血清中维生素D活性代谢物的LC-MS/MS定量方法研究

目的1α,25-二羟基维生素D_(3)是维生素D的活性代谢产物。但该物质在人血清中的含量非常低,常规的检测方法无法准确定量。建立并验证一种准确、选择性高、快速定量1α,25-二羟基维生素D3的液质联用方法,对满足临床研究、临床诊断的需求非常有帮助。方法因该分析物为内源性物质,方法中采用自配并经过验证的替代基质配制标准曲线和质控品。人血清样品经过液液萃取纯化,用衍生化试剂消除内源性干扰,再进行衍生化反应以提高灵敏度。采用反相柱分离,质谱电喷雾电离源正离子模式采集,离子对为574.3→314.3和577.4→317.2的多反应监测(MRM)模式,监测1α,25-二羟基维生素D3和内标。在15~1000 pg/mL范围内线性良好,最低定量限(LLOQ)为15 pg/mL。结果经过方法学验证,分析物的精密度和准确度(日内及日间)偏差均满足±20%以内的要求。血清样品稳定性实验结果良好,满足评判标准。结论该方法准确、稳定,具有耐用性及灵敏度高等优点,适用于临床样品的分析。

维生素D3减轻高糖暴露诱导氧化应激促进人脐带间充质干细胞的成骨分化

背景:糖尿病骨质疏松症逐渐受到公众的关注,然而鲜有研究报道高糖环境对人脐带间充质干细胞成骨分化的影响和相应的治疗策略。目的:探讨维生素D3恢复高糖环境中人脐带间充质干细胞成骨分化的潜力。方法:通过CCK-8法检测人脐带间充质干细胞活力来筛选适宜的维生素D3干预浓度。在高葡萄糖条件下,通过RT-qPCR、蛋白质印迹、免疫荧光、JC-1线粒体膜电位、茜素红染色和β-半乳糖苷酶染色等实验评估维生素D3干预后人脐带间充质干细胞的成骨分化潜能、细胞内活性氧积累、线粒体膜电位改变和细胞衰老情况,并探讨了潜在的机制。结果与结论:①维生素D3在0.1μmol/L至1 mmol/L范围内均能显著促进人脐带间充质干细胞的增殖;②高糖环境下调了人脐带间充质干细胞中成骨相关基因α1-Ⅰ型胶原蛋白、碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白的mRNA和蛋白表达水平,诱发了氧化应激和细胞衰老;③维生素D3在10μmol/L的干预浓度下显著恢复了高糖条件下人脐带间充质干细胞的成骨表型,并通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻了细胞内的氧化应激和细胞衰老;④结果表明,高糖环境中人脐带间充质干细胞的成骨分化能力降低,维生素D3可以部分提高其成骨分化能力并减轻细胞损伤。

玫瑰/鸢尾/百合活性组合物基于婴儿3D皮肤模型的保湿及促屏障功能的功效研究

采用一种独特的3D重建婴儿皮肤模型,研究了玫瑰/鸢尾/百合活性组合物对屏障功能特性和含水量的影响。为探讨活性成分处理对婴儿皮肤模型保湿和屏障功能的影响,对丝聚蛋白、紧密连接蛋白-1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-14和透明质酸进行了病理学和免疫组织学分析。与成人重建的皮肤相比,重建的婴儿皮肤表皮更薄,角质层细胞更小,验证了构建的婴儿3D皮肤模型很好地模拟了人体皮肤的结构,利用该模型进行功效测试有科学意义。用0.005%玫瑰/鸢尾/百合活性组合物处理的婴儿3D皮肤模型中,丝聚蛋白、紧密连接蛋白-1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-14的表达分别显著增加了190.5%,224.5%和135.0%,具有应用于婴童和敏感肌化妆品领域的潜力。

活性维生素D_3及其类似物的足细胞保护作用研究进展

近年来研究发现1,25-二羟维生素D3（1,25-（OH）2D3）及其类似物具有独立于钙磷调节之外的许多功能,这些功能是结合细胞内维生素D受体（vitamin D receptor,VDR）后发挥作用的.而足细胞是维持肾小球功能的重要细胞,足细胞上表达VDR.因此1,25-（OH）2D3及其类似物与足细胞功能之间的相互关系值得探索.本文就近年来活性维生素D3及其类似物对足细胞的保护作用研究进展作一介绍.

活性维生素D_3及其类似物对肾脏保护作用研究进展

活性维生素D3及其类似物在调节钙磷代谢、预防佝偻病等方面有着重要的作用,近年来有研究发现其除了调节钙磷代谢作用外,还具有抑制肾素血管紧张素系统、抑制炎症因子分泌、减少细胞外基质沉积和免疫细胞的增殖活化等肾脏保护作用;现就这方面的研究进展作一综述。

活性维生素D_3类药物研究概况

活性维生素D3除了具有调节钙磷代谢的功能外,还是一种细胞循环调节剂,影响细胞的增殖、分化和凋亡。活性维生素D3配体,通过与维生素D受体结合,在体内发挥多种多样的生理学功能,临床上可用来治疗炎症、皮肤病、骨质疏松、癌症和免疫疾病等。为了减少钙血症等不良反应,并使活性维生素D3的各种生理学作用相分离,到目前为止已经合成出3 000余个活性维生素D3衍生物。该文对活性维生素D3的临床应用、构效关系及其研究最新进展进行综述。

活性维生素D类似物对内毒素感染小鼠肾脏细胞因子的影响

目的研究活性维生素D类似物对内毒素感染小鼠肾脏细胞因子的影响。方法将C57 BL/6源性野生小鼠(20只)随机分为正常对照组(CON组)、帕立骨化醇组(P组)、脂多糖组(LPS组)、帕立骨化醇+脂多糖组(P+LPS组)。比较各组小鼠一般状态,应用ELISA试剂盒检测小鼠血清肌酐含量,实时定量PCR法测定小鼠肾脏中细胞因子水平。结果一般状态比较,P+LPS组小鼠较LPS组小鼠不良反应减轻。各组小鼠肾脏形态学及血清肌酐水平未见明显差异。P+LPS组肾脏组织细胞因子IL-1β、ICAM、TNF-α、INF-γ表达比LPS组明显下降(P<0.05)。结论活性维生素D类似物能显著减少内毒素感染小鼠肾脏组织中IL-1β、ICAM、TNF-α、INF-γ的含量,减轻炎性细胞因子介导的肾脏损伤,从而起到对肾脏的保护作用。

维生素D及其类似物治疗糖尿病肾病的研究进展

糖尿病肾病(DKD)是导致终末期肾病的主要原因,目前尚无特异性的治疗手段。维生素D在人体内代谢后结合细胞上的受体发挥多种生物学效应,临床应用广泛。近年来,临床研究结果显示,维生素D及其类似物能有效降低DKD患者的蛋白尿水平,且具有较好的安全性,但目前尚缺乏关于其种类、剂量、剂型及疗程的统一推荐方案。同时,基础研究也表明,维生素D可能通过多种途径影响DKD的发病。该文主要对国内外维生素D及其类似物治疗DKD的临床应用进展进行综述,并简要总结基础研究成果,以期对未来此类研究的开展及临床应用提供理论依据。

生物法制备活性维生素D_3的现状简述

活性维生素D_3(VD_3)是一种人体内不可或缺的脂溶性维生素,它具有调节人体钙磷代谢以及控制骨骼细胞生长分化的重要生理功效。综述了目前针对生物法制备活性VD_3的限制性因素及其解决对策,从重组基因工程菌的表达、人工电子传递链的构建、全细胞辅酶再生体系的建立、底物细胞膜通透性的改善4个方面进行阐述。

失-C-环1α,25-二羟基维生素D_3类似物的研究——I两个含偕二甲基的手性D环合成子的合成

目的 :合成含偕二甲基的手性D环合成子。方法 :以 (+) -内向 3 溴莰酮 2为手性源 ,立体控制合成含偕二甲基的手性D环合成子。结果 :所合成的两个手性D环合成子光学纯度高。结论 :(+) 内向 3 溴莰酮

维生素D3活性代谢物对体外培养的人牙乳头组织的诱导作用

维生素Ｄ３活性代谢物对体外培养的人牙乳头组织的诱导作用赵大为①史俊南①黄梅②肖明振①（第四军医大学①牙髓生物学实验室②中心实验室）维生素Ｄ３活性代谢物—１，２５—二羟基维生素Ｄ３作为甾体激素，除调节钙磷代谢外，还具有抑制某些细胞增殖、诱导细胞分化的功...

维生素D3活性代谢物对牙细胞体外矿化的影响

维生素Ｄ３活性代谢物对牙细胞体外矿化的影响赵大为①史俊南①陈建元②肖明振①（第四军医大学①牙髓生物学实验室②中心实验室）牙与骨在许多方面高度相似，人牙细胞如牙髓细胞、牙乳头细胞的生物学特性类似于成骨细胞如高碱性磷酸酶活性等。本研究的目的是了解１，２５...

微生物转化制备活性维生素D_3的研究进展

活性维生素D类药物作为一类高效原料药,采用化学合成方法,制备复杂,限制了其广泛应用。采用微生物转化法条件温和,操作简单,对于活性维生素D3的制备具有重要意义。从甾体羟化菌株,生物转化制备不同活性维生素D3、基因工程在生物转化上的应用及转化率的影响因素等方面综述了其研究进展,并对该领域的发展趋势进行了展望。

活性维生素D3及锌、锰复合物改善水印蛋研究

本试验旨在研究在产蛋鸡日粮中添加活性维生素D3及锌、锰复合物对蛋壳质量的影响。试验材料含维生素D3复合物,可在肠道中经肠道消化酶水解获得活性维生素D3形式,直接驱动对钙、磷的吸收代谢及其他功能,而锌、锰微量元素具有改善蛋壳质量和缓减应激等作用。试验结果显示,对照组蛋壳厚度为0.317mm,试验组蛋壳厚度为0.348mm,显著高于对照组(P<0.05)。对照组蛋壳评分为1.82,试验组蛋壳评分为1.10,极显著降低(P<0.01)。此外,试验组裂纹蛋和水印蛋分别为3.3%和26.7%,与对照组相比均大幅降低(分别为23.3%和48.7%)。结果表明,蛋鸡产蛋料添加活性维生素D3及锌、锰复合物可显著提高蛋壳质量,改善水印蛋问题。

活性维生素D_3及锌、锰复合物改善蛋壳质量研究

暗斑蛋,国外学者称为半透明蛋(Translucent egg),最早于1932 年提出(Hoist等,1932),国内学者称为“薄斑”,因表面可呈现不同的水斑,亦称“水印蛋”。经调查,暗斑蛋普遍存在于粉壳、褐壳和绿壳等蛋鸡品种(王德贺等,2016),严重影响鸡蛋品相,降低消费欲望。

维生素D及其类似物抗胃癌作用及机制的研究进展

胃癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤。近年来大量的研究表明维生素D及其类似物具有广泛的生物学作用,可阻止多种肿瘤的发生发展。流行病学资料及在体和离体动物实验均证实血清维生素D水平与胃癌的发生、分化、浸润及转移均密切相关。其机制可能涉及调控胃癌细胞周期、促进胃癌细胞的凋亡、抑制胃癌细胞的侵袭和转移、化疗药物的增敏作用等,本文主要就维生素D及其类似物抗胃癌作用及机制的研究进展进行了综述。

活性维生素D3对咳嗽变异型哮喘大鼠气道炎症及骨桥蛋白表达的影响

目的:观察活性维生素D3对咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)气道炎症及肺组织骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的干预效应。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、治疗组,每组各10只。采用腹腔注射联合雾化吸入卵清蛋白(OVA)诱导CVA模型,治疗组激发前30 min予活性维生素D3100 ng/mL灌胃。大鼠肺功能仪检测吸入乙酰胆碱(Ach)后气道阻力值,瑞氏-吉姆萨染色观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞分类计数,HE染色、PAS染色观察肺组织形态学改变,免疫组化检测肺组织OPN表达。结果:(1)气道高反应:模型组和治疗组吸入Ach后气道阻力明显高于空白组(P<0.01),治疗组的气道阻力低于模型组(P<0.01)。(2)炎症细胞分类计数:模型组及治疗组BALF中巨噬细胞百分率、淋巴细胞百分率、中性粒细胞百分率及嗜酸性粒细胞百分率均较空白组增加(P<0.01),治疗组炎症细胞计数低于模型组(P<0.05)。(3)肺组织形态学改变:模型组肺组织可见大量炎症细胞浸润,杯状细胞增生,治疗组上述改变较模型组减轻。⑷肺组织OPN表达:模型及治疗组OPN表达较空白组增加(P<0.05),治疗组较模型组降低(P<0.05),OPN含量与BALF中炎症细胞所占百分率正相关(P<0.05)。结论:活性维生素D3可降低CVA大鼠气道高反应,减轻气道炎症,其机制可能与干预肺组织OPN表达相关。

卵清蛋白、金黄色葡萄球菌肠毒素B和维生素D类似物诱导小鼠特应性皮炎模型（英文）

目的:阐明利用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)、金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)和维生素D类似物(calcipotriene ointment,CO)局部刺激小鼠背部建立特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)动物模型的方法。方法:将BALB/c小鼠背部去毛随机分为3组:对照组,OVA/SEB,OVA/SEB/CO,分别给予相应的处理。隔天给药并拍照记录皮损状态,于第15天处死小鼠,处死前用皮肤共聚焦显微镜测量表皮厚度。用ELISA方法检测血清IL-2,IL-4,IL-31,干扰素(interferon,IFN)-γ,肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和IgE水平,HE染色检测皮损处炎症情况,实时荧光定量PCR检测皮损处上述因子的mRNA表达水平。结果:OVA/SEB/CO组皮损处炎症细胞浸润和表皮增厚明显,血清IgE水平显著增高,血清和皮损处IL-4,IL-31,IFN-γ,TNF-α和NGF表达水平均显著高于对照组或OVA/SEB组。结论:OVA/SEB/CO局部刺激可短时间、低成本地诱导BALB/c小鼠皮肤AD样改变。

全反式维甲酸、活性维生素D_3联合雄激素对MDS难治性贫血的疗效追踪观察

为了探讨全反式维甲酸、活性维生素D3及康力龙联合治疗骨髓增生异常综合征难治性贫血(MDSRA)的疗效及作用机制,治疗组62例采用全反式维甲酸30mg/(m2·d),活性维生素D30.01μg/(kg·d),康力龙0.1mg/(kg·d)治疗,对照组33例采用叶酸及铁剂等治疗。治疗前后检查骨髓及外周血。结果表明:用药8周,治疗组完全缓解(CR)4例,部分缓解(PR)12例,血液学改善(HI)43例(69.35%)。平均随访26.25月出现10例死亡、2例RAEB、1例RAEBT及3例转变为白血病。对照组用药8周无CR,PR3例,HI17例(51.51%)。平均随访16个月出现6例死亡、1例RAEB、1例RAEBT及3例转变为白血病。治疗组3和5年生存率为69.42%和53.72%,对照组为52.23%和31.34%(P=0.016)。治疗组出现副作用程度低。KaplanMeier分析提示,三联治疗、无转变、年龄偏小、无合并症、女性、血红蛋白值90-120g/L、骨髓增生活跃及一系血细胞减少组生存时间长。Cox风险比例模型表明,三联治疗、转变及年龄变量是影响预后的独立因素。结论:三联药物治疗RA疗效高,毒副作用低,治疗有效的机制可能为诱导分化、抗增殖、抗凋亡、抗血管生成、改善营养及调节免疫。