丹参提取物改善大鼠重症急性胰腺炎肺损伤模型的ROS-NLRP3炎症小体信号通路机制

目的:探讨活性氧簇(ROS)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路在丹参提取物改善急性胰腺炎肺损伤大鼠的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分组5组:假手术组、模型组、丹参提取物(1.5 g·kg^-1)组、ROS抑制剂组[N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC),20 mg·kg^-1]、丹参提取物+NAC组(1.5 g·kg-1+20 mg·kg^-1),每组12只。以逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠(1 ml·kg^-1)法建立急性胰腺炎肺损伤大鼠模型,各组灌胃给药,模型组和假手术组给予等量生理盐水,qd,持续5 d。处死大鼠,测量腹水量、右肺干质量、右肺湿质量,计算湿质量/干质量(W/D)比值,采用苏木精-伊红(HE)染色法对大鼠肺组织病理症状进行Holfbauer评分,以全自动血气分析检测仪检测动脉血中氧分压(PaO2)、二氧化碳分压(PaCO2)、氧合指数(OI),用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,ROS检测试剂盒检测肺组织中ROS水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠腹水量、W/D比值、Holfbauer评分、PaCO2、TNF-α、IL-6、ROS水平、NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达显著升高(P<0.05),PaO2、OI显著降低(P<0.05);与模型组比较,各药物处理组大鼠腹水量、W/D、Holfbauer评分、PaCO2、TNF-α、IL-6、ROS水平、NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达显著降低(P<0.05),PaO2、OI显著升高(P<0.05);与丹参提取物组及NAC组分别比较,丹参提取物+NAC组大鼠腹水量、W/D、Holfbauer评分、PaCO2、TNF-α、IL-6、ROS水平、NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达均显著降低(P<0.05),PaO2、OI显著升高(P<0.05)。结论:丹参提取物可以保护急性胰腺炎肺损伤大鼠的肺组织,可能通过下调ROS-NLRP3炎症小体信号实现。

PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspse-1通路诱导大鼠子宫炎症反应

颗粒物(PM)对呼吸系统、心血管系统、神经系统和免疫系统均有损害,但目前关于吸入颗粒物对生殖损伤的研究较少。本研究旨在探讨细颗粒物(PM_(2.5))短期暴露对大鼠子宫炎症损伤及其作用机制。PM_(2.5)暴露30 d后,高剂量组大鼠的子宫脏器系数、内膜上皮细胞厚度和腺上皮高度均明显高于对照组(P<0.05),抑制剂MCC950则能明显降低PM_(2.5)对子宫的影响。子宫组织免疫荧光双染色结果显示,PM_(2.5)暴露组子宫内CD45白细胞和CD11b巨噬细胞均明显增加(P<0.05)。Elisa法检测子宫组织和血清中白介素1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1),暴露组子宫组织和血清中IL-1β和TGF-β1含量明显升高(P<0.05)。Western印迹法检测结果显示,PM_(2.5)上调核苷酸结合低聚体结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白质(ASC)、pro-IL-1β、pro-Caspase-1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白质表达量(P<0.05)。与高剂量组相比,NLRP3抑制剂MCC950能明显降低NLRP3/Caspase-1通路中关键蛋白质表达水平(P<0.05)。综上,PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspase-1信号,诱导大鼠子宫炎症反应,为PM_(2.5)生殖毒性预防和治疗提供理论基础。

降钙素相关基因肽在小鼠巨噬细胞炎症调控中的作用研究

目的探讨降钙素相关基因肽(CGRP)在炎症调控中的作用,验证CGRP可通过活性氧簇-核苷酸结合低聚体结构域样受体3(ROS-NLRP3)信号通路抑制小鼠巨噬细胞炎症因子的分泌。方法实验分为对照组、脂多糖(LPS)100 ng/ml组(LPS组)、CGRP 10 ng/ml组(CGRP 10组)、CGPR 30 ng/ml组(CGRP 30组)、CGRP 100 ng/ml组(CGRP 100组)及CGRP 30 ng/ml+LPS 100 ng/ml组(CGRP 30+LPS组)。作用12 h后,分别收集各组细胞的培养上清,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白表达。同时收集各组细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测炎症因子IL-1β、TNF-α和炎症复合体NLRP3 mRNA的表达水平。流式细胞术检测各组细胞内活性氧簇(ROS)水平,Western blotting检测ROS-NLRP3信号通路相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β及TNF-α的蛋白表达。结果与对照组比较,LPS组细胞中IL-1β、TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平升高,培养上清液中IL-1β和TNF-α的蛋白表达水平升高,细胞内ROS水平升高,且细胞内NLRP3、Caspase-1、IL-1β及TNF-α的蛋白表达水平升高(P<0.05);与LPS组比较,CGRP 10组、CGRP 30组、CGRP 100组、CGRP 30+LPS组细胞中IL-1β、TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平降低,培养上清液中IL-1β和TNF-α蛋白表达水平降低,细胞内ROS水平降低,且细胞内NLRP3、caspase-1、IL-1β及TNF-α蛋白表达水平也降低,所有指标中CGRP 30组降低最明显(P<0.05)。结论CGRP可降低巨噬细胞内ROS和NLRP3的表达,使炎症因子IL-1β和TNF-α的释放减少,CGRP可能在减弱局部炎症反应中发挥重要的调控作用。