活性免疫球蛋白蛋黄粉增强小鼠抗疲劳性能的实验研究

目的研究活性免疫球蛋白蛋黄粉增强小鼠抗疲劳性能的作用。方法分别以50mg/(kg·d)(低浓度)活性免疫球蛋白蛋黄粉溶液、100mg/(kg·d)(高浓度)活性免疫球蛋白蛋黄粉溶液、100mg/(kg·d)缺乏活性免疫球蛋白的蛋黄粉溶液(对照)和同样体积的生理盐水(对照)对小鼠进行灌胃,15天后,分别测量小鼠力竭游泳时间、血尿素氮含量、运动前后全血乳酸含量、运动后糖原肝和肌糖原含量以及丙二醛含量。结果给予活性免疫球蛋白蛋黄粉后,小鼠负重游泳时间明显延长,肝糖原消耗量明显减少,运动后血尿素氮水平降低,明显促进小鼠运动后乳酸消除,降低小鼠血清MDA含量。结论活性免疫球蛋白蛋黄粉具有明显抗疲劳作用,而缺乏活性免疫球蛋白的同质蛋黄粉则无明显抗疲劳作用。

美拉德反应对四角蛤蜊原肌球蛋白免疫结合活性的影响

以四角蛤蜊(Mactra veneriformis)为研究对象,采用木糖、阿拉伯糖对蛤蜊粗提物进行干法美拉德反应,对反应产物的免疫结合活性、消化特性分析发现,美拉德反应能够降低四角蛤蜊过敏原的免疫结合活性,提高四角蛤蜊粗提物在模拟胃肠液中的连续消化速率,降低消化产物的粒径。之后对蛤蜊美拉德反应产物中原肌球蛋白(tropomyosin,TM)进行分离纯化,并分析其结构特性和免疫结合活性。结果显示,经过干法美拉德反应后TM的α-螺旋相对含量减少,β-折叠、β-转角、无规卷曲相对含量增多,表面疏水性增强,空间结构改变,最终导致TM的免疫结合活性降低。本研究为开发低致敏性蛤蜊产品提供理论参考。

淡水小龙虾主要过敏原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫活性鉴定

目的:克隆、表达淡水小龙虾肌肉中主要过敏原原肌球蛋白(tropomyosin),并对其免疫活性进行鉴定。方法:根据甲壳类的泛过敏原tropomyosin基因的高度保守性设计简并引物,通过RT-PCR克隆出淡水小龙虾虾肉中过敏原tropomyosin的全长基因。将该基因与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经诱导异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni2+亲和层析柱纯化后,用Western blot检测该重组蛋白的免疫活性。结果:序列分析显示该基因包括一个编码284个氨基酸的开放阅读框,与已知虾、蟹、龙虾等的过敏原tropomyosin基因有较高同源性(>80%)。根据过敏原的命名规则,将其命名为Proc 1,并提交GenBank数据库,登录号为FJ769183。重组小龙虾tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达,Western blot检测结果显示该重组蛋白具有良好的免疫活性。结论:研究成功表达了具有免疫活性的淡水小龙虾原肌球蛋白,为虾过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。

抗轮状病毒卵黄免疫球蛋白制备工艺及生物学活性研究

目的 :抗轮状病毒卵黄免疫球蛋白 (yolkimmunoglobulins,IgY)的制备及鉴定方法方法 :采用MA - 10 4细胞转瓶培养技术 ,批量制备人型轮状病毒Wa株和猴型轮状病毒SA11,以纯化病毒 +佐剂对SPF纯系莱航产蛋母鸡进行强化免疫 ,通过盐析、柱层析和超滤方法从鸡卵黄中制备特异性免疫球蛋白 ,并对纯化的免疫球蛋白进行生物学活性研究。结果 :免疫鸡卵黄中产生高滴度特异性抗轮状病毒免疫球蛋白 ,其ELISA免疫效价达 1.5× 10 5,在定期加强免疫条件下 ,卵黄抗体效价维持在高滴度可达 12个月以上。经脱脂盐析和层析纯化的IgY抗体 ,在 4℃条件下其免疫效价可稳定保存 6个月以上 ,无显著下降。结论 :体外细胞病变抑制实验结果表明 ,批量制备的IgY抗体具有高效价的特异性轮状病毒中和活性。

β-伴大豆球蛋白β亚基的纯化及免疫活性鉴定

等电点沉淀法和凝胶过滤层析提纯的β-伴大豆球蛋白经6mol·L-1脲变性后解聚为游离亚基,利用DEAE琼脂糖凝胶FF离子交换层析分离纯化β-伴大豆球蛋白亚基,并对纯化亚基进行透析复性。同时将β-伴大豆球蛋白免疫家兔制备抗血清,利用免疫印迹方法检测纯化的亚基与β-伴大豆球蛋白抗血清是否发生免疫反应。结果表明:利用DEAE琼脂糖凝胶FF阴离子交换层析可以纯化出高纯度的β-伴大豆球蛋白β亚基,纯化的β亚基可以与抗β-伴大豆球蛋白抗体结合,具有免疫活性。

蒸汽处理前后β-伴大豆球蛋白在仔猪消化道内免疫活性变化规律的研究

随机从2窝“杜长约”三元杂交仔猪中挑选12头,分成A、B、C3组,每组4个重复,公、母各半。21日龄断奶;22-26日龄,A组饲喂不舍任何豆科植物的代乳料,B、C组分别饲喂合纯化的蒸汽处理前、后β-伴大豆球蛋白的代乳料。26日龄全部屠宰,取胃、空肠中段、盲肠和结肠中的食糜,以测定消化道各部位β-伴大豆球蛋白的免疫活性。结果表明:随着消化道的延续,β-伴大豆球蛋白的免疫活性均呈下降趋势;与消化道其他部位比较起来,活性在胃和空肠下降幅度较大,到空肠中段基本丧失,从空肠中段到结肠无明显变化;整个消化道中,采食含未经蒸汽处理β-伴大豆球蛋白代乳料仔猪中β-伴大豆球蛋白免疫活性的下降幅度均小于采食含蒸汽处理β-伴大豆球蛋白代乳料的仔猪。

家蚕类免疫球蛋白(hemolin)基因的克隆及表达特征和抗菌活性研究

Hemolin是昆虫的一种重要先天性免疫蛋白,属于免疫球蛋白超家族。克隆了家蚕hemolin基因,其序列全长5 100bp,含有5个外显子和4个内含子,基因cDNA编码含410个氨基酸的蛋白质,预测蛋白的分子质量约44.79 kD,pI 5.12。对该基因表达规律和生物学活性的结果研究表明:该基因只在家蚕蛹期脂肪体内特异性转录和表达,并能够被细菌和病毒诱导在幼虫期表达;该基因体外表达获得的重组蛋白具有抗菌生物学活性,能够有效抑制苏云金芽孢杆菌等的生长,由此暗示家蚕Hemolin蛋白可能在蚕体抵御病毒与细菌的感染过程中发挥重要作用。

采用多种抗原测定静注人免疫球蛋白(pH4)中抗体Fc段生物学活性的初探

目的初步探讨采用多种抗原测定静注人免疫球蛋白(IVIG)(pH4)中抗体的Fc段生物学活性,了解IVIG中抗体的Fc段生物学活性。方法采用补体活化的经典途径中免疫复合物激活补体的方法,将不同浓度的麻疹病毒、风疹病毒、乙肝表面抗原(HBsAg)、破伤风类毒素、脑膜炎球菌P64k外膜蛋白和白喉类毒素6种抗原分别致敏人O型血红细胞形成红细胞-抗原结合物;然后,6种致敏红细胞分别与IVIG孵育,与特异性抗体形成红细胞-抗原-抗体复合物;最后,此复合物与补体反应,在541 nm波长处读取吸光值,并绘制溶血反应动力学曲线,分别计算IVIG中针对上述6种抗原IgG的Fc段生物学活性。采用此方法,用6种抗原致敏的红细胞测定IVIG的Fc段生物学活性10次,验证此方法的重复性。结果麻疹病毒、风疹病毒、HBsAg、破伤风类毒素和脑膜炎球菌P64k外膜蛋白致敏的红细胞分别与供试品和补体反应后,测定的溶血反应动力学曲线较平缓,而白喉类毒素致敏的红细胞与供试品和补体反应后,测定的溶血反应动力学曲线下降明显,呈典型的"S"型曲线。计算结果显示,IVIG中针对此六种抗原的抗体Fc段生物学活性相对于参考品均大于80%。Fc段生物学检测方法重复性较好。结论采用多种抗原分别致敏红细胞,可以用来检测IVIG中多种抗体的Fc段生物学活性,为深入了解IVIG制品中的多种抗体的Fc段生物学活性奠定了基础。

激活补体试验检测静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性的优化

优化激活补体试验的条件,完善静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法。方法采用补体活化经典途径的原理,分别探讨致敏红细胞密度和贮存时间对人免疫球蛋白Fc段生物学活性检测结果的影响;比较手工法和微孔板分光光度法检测Fc段生物学活性的检测结果。结果在致敏红细胞A541 nm=1.3和致敏红细胞贮存5 d时,检测结果较稳定。微孔板分光光度法检测优于手工法。结论完善了人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法,检测结果准确、重复性好。

免疫球蛋白样抑制性受体KIR基因与HLA-Cw的匹配对NK细胞活性的影响

本研究探索自然杀伤(natural killer,NK)细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样抑制性受体(killer immunoglob-ulin-like inhibition receptor,KIR)基因与HLA-Cw配体匹配对NK细胞活性的影响。对27名健康人取新鲜外周血20ml,用NK细胞免疫磁珠分选试剂盒负向分选高纯度NK细胞。对30例初治确诊急性髓系白血病(AML)患者取新鲜骨髓液10ml,分离单个核细胞作为靶细胞。流式细胞仪检测NK细胞CD158a,CD158b表达水平。取健康人和患者的外周血各2ml,以PROTRANS法抽提DNA,采用序列特异性引物PCR-SSP分型技术分别检测HLA-Cw、KIR基因。MTT法检测KIR与HLA-Cw基因不同组合的NK细胞对AML患者白血病细胞的杀伤率。结果表明:分选后的NK细胞,纯度为(90.8±6.08)%。NK细胞KIR基因与靶细胞HLA-Cw等位基因的匹配数少则NK细胞的杀伤效应强,0个等位基因匹配的杀伤率为(50.66±8.40)%,1个匹配与2个匹配的杀伤率分别为(38.28±6.71)%,(19.74±4.15)%,(F=20.226,p<0.001)。NK细胞的KIR表达水平与杀伤作用也有一定的联系(F=16.276,p值<0.001)。结论:NK细胞对AML白血病细胞的杀伤作用与抑制性KIR/HLA-Cw的匹配数及KIR的表达相关,匹配越少、KIR表达越低,杀伤率越高。

进化免疫球蛋白结合分子LD5的原核表达、纯化及结合活性

目的对新型进化免疫球蛋白(Ig)结合分子LD5进行原核表达和纯化,并鉴定其结合活性。方法将LD5基因片段克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌后,IPTG诱导表达。以8mol/L尿素裂解菌体后,上清经Ni2+-NTA柱纯化,并对纯化蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。以ELISA和Dot blot对LD5蛋白结合IgG、IgM活性进行鉴定。结果LD5分子在大肠杆菌中获得成功表达,表达的融合蛋白相对分子质量为59000。Western blot表明纯化的LD5蛋白能特异结合IgG。ELISA结果显示,LD5在结合IgM上较SpA具有明显的优势。结论LD5分子在大肠杆菌中已成功表达,纯化的LD5蛋白保留了天然Ig结合分子的结合活性。

静注人免疫球蛋白抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用测定方法的建立

目的利用转录报告基因细胞,建立静注人免疫球蛋白(pH4)(human Immunoglobulin(pH4)for Intravenous Injection,IVIG)抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性测定方法。方法以Jurkat-NFAT-Luc-CD16细胞作为效应细胞,PLC/PRF/5细胞作为靶细胞,将效应细胞、靶细胞和IVIG孵育后,通过检测IVIG Fc段结合效应细胞后活化T细胞核因子释放的荧光素酶,建立IVIG ADCC生物学活性检测方法,同时对试验条件进行优化,以及对该方法进行方法学验证。结果IVIG在该方法中存在量效关系,符合四参数方程。经过试验条件优化,最终确定将PLC/PRF/5细胞作为靶细胞,抗体起始稀释浓度为20 mg/mL,梯度稀释倍数为1∶2,效靶比为1∶3,效应细胞、靶细胞和IVIG共同孵育时间为24 h。三次独立检测的日内和日间起始工作浓度荧光素酶相对光单位(relative light unit,RLU)及半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<11%,2个不同稀释组回收率样本相对效价分别(23.50±1.69)%,(49.30±2.97)%,对应的回收率分别为(93.50±6.30)%,(96.24±5.43)%,RSD均<11%。结论本研究利用转录报告基因细胞成功建立IVIG ADCC生物学活性检测方法,该方法具有专属性强、重复性好、准确性高等优点,可作为IVIG ADCC生物学活性检测方法。

静脉注射用免疫球蛋白的抗补体活性及部分免疫学特性测定

本文采用100CH_(50)法测定静脉注射用免疫球蛋白(IVIG)的抗补体活性(ACA)。对IVIG的pH,Na^+含量及不同成分的缓冲液进行了试验比较;ACA重复测定结果的变异系数在15％以内;MG在含微量IgG多聚体情况下,多聚体与ACA的关系不明显;17批MG都含有麻疹抗体和白喉抗体,IgA含量不等,不含IgM。

应用明矾—活性炭吸附法去除静脉注射用人血免疫球蛋白制剂中的热原质

用活性炭、硅藻土、氢氧化铝、明矾—活性炭四种不同的吸附剂处理静脉注射用人血免疫球蛋白制剂。结果表明，明矾—活性炭吸附法去除热原质最有效，同时进一步改善了制品外观，提高了制品纯度，蛋白回收率达到７５％以上，而且毒性试验和安全试验也符合标准。

静注人免疫球蛋白中白喉抗体效价对其Fc段生物学活性检测结果影响的分析

目的分析静注人免疫球蛋白（IVIG）中白喉抗体效价对其Fc段生物学活性检测的影响。方法检测20批IVIG的白喉抗体效价水平和Fc段生物学活性结果,进一步探讨白喉抗体效价与Fc段生物学活性的关系。结果20批IVIG中白喉抗体效价水平均符合中国药典的要求,在3~60 HAU/g之间,其中有两批IVIG的白喉抗体效价水平相对较高,其他18批IVIG的白喉抗体效价水平变化趋势不明显。20批IVIG的Fc段生物学活性均较高,在60%~140%之间。白喉抗体效价水平高者,其Fc段生物学活性并非高,反之亦然。结论 IVIG的Fc段生物学活性与其白喉抗体效价水平无明显的相关性。

蛋黄免疫球蛋白的功能性研究与开发

免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是一类具有增强抗菌、免疫功能的活性蛋白质，是人类特别是婴儿健康所需的生理活性物质。本文对蛋黄免疫球蛋白（ImmunoglobulinYolk，IgY）的功能特性进行了较系统的研究。对IgY的功能性研究表明，IgY确实具有较高的抗菌免疫活性，可抑制致病性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等常见肠道致病菌的生长，IgY的耐热、耐酸性与牛、猪IgG相当，对胃蛋白酶较敏感，但经胰蛋白酶消化后仍保留了大部分的对抗原的结合力。动物及婴儿喂养实验证实，IgY安全无毒，并可帮助机体增强免疫功能．提高抵抗细菌感染的能力，完全可作为具有增强免疫功能的食品功能因子。

鸡卵黄免疫球蛋白的提取及体外抑菌活性研究

本研究采用水稀释法脱脂、分步盐析法分离纯化对鸡卵黄免疫球蛋白进行了提取,结果表明,当卵黄作7倍无菌水稀释、pH值为5、4℃条件下温浴5 h时,可得到较纯的卵黄水溶性组分(W SF),再经过多步盐析,可获得纯度为68.4%的IgY,其回收率为82%。体外抑菌活性实验表明,提取的IgY对大肠杆菌具有明显的抑制作用,而对金黄色葡萄球菌抑制作用较弱。研究结果为IgY的分离提取及临床应用提供了参考数据。

免疫球蛋白制剂对仔猪血清碱性磷酸酶活性和断奶时增重的影响

实验分 2批选用 170头大白仔猪 (40 ,130头 ) ,随机分为 5组 ,均食初乳。A组为对照组 ,其余各组均于出生后 2 4h之内饲喂不同剂量的免疫球蛋白制剂 ,观察对仔猪 10、 2 0日龄血清碱性磷酸酶活性和断奶时增重的影响。结果表明 ,饲喂免疫球蛋白制剂 10ml的仔猪 ,其 10、 2 0日龄血清碱性磷酸酶活性显著高于对照组 (P <0 . 0 5 ) ,断奶时增重极显著高于对照组 (P <0 . 0 1)。