生物活性短肽RGD在PET表面接枝方法的研究

在高分子材料表面共价引入人工合成的精氨酰 -甘氨酰 -天冬氨酸三肽 (Arg- Gly- Asp peptides,RGD) ,以达到让内皮细胞与之特异结合并更加牢固的目的。实验用紫外辐照法将活性基团羧基 (- COOH)接枝到聚对苯二甲酸乙二醇酯 (Poly(ethylene terephtalate) ,PET)膜的表面 ,将液相合成的 RGD三肽耦合接枝到处理过的材料表面 ,光电子能谱对以羧基为活性基团的接肽反应结果进行分析 ,光学、电子显微镜观察内皮细胞生长情况以检测接枝短肽的生物活性。内皮细胞生长实验结果表明 ,成功接枝的 RGD序列对材料内皮细胞种植起到了促进作用。本实验成功运用紫外接枝与化学耦合 ,将生物活性短肽 RGD接枝到膜表面 ,探索了一种新的接枝生物活性短肽的方法。

在有机介质中用固定化木瓜蛋白酶合成生物活性短肽的研究

在有机介质中用固定化木瓜蛋白酶合成生物活性短肽的研究王旭，张学忠，陈松明，吴晓霞，李建军（吉林大学酶工程国家重点实验室，长春１３００２３）近年来，利用酶法合成多肽的方法由于与化学法和基因工程法比较有诸多优点，而越来越引起人们的重视，并进行了大量研究。...

生物活性短肽在动物生产中的应用前景

该文综述了生物活性短肽对动物胃肠运动、消化液分泌、食欲、激素分泌、免疫功能等生理功能的影响,并探讨了生物活性短肽在动物营养中的应用前景。

生物活性短肽RGD在骨组织诱导再生中的研究进展

临床上对创伤、感染和肿瘤切除后所造成大范围骨缺损的修复至今未得到有效的解决。在基质材料中的生物活性物质能对其周围组织及长入基质材料中的纤维组织发生诱导作用 ,使其向骨组织方向生长 ,从而促进骨缺损区的修复。精氨酸 -甘氨酸 -天冬氨酸序列 (Arg- Gly- Asp,RGD)是细胞膜整合素受体与细胞外配体相结合的识别位点。在一定条件下 ,人工合成的 RGD序列的可溶性小分子多肽能够竞争性地与细胞表面的整合素结合 ,将细胞外信息传入细胞内 ,引起细胞一系列的生理变化。目前 ,国内外研究报道合成的 RGD肽具有诱导成骨细胞的生长 ,抑制破骨细胞之间、破骨细胞与基质之间的黏附 ,具有诱导骨再生的能力。本文仅就 RGD肽在骨组织诱导再生中的应用及其进展作一简要综述。

合成角质细胞生长因子活性短肽促进表皮细胞增殖的实验研究

目的应用噬菌体随机7肽库筛选角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)的关键序列,进行KGF活性短肽的调整和合成,并研究其对表皮细胞增殖的作用。方法以KGF单克隆抗体为靶,筛选噬菌体随机7肽库,获得KGF的特异性序列,并进行序列调整。用免疫荧光法检测KGF活性短肽的表皮细胞亲和力。用CCK-8法检测KGF活性短肽对表皮细胞增殖的影响。用RT-PCR法和Western-blot法检测表皮细胞上特异性受体KGFR的表达水平。结果筛选噬菌体随机7肽库,获得2个与KGF相似的特异性序列,合成获得2个KGF活性短肽,并纯化至98%纯度,短肽的C端进行氨基化封闭,N端进行罗丹明激光染料标记。免疫荧光检测结果显示,2个KGF活性短肽均能够与表皮细胞相结合。CCK-8检测结果显示,与阴性对照组相比,2个KGF活性短肽能够促进表皮细胞增殖,并呈浓度依赖性。RT-PCR和Western-blot检测结果显示,2个KGF活性短肽组中表皮细胞表达KGFR增强。结论从噬菌体随机7肽库中筛选到2个KGF的关键序列,合成的2个KGF活性短肽能够与KGFR相结合,并增强KGFR的表达,从而促进表皮细胞增殖,有望应用于促进创面愈合。

不同活性短肽对酪朊酸钠乳化特性的影响及其配比优化

比较了水解乳清蛋白、大豆肽、海洋胶原蛋白肽、玉米肽和花生肽等不同活性短肽对酪朊酸钠的乳化活性和乳化稳定性影响,并优化了其蛋白体系乳化效果较好的复配比例。结果表明,水解乳清蛋白与酪朊酸钠的复配比例大于2∶8,大豆肽和海洋胶原蛋白肽分别与酪朊酸钠的复配比例大于1∶9时,以酪朊酸钠为主体的蛋白体系的乳化活性和乳化稳定性均显著降低(p<0.05);玉米肽和花生肽与酪朊酸钠的复配比例为1∶9时,体系的乳化活性和乳化稳定性均显著降低(p<0.05)。进一步选用水解乳清蛋白、大豆肽和海洋胶原蛋白肽复合后与酪朊酸钠复配,采用混料设计试验,确定复配体系乳化效果较好的3种活性短肽的较佳配比为水解乳清蛋白50%、大豆肽40%、海洋胶原蛋白肽10%,3种复合活性短肽与酪朊酸钠的优化复配比例为3∶7。研究结果可为高蛋白饮料中活性短肽的选择提供理论依据。

噬菌体肽库筛选与SK-BR-3细胞表面HER2特异性结合的活性短肽

目的利用噬菌体展示肽库技术筛选与人乳腺癌细胞表面HER2特异性结合的活性短肽。方法以过表达HER2的人乳腺癌细胞SK-BR-3为靶细胞,Herceptin作为竞争性洗脱剂,采用竞争结合实验,经四轮亲和筛选,获得阳性噬菌体富集;通过ELISA评价与SK-BR-3细胞高特异性结合的阳性噬菌体克隆;分析DNA测序结果并推导短肽序列;采用MTT法比较筛选短肽与Herceptin对SK-BR-3细胞生长的抑制率。结果随机挑选的16个克隆对SK-BR-3细胞具有特异性结合力,其中S-1阳性克隆与靶细胞特异结合活性最强,且其短肽序列对SK-BR-3细胞生长具有一定的抑制作用。结论通过噬菌体展示肽库对过表达HER2乳腺癌细胞进行筛选,获得与SK-BR-3细胞高特异性结合的活性短肽序列,为设计乳腺癌靶向药物与导向治疗提供参考数据。

抑制白细胞介素-17活性短肽疫苗对ApoE-/-小鼠免疫功能的影响

白细胞介素17（IL-17）是近年来发现的又一新的细胞因子[1],它主要由活化的T淋巴细胞产生,能诱导多种基质细胞产生多种前炎性细胞因子和造血活性因子,如白细胞介素-6（IL-6）,白细胞介素-8（IL-8）,粒细胞集落刺激因子（GCSF）,肿瘤坏死因子？α（TNF？α）、白细胞介素-1（IL-1）,前列腺素E2（PGE2）等[2-3]。

抑制IL-17活性短肽疫苗的抗动脉粥样硬化的治疗作用

目的:将具有抑制IL-17活性的短肽疫苗主动免疫ApoE-/-小鼠,研究IL-17疫苗对动脉粥样硬化的治疗作用。方法选取8 w龄健康雄性ApoE-/-小鼠,分两组,一组用生理盐水腹腔注射,一组用IL-17疫苗(0002)腹腔注射,每组12只,分别于0、2、4、6 w共免疫4次,实验结束后,测体重,以自动分析仪检测血清中血脂含量,留取心脏以油红染色的方法检测主动脉瓣环及主动脉大体标本的斑块面积及其成分分析。结果结果表明IL-17疫苗(0002)在未影响小鼠体重及血脂情况下显著的减少斑块面积(P<0.01)。结论通过诱导产生具有靶向阻断作用的中和性抗体来产生作用的IL-17疫苗,为动脉粥样硬化的防治提供新思路。

角质细胞生长因子活性短肽促进糖尿病大鼠创面愈合的实验研究

目的探讨角质细胞生长因子(KGF)活性多肽对糖尿病大鼠创面愈合的促进作用。方法选择24只健康雌性SD大鼠,腹腔注射链脲佐菌素酸(STZ),制备糖尿病大鼠模型。将24只大鼠随机分成4组,即阴性对照组、KGF阳性对照组、KGF活性短肽1组、KGF活性短肽2组,每组6只。分别于大鼠背部制备直径2 cm的圆形创面,并定期对创面局部注射各组药物。伤后14 d进行拍照,记录创面未愈合面积,计算创面愈合率。采用HE染色观察创面愈合情况。结果成功制备糖尿病大鼠慢性创面模型。伤后14 d,KGF阳性对照组、KGF活性短肽1组和KGF活性短肽2组的创面愈合率与阴性对照组比较,显著升高,差异有高度统计学意义(P <0.01);KGF活性短肽1组和KGF活性短肽2组的创面愈合率与KGF阳性对照组比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。阴性对照组创面皮肤全层缺失,毛囊、汗腺和皮脂腺等皮肤附件缺失,组织结构均匀致密、无层次,炎症细胞浸润明显。除阴性对照组外,其余各组均创面上皮化良好,深层组织层次清楚、结构疏松,炎症细胞浸润较少,并可见再生的毛囊、汗腺和皮脂腺等皮肤附件。结论 KGF活性短肽可促进糖尿病大鼠的创面愈合及皮肤附件的再生。

重组大肠杆菌产活性短肽高密度发酵研究

利用5 L发酵罐对重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET30a-EEMQRR外源表达活性短肽EEMQRR的高密度发酵工艺进行研究。通过对培养基类型、碳源、诱导时机、铵离子浓度和有机氮源的工艺优化,获得活性短肽EEMQRR在无机盐培养基高密度发酵的最优条件。重组大肠杆菌在无机盐培养基培养12 h后加入IPTG开始诱导,发酵结束时OD_(600)>145,活性短肽EEMQRR重组表达产量可达12.72 g/L。该无机盐培养基高密度发酵工艺重复性良好,效率高,具备推广至重组大肠杆菌表达其他目的蛋白的产业化前景。

生物酶法耦合膜技术制备活性短肽的工艺研究

主要探讨生物酶法耦合膜技术生产活性短肽的工艺中各级膜工作过程和其他流程试验,采用正交试验确定了最佳酶解条件:加酶量2%、料液比1∶4、酶解时间3h。鱼初加工的下脚料,鱼头、鱼尾、鱼皮、鱼鳞等经过该工艺过程,最终得到了活性短肽产品,86%以上肽为易于人体吸收的生物活性短肽。

楔形短肽表面活性剂A_3V_3D纳米自组装结构的表征及机理研究

通过对传统短肽表面活性剂氨基酸序列的改良,设计了具有楔形几何结构的新型短肽表面活性剂A3V3D.圆二色谱(CD)分析表明,该短肽的二级结构为无规则卷曲,透射电子显微镜(TEM)和原子力显微镜(AFM)表征发现,该短肽在水溶液中能够发生有序的自组装,形成稳定的光滑平直的纳米纤维.芘探针荧光光谱分析显示,该短肽形成了疏水区并将芘分子包裹其中.由此推测A3V3D在其楔形几何结构的影响下,以柱状胶束的形式发生自组装,是一种新型的自组装短肽材料,说明了几何形状效应在控制短肽的自组装行为中起着关键作用.

还原型谷胱甘肽提取方法初探

还原型谷胱甘肽(GSH)是一种天然的活性短肽,具有清理体内自由基等生理功能。为了寻找适合实验室应用的简便、易行的提取GSH的方法,以安琪活性干酵母为研究对象,以相似相容原理为理论依据,用热水抽提、甲酸抽提、乙醇抽提、低温抽提方法提取GSH,分析比较不同提取方法的提取效果。结果表明,热水抽提是一种比较理想的从酵母中提取谷胱甘肽的方法,其特点是耗时少、仪器简单、抽提液中GSH质量浓度高、经济且无污染。

转化生长因子β1的关键序列筛选及鉴定

目的应用噬菌体随机12肽库,筛选转化生长因子β1(Transforming growth factor-beta1,TGF-β1)的关键序列,进行TGF-β1活性短肽的合成,并检测其与成纤维细胞的亲和力。方法以TGF-β1单克隆抗体为靶,筛选噬菌体随机12肽库,获得TGF-β1的特异性序列。进行序列比对分析,选择TGF-β1的关键序列。进行TGF-β1活性短肽的合成、纯化、修饰及免疫荧光标记。应用免疫荧光法检测TGF-β1活性短肽的成纤维细胞亲和力。结果筛选噬菌体随机12肽库,获得10个与TGF-β1相似的特异性序列。分析获得7个TGF-β1的关键序列。合成获得7个TGF-β1活性短肽,并纯化至98%,短肽的C端进行氨基化封闭,N端进行罗丹明激光染料标记。免疫荧光检测结果显示,1个TGF-β1活性短肽能够与成纤维细胞相结合。结论从噬菌体随机12肽库中筛选到TGF-β1的关键序列,1个TGF-β1活性短肽能够与成纤维细胞相结合,有望应用于促进创面愈合的相关研究。