富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路及视网膜血管通透性的影响

目的 探究富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管通透性及硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路的影响。方法 2020年6—9月,SD大鼠采用随机数字表法选取15只为空白组,其余大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)和高脂饲料喂养构建DR模型,造模成功的大鼠采用随机数字表法分为模型组、富氢水低、高剂量组(5、10 mL/kg),每组15只。连续给药28 d后,记录大鼠体质量,检测空腹血糖(FBG)水平;眼底照相和荧光素血管造影(FFA)观察大鼠右眼新生血管和荧光素渗漏现象;光学相干断层扫描(OCT)检测视网膜厚度;伊文思蓝-白蛋白复合物渗漏分析视网膜血管通透性;HE染色观察视网膜病理变化;免疫荧光染色观察新生血管形成情况;TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡;酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测量视网膜匀浆中血管生成素-1(Ang-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;WB法检测视网膜TXNIP/NLRP3通路和凋亡相关蛋白的表达。结果 与空白组相比,模型组大鼠FBG[(26.49±2.18)mmol/L比(5.76±1.09)mmol/L]、血-视网膜屏障(BRB)通透性[(32.51±2.05)μg/g比(11.24±1.76)μg/g]、视网膜细胞凋亡[(23.31±2.14)%比(0.07±0.01)%]、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、TXNIP[(0.85±0.09)比(0.40±0.05)]、NLRP3[(0.93±0.10)比(0.48±0.07)]、IL-1β[(0.74±0.05)比(0.41±0.04)]、胱天蛋白酶-1(caspase-1)[(0.78±0.07)比(0.24±0.04)]表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平显著增加(P<0.05),体质量、视网膜厚度[(148.31±12.76)μm比(223.57±17.23)μm]显著降低(P<0.05),视网膜有较多新生血管和血管曲折,血管渗漏严重,视网膜细胞明显水肿,有大量炎性渗出,神经节细胞层(GCL)细胞数量减少;与模型组相比,富氢水低、高剂量组大鼠FBG[(20.85±3.45)mmol/L、(14.27±2.42)mmol/L比(26.49±2.18)mmol/L]、BRB通透性[(24.67±1.85)μg/g、(17.48±1.63)μg/g比(32.51±2.05)μg/g]、视网膜细胞凋亡[(14.65±1.36)%、(9.85±1.22)%比(23.31±2.14)%]、Bax、Bcl-2、TXNIP[(0.64±0.09)、(0.52±0.08)比(0.85±0.09)]、NLRP3[(0.72±0.09)、(0.61±0.08)比(0.93±0.10)]、IL-1β[(0.62±0.06)、(0.53±0.05)比(0.74±0.05)]、caspase-1[(0.57±0.06)、(0.41±0.05)比(0.78±0.07)]表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.05),体质量、视网膜厚度[(173.62±14.46)μm、(196.54±15.75)μm比(148.31±12.76)μm]明显增加(P<0.05),视网膜水肿情况减轻,GCL细胞数量明显增加,损伤得到改善。结论 富氢水可抑制新生血管形成,降低DR大鼠视网膜血管通透性,减轻视网膜神经元损伤;其作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3通路的激活有关。

芍药苷预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤氧化应激的保护作用及对Nrf-2/TXNIP/NLRP-3信号通路的影响

目的探讨芍药苷(PF)对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)大鼠氧化应激的影响及其可能作用机制。方法选取65只SD大鼠采用结扎冠状动脉(冠脉)左前降支建立MIRI模型,造模成功后随机分为模型组、PF低、高剂量(60 mg/kg、120 mg/kg)组和西药(1 mg/kg盐酸地尔硫卓)组各15只,另设对照组。检测大鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;HE染色观察心肌组织病理学变化;RT-PCR和Western blot检测心肌组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体蛋白3(NLRP-3)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,各实验组AST、CK、CK-MB、LDH、MDA水平、TXNIP、NLRP-3 mRNA和蛋白水平降低,GSH-Px、SOD、CAT水平、Nrf2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与PF低剂量组比较,PF高剂量组以上指标效果更佳(P<0.05)。结论PF可减轻MIRI大鼠氧化应激,改善心肌损伤,可能与Nrf2/TXNIP/NLRP-3信号通路有关。

电针对帕金森病小鼠肠道硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体3信号通路的影响

目的:观察电针“风府”“太冲”“足三里”对帕金森病(PD)小鼠α-突触核蛋白(α-syn)、咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1(Claudin-1)及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体3(NLRP3)的影响,探讨电针对PD肠道屏障功能及炎性反应的影响及作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组,每组12只。采用鱼藤酮灌胃复制PD小鼠模型。电针组予“风府”“太冲”“足三里”电针治疗,30 min/次,1次/d,连续治疗14 d。观察各组小鼠行为学评分,旷场实验检测小鼠自主运动总路程,免疫组织化学法检测小鼠中脑黑质区和结肠组织中α-syn的阳性表达,阿尔新蓝染色法观察结肠形态及杯状细胞分布情况,实时荧光定量PCR法检测结肠组织中Occludin、Claudin-1、TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠行为学评分升高(P<0.01);旷场实验自主运动总路程减少(P<0.01);中脑黑质区和结肠组织α-syn阳性表达升高(P<0.01);结肠组织中杯状细胞、隐窝减少,肌层变薄;结肠组织中Occludin、Claudin-1 mRNA表达水平降低(P<0.01),TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠行为学评分降低(P<0.01);旷场实验自主运动总路程增加(P<0.01);中脑黑质区和结肠组织α-syn阳性表达降低(P<0.01);结肠组织中表面绒毛较完整,杯状细胞、隐窝增加,肌层增厚;结肠组织中Occludin、Claudin-1 mRNA表达水平升高(P<0.05),TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论:电针“风府”“太冲”“足三里”可清除PD小鼠中脑黑质区和结肠组织中异常聚集的α-syn,改善肠道屏障受损,调节TXNIP/NLRP3信号通路,延缓PD的发生发展。

TXNIP/NLRP3信号通路在PCOS-IR大鼠卵巢慢性炎症中的作用机制研究

目的:研究硫氧还蛋白相互作用蛋白∕NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(TXNIP∕NLRP3)信号通路对多囊卵巢综合征(PCOS)-胰岛素抵抗(IR)大鼠卵巢慢性炎症的影响。方法:颈背部皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)溶液0.2 ml(6 mg/100 g)建立PCOS-IR大鼠模型,建立成功的模型大鼠随机分为模型组、siRNA NC组、TXNIP siRNA组、RES干预组,每组8只,正常组8只。siRNA NC组、TXNIP siRNA组分别颈背部皮下注射5 nmol siRNA NC、TXNIP siRNA,5 d/次;RES干预组颈背部皮下注射50 mg/kg RES,正常组和模型组颈背部皮下注射等体积生理盐水,1次/d,10 d。放射免疫试剂盒检测血清中睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平,血糖仪检测血清中空腹血糖(FBG)水平,ELISA检测血清中空腹胰岛素(FINS)、IL-6、IL-1β、TNF-α水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI)。HE染色观察卵巢卵泡发育情况;qRT-PCR和Western blot检测卵巢组织中TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)、pro-caspase-1蛋白水平。结果:模型组和siRNA NC组卵泡腔变大、出现囊肿现象,颗粒细胞层减少;TXNIP siRNA组和RES干预组出现黄体,卵泡腔变小,颗粒层增厚。与正常组相比,模型组、siRNA NC组T、LH、E_(2)、IGF-1、FBG、FINS、HOMA-IR,IL-6、IL-1β、TNF-α水平,卵巢组织中TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平,pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平升高,FSH水平降低(P<0.05);分别与模型组、siRNA NC组相比,TXNIP siRNA组、RES干预组T、LH、E_(2)、IGF-1、FBG、FINS、HOMA-IR,IL-6、IL-1β、TNF-α水平,卵巢组织中TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平,pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平降低,FSH水平升高(P<0.05)。结论:抑制TXNIP/NLRP3信号通路可实现对PCOS-IR大鼠卵巢慢性炎症的缓解。

电针调控TXNIP/NLRP3通路介导的焦亡途径对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用研究

目的:探究电针对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的保护作用及机制。方法:将新生SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、HIBD组、电针组、电针+TXNIP NC组和电针+TXNIP OE组,除Sham组外,其余各组采用改良RICE法建立大鼠HIBD模型;电针组、电针+TXNIP NC组和电针+TXNIP OE组大鼠进行电针治疗,电针+TXNIP NC组、电针+TXNIP OE组大鼠分别经脑室注射TXNIP NC CRISPR质粒、TXNIP OE CRISPR质粒溶液,电针组注射无菌生理盐水;治疗周期完成后,采用莫里斯水迷宫测试大鼠学习记忆能力;红四氮唑(TTC)法检测脑梗死体积,尼氏(Nissl)和苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经细胞形态;免疫荧光法检测海马区细胞焦亡;蛋白免疫印迹法检测大鼠海马组织含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cleaved-caspase-1)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-caspase-1)、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)表达;酶联免疫吸附法检测大鼠海马组织白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平。结果:Sham组无脑梗死,海马区神经细胞排列规则致密;与Sham组比较,HIBD组海马区神经细胞排列错乱疏松,脑梗死体积、逃避潜伏期、海马区cleaved-caspase-1+TUNEL+细胞、海马组织cleaved-caspase-1/pro-caspase-1、ASC、TXNIP、NLRP3蛋白及IL-18、IL-1β水平明显增加,穿越平台的次数明显减少(P<0.05);与HIBD组比较,电针组、电针+TXNIP NC组海马区细胞损伤明显改善,脑梗死体积、逃避潜伏期、海马区cleaved-caspase-1+TUNEL+细胞、海马组织cleaved-caspase-1/pro-caspase-1、ASC、TXNIP、NLRP3蛋白及IL-18、IL-1β水平减少,穿越平台的次数增加(P<0.05);与电针组、电针+TXNIP NC组比较,电针+TXNIP OE组海马区细胞损伤加重,脑梗死体积、逃避潜伏期、海马区cleaved-caspase-1+TUNEL+细胞、海马组织cleaved-caspase-1/pro-caspase-1、ASC、TXNIP、NLRP3蛋白及IL-18、IL-1β水平增加,穿越平台的次数减少(P<0.05)。结论:在大鼠HIBD模型中,电针可能通过抑制TXNIP/NLRP3通路介导的细胞焦亡,减轻神经细胞损伤,改善其学习记忆能力。

2-十一烷酮通过调控重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白信号改善小鼠哮喘的研究

目的研究2-十一烷酮对实验性哮喘小鼠重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白(Nrf2/TXNIP/TrX)信号的影响。方法将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、对照组、实验组和联合组,每组6只。正常组未行造模,其余4组给予抗原混合液200μL致敏+1%OVA激发建模。在此基础上,对照组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮;实验组给予30 mg·kg^(-1)ML385;联合组给予400 mg·kg^(-1)2-十一烷酮+30 mg·kg^(-1)ML385;正常组和模型组均给予等量0.9%NaCl。用苏木精-伊红染色法观察肺组织炎性细胞的浸润情况,用酶联免疫吸附试验法检测血清免疫球蛋白E(IgE)和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)水平,用蛋白质印迹法检测Nrf2、TXNIP、TrX和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的表达水平。结果实验组、对照组、联合组、模型组和正常组的炎症评分分别为(4.33±0.65)、(1.00±0.41)、(3.00±1.21)、(3.33±0.32)和(0.67±0.31)分,血清IgE分别为(24.17±4.59)、(87.51±9.91)、(49.43±8.49)、(129.38±13.75)和(78.00±11.35)ng·mL^(-1),BALF中IL-1β分别为(44.17±7.11)、(154.45±17.75)、(87.04±15.72)、(216.29±19.64)和(134.87±23.83)pg·mL^(-1),Nrf2蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.46±0.02、0.71±0.03、0.30±0.02和0.48±0.02,TXNIP蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.16±0.57、1.55±0.21、5.25±0.18和3.59±0.24,TrX蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.38±0.02、0.79±0.01、0.24±0.03和0.42±0.02,NLRP3蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、4.33±0.42、2.26±0.31、5.21±0.44和3.67±0.29。实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论2-十一烷酮对OVA诱导的小鼠哮喘具有明显的治疗作用,其机制可能与调节Nrf2/TXNIP/TrX信号,抑制NLRP3炎症小体活化有关。

木犀草素抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征的改善作用

目的:探讨木犀草素调控活性氧(ROS)/硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3(NLRP3)信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的改善作用。方法:60只SD小鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素(20 mg·kg^(-1))组、邻苯三酚(PG)(75 mg·kg^(-1))组和木犀草素(20 mg·kg^(-1))+PG(75 mg·kg^(-1))组,每组12只。除对照组外,其他组小鼠采用气管滴注脂多糖(LPS)溶液的方法建立ARDS模型,对照组小鼠气管滴注等量生理盐水。称量各组小鼠右肺湿质量和干质量,并计算湿质量/干质量(W/D)比值,检测各组小鼠动脉血氧分压(PaO_(2)),HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,检测各组小鼠吸气阻力(Ri)、每分钟通气量(MV)和呼气峰流速(PEF),检测各组小鼠肺组织中ROS、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)水平及血清白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blotting法检测各组小鼠肺组织中TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠肺泡壁变厚,肺泡塌陷变形,肺间质水肿伴有大量炎性细胞浸润,肺组织有严重病理损伤,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平及TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平升高(P<0.05);MV、PEF、PaO_(2)和肺组织中GSH-Px及CAT水平降低(P<0.05)。与模型组比较,木犀草素组小鼠肺组织病理损伤均有所改善,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平和TXNIP、caspase-1、caspase-4及NLRP3蛋白表达水平均降低(P<0.05),MV、PEF和PaO_(2)及肺组织中GSH-Px和CAT水平均升高(P<0.05);PG组小鼠肺组织病理损伤均加重,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平及TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平均升高(P<0.05),MV、PEF和PaO_(2)及肺组织中GSH-Px和CAT水平均降低(P<0.05)。结论:木犀草素可通过抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路激活,减轻肺部炎症与氧化应激,改善ARDS小鼠肺损伤,修复其肺功能。

基于TXNIP/NLRP3信号通路探讨红景天苷对肠缺血再灌注损伤大鼠的作用机制

目的:探讨红景天苷(SAL)对肠缺血再灌注损伤(IIR)大鼠硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路及肠黏膜功能的影响。方法:60只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(对照组)、模型组、低剂量组(红景天苷10 mg/kg)、中剂量组(红景天苷20 mg/kg)、高剂量组(红景天苷40 mg/kg),每组12只。建立肠缺血再灌注模型前24 h、12 h和1 h低、中、高剂量组分别给予10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg红景天苷预处理,模型组给予生理盐水处理。对照组不建立模型,且给予生理盐水处理。再灌注2 h后取材,计算小肠含水率;采用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测血清中白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素10(IL-10)水平;以苏木精—伊红染色(HE)检测各组大鼠小肠黏膜组织病理变化;检测小肠组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测小肠组织中TXNIP/NLRP3通路蛋白表达。结果:HE染色结果显示,对照组大鼠小肠组织无明显肠黏膜损伤,模型组大鼠肠黏膜损伤明显,低剂量组绒毛结构保留,中剂量组多数绒毛完整,高剂量组绒毛结构接近正常;与对照组相比,模型组大鼠小肠含水率、血清炎性因子IL-18、IL-1β水平、小肠组织中MDA水平及TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1 p20蛋白表达均显著升高,IL-10水平及SOD活性显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组小肠含水率、血清炎性因子IL-18、IL-1β水平、小肠组织中MDA水平及TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1 p20蛋白表达均显著降低,IL-10水平及SOD活性显著升高,具有一定的剂量依赖性(均P<0.05)。结论:红景天苷可能通过减轻氧化应激反应,抑制TXNIP∕NLRP3信号通路及其下游炎症反应,保护肠黏膜,减轻IIR。

Nod样受体蛋白3炎性体在2型糖尿病脑微血管内皮细胞中的变化及变化机制

目的探讨Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体在2型糖尿病脑微血管内皮中的变化及机制。方法 3月龄Wistar大鼠和自发性2型糖尿病(GK)大鼠各5只,采用免疫组织化学法观察NLRP3在脑组织中的表达;体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(CMEC)。不同糖浓度培养基模拟2型糖尿病内环境,活性氧(ROS)阻断剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为抑制剂,将细胞分为对照组(糖浓度5.6 mmol/L)、高糖1组(HG1组,培养基糖浓度10 mmol/L)、高糖2组(HG2组,培养基糖浓度20 mmol/L)、高糖3组(HG3,培养基糖浓度30 mmol/L)及高糖+NAC组(HG+NAC组,目的蛋白表达较明显组的糖浓度)。采用Western blotting法检测各组硫氧还蛋白交互蛋白(TXNIP)和NLRP3的表达,并对TXNIP和NLRP3是否存在相关性进行分析;采用ELISA法检测白介素1β(IL-1β)的含量;采用流式细胞术检测对照组、HG3组、HG+NAC组ROS的含量。结果 NLRP3在脑微血管壁聚集,与Wistar大鼠相比,GK大鼠的阳染强度,阳染血管数均有增加(P<0.05);与对照组相比,HG1组、HG2组、HG3组TXNIP、NLRP3的表达增加(P<0.01),HG3组最明显,细胞内IL-1β水平增高(P<0.01),ROS的含量增加(P<0.01);细胞内TXNIP和NLRP3的表达呈正相关性(r=0.993;P<0.05);给予ROS清除剂后,与HG3组相比,HG+NAC组细胞内ROS含量下降(P<0.01),TXNIP、NLRP3表达水平下降(P<0.01),细胞内IL-1β水平下降(P<0.01)。结论 NLRP3在2型糖尿病脑微血管内皮细胞中经ROS-TXNIP途径被激活,并且促进炎性因子IL-β的释放,在2型糖尿病脑微血管损伤中发挥重要作用。

丙泊酚对缺氧复氧的肠上皮细胞ROS/TXNIP/NLRP3通路及凋亡的影响

目的:探讨丙泊酚处理对缺氧复氧的肠上皮细胞活性氧(ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)通路及凋亡的影响。方法:对人肠上皮HIEC细胞进行培养,并进行缺氧复氧处理;通过不同浓度(25,50,100μmol·L^(-1))丙泊酚对缺氧复氧HIEC细胞进行处理,细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞活力;流式细胞术检测HIEC细胞凋亡;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测HIEC细胞ROS水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl2)、Bcl-2相关基因(Bax)、及TXNIP、NLRP3、白介素-1β(IL-1β)表达情况。结果:与对照组比较,缺氧复氧组HIEC细胞活力、蛋白Bcl2表达水平显著降低,HIEC细胞凋亡率、细胞内ROS含量、蛋白Bax、Caspase-3、TXNIP、NLRP3、IL-1β表达水平显著升高(P<0.05);与缺氧复氧组比较,不同浓度丙泊酚处理组HIEC细胞活力、蛋白Bcl2表达水平显著升高,细胞凋亡率、细胞内ROS含量、蛋白Bax、Caspase-3、TXNIP、NLRP3、IL-1β表达水平显著降低(P<0.05)。结论:丙泊酚处理能够抑制缺氧复氧HIEC细胞ROS/TXNIP/NLRP3通路及细胞的凋亡,可能对肠上皮细胞缺血再灌注损伤(I/R)有一定的保护作用。

基于TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路探讨清热止血方联合雷公藤多苷治疗过敏性紫癜性肾炎模型大鼠的作用机制

目的 探讨清热止血方联合雷公藤多苷对过敏性紫癜性肾炎模型大鼠的作用机制。方法 腹腔注射卵白蛋白与完全弗氏佐剂复制过敏性紫癜性肾炎大鼠模型。将造模成功的54只大鼠按照随机数字表法分为模型组(n=11)、清热止血方组(3.17 mg/kg,n=11)、雷公藤多苷组(4.69 mg/kg,n=11)、联合组(清热止血方3.17 mg/kg+雷公藤多苷4.69 mg/kg,n=11)、激素组(醋酸泼尼松2.34 mg/kg,n=10),另设空白组(n=9)。各给药组给予相应药物灌胃,空白组及模型组予等量的生理盐水灌胃,2次/d,连续灌胃4周。采用尿液分析仪检测大鼠尿红细胞计数及24 h尿蛋白定量;采用透射电镜观察大鼠肾小球系膜区病变情况;采用蛋白质印迹法及实时荧光PCR法检测大鼠肾脏组织硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的蛋白及mRNA表达量。结果 与模型组比较,各给药组大鼠尿红细胞计数,24 h尿蛋白定量,肾脏组织中TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达量均降低(P<0.05);各给药组大鼠肾小球系膜增生及基底膜增厚均改善,其中,联合组改善最明显;联合组、雷公藤多苷组及激素组大鼠肾脏组织中TXNIP、NLRP3 mRNA表达量降低(P<0.05),联合组、激素组大鼠肾脏组织中IL-1β mRNA表达量降低(P<0.05)。与联合组比较,其余给药组大鼠尿红细胞计数,24 h尿蛋白定量,肾脏组织中TXNIP、NLRP3蛋白及IL-1β mRNA表达量均升高(P<0.05);雷公藤多苷组大鼠肾脏组织中TXNIP、NLRP3 mRNA表达量升高(P<0.05),清热止血方组大鼠肾脏组织中NLRP3 mRNA表达量升高(P<0.05),激素组大鼠肾脏组织中TXNIP、NLRP3、IL-1β mRNA表达量均升高(P<0.05)。结论 清热止血方联合雷公藤多苷可有效降低过敏性紫癜性肾炎模型大鼠尿红细胞计数及24 h尿蛋白定量,减轻肾脏损伤,可能与抑制TXNIP/NLRP3/Caspase-1炎性通路的激活相关。

茱萸丸抑制氧化三甲胺介导的ROS/TXNIP/NLRP3信号通路诱导血管内皮细胞焦亡

目的研究茱萸丸对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响及其相关机制。方法采用高脂饲料喂养雄性低密度脂蛋白受体敲除(low density lipoprotein receptor knockout,LDLR−/−)小鼠诱导AS模型,造模周期为12周。造模成功的50只LDLR−/−小鼠随机分成模型组及茱萸丸低、中、高剂量(130.54、261.08、552.16 mg/kg)组和阿托伐他汀(10.40 mg/kg)组,每组10只,C57BL/6J小鼠10只作为对照组。给药12周后,采用生化法检测小鼠血清三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)、Masson、油红O染色观察小鼠主动脉的病理学改变;ELISA检测血清中白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、IL-1β、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;超高液相色谱串联质谱法(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS)检测小鼠血浆中三甲胺(trimethylamine,TMA)、氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)含量;16S rRNA技术检测小鼠粪便中肠道菌群物种组成差异;荧光探针法检测主动脉ROS的荧光强度;免疫荧光及Western blotting检测小鼠主动脉硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NOD like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)蛋白表达;qRT-PCR检测主动脉硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)、TXNIP、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)mRNA表达。结果与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高(P<0.01),HDL-C水平显著下降(P<0.01),主动脉内膜大面积增厚,形成明显的泡沫细胞,脉壁胶原蛋白沉积增多,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),Chao1、Ace以及observed species指数降低(P<0.01),拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度显著下降(P<0.01),主动脉中ROS含量增加(P<0.01),TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平升高(P<0.01),TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,茱萸丸组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低(P<0.05、0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.01),主动脉斑块、血管壁泡沫细胞及胶原蛋白沉积均呈现不同程度的改善,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著降低(P<0.05、0.01),SOD活性显著升高(P<0.01),Chao1、Ace以及observed species指数均明显升高(P<0.01),拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度升高(P<0.05、0.01),厚壁菌门菌群丰度降低(P<0.05),主动脉中ROS含量减少(P<0.05、0.01),TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平显著降低(P<0.01),TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论茱萸丸能够显著抑制LDLR−/−AS小鼠主动脉病理改变、调节肠道菌群中有益菌和有害菌的相对丰度,减少TMAO生成,抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,改善炎症反应,减轻内皮细胞损伤,从而发挥抗AS的作用。

麻黄水提物减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用及机制研究

目的研究麻黄水提物通过活性氧(reactive oxygen species,ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)/Nod样受体蛋白3(Nod like receptor protein 3,NLRP3)通路减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、麻黄水提物(400 mg/kg)组、三甲胺N-氧化物(trimethylamine N-oxide,TMAO,110 mg/kg)组、麻黄水提物(400 mg/kg)+TMAO(110 mg/kg)组,灌胃给药10 d后采用腹腔注射LPS(5 mg/kg)的方法建立LPS诱导ALI模型。造模后6 h,检测肺组织病理改变,支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症细胞分类,血清及BALF中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,肺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总抗氧化力(total antioxidant capacity,T-AOC)含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平。结果模型对照组大鼠出现肺组织内炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚的病理改变,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平均高于正常对照组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量低于正常对照组(P<0.05)。麻黄水提物组大鼠肺组织的病理改变较模型对照组改善,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平均低于模型对照组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量高于模型对照组(P<0.05)。麻黄水提物+TMAO组大鼠肺组织的病理改变较麻黄水提物组加重,BALF中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的数量,血清及BALF中IL-1β、IL-18、TNF-α含量,肺组织中MDA含量、ROS活力及TXNIP、NLRP3的表达水平均高于麻黄水提物组(P<0.05);肺组织中T-AOC含量低于麻黄水提物组(P<0.05)。结论麻黄水提物可减轻LPS诱导ALI,并抑制炎症反应和氧化应激反应,其可能的分子机制与抑制ROS/TXNIP/NLRP3通路有关。

ROS/TXNIP/NLRP3信号通路在高糖诱导人胚胎滋养层细胞焦亡过程中的作用

目的探究活性氧(ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路在高糖诱导下人胚胎滋养层细胞焦亡变化情况。方法体外培养人胚胎滋养层细胞,建立高糖损伤模型,分为对照组、高糖(HG)组、HG+ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸(HG+NAC)组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞存活率变化情况;二氢乙啶-ROS荧光探针法检测各组细胞的ROS水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测转染后各组细胞TXNIP和NLRP3 mRNA表达情况;蛋白免疫印迹分析法检测各组细胞TXNIP、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1和白细胞介素(IL)-1β及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、GSDMD蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞焦亡情况。结果高糖诱导人胚胎滋养层细胞损伤的最佳D-葡萄糖浓度为30 mmol/L;与对照组(96.27±3.10)%相比,HG组(55.44±2.15)%人胚胎滋养层细胞存活率显著降低(P<0.05),7’二氯荧光素(DCF)荧光强度(ROS水平)、TXNIP、NLRP3蛋白表达水平、细胞焦亡数目、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与HG组相比,HG+NAC组(84.75±2.33)%人胚胎滋养层细胞存活率显著升高(P<0.05),DCF荧光强度(ROS水平)、TXNIP、NLRP3蛋白表达水平、细胞焦亡数目、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论抑制高糖诱导下人胚胎滋养层细胞内ROS水平,可能通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路,促进细胞增殖,并减少焦亡的发生。

大黄素调节AMPK/TXNIP/NLRP3信号通路对子痫前期大鼠炎症反应的影响

目的探究大黄素调节AMP活化蛋白激酶(AMPK)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路对子痫前期(PE)大鼠炎症反应的影响。方法通过皮下注射L-精氨酸甲酯(100 mg·kg^(-1))构建PE大鼠模型。将60只雌性大鼠随机分为对照组、模型组、大黄素组(40 mg·kg^(-1)大黄素)、Compound B10组(100 mg·kg^(-1) Compound B10)、大黄素+Compound B10组(40 mg·kg^(-1)大黄素+100 mg·kg^(-1) Compound B10),每组12只。对照组和模型组腹腔注射等量0.9%NaCl。收集24 h尿液,用考马斯亮蓝法测定总尿蛋白含量,用蛋白质印迹法检测AMPK/TXNIP/NLRP3信号通路蛋白水平。结果对照组、模型组、大黄素组、Compound B10组和大黄素+Compound B10组的总尿蛋白相对表达水平分别为(54.34±6.26)、(136.37±15.43)、(76.38±8.61)、(215.39±25.14)和(110.93±13.92)g·L^(-1),尿量分别为(10.59±0.92)、(15.38±1.49)、(11.51±1.13)、(21.49±2.50)和(14.71±1.49)mL,AMPK蛋白相对表达水平分别为0.63±0.06、1.57±0.18、0.81±0.09、2.34±0.23和1.38±0.15,TXNIP蛋白相对表达水平分别为0.33±0.04、0.79±0.08、0.49±0.10、1.13±0.12和0.82±0.09,NLRP3蛋白相对表达水平分别为0.46±0.05、0.83±0.09、0.56±0.07、1.25±0.14和0.78±0.08。模型组的上述指标与对照组、大黄素组、Compound B10组比较,大黄素+Compound B10组的上述指标与大黄素组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论大黄素可能通过抑制AMPK/TXNIP/NLRP3信号轴缓解PE大鼠炎症反应,从而改善胎盘损伤。

基于TXNIP/NLRP3信号通路研究根皮素对糖尿病肾病小鼠肾脏自噬和纤维化的影响

目的:基于硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(TXNIP/NLRP3)信号通路研究根皮素对糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏自噬和纤维化的影响及分子机制。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素30 mg/kg建立DN小鼠模型。随机将小鼠分为正常对照组、模型对照组、吡格列酮10 mg/kg组、根皮素200、400 mg/kg组,每组10只。小鼠连续灌胃根皮素10 w后,测定各组小鼠肾脏肥大指数,采用HE染色、PAS染色和Masson染色观察小鼠肾脏病理形态学变化和肾纤维化改变程度,检测小鼠血糖、体质量、饮水量、尿量、尿β2微球蛋白(β2-MG)含量,取血清测定尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中白细胞介素-1(IL-1)、IL-18、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量;采用免疫组化法测定肾组织盘状结构域受体1(DDR1)、TXNIP、NLRP3、IL-1β、自噬效应蛋白Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达,并用Western blot法检测肾脏TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠血糖、血清BUN、Scr、IL-1、IL-18、TGF-β1、尿β2-MG含量显著升高,肾脏肥大指数显著增加(P<0.01);肾脏DDR1、TXNIP、NLRP3、IL-1β、TGF-β1、α-SMA蛋白表达显著上调(P<0.01),Beclin-1显著上调、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,根皮素200、400 mg/kg组和吡格列酮10 mg/kg组小鼠血糖、血清BUN、Scr、IL-1、IL-18、TGF-β1、尿β2-MG含量显著降低,肾脏肥大指数显著降低(P<0.01);肾脏DDR1、TXNIP、NLRP3、IL-1β、TGF-β1、α-SMA蛋白表达显著下调(P<0.01),Beclin-1蛋白表达上调、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P<0.01),肾脏病理形态和纤维化明显改善。结论:根皮素能提高肾脏自噬水平并抑制肾纤维化,其机制可能与调控TXNIP-NLRP3信号通路减轻炎症反应有关。

七氟醚后处理对脑缺血/再灌注损伤大鼠的脑保护作用及对ROS/TXNIP/NLRP3通路的影响

目的探究七氟醚后处理对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤大鼠的脑保护作用及对活性氧(reactive oxygen species,ROS)/硫氧还蛋白结合蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3(NOD-like receptor associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法60只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组(sham组)、I/R组、七氟醚后处理组(SP组),每组20只。采用大脑中动脉线栓法制备脑I/R模型,SP组造模后即刻吸入2.4%七氟醚30 min。对各组大鼠进行神经功能缺损评分;获取大鼠脑组织,H-E染色和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色观察组织病理学变化和脑梗死体积;分析大鼠脑水肿程度及血脑屏障通透性;TUNEL法检测脑组织细胞凋亡率;检测血清炎性因子(IL-1β和IL-18)及脑组织氧化应激指标[ROS、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)]的水平;Western blot法检测TXNIP/NLRP3通路相关蛋白[TXNIP、NLRP3、凋亡相关点样蛋白(apotosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(cysteine aspartase,caspase-1)]的表达。结果与sham组比较,I/R组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积明显升高(P<0.05),脑组织水肿程度及血脑屏障通透性也明显增加,脑细胞凋亡率升高(P<0.05),血清IL-1β和IL-18含量明显升高(P<0.05),脑组织中ROS和MDA含量及TXNIP、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而GPx和SOD活性降低(P<0.05);与I/R组比较,SP组神经功能缺损评分和脑梗死体积降低(P<0.05),脑水肿程度及血脑屏障通透性下降,脑细胞的凋亡率降低(P<0.05),血清IL-1β和IL-18含量明显降低(P<0.05),脑组织中ROS和MDA含量及TXNIP、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白水平明显降低(P<0.05),而GPx和SOD活性升高(P<0.05)。结论七氟醚后处理能够有效减轻大鼠脑I/R损伤,可能与其对ROS/TXNIP/NLRP3信号通路的抑制有关。

基于ROS/TXNIP/NLRP3通路探讨“邵氏五针法”预处理对哮喘大鼠气道炎性反应的影响

目的:探讨“邵氏五针法”预处理缓解哮喘大鼠气道炎性反应可能的作用机制。方法:将40只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组和西药组,每组10只。除空白组外,其余3组大鼠采用雾化吸入卵蛋白致敏及激发方法制备哮喘模型。针刺组取“大椎”及双侧“肺俞”“风门”行针刺预处理干预,每次20 min,起针后进行激发,每日1次,连续7 d;西药组予腹腔注射地塞米松磷酸钠溶液,用药后激发,每日1次,连续7 d。观察各组大鼠一般情况,ELISA法检测大鼠血清炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量,免疫荧光染色法检测大鼠肺组织活性氧簇(ROS)阳性表达,Western blot法检测大鼠肺组织硫氧还蛋白反应蛋白(TXNIP)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)以及半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶(Caspase-1)蛋白表达。结果:空白组大鼠精神行为状态良好;模型组大鼠出现呼吸急促、抓耳挠腮、烦躁不安等情况;与模型组比较,针刺组、西药组大鼠呼吸较平稳,反应相对灵敏。与空白组比较,模型组大鼠血清IL-18、IL-1β含量升高(P<0.01),ROS阳性表达强度增高,肺组织TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组、西药组大鼠血清IL-18、IL-1β含量降低(P<0.01),ROS阳性表达强度降低,肺组织TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达降低(P<0.01)。与西药组比较,针刺组大鼠肺组织ASC蛋白表达降低(P<0.05)。结论:“邵氏五针法”预处理可通过降低ROS,减少ROS/TXNIP/NLRP3通路相关蛋白的聚集与激活,进而减少下游IL-1β、IL-18炎性因子的分泌,改善哮喘大鼠气道炎性反应,这可能是“邵氏五针法”防治哮喘的作用机制之一。

六味补气方对慢性阻塞性肺疾病细胞焦亡的干预作用及机制研究

目的 研究六味补气方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)细胞焦亡的影响。方法 按照随机数字表法将大鼠分为正常对照组、模型组、桂龙咳喘宁组和六味补气方低、中、高剂量组,每组10只。采用烟熏加脂多糖(LPS)气管滴入的方法建立COPD大鼠模型。药物干预后,检测大鼠肺功能;支气管肺组织形态学改变;同时检测肺组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和Gasdermin D-N端(GSDMD-N)的改变;肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子白介素18(IL-18)、白介素1β(IL-1β)水平;肺组织活性氧(ROS)水平;肺组织NLRP3、半胱天冬酶-1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)蛋白表达以及mRNA水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠肺功能降低(P<0.01),肺组织损伤,细胞膜破裂,IL-18、IL-1β和ROS水平升高(P<0.01),肺组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、和ASC蛋白表达和mRNA水平显著升高(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,各用药组肺功能改善,肺组织损伤和细胞焦亡减轻,IL-18、IL-1β和ROS水平下降(P<0.01),肺组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD和ASC蛋白表达和m RNA水平降低(P<0.01),其中以六味补气方高剂量组改变最为显著。结论六味补气方可降低COPD大鼠IL-18、IL-1β和ROS水平,减轻气道炎症和氧化应激,阻抑肺组织损伤和细胞的焦亡,增加肺功能,其机制可能是通过调控ROS/NLRP3/Caspase-1信号通路实现的。

积雪草苷对脑缺血再灌注大鼠Nrf-2/TXNIP/NLRP-3通路及小胶质细胞活化的影响

目的观察积雪草苷(Asiaticoside, ASI)对脑缺血再灌注(Cerebral ischemia reperfusion, CIR)大鼠皮层中核因子相关因子-2(Nuclear factor-erythroid 2-related factor-2,Nrf-2)、氧还蛋白相互作用蛋白(Thiredoxin-interactive protein, TXNIP)、NOD样受体蛋白-3(Nod-like receptor protein-3,NLRP-3)通路蛋白表达水平的影响。方法改良Longa法阻塞大脑中动脉制备CIR大鼠模型,分为CIR组、低、中、高剂量ASI组,15只/组,另取15只不插入线栓为Sham组,低、中、高剂量ASI组分别给予10、20、40 mg/mL ASI溶液灌胃,Sham组、CIR组生理盐水灌胃,容积2 mL·kg-1·d-1,连续3 d,末次给药6 h后麻醉处死大鼠,取脑组织,红四氮唑(triphenyltetrazolium chloride, TTC)法检测脑梗死体积,苏木素伊红(Haematoxylin-eosin, HE)法观察脑皮层病变,免疫荧光法检测脑皮层小胶质细胞活化,试剂盒检测活性氧(Reactive oxygen species, ROS)、总抗氧化能力及白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)水平,Western blot法检测脑皮层组织Nrf-2/TXNIP/NLRP-3通路蛋白表达水平。结果 Sham组大鼠脑皮层组织无损伤;CIR组大鼠脑皮层可见神经元变性、细胞萎缩及炎性细胞浸润等;低、中、高剂量ASI组大鼠脑皮层组织损伤依次减轻,高剂量ASI组仅可见个别神经细胞萎缩。与Sham组比较,CIR组大鼠脑梗死体积、脑皮层钙离子结合蛋白1(Ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1+)活化小胶质细胞、ROS及IL-1β水平、TXNIP、斑点样蛋白(Apotosis-associated speck-like protein, ASC),NLRP-3及天冬氨酸蛋白水解酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase 1,Caspase-1)蛋白表达水平升高(P均<0.05),总抗氧化能力、Nrf-2核移位及血红素氧合酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平降低(P均<0.05);与CIR组比较,低、中、高剂量ASI组大鼠脑梗死体积、脑皮层Iba1+活化小胶质细胞、ROS及IL-1β水平、TXNIP,ASC,NLRP-3及Caspase-1蛋白表达水平剂量依赖性降低(P均<0.05),总抗氧化能力、Nrf-2核移位及HO-1蛋白表达水平剂量依赖性增高(P均<0.05)。结论 ASI可促进脑皮层中Nrf-2通路蛋白表达,降低氧化应激,抑制TXNIP/NLRP-3通路蛋白表达,抑制IL-1β等释放,减轻小胶质细胞活化,改善CIR所致大鼠脑损伤。