富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路及视网膜血管通透性的影响

目的 探究富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管通透性及硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路的影响。方法 2020年6—9月,SD大鼠采用随机数字表法选取15只为空白组,其余大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)和高脂饲料喂养构建DR模型,造模成功的大鼠采用随机数字表法分为模型组、富氢水低、高剂量组(5、10 mL/kg),每组15只。连续给药28 d后,记录大鼠体质量,检测空腹血糖(FBG)水平;眼底照相和荧光素血管造影(FFA)观察大鼠右眼新生血管和荧光素渗漏现象;光学相干断层扫描(OCT)检测视网膜厚度;伊文思蓝-白蛋白复合物渗漏分析视网膜血管通透性;HE染色观察视网膜病理变化;免疫荧光染色观察新生血管形成情况;TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡;酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测量视网膜匀浆中血管生成素-1(Ang-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;WB法检测视网膜TXNIP/NLRP3通路和凋亡相关蛋白的表达。结果 与空白组相比,模型组大鼠FBG[(26.49±2.18)mmol/L比(5.76±1.09)mmol/L]、血-视网膜屏障(BRB)通透性[(32.51±2.05)μg/g比(11.24±1.76)μg/g]、视网膜细胞凋亡[(23.31±2.14)%比(0.07±0.01)%]、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、TXNIP[(0.85±0.09)比(0.40±0.05)]、NLRP3[(0.93±0.10)比(0.48±0.07)]、IL-1β[(0.74±0.05)比(0.41±0.04)]、胱天蛋白酶-1(caspase-1)[(0.78±0.07)比(0.24±0.04)]表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平显著增加(P<0.05),体质量、视网膜厚度[(148.31±12.76)μm比(223.57±17.23)μm]显著降低(P<0.05),视网膜有较多新生血管和血管曲折,血管渗漏严重,视网膜细胞明显水肿,有大量炎性渗出,神经节细胞层(GCL)细胞数量减少;与模型组相比,富氢水低、高剂量组大鼠FBG[(20.85±3.45)mmol/L、(14.27±2.42)mmol/L比(26.49±2.18)mmol/L]、BRB通透性[(24.67±1.85)μg/g、(17.48±1.63)μg/g比(32.51±2.05)μg/g]、视网膜细胞凋亡[(14.65±1.36)%、(9.85±1.22)%比(23.31±2.14)%]、Bax、Bcl-2、TXNIP[(0.64±0.09)、(0.52±0.08)比(0.85±0.09)]、NLRP3[(0.72±0.09)、(0.61±0.08)比(0.93±0.10)]、IL-1β[(0.62±0.06)、(0.53±0.05)比(0.74±0.05)]、caspase-1[(0.57±0.06)、(0.41±0.05)比(0.78±0.07)]表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.05),体质量、视网膜厚度[(173.62±14.46)μm、(196.54±15.75)μm比(148.31±12.76)μm]明显增加(P<0.05),视网膜水肿情况减轻,GCL细胞数量明显增加,损伤得到改善。结论 富氢水可抑制新生血管形成,降低DR大鼠视网膜血管通透性,减轻视网膜神经元损伤;其作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3通路的激活有关。

链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠坐骨神经硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体的表达

目的初步探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路在链尿佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠坐骨神经中的作用。方法采用单次STZ腹腔注射的方法建立糖尿病大鼠模型,取年龄、体重匹配的雄性大鼠作为正常对照组,监测血糖、体重变化,成模后12周应用电子Von Frey仪测定机械痛阈值,处死取坐骨神经进行坚牢蓝染色,采用免疫组织化学及Western blot法检测TXNIP、NLRP3、半胱天冬酶-1和白细胞介素(IL)-1β的表达,ELISA法测定血清中IL-1β、IL-18水平。结果糖尿病大鼠模型坐骨神经中TXNIP蛋白表达为3.78±0.08,较正常对照组0.99±0.06显著增加(t=26.980,P<0.0001);与正常对照组(0.97±0.05)相比,糖尿病组NLRP3蛋白表达(2.44±0.16)明显升高(t=8.885,P<0.0001);糖尿病组活化的半胱天冬酶-1蛋白表达为4.45±0.19,正常对照组为1.08±0.06,两组差异有统计学意义(t=16.900,P<0.0001)。糖尿病组IL-1β蛋白表达为4.50±0.16,较正常对照组1.19±0.08显著增加(t=18.630,P<0.0001);与正常对照组比较,糖尿病大鼠血清中IL-1β[(110.50±8.80)pg/ml比(17.97±3.18)pg/ml,t=9.892,P<0.0001]、IL-18[(591.70±8.78)pg/ml比(160.70±8.33)pg/ml,t=35.620,P<0.0001]均分泌增多。结论糖尿病周围神经病变(DPN)的发病机制可能与TXNIP表达增加、NLRP3炎症小体激活以及下游炎症反应有关,该通路可成为DPN治疗的新靶标。

硫氧还蛋白1/硫氧还蛋白相互作用蛋白对腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体的调控及机制研究

目的探究硫氧还蛋白1(Trx1)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(Txnip)对腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的调控作用及可能机制。方法前瞻性采用随机数字表法将人腹膜间皮细胞(HMrSV5)分为三组,一组采用10%胎牛血清(FBS)培养液(空白组)、一组采用转染小干扰RNA(siRNA)阴性对照的4.25%腹膜透析液(PDS)与10%FBS培养液(si-NC组),一组采用转染靶向沉默Txnip siRNA的4.25%PDS与10%FBS培养液(si-Txnip组)。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹法(WB)测定各组Trx1、Txnip、NLRP3 mRNA与蛋白表达水平;采用MTT法测定各组培养不同时间点细胞增殖情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定上清液白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平和半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)活性。结果si-NC组、si-Txnip组培养1、2、3 d HMrSV5增殖活性均低于空白组(P<0.05);并且si-Txnip组培养1、2、3 d HMrSV5增殖活性均高于si-NC组(0.402±0.009比0.372±0.010、0.554±0.016比0.482±0.008、0.700±0.013比0.590±0.010),差异有统计学意义(P<0.05)。si-NC组、si-Txnip组Txnip、NLRP3 mRNA表达均高于空白组(P<0.05);并且si-Txnip组Txnip、NLRP3 mRNA表达低于si-NC组(1.43±0.32比2.80±0.43、2.38±0.35比3.42±0.40),si-Txnip组Trx1 mRNA表达低于空白组、高于si-NC组(2.24±0.35比3.50±0.38、1.18±0.23),差异有统计学意义(P<0.05)。si-NC组、si-Txnip组Txnip、NLRP3蛋白表达均高于空白组(P<0.05);si-Txnip组Txnip、NLRP3蛋白表达低于si-NC组(0.453±0.108比0.754±0.116),si-Txnip组Trx1蛋白表达低于空白组、高于si-NC组(0.514±0.112比0.753±0.125、0.297±0.010),差异有统计学意义(P<0.05)。si-NC组、si-Txnip组上清液IL-1β、IL-6水平均高于空白组[(0.45±0.07)、(0.35±0.06)μg/L比(0.23±0.05)μg/L,(3.00±0.38)、(2.32±0.30)μg/L比(1.95±0.34)μg/L],si-Txnip组上清液IL-1β、IL-6水平低于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-Txnip组上清液caspase-1活性小于si-NC组、大于空白组[(0.87±0.26)U比(1.65±0.40)、(0.62±0.20)U],差异有统计学意义(P<0.05)。结论Trx1/Txnip系统中下调Txnip能明显抑制腹膜间皮细胞NLRP3炎症小体及功能。

基于TXNIP/NLRP3炎性小体通路研究清热凉血方对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的基于硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3炎性小体通路探讨清热凉血方(QRLX)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜屏障的保护作用及潜在机制。方法78只大鼠随机选取12只为对照(Control)组,其余大鼠采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建UC大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为UC组、柳氮磺吡啶组(SASP,270 mg/kg)、清热凉血方低(QRLX-L,14.8 g/kg)、中(QRLX-M,29.6 g/kg)、高剂量(QRLX-H,59.2 g/kg)组,每组12只。各给药组给予相应剂量药物灌胃,连续2 w。异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-dextran)灌胃检测肠道渗透性;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中二胺氧化酶(DAO)活性、D乳酸(LA)、内毒素(ET)和结肠组织白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理学变化;免疫组化法检测肠屏障功能相关紧密连接蛋白(ZO)-1和occludin表达;Western印迹检测结肠组织TXNIP/NLRP3通路相关蛋白表达。结果与Control组相比,UC组血清FITC-dextran浓度、血浆DAO活性、D-LA、ET、结肠匀浆中IL-1β、IL-18水平、TXNIP、NLRP3、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cl-caspase)-1 p10、cl-caspase-1 p20蛋白水平明显升高,结肠组织occludin、ZO-1阳性表达明显减少(均P<0.05);与UC组相比,SASP组和QRLX-H、QRLX-M组FITC-dextran浓度、血浆DAO活性、D-LA、ET、结肠匀浆中IL-1β、IL-18水平、TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1 p10、cl-caspase-1 p20蛋白水平明显降低,结肠组织occludin-1、ZO-1阳性表达明显增加(均P<0.05)。结论QRLX可增强UC大鼠的肠黏膜屏障功能,改善UC;其作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3炎性小体通路的激活有关。

七氟醚后处理对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞焦亡及TXNIP/NLRP3通路的影响

目的:基于硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路探究七氟醚后处理(SPostC)对缺氧复氧(HR)诱导的H9C2心肌细胞焦亡的影响。方法:体外培养H9C2心肌细胞,将细胞分为4组:正常对照组(NC组)、HR组、HR+SPostC组、HR+SPostC+TXNIP/NLRP3通路抑制剂白藜芦醇组(HR+SPostC+RES组)。采用CCK-8检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH含量;采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞膜孔的形成;采用Western blot法检测细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、IL-1β、IL-18及TXNIP/NLRP3通路相关蛋白TXNIP、NLRP3的表达;采用实时荧光定量PCR法检测TXNIP/NLRP3通路相关基因TXNIP、NLRP3的表达。结果:与NC组相比,其余3组细胞活力显著降低,而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显升高(P<0.05);与HR组相比,HR+SPostC组和HR+SPostC+RES组细胞活力显著升高(P<0.05),而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显降低(P<0.05);与HR+SPostC组相比,HR+SPostC+RES组细胞活力显著升高(P<0.05),而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显降低(P<0.05)。结论:SPostC可能通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路进而抑制HR诱导的H9C2心肌细胞焦亡。

丙泊酚对缺氧复氧的肠上皮细胞ROS/TXNIP/NLRP3通路及凋亡的影响

目的:探讨丙泊酚处理对缺氧复氧的肠上皮细胞活性氧(ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)通路及凋亡的影响。方法:对人肠上皮HIEC细胞进行培养,并进行缺氧复氧处理;通过不同浓度(25,50,100μmol·L^(-1))丙泊酚对缺氧复氧HIEC细胞进行处理,细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞活力;流式细胞术检测HIEC细胞凋亡;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测HIEC细胞ROS水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl2)、Bcl-2相关基因(Bax)、及TXNIP、NLRP3、白介素-1β(IL-1β)表达情况。结果:与对照组比较,缺氧复氧组HIEC细胞活力、蛋白Bcl2表达水平显著降低,HIEC细胞凋亡率、细胞内ROS含量、蛋白Bax、Caspase-3、TXNIP、NLRP3、IL-1β表达水平显著升高(P<0.05);与缺氧复氧组比较,不同浓度丙泊酚处理组HIEC细胞活力、蛋白Bcl2表达水平显著升高,细胞凋亡率、细胞内ROS含量、蛋白Bax、Caspase-3、TXNIP、NLRP3、IL-1β表达水平显著降低(P<0.05)。结论:丙泊酚处理能够抑制缺氧复氧HIEC细胞ROS/TXNIP/NLRP3通路及细胞的凋亡,可能对肠上皮细胞缺血再灌注损伤(I/R)有一定的保护作用。

基于ROS/TXNIP/NLRP3通路的柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞焦亡的影响

目的观察柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞焦亡的影响,从ROS/TXNIP/NLRP3通路探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组和柴胡三参胶囊低、中、高剂量组,每组10只。柴胡三参胶囊低、中、高剂量组分别按0.15、0.3、0.6 g/kg灌胃,曲美他嗪组按5.4 mg/kg灌胃,假手术组和模型组予等体积生理盐水灌胃,28 d后造模。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型。HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构,ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β含量,DCFH-DA荧光探针检测心肌组织活性氧(ROS)含量,免疫荧光染色检测心肌细胞焦亡,Western blot和RT-PCR分别检测心肌组织硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)蛋白和mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维结构不完整,细胞出现脂肪样变、间质水肿及出血,伴有少量炎性细胞浸润,胞质疏松,胞膜破裂严重、有大量孔隙形成;血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著增加;心肌组织ROS含量显著增加,细胞焦亡率显著升高,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠心肌纤维结构均有不同程度改善,心肌细胞脂肪样变减少,间质水肿及出血程度减轻,无明显炎性细胞浸润,胞质较致密,胞膜相对完整、孔隙减少;柴胡三参胶囊中、高剂量组和曲美他嗪组大鼠血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著减少,心肌组织ROS含量显著减少,细胞焦亡率显著降低,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论柴胡三参胶囊可有效减轻MIRI大鼠心肌细胞损伤,其机制可能与下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,抑制心肌细胞焦亡有关。

基于NLRP3/caspase-1通路研究木犀草素对脂多糖诱导的肠上皮细胞焦亡的影响

目的探讨木犀草素对脂多糖(LPS)诱导的肠上皮细胞焦亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)通路的影响。方法体外培养人肠上皮细胞HIEC-6,对其进行(1.0μg/mL)LPS诱导,并将细胞分为对照组、LPS组、LPS+(25、50、100μmol/L)木犀草素组、木犀草素+NLRP3激活剂尼日利亚菌素钠盐(NSS)组,除对照组外均添加1.0μg/mL的LPS。MTT法检测各组细胞活力;电阻仪检测单层上皮跨膜电阻(TEER);酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测各组细胞焦亡相关蛋白(GSDMD、GSDMD-N)及NLRP3、caspase-1、IL-1β的表达。结果与对照组比较,LPS组HIEC-6细胞活力、TEER值显著降低,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、蛋白GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+(25、50、100μmol/L)木犀草素组HIEC-6细胞活力、TEER值显著升高,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著降低(P<0.05);与LPS+100μmol/L木犀草素组比较,木犀草素+NSS组HIEC细胞活力、TEER值显著降低,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著升高(P<0.05)。结论木犀草素能够减轻LPS诱导的人肠上皮细胞HIEC-6焦亡和细胞炎性损伤,可能与NLRP3/caspase-1信号通路的抑制有关。

慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者外周血巨噬细胞极化和TXNIP/NLRP3水平与预后的关系探讨

目的探讨慢加急性乙型肝炎肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血巨噬细胞极化和外周血单个核细胞(PBMCs)硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化.方法2019年6年~2020年6月我院收治的HBV-ACLF患者57例和慢性乙型肝炎(CHB)患者43例,使用流式细胞仪检测外周血M1/M2型巨噬细胞比率,分离PBMCs,采用实时荧光定量RT-PCR法检测TXNIP、NLRP3和半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)mRNA水平,采用ELISA法检测血清白介素-6(IL)-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α).结果HBV-ACLF组M1型巨噬细胞比率和M1/M2细胞比值分别为(3.5±0.4)%和(1.2±0.2),显著高于CHB组[分别为(2.1±0.2)%和(0.6±0.1),P<0.05],而M2型巨噬细胞比率为(2.5±0.3)%,显著低于CHB组[(4.1±0.4)%,P<0.05];HBV-ACLF组血清IL-6和TNF-α水平分别为(37.9±4.2)ng/L和(2.3±0.2)pg/mL,显著高于CHB组[分别为(28.8±3.6)ng/L和(1.2±0.1)pg/mL,P<0.05],而血清IL-10水平为(1.4±0.2)pg/mL,显著低于CHB组[(2.9±0.3)pg/mL,P<0.05];HBV-ACLF组PBMCs NLRP3、TXNIP和caspase-1 mRNA水平分别为(0.5±0.1)、(0.7±0.1)和(1.2±0.1),显著低于CHB组[分别为(0.8±0.2)、(1.0±0.1)和(1.6±0.2),P<0.05];15例死亡患者外周血M1型巨噬细胞比率为(4.1±0.4)%,显著高于42例生存组[(3.3±0.3)%,P<0.05],而M2型巨噬细胞比率、PBMCs NLRP3和TXNIP mRNA水平分别为(1.9±0.2)%、(0.2±0.1)和(0.4±0.1),显著低于生存组[分别为(2.7±0.3)%、(0.6±0.1)和(0.8±0.1),P<0.05].结论HBV-ACLF患者外周血巨噬细胞向促炎方向极化,而TXNIP和NLRP3 mRNA水平下调可能与免疫功能被抑制有关.

茱萸丸抑制氧化三甲胺介导的ROS/TXNIP/NLRP3信号通路诱导血管内皮细胞焦亡

目的研究茱萸丸对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响及其相关机制。方法采用高脂饲料喂养雄性低密度脂蛋白受体敲除(low density lipoprotein receptor knockout,LDLR−/−)小鼠诱导AS模型,造模周期为12周。造模成功的50只LDLR−/−小鼠随机分成模型组及茱萸丸低、中、高剂量(130.54、261.08、552.16 mg/kg)组和阿托伐他汀(10.40 mg/kg)组,每组10只,C57BL/6J小鼠10只作为对照组。给药12周后,采用生化法检测小鼠血清三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)、Masson、油红O染色观察小鼠主动脉的病理学改变;ELISA检测血清中白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、IL-1β、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;超高液相色谱串联质谱法(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS)检测小鼠血浆中三甲胺(trimethylamine,TMA)、氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)含量;16S rRNA技术检测小鼠粪便中肠道菌群物种组成差异;荧光探针法检测主动脉ROS的荧光强度;免疫荧光及Western blotting检测小鼠主动脉硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NOD like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)蛋白表达;qRT-PCR检测主动脉硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)、TXNIP、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)mRNA表达。结果与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高(P<0.01),HDL-C水平显著下降(P<0.01),主动脉内膜大面积增厚,形成明显的泡沫细胞,脉壁胶原蛋白沉积增多,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),Chao1、Ace以及observed species指数降低(P<0.01),拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度显著下降(P<0.01),主动脉中ROS含量增加(P<0.01),TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平升高(P<0.01),TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,茱萸丸组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低(P<0.05、0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.01),主动脉斑块、血管壁泡沫细胞及胶原蛋白沉积均呈现不同程度的改善,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著降低(P<0.05、0.01),SOD活性显著升高(P<0.01),Chao1、Ace以及observed species指数均明显升高(P<0.01),拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度升高(P<0.05、0.01),厚壁菌门菌群丰度降低(P<0.05),主动脉中ROS含量减少(P<0.05、0.01),TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平显著降低(P<0.01),TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论茱萸丸能够显著抑制LDLR−/−AS小鼠主动脉病理改变、调节肠道菌群中有益菌和有害菌的相对丰度,减少TMAO生成,抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,改善炎症反应,减轻内皮细胞损伤,从而发挥抗AS的作用。

茱萸丸及其拆方对动脉粥样硬化模型小鼠主动脉斑块及主动脉组织NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路的影响

目的探讨茱萸丸治疗动脉粥样硬化的可能作用机制及配伍意义。方法13只正常C57BL/6J小鼠作为空白组,40只同品系的ApoE-/-小鼠随机分为模型组、黄连组、吴茱萸组、茱萸丸组各10只。除空白组外,其余各组均采用高脂饲料连续12周喂养制备动脉粥样硬化模型。造模后黄连组给予黄连药液143.34 mg/(kg·d)灌胃,吴茱萸组给予吴茱萸药液301.78 mg/(kg·d)灌胃,茱萸丸组给予茱萸丸药液261.07 mg/(kg·d)灌胃,空白组及模型组每日给予0.3 ml生理盐水灌胃,各组小鼠均灌胃12周。各组小鼠采用生化法检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖水平;采用ELISA检测血清中空腹胰岛素,并计算胰岛素抵抗指数;采用HE染色观察小鼠主动脉组织、肝脏、附睾脂肪的病理学形态变化,油红O染色观察小鼠主动脉组织脂质沉积情况,并计算主动脉斑块面积占比、主动脉红染脂质面积占比、非酒精性脂肪肝活动性积分(NAS)评分、附睾脂肪横截面面积;采用ELISA检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)水平;采用Western blot检测主动脉组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)蛋白表达;采用免疫荧光法检测含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达;采用实时荧光PCR法检测小鼠主动脉组织NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达量。结果与空白组比较,模型组血清TC、TG、LDL-C升高,空腹胰岛素降低,空腹血糖、胰岛素抵抗指数升高(P<0.01);主动脉斑块增大,肝脏脂质沉积增多,附睾脂肪细胞体积变大,主动脉斑块面积占比及红染脂质面积占比增加,肝脏NAS评分升高,附睾脂肪横截面面积变大,血清IL-1β、IL-18升高,主动脉组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,黄连组、吴茱萸组、茱萸丸组血清TC、TG、LDL-C降低,空腹胰岛素升高,空腹血糖、胰岛素抵抗指数降低(P<0.01);主动脉斑块明显缩小,肝脏脂质沉积减轻,附睾脂肪细胞体积缩小,主动脉斑块面积占比及红染脂质面积占比减小,肝脏NAS评分降低,附睾脂肪横截面面积减小,血清IL-1β、IL-18降低,主动脉组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.01),且茱萸丸组各指标改善优于黄连组、吴茱萸组(P<0.01)。结论茱萸丸对动脉粥样硬化斑块有较好的治疗作用,且黄连与吴茱萸配伍具有协同作用,其作用机制可能与调节主动脉NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路,从而减轻血管炎症反应有关。

白杨素通过抑制IRE1α/TXNIP/NLRP3通路减轻糖尿病大鼠的肾组织损伤

目的 探讨白杨素(CHR)通过抑制肌醇需求酶1α(IRE1α)/硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路减轻糖尿病大鼠肾组织损伤的机制。方法 将健康SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、CHR组、CHR+溶剂对照组、CHR+IRE1α组,每组8只。除对照组外,其余各组高脂高糖饲料饲养联合30 mg/kg链脲佐菌素(STZ)注射构建糖尿病模型,CHR组、CHR+溶剂对照组、CHR+IRE1α组采用100 mg·kg^(-1)·d^(-1) CHR连续灌胃3周,CHR+溶剂对照组、CHR+IRE1α组同时分别腹腔注射1 m L磷酸缓冲液、1×10^(9) PFU/m L Ad-IRE1α病毒悬液;对照组、模型组腹腔注射等量生理盐水。观察大鼠一般情况并称重;检测空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐(s Cr)、血尿素氮(BUN)水平;苏木精-伊红染色观察肾组织形态;蛋白免疫印迹法检测肾组织中IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1、白介素-1β(IL-1β)蛋白表达情况。结果 模型组大鼠出现多饮、多尿、多食、消瘦情况,精神状态欠佳,肾小球肥大、基质增厚,肾小球毛细血管间有结节状粉红色玻璃样物,肾小管内皮气球样变,部分细胞出现核固缩现象;CHR组、CHR+溶剂对照组较模型组身体和精神状态有所改善,肾小球、肾小管病理现象缓解;CHR+IRE1α组相较CHR组肾小球肥大、基质变厚加重,肾小管出现病变。与对照组相比,模型组血液中FPG、TG、TC、LDL-C、s Cr、BUN水平及肾脏组织中IRE1α、TXNIP、caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白水平升高(P<0.05),体质量减轻(P<0.05),HDL-C水平降低(P<0.05);与模型组相比,CHR组血液中FPG、TG、TC、LDL-C、s Cr、BUN水平及肾组织中IRE1α、TXNIP、caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白水平降低(P<0.05),体质量增加(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05);与CHR组相比,CHR+IRE1α组血液中FPG、TG、TC、LDL-C、s Cr、BUN水平及肾组织中IRE1α、TXNIP、caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白水平升高(P<0.05),体质量减轻(P<0.05),HDL-C水平降低(P<0.05)。结论 CHR可能通过抑制IRE1α/TXNIP/NLRP3通路减轻糖尿病大鼠的肾组织损伤,发挥对肾组织的保护作用。

金银花提取液通过调控NLRP3/ASC/caspase-1信号通路对溃疡性结肠炎大鼠肠道黏膜的影响

目的:探讨金银花提取液通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)/含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)信号通路对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道黏膜的影响。方法:随机选取10只大鼠为对照组,另取55只大鼠在肛门约8 cm结肠处注射含5%TNBS和50%乙醇的混合液(4 ml/kg)构建大鼠UC模型,将造模成功的50只大鼠分为UC组、金银花低、中、高剂量组和金银花+NSS(NLRP3激活剂)组,每组10只。金银花低、中、高剂量组分别灌胃给予40、80、120 mg/(kg·d)金银花提取液,金银花+NSS组灌胃给予120 mg/(kg·d)金银花提取液和4 mg/(kg·d)NSS,对照组、UC组灌胃给予等体积生理盐水。观察大鼠一般情况,末次给药24 h后腹主动脉取血,处死大鼠,收集结肠组织,量取结肠长度。试剂盒检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、TNF-α、IL-6水平;HE染色检测大鼠结肠黏膜病理学变化;RT-PCR和Western blot检测大鼠肠道黏膜NLRP3/ASC/caspase-1通路mRNA和蛋白表达。结果:与对照组比较,UC组大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤程度、血清LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及结肠黏膜组织NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达显著升高,结肠长度、血清SOD水平显著降低(P<0.05);与UC组比较,金银花低、中、高剂量组DAI、结肠黏膜损伤程度、LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达显著降低,结肠长度、血清SOD水平显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);与金银花高剂量组比较,金银花+NSS组DAI、结肠黏膜损伤程度、LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达显著升高,结肠长度、SOD水平显著降低(P<0.05)。结论:金银花提取液可能通过抑制NLRP3/ASC/caspase-1信号通路激活缓解UC大鼠肠道黏膜损伤。

NOX2、NLRP3在肝纤维化患者血清中的表达及其生物学意义

目的:探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)在肝纤维化患者血清中的表达及生物学意义。方法:选取2017年9月至2020年9月我院收治的80例肝纤维化患者为研究对象,同期选取80例我院收治的酒精性肝炎患者为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测受试者血清中NOX2、NLRP3的表达,并比较肝纤维化患者与对照组患者血清中NOX2、NLRP3的表达差异。体外培养肝星状细胞(HSC)系LX-2,用6 ng/ml转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激24 h,活化并分为Control组、NC组、NOX2 siRNA组;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中NOX2、NLRP3的mRNA表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞ROS水平;蛋白免疫印迹(WB)检测增殖蛋白CyclinD1、CDK4,凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9及NOX2、NLRP3、IL-18、IL-1β的表达。结果:与对照组患者比较,肝纤维化组患者血清NOX2、NLRP3的表达显著升高(P<0.05);与Control组比较,NOX2 siRNA组细胞NOX2、NLRP3的mRNA表达、细胞内ROS含量,增殖蛋白CyclinD1、CDK4及蛋白NOX2、NLRP3、IL-18、IL-1β的表达均显著降低,细胞增殖抑制率、凋亡率、凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达显著升高(P<0.05)。结论:NOX2、NLRP3可能参与肝纤维化的发生,其可能是治疗肝纤维化的靶点。

基于TXNIP/NLRP3信号通路研究根皮素对糖尿病肾病小鼠肾脏自噬和纤维化的影响

目的:基于硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(TXNIP/NLRP3)信号通路研究根皮素对糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏自噬和纤维化的影响及分子机制。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素30 mg/kg建立DN小鼠模型。随机将小鼠分为正常对照组、模型对照组、吡格列酮10 mg/kg组、根皮素200、400 mg/kg组,每组10只。小鼠连续灌胃根皮素10 w后,测定各组小鼠肾脏肥大指数,采用HE染色、PAS染色和Masson染色观察小鼠肾脏病理形态学变化和肾纤维化改变程度,检测小鼠血糖、体质量、饮水量、尿量、尿β2微球蛋白(β2-MG)含量,取血清测定尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中白细胞介素-1(IL-1)、IL-18、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量;采用免疫组化法测定肾组织盘状结构域受体1(DDR1)、TXNIP、NLRP3、IL-1β、自噬效应蛋白Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达,并用Western blot法检测肾脏TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠血糖、血清BUN、Scr、IL-1、IL-18、TGF-β1、尿β2-MG含量显著升高,肾脏肥大指数显著增加(P<0.01);肾脏DDR1、TXNIP、NLRP3、IL-1β、TGF-β1、α-SMA蛋白表达显著上调(P<0.01),Beclin-1显著上调、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,根皮素200、400 mg/kg组和吡格列酮10 mg/kg组小鼠血糖、血清BUN、Scr、IL-1、IL-18、TGF-β1、尿β2-MG含量显著降低,肾脏肥大指数显著降低(P<0.01);肾脏DDR1、TXNIP、NLRP3、IL-1β、TGF-β1、α-SMA蛋白表达显著下调(P<0.01),Beclin-1蛋白表达上调、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P<0.01),肾脏病理形态和纤维化明显改善。结论:根皮素能提高肾脏自噬水平并抑制肾纤维化,其机制可能与调控TXNIP-NLRP3信号通路减轻炎症反应有关。

氨甲环酸对脑出血大鼠NOX2/ROS/NLRP3通路及小胶质细胞活化的影响

目的分析氨甲环酸对脑出血大鼠NADH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)通路及小胶质细胞活化的影响。方法采用随机数字表法将大鼠分为假手术组(15只)、模型组(13只)、氨甲环酸低剂量组(25 mg/mL,13只)、氨甲环酸中剂量组(50 mg/mL,14只)、氨甲环酸高剂量组(100 mg/mL,13只)。无菌胶原酶IV灌注法制备大鼠脑出血模型,造模成功后给药(6、24、48 h)后利用Garcia评分对大鼠神经功能进行评分;给药48 h后测定大鼠脑组织含水量及血肿体积。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的表达水平;免疫组织化学法检测大鼠小胶质细胞数目;蛋白印迹(WB)法检测大鼠脑组织蛋白NOX2、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶(caspase-1)、IL-1β表达;活性氧检测试剂盒检测大鼠脑组织ROS含量。结果造模成功后,与假手术组(17.51±0.01)分比较,模型组(8.24±0.48)分、氨甲环酸(低、中、高剂量)组(8.27±0.46、8.15±0.54、8.19±0.52)分大鼠神经功能评分显著降低,差异有统计学意义(F=1290.268,P<0.05)。给药后,同一时间(6、24、48 h),与假手术组比较,模型组、氨甲环酸(低、中、高剂量)组大鼠神经功能评分显著降低,差异均有统计学意义(F=869.679、927.512、1105.559,P均<0.05);与模型组比较,氨甲环酸(低、中、高剂量)组大鼠神经功能评分显著升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);与假手术组比较,模型组脑组织含水量、血肿体积、小胶质细胞数目、血清蛋白TNF-α、IL-1β表达水平、脑组织ROS含量、蛋白NOX2、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著增加(P<0.05);与模型组比较,氨甲环酸(低、中、高剂量)组大鼠脑组织含水量、血肿体积、小胶质细胞数目、血清蛋白TNF-α、IL-1β表达水平、脑组织ROS含量、蛋白NOX2、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论氨甲环酸可能通过影响NOX2/ROS/NLRP3通路及小胶质细胞的活化在脑出血的治疗中发挥作用。

毛蕊花糖苷调节IRE1α/TXNIP/NLRP3信号通路对重症急性胰腺炎模型大鼠肺损伤的影响

目的探讨毛蕊花糖苷(acteoside,ACT)调节肌醇需求酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)通路对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型大鼠肺损伤的影响。方法大鼠随机分为SAP组、正常组、毛蕊花糖苷低剂量(ACT-L)组和高剂量(ACT-H)组、乌司他丁组、ACT-H+空载体组、ACT-H+IRE1α过表达腺病毒载体(Ad-IRE1α)组,每组12只。除正常组外,其他组大鼠均通过向胆胰管注入5%牛磺胆酸钠溶液的方式构建SAP模型,建模成功后给药2天,一天一次。检测血清脂肪酶、淀粉酶水平及肺湿重/干重比值的变化;HE染色检测胰腺、肺组织病理变化并评估病理评分;试剂盒检测肺组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;ELISA检测肺组织中白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平;蛋白质印迹检测肺组织中IRE1α、TXNIP、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)蛋白水平。结果与正常组相比,SAP组大鼠胰腺水肿,有大量细胞坏死以及炎症细胞浸润,肺组织炎症细胞浸润明显,肺泡充血、肺泡壁水肿严重,胰腺、肺组织病理评分、血清中脂肪酶、淀粉酶水平、肺湿重/干重比值、肺组织中MDA、ROS水平、IL-18、IL-1β水平及IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1蛋白升高,肺组织中SOD水平降低(P<0.05);与SAP组相比,ACT-L组、ACT-H组、乌司他丁组大鼠胰腺及肺组织损伤有所改善,胰腺、肺组织病理评分、血清中脂肪酶、淀粉酶水平、肺湿重/干重比值、肺组织中MDA、ROS水平、IL-18、IL-1β水平及IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1蛋白降低,肺组织中SOD水平升高(P<0.05);与ACT-H+空载体组相比,ACT-H+Ad-IRE1α组大鼠胰腺及肺组织损伤加剧,胰腺、肺组织病理评分、血清中脂肪酶、淀粉酶水平、肺湿重/干重比值、肺组织中MDA、ROS水平、IL-18、IL-1β水平及IRE1α、TXNIP、NLRP3、caspase-1蛋白升高,肺组织中SOD水平降低(P<0.05)。结论ACT改善SAP大鼠肺损伤的机制可能与抑制IRE1α/TXNIP/NLRP3通路活化有关。

TXNIP/NLRP3通路在乳腺癌发生发展中的作用机制研究

目的探讨硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)通路在乳腺癌发生发展过程中的调控机制。方法选取2019年9月至2020年6月期间于笔者所在医院行手术切除的15例乳腺癌组织及其癌旁组织标本,通过免疫组化染色法检测其TXNIP及NLRP3蛋白的表达水平。同时选取3种乳腺癌细胞系(MDA-MB231、MCF-7和SKBR3)和正常乳腺上皮细胞系(HMEC),采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各细胞系中TXNIP及NLRP3蛋白的相对表达水平。另取MDA-MB231乳腺癌细胞系将其分为6组,即空白对照组(正常培养不做任何处理)、TXNIP过表达组(Ad-TXNIP组,转染携带TXNIP过表达序列的腺病毒载体)、Ad-TXNIP阴性对照组(Ad-eGFP1组,转染不含TXNIP过表达序列的腺病毒空载体)、NLRP3过表达组(Ad-NLRP3组,转染含NLRP3过表达序列的腺病毒载体)、TXNIP和NLRP3过表达共转染组(Ad-TXNIP+Ad-NLRP3组,共转染携带TXNIP和NLRP3过表达序列的腺病毒载体)、TXNIP过表达和Ad-NLRP3阴性对照(Ad-eGFP2)共转染组(Ad-TXNIP+Ad-eGFP2组,共转染携带TXNIP过表达序列和不含NLRP3过表达序列的腺病毒空载体),各组细胞转染并培养24 h后,采用CCK-8法检测MDA-MB231细胞的增殖活性;采用Transwell小室法检测MDA-MB231细胞的迁移、侵袭能力;开展裸鼠成瘤实验并检测MDA-MB231细胞在动物体内的成瘤能力;采用Western blot法检测MDA-MB231细胞中TXNIP、NLRP3、增殖标志蛋白Ki-67、凋亡蛋白caspase-1、血管内皮生长因子(VEGF)、NLRP3下游蛋白白细胞介素(IL)-1β、IL-18以及caspase-1前体蛋白(pro-caspase-1)表达情况。结果与癌旁组织相比,乳腺癌组织中TXNIP蛋白相对表达水平降低(P<0.05),NLRP3蛋白相对表达水平升高(P<0.05)。与HMEC细胞系相比,MDA-MB231、MCF-7和SKBR3乳腺癌细胞系中TXNIP蛋白相对表达水平降低(P<0.05),NLRP3蛋白相对表达水平升高(P<0.05)。与空白对照组相比,Ad-TXNIP组及Ad-NLRP3组MDA-MB231细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、IL-18、pro-caspase-1和caspase-1蛋白相对表达量升高(P<0.05),Ki-67和VEGF蛋白相对表达量,MDA-MB231细胞增殖活性、侵袭能力、迁移能力和动物体内瘤体质量均降低(P<0.05)。与Ad-TXNIP组及Ad-NLRP3组相比,Ad-TXNIP+Ad-NLRP3组MDA-MB231细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、IL-18、pro-caspase-1和caspase-1蛋白相对表达量进一步升高(P<0.05),Ki-67和VEGF蛋白相对表达量,MDA-MB231细胞增殖活性、侵袭能力、迁移能力和动物体内瘤体质量进一步降低(P<0.05)。结论在乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中,TXNIP蛋白呈低表达,NLRP3蛋白呈高表达;二者可相互作用,促进细胞焦亡,进而抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭与迁移。

加味升降散对糖尿病肾病大鼠TXNIP/NLRP3通路及足细胞焦亡的影响

目的:探讨加味升降散对糖尿病肾病(Diabetic kidney disease, DKD)大鼠的干预作用及对硫氧还蛋白结合蛋白(Thioredoxin interacting protein, TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide oligomerization domain-(NOD-) like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)通路及细胞焦亡的影响。方法:随机将造模成功SD大鼠分为模型对照组、阳性药厄贝沙坦0.014 g/kg组、加味升降散4.37、8.73、17.46 g/kg组,另设正常对照组,各组灌胃相应剂量药物或蒸馏水,连续4 w。给药结束后检测大鼠24 h尿蛋白(UTP)含量,血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18含量;采用苏木素-伊红(HE)染色和透射电镜(TEM)观察大鼠肾脏病理学变化;TUNEL染色检测肾组织细胞DNA损伤情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和免疫组化(IHC)分别检测大鼠肾组织中Podocalyxin、Nephrin、Podocin、Synaptopodin、Gasdermin D(Gsdmd)mRNA及蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TXNIP/NLRP3信号通路关键蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠肾脏足细胞足突广泛融合,肾组织细胞DNA损伤明显增加,UTP含量显著升高,血清IL-1β、IL-18含量显著升高,肾组织中Podocalyxin、Nephrin、Podocin、Synaptopodin mRNA和蛋白表达明显下调,Gsdmd mRNA和蛋白表达明显上调、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、TXNIP和NLRP3蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,加味升降散4.37、8.73、17.46 g/kg组及厄贝沙坦0.014 g/kg组大鼠肾脏足细胞足突融合均有不同程度改善,肾组织细胞DNA损伤均有不同程度减少,UTP含量显著降低,血清中IL-1β、IL-18含量显著降低,肾组织中Podocalyxin、Nephrin、Podocin、Synaptopodin mRNA表达显著上调,Podocalyxin、Synaptopodin蛋白表达显著上调,肾组织中Gsdmd mRNA和蛋白表达显著下调,Caspase-1、TXNIP及NLRP3蛋白表达显著下调(P<0.01);加味升降散8.73、17.46 g/kg组及厄贝沙坦0.014 g/kg组肾组织中Nephrin、Podocin蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:加味升降散可通过下调TXNIP/NLRP3信号通路,减少肾组织足细胞焦亡,减轻DKD大鼠肾损伤。

藏红花素对膝关节骨性关节炎大鼠的治疗作用及TXNIP/NLRP3信号通路的影响

目的探究藏红花素对膝关节骨性关节炎(KOA)大鼠的治疗作用及对硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3信号通路的影响。方法构建KOA大鼠模型,48只大鼠建模成功随机分为模型组,藏红花素低(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组,硫酸氨基葡萄糖(170 mg/kg)组,每组12只。另取12只作为假手术组(实验过程中仅打开关节腔不做其他处理)。各组给予对应药物灌胃28 d,1次/d。酶联免疫吸附试验检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠软骨组织病理学变化;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测大鼠软骨组织中MDA、SOD水平;荧光定量-聚合酶链反应(PCR)法检测软骨组织中TXNIP、NLRP3信使RNA(mRNA)水平;Western印迹检测软骨组织中TXNIP、NLRP3蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组软骨组织表面不光滑且滑膜增生,软骨细胞紊乱且减少,同时有大量炎性细胞浸润,血清中TNF-α、IL-1β水平,软骨组织中MDA水平、TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平显著升高,软骨组织SOD水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,藏红花素低、高剂量组软骨组织病理变化依次改善,血清中TNF-α、IL-1β水平,软骨组织中MDA水平、TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平显著降低,软骨组织SOD水平显著升高(P<0.05);硫酸氨基葡萄糖组和藏红花素高剂量组软骨组织病理变化及各项指标比较均无显著差异(P>0.05)。结论藏红花素可减轻KOA大鼠软骨损伤,改善炎症和氧化应激反应,其机制可能与抑制TXNIP/NLRP3信号通路相关。