贻贝启发接枝骨形态发生蛋白2成骨活性肽的介孔生物玻璃修复股骨髁缺损

背景:骨形态发生蛋白2在胚胎发育、骨骼形成和再生修复中具有重要作用,但高剂量应用与癌症发病密切相关。骨形态发生蛋白2成骨活性段L20能够有效减少癌症等不良反应,并可显著促进骨组织再生。目的:将骨形态发生蛋白2活性肽段以贻贝衍生肽模拟策略接枝在介孔生物玻璃表面,探究其对组织工程成骨性能的影响。方法:(1)采用模板法合成介孔生物玻璃纳米颗粒,采用一步法合成负载骨形态发生蛋白2成骨活性肽L20的介孔生物玻璃纳米颗粒,表征负载骨形态发生蛋白2成骨活性肽L20介孔活性玻璃纳米颗粒的形貌与体外缓释性能。(2)分离提取SD大鼠骨髓间充质干细胞,传2代后分别与PBS(空白组)、介孔生物玻璃纳米颗粒(对照组)、负载骨形态发生蛋白2成骨活性肽L20介孔生物玻璃纳米颗粒(实验组)共培养,采用细胞活死荧光染色和CCK-8法检测细胞毒性和细胞增殖,扫描电镜观察细胞黏附;成骨诱导分化后,进行碱性磷酸酶染色、茜素红S染色与成骨相关基因表达检测。(3)取15只SD大鼠,建立双侧股骨髁缺损模型,采用随机数字表法分为3组:空白组(n=5)不植入任何材料,对照组(n=5)植入介孔生物玻璃纳米颗粒,实验组(n=5)植入负载骨形态发生蛋白2成骨活性肽L20介孔生物玻璃纳米颗粒。术后8周,进行股骨Micro-CT扫描与组织形态观察。结果与结论:(1)扫描电镜下可见负载骨形态发生蛋白2成骨活性肽L20介孔生物玻璃纳米颗粒为球形、单分散颗粒,透射电镜下可见其具有多孔结构,平均粒径为(268.10±0.58) nm,体外可缓释L20。(2)负载骨形态发生蛋白2成骨活性肽L20介孔生物玻璃纳米颗粒无细胞毒性,并且可促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附;与空白组、对照组相比,实验组碱性磷酸酶活性与细胞外基质矿化能力均升高(P <0.05),碱性磷酸酶、Runx2、骨钙素mRNA表达升高(P <0.05)。(3)股骨Micro-CT扫描结果显示,与空白组、对照组相比,实验组新生骨量与骨密度均升高(P <0.05);苏木精-伊红与Masson染色结果显示,与空白组、对照组相比,实验组新骨生成与胶原纤维均增加。(4)结果表明,负载骨形态发生蛋白2活性肽L20介孔生物玻璃纳米颗粒具有良好的生物相容性及体内外促成骨性能,可促进SD大鼠股骨髁缺损的再生修复。

骨形成蛋白2活性多肽体外定向诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的剂量依赖性研究

目的探讨自行合成的骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)活性多肽对大鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)体外定向诱导成骨的能力,评价BMP-2活性多肽的成骨诱导性及诱导成骨的剂量依赖性。方法取4周龄Wistar大鼠分离培养MSCs,传至第3代时改用条件培养基,培养基中分别加入浓度为300、200、100、50及0μg/ml的BMP-2活性多肽,并依次记为A、B、C、D和E组。细胞培养至5、10、15及20d,检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,测定钙含量,采用实时荧光定量PCR(fluorescent quantitativePCR,FQ-PCR)检测型胶原、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达,检测不同浓度BMP-2活性多肽体外诱导成骨的能力。结果倒置相差显微镜下观察,用条件培养基培养3～4d后,培养细胞由长梭形转变为短梭形或多角形。随条件培养基中BMP-2活性多肽浓度的增加,细胞发生成骨样改变的时间提前。ALP活性和钙含量检测显示,A组和B组较其他组增加明显,且差异有统计学意义(P<0.05),但A、B组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。FQ-PCR检测发现不同浓度条件培养基培养14d后,型胶原、OPN和OCN mRNA在各组均有表达。Ct值表明其表达量的大小顺序为A、B、C、D组,E组无表达,A组和B组的Ct值明显大于C组和D组,差异有统计学意义(P<0.05),但A组和B组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论BMP-2活性多肽能有效地促进MSCs向成骨方向分化,其诱导作用存在剂量依赖关系,最佳诱导剂量为200μg/ml。

米糠蛋白活性肽的制备工艺研究

研究了米糠蛋白的提取 ,酶水解及米糠蛋白活性肽的分离制备方法。结果表明 :在pH值为1.82 ,温度为 37℃时 ,米糠蛋白经胃蛋白酶酶解作用 12 0min ,经凝胶树脂Sephadex层析能获得较多的多肽组分。

乳蛋白活性肽研究进展

乳蛋白是一种富含生物活性肽的蛋白资源,许多生物活性肽存在于乳蛋白序列中,在胃肠道消化水解或食物加工过程中释放出来,从而发挥其生物学作用。文章就几种乳蛋白源性的具有重要应用价值的生物活性肽的研究现状作了简要概述。

微生物发酵法生产乳蛋白活性肽口服液

介绍了微生物发酵法生产乳蛋白活性肽口服液的产品配方、生产工艺及质量标准;并测定了乳蛋白活性肽口服液中肽的分子量分布。通过试验确定了乳蛋白活性肽口服液无毒且具有免疫调节和延缓衰老的保健功能。

酶法制备大豆蛋白活性肽的工艺优化、分离纯化及抗氧化活性研究

以大豆蛋白粉为原料,水解度为考核指标,在单因素试验的基础上,利用正交试验对碱性蛋白酶制备大豆蛋白活性肽工艺进行优化。结果表明:最佳水解工艺为水解pH 11、水解温度55℃、加酶量0.6 g,在此条件下水解度为24.8%。利用Sephadex G-25凝胶柱对产物进行分离纯化,产物和对比标准物的洗脱图谱分析表明,绝大部分产物是小相对分子质量的蛋白活性肽,相对分子质量大都在1400以下。产物的抗氧化活性随着水解度的增加而逐渐增强,当水解度为25.5%时,其抗脂质体氧化活性为68.6%、对超氧阴离子自由基清除能力为41.2%;当水解度为29.2%时,对Fe^(3+)的还原能力为0.137。

乳蛋白活性肽的延缓衰老作用研究

目的 研究乳蛋白活性肽对果蝇寿命和大鼠氧化与抗氧化指标的影响。方法 果蝇生存实验 ,大鼠抗氧化实验。结果 乳蛋白活性肽可明显延长两个性别果蝇的最高寿命和平均寿命 ;同时可明显降低大鼠血清中丙二醛(MDA)含量 ,并显著升高大鼠抗氧化酶 (超氧化物歧化酶SOD及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)的活力。结论 乳蛋白活性肽有延缓衰老作用。

大鼠骨形成蛋白2活性多肽/PLGA-[ASP-PEG]复合物植入异位成骨观察

目的采用动物实验的方法评价自行研制的三嵌段材料PLGA-[ASP-PEG]与化学合成的骨形成蛋白2(BMP2)活性多肽复合物植入大鼠体内异位诱导成骨的能力。方法成年雄性SD大鼠36只,背部消毒,切开皮肤,分离两侧肌间隙,按实验分为4组,按设计分别植入测试材料。A组BMP2活性多肽/PLGA-[ASP-PEG]复合物组;B组BMP2活性多肽/PLGA复合物组;C组单纯PLGA-[ASP-PEG]组;D组单纯PLGA组。将上述材料用环氧乙烷处理后植入大鼠背部肌肉中,分别于1周,4周,8周,12周和16周处死,进行植入物大体和组织学观察,并利用CT三维成像观察植入物成骨情况,应用荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)及骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达。结果组织学观察A组在8周出现新骨形成;B组在12周出现新骨;C组和D组16周未见新骨形成。CT三维成像16周时,A、B和C组均见新骨形成,骨块大小A>B>C组,D组未见新骨。实时定量PCR各组均有Col-ⅠmRNA和OPNmRNA的表达,A组Col-Ⅰ的Ct值为(21.67±3.21),OPN的Ct值为(21.72±5.11),与其他3组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论三嵌段材料PLGA-[ASP-PEG]及PLGA具有较轻的组织学反应,生物相容性好;BMP2活性多肽能明显诱导成骨;BMP2活性多肽/PLGA-[ASP-PEG]复合物具有较强的异位诱导成骨能力。

血清C反应蛋白、白介素-6、白介素-8与尿胰蛋白酶原活性肽联合检测在急性胰腺炎早期病情判断中的意义

目的探讨血清C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)与尿胰蛋白酶原活性肽(TAP)联合检测在急性胰腺炎(AP)早期病情判断中的意义。方法分别检测健康对照组(26例)、轻型AP组(24例)和重型AP组(21例)血清CRP、IL-6、IL-8和尿TAP水平。结果重型AP组血清CRP、IL-6、IL-8和尿TAP水平高于轻型AP组和健康对照组(P<0.05)。结论血清CRP、IL-6、IL-8与尿TAP水平随AP病情严重程度的升高而增高,四者联合检测对于AP早期病情判断具有重要应用价值。

大豆蛋白活性肽的生理功能及产品开发

本文对肽的组份、生理活性特点及应用方面进行了较为详细的阐述 ,指出对大豆肽制成各种系列产品的实际意义 。

大豆蛋白活性肽在相关行业中的应用

介绍了大豆蛋白活性肽的生理功能 ,详述了大豆蛋白活性肽的应用领域。由于大豆肽适量的分子量和适的氨基酸排序 ,赋予了其很高的营养价值和生理活性。与大分子蛋白和小分子氨基酸相比 ,肽更易被人体和动物体吸收利用 ,可通过血液直接进入人体器官内参与机能代谢 ,具有各种生理功能 ;同时 ,肽具有很好的物理性能 ,低粘度、易溶解、高浓度下流动性好、pH不受温度变化影响 ,较强的吸湿性等 ,这决定了大豆蛋白活性肽除具有很高的生理活性和营养价值外 ,还具有很好的加工性能 。

大豆蛋白活性肽培育淡水鱼种试验

大豆蛋白活性肽是以大豆蛋白为原料将产酶菌种经特殊发酵工艺所生产的一种低分子肽混合物。它具有以下几种特性：①活性肽是一种分子肽混合物,含有大豆蛋白酶解的小肽,还有产酶菌发酵分子的小肽及其代谢产物。

大豆蛋白活性肽对断奶仔猪生产性能的影响

为研究大豆蛋白活性肽对断奶仔猪生产性能的影响,选取120头28日龄杜×大×长三元杂交断奶仔猪,随机分为3组,每组4个重复,每个重复10头,试验Ⅰ组(对照组)饲喂常规日粮,试验Ⅱ组(正对照组)饲喂8%膨化豆粕,试验Ⅲ组(试验组)饲喂7%蛋白活性肽,进行为期20 d的饲养试验。结果表明,使用蛋白活性肽后,在仔猪增重方面,分别比试验Ⅰ组(对照组)和试验Ⅱ组(正对照组)提高2.07%、3.72%;死淘率分别降低34.38%、30.65%;腹泻率分别降低21.34%、35.31%。由此可见,蛋白活性肽对断奶仔猪的生产性能有良好的促进作用,可在猪生产中推广应用。

牛乳κ-酪蛋白活性多肽及其改造肽的合成和生物活性

为获得抗凝血活性更强的多肽,对牛乳κ-酪蛋白(κ-CN)的十一肽(f106-116)进行设计合成并改造,采用Fmoc固相合成策略,以Wang树脂为载体,Fmoc保护氨基酸为原料,HOBT/DIC为缩合剂,TFA/苯甲硫醚/EDT/苯甲醚裂解体系脱除保护基,经RP-HPLC纯化后得到了纯度>95%的9种多肽,经ESI-MS确证其结构。将所有的合成肽进行凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)以及凝血酶原时间(PT)活性测定,结果表明,各改造肽抗凝活性皆低于十一肽,增强牛乳κ-CN的十一肽片段的疏水性,其TT活性增强。

响应面法优化酶解制备皖鱼皮胶原蛋白活性肽工艺及产物表征

以皖鱼皮为原料,水解度(Degree of Hydrolysis,DH)为评价指标,响应面法优化酶解制备胶原蛋白活性肽工艺,为皖鱼皮胶原蛋白活性肽开发利用提供理论参考。结果表明,最佳制备工艺条件:水解温度50℃、pH 10、加酶量2000U、料液比1∶3(g/mL),在此条件下进行验证试验,水解度为28.16%。水解液经超滤和喷雾干燥后,得到的水解产物为有苦涩味的白色粉末,主要是小分子寡肽,分子量主要分布在200~1000Da,占比达到82.39%。

活性肽蛋白对猪的营养价值研究

选用(30±2)kg的三元杂种雄性仔猪4头,应用交叉套算法和全收粪法相结合的研究手段,确定不同添加水平活性肽蛋白对猪的能量、蛋白质和氨基酸消化率及有效氨基酸含量的影响。研究表明,48.55%粗蛋白质的活性肽蛋白,其赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸的表观消化率分别为83.58%、83.07%、83.38%。活性肽蛋白蛋白质的表观消化率平均值为88.02%,真实消化率的平均值为88.97%。活性肽蛋白能量的表观消化率实测值平均为63.74%,表观消化能实测值平均为12.21MJ/kg;能量的真实消化率估测值平均为77.95%,真实消化能估测值平均为14.90MJ/kg。

乳铁蛋白及其活性肽抗菌活性的研究进展

乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)是转铁蛋白家族中一种天然的铁结合糖蛋白,主要包括血清转铁蛋白和卵转铁蛋白。乳铁蛋白活性肽(Lactoferricin,Lfcin)是乳铁蛋白在胃蛋白酶作用下水解下来的由25个氨基酸残基组成的小肽。乳铁蛋白及其活性肽具有多种生物学功能,这些功能大都和它的铁离子结合特性有关。文章就近年来乳铁蛋白及其活性肽抗菌活性的研究进展作一综述。

蛋白水解活性肽的研究现状

活性肽是蛋白质经酶水解而得的产物，不仅能提供给人类营养，同时具有防病治病，调节人体生理机能的功效，本文主要就肽在体内的消化吸收，蛋白水解物的酶法生产，水解物的去苦研究，及保健与功能食品的开发等方面进行综述。

大豆蛋白活性肽在功能性食品中的应用及发展前景

本文对采用微生物发酵技术生产的大豆蛋白活性肽 ,在功能性食品中的应用及发展前景进行了研究。结合产品的功能特性及在功能性食品中的应用 ,总结了近年来国内外的应用情况及发展前景。

活性菌肽豆蛋白对鲫(Carassius auratus)促生长的作用效果及机理分析

采用不同饲料配方投喂,研究了普通豆粕(对照组)、发酵豆粕和活性菌肽豆蛋白配合饲料对鲫(Carassius auratus)生长性状影响的研究。结果表明,活性菌肽豆蛋白组的相对体重生长率高于对照组41.87%(P<0.01)和发酵豆粕组19.11%;血清中的三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和生长激素(GH)含量活性菌肽豆蛋白组最高,其次是发酵豆粕组,而对照组最低;实时定量PCR检测显示:IGFs(IGF-I和IGF-II)基因的表达量在活性菌肽豆蛋白组中最高,其次是发酵豆粕组,对照组的表达量最低。GHR基因的表达量在活性菌肽豆蛋白组和发酵豆粕组间无显著性差异,但明显高于对照组。因此,活性菌肽豆蛋白可能通过调控鲫血清GH、IGF-I、T3和T4等激素水平,及肝脏GHR和IGFs基因的表达,进而影响鲫的生长。