基于胸腺基质淋巴细胞生成素/蛋白酶激活受体2/瞬时电位受体香草酸受体1/活化T细胞的核因子信号通路探讨麻荆止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制

目的:通过麻荆止咳颗粒调控胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)/蛋白酶激活受体2(Proteinase Activated Receptor-2,PAR2)/瞬时电位感受器香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)/活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFAT)信号通路的动物实验,探讨其治疗咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)的疗效机制。方法:将豚鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组和地塞米松组,构建CVA豚鼠模型,药物干预10天,采用辣椒素激发各组豚鼠,观察咳嗽情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法观察各组肺组织病理学变化;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Method,ELISA)法检测各组血清TSLP含量;免疫组化染色及实时定量聚合酶链反应(quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)法检测肺组织PAR2、TRPV1、NFAT的表达。结果:与模型组对比,中药组和地塞米松组药物干预后咳嗽次数明显减少;血清TSLP含量显著降低;且肺组织病理变化较模型组明显减轻;PAR2、TRPV1和NFAT的蛋白与mRNA表达均下调。结论:麻荆止咳颗粒可通过抑制CVA模型豚鼠TSLP/PAR2/TRPV1/NFAT信号通路表达,降低气道敏感性及改善气道炎症,达到止咳效果。

PPAR-α激活对ET-1诱导的心肌肥大和转录因子NFATc4的影响

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)激活对内皮素-1(ET-1)诱导的心肌肥大和活化T细胞核因子c4(NFATc4)的影响,探讨在心肌肥大发病过程中PPAR-α和NFATc4的相互作用。方法:培养新生SD大鼠心肌细胞,采用[3H]亮氨酸法和RT-PCR法观察PPAR-α激动剂非诺贝特对ET-1诱导的心肌细胞肥大的影响;应用免疫荧光和免疫共沉淀技术分别检测非诺贝特对ET-1诱导的NFATc4核转位以及PPAR-α和NFATc4相互作用的影响;用Western blotting法检测NFATc4的胞浆和胞核表达。结果:(1)PPAR-α激动剂非诺贝特显著抑制ET-1诱导的肥厚反应。(2)非诺贝特阻止ET-1诱导NFATc4由胞浆到胞核的转位。(3)在心肌细胞中,PPAR-α和NFATc4之间存在相互作用,非诺贝特加强了这种相互作用。结论:PPAR-α激活后可以通过调控转录因子NFATc4来抑制ET-1诱导的心肌肥大反应。

NFATc1对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的:检测活化T细胞c1核因子(NFATc1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR检测NSCLC细胞H1650、H460、H1299及正常人支气管上皮细胞BEAS-2B中NFATc1表达水平,将si-NFATc质粒转染至H1650细胞中,通过CCK-8增殖及集落形成实验、划痕和Western印迹实验分别检测转染后H1650细胞增殖、迁移及EMT的影响。结果:NFATc1 mRNA在H1650、H460、H1299细胞中的相对表达水平高于BEAS-2B细胞(t=10.732,P<0.001;t=4.705,P=0.009;t=4.792,P=0.009),且H1650细胞中NFATc1 mRNA表达水平高于H460、H1299细胞(t=3.593,P=0.023;t=7.505,P=0.002);转染si-NFATc1组NFATc1 mRNA(t=9.325,P<0.001),NFATc1蛋白(t=10.254,P<0.001),细胞的OD值(t=7.954,P<0.001)均低于si-NC组,细胞集落形成数(t=12.210,P<0.001),迁移率(t=8.951,P<0.001)低于si-NC组;si-NFATc1组E-cadherin蛋白表达水平高于si-NC组(t=6.352,P<0.001),Vimentin和N-cadherin蛋白的表达(t=6.012,P<0.001;t=10.241,P<0.001)低于si-NC组。结论:NFATc1在H1650细胞中表达水平增加,敲低其表达水平后可减弱细胞增殖、迁移和EMT。

干扰NFAT5的表达对宫颈癌增殖和转移能力的影响及机制研究

目的研究活化T细胞的核因子(NFAT5)对宫颈癌细胞增殖和转移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法检测NFAT5在宫颈癌细胞系C33A、HeLa、Caski和人宫颈上皮永生化细胞H8中的表达,选择表达最高的宫颈癌细胞系进行NFAT5 siRNA感染,分为对照组(si-NC组)和实验组(si-NFAT5组)。Western blotting检测各组细胞中NFAT5的表达水平;MTS、平板克隆和EdU实验检测各组细胞的增殖能力;Transwell和划痕实验检测各组细胞转移能力;Western blotting检测NFAT5对Toll样受体-4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路活化的影响。结果Western blotting检测结果显示NFAT5在宫颈癌细胞系的表达水平高于在人宫颈上皮永生化细胞H8中的表达(P<0.05),选择表达水平最高的HeLa细胞转染NFAT5 siRNA进行后续实验。Western blotting结果显示NFAT5在si-NFAT5组中的表达降低(P<0.05);si-NFAT5组HeLa细胞增殖和转移能力下降,细胞中TLR4和MyD88蛋白的表达降低。结论干扰NFAT5的表达可能通过降低TLR4/MyD88信号通路活性抑制宫颈癌细胞增殖和转移能力,NFAT5可能是宫颈癌治疗的新型靶标。