鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶活性检测方法的建立

目的建立鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶(mouse indoleamine 2,3-dioxygenase,mIDO)活性检测方法。方法利用基因工程方法表达纯化重组mIDO(recombinant mIDO,rmIDO),建立酶水平mIDO活性检测体系;构建过表达mIDO的小鼠Lewis肺癌(Lewis lung cancer,LLC)细胞株,建立细胞水平mIDO活性检测体系。比较L-1-甲基色氨酸(L-1-methyl tryptophan,L-1-MT)在酶及细胞水平上对mIDO及人源IDO(human IDO,hIDO)的抑制作用,测定抑制类型、抑制常数Ki值及半数抑制浓度(IC50)值。结果 L-1-MT对mIDO和hIDO均有抑制作用,抑制类型及抑制常数Ki值相似,但IC50值在酶水平及细胞水平上均有差异。结论 mIDO酶活性检测体系是筛选IDO抑制剂的有效工具,与hIDO酶活性检测体系联用,能反映种属差异,可更好地利用小鼠模型来替代人类进行IDO抑制剂治疗疾病的研究。