NFAT5组增殖能力均明显低于对照组和NC组(均P<0.001)。3组细胞克隆数分别为452.33±31.50、421.00±17.35、129.00±17.35,差异具有统计学意义(F=128.200,P<0.001);si-NFAT5组细胞克隆数较对照组和NC组均显著下降(均P<0.001)。3组细胞侵袭数目分别为262.67±28.02、278.00±27.50、46.00±12.00,差异具有统计学意义(F=89.896,P<0.001);si-NFAT5组细胞侵袭能力较对照组和NC组均显著降低(均P<0.001)。3组细胞相对划痕宽度分别为0.28±0.04、0.32±0.04、0.54±0.04,差异具有统计学意义(F=42.889,P<0.001);si-NFAT5组细胞相对划痕宽度较对照组和NC组均显著增加(均P<0.001)。3组细胞凋亡率分别为(3.38±0.56)%、(3.14±0.62)%、(13.82±0.75)%,差异具有统计学意义(F=264.705,P<0.001);si-NFAT5组细胞凋亡率均显著高于对照组和NC组(均P<0.001)。3组H1975细胞NFAT5、p-P38/P38、p-ERK1/2/ERK1/2、p-JNK/JNK蛋白表达差异均具有统计学意义(F=91.245,P<0.001;F=132.896,P<0.001;F=243.332,P<0.001;F=118.358,P<0.001);si-NFAT5组NFAT5、p-P38/P38、p-ERK1/2/ERK1/2、p-JNK/JNK蛋白表达较对照组和NC组均显著降低(均P<0.001)。结论:NFAT5在肺腺癌组织及细胞中的表达均升高。抑制NFAT5能够抑制肺腺癌H1975细胞增殖、侵袭和迁移,并促进H1975细胞凋亡,其机制可能与NFAT5抑制MAPK信号通路有关。

NFAT5在实体肿瘤中的研究意义

目的总结活化T细胞核因子5(NFAT5)对实体肿瘤的影响以及促进肿瘤发生发展的作用机制,分析NFAT5在肿瘤学领域中相关研究的不足及未来方向。方法应用PubMed以"NFAT5、TonEBP、OREBP、cancer、tumor"等为关键词检索文献,同时以"活化T细胞核因子5、癌"等为关键词检索中国期刊全文数据库。检索时间为1999-03―2020-10,共检索到英文相关文献195篇,中文文献39篇。纳入标准:(1)NFAT5相关调控因素;(2)NFAT5在实体瘤中的相关研究;(3)NFAT5对免疫微环境的影响。根据标准共纳入45篇文献。结果NFAT5对多种类型的实体肿瘤发挥着促癌作用。NFAT5既可以通过直接调控AQP5、S100A4等促进癌细胞的增殖、运动能力等,也可以通过增强其他转录因子的活性而发挥间接作用。结论 NFAT5在部分实体肿瘤的发展及转移中起着重要作用,针对NFAT5的治疗可能会改变肿瘤的免疫微环境,有望为这些肿瘤的治疗提供新的思路。

东革阿里改善高尿酸血症的物质基础及作用机制研究

目的 研究东革阿里改善高尿酸血症的物质基础及作用机制。方法 采用体外酶实验,考察东革阿里不同溶剂提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用;利用HPLC表征不同溶剂提取物中化学成分的区别;通过网络药理学和分子对接技术预测东革阿里改善高尿酸血症的可能作用机制。结果 东革阿里75%乙醇提取物较水提取物有更好的黄嘌呤氧化酶抑制作用;乙醇提取物中的化学成分以宽缨酮为主,含量为130.4μg·mL-1,而水提取物中宽缨酮含量8μg·mL-1;宽缨酮具有较好的黄嘌呤氧化酶抑制作用,分子对接能量为-5.57 kcal·mol-1;网络药理学发现:活化T细胞核因子5(NFAT5)和胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)是宽缨酮、高尿酸血症和炎症三者间的共同靶点,且宽缨酮与两者间对接良好,具有较低的对接能量(-2.88、-4.01 kcal·mol-1)。结论 东革阿里改善高尿酸血症的物质基础与宽缨酮及其类似物有关,其作用机制可能与抑制黄嘌呤氧化酶的活性及与炎症通路的NFAT5和IGF1R两个靶点蛋白有关。