土壤、底泥和活性污泥中全氟化合物的高效液相色谱-串联质谱分析方法

建立了利用高效液相色谱三重四级杆串联质谱分析土壤、底泥和活性污泥中全氟化合物的分析方法.研究采用100%甲醇超声提取的方法对样品进行前处理,样品经提取后再进一步用固相萃取柱净化.结合内标法定量,可以实现对土壤、底泥和活性污泥样品中的12种常见全氟化合物的准确定量分析,且操作简单,对样品检出限可达0.01ng.g-1—0.1ng.g-1(土壤和底泥,干重,S/N=3).方法对实际样品中全氟己烷磺酸(PFHxS)、全氟辛烷磺酸(PFOS)、全氟辛烷磺酰胺(FOSA)、7种全氟羧酸(C7—C12,C14)和两种调聚酸(8∶2饱和与不饱和调聚酸)都有较好的回收结果,大部分待测物的回收率在75%—127%之间,分析结果表明三类样品中均能检测出一定量的全氟化合物.

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法检测甘薯和土壤中烯效唑残留的方法研究

采用改良的QuEChERS方法进行前处理,建立了甘薯和土壤中烯效唑残留的QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品用含0.1%乙酸的乙腈振荡提取,经C18净化剂进行基质净化,采用C18反相色谱柱分离,进行LC-MS/MS检测。结果表明:烯效唑在0.0005~1.0 mg/L浓度范围内,质量浓度与对应的峰面积间呈良好的线性关系,相关系数为0.9951~0.9959;在0.002、0.02、0.20 mg/kg 3个添加水平下,烯效唑在甘薯和土壤中的平均回收率为90.3%~106.7%,相对标准偏差为0.6%~3.6%,方法定量限为0.002 mg/kg。该方法方便快捷、精准定量、检测灵敏,适用于甘薯和土壤样品中烯效唑的检测。

高效液相色谱-串联质谱测定饮料基质中10种卡西酮类新精神活性物质

建立高效液相色谱-串联质谱法测定饮料基质中多种卡西酮类新精神活性物质的含量。样品中10种卡西酮类新精神活性物质采用乙腈提取,样品提取液经QuEChERS方法净化后,采用Shim-pack XR-ODS(100 mm×2.0 mm,3μm)色谱柱分离,以2 mmol/L乙酸铵水溶液和乙腈作为流动相,进行梯度洗脱,采用电喷雾正离子模式多反应监测,外标法定量。10种卡西酮类新精神活性物质的质量分数在0~500μg/kg范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数大于0.999,方法检出限为0.1~2μg/kg。样品在50、100、200μg/kg三个添加水平浓度下的平均回收率为77.9%~94.1%,测定结果的相对标准偏差为3.3%~11.5%(n=5)。该方法准确、简便、灵敏度高,可满足多种饮料基质中多种卡西酮类新精神物质的含量测定。

高效液相色谱法测定食品中4-己基间苯二酚残留量的方法验证

目的:验证沈阳市食品药品检验所实验室是否有开展《食品安全国家标准食品中4-己基间苯二酚残留量的测定》(GB 5009.280—2020)项目的检验能力。方法:采用高效液相色谱进行分离,荧光检测器进行检测分析,根据保留时间进行定性分析,外标法进行准确定量,同时验证方法标准曲线线性范围、检出限、定量限、精密度和回收率。结果:当4-己基间苯二酚浓度在0.02~2.00 mg·L^(-1)时,呈现出的线性关系良好,方法检出限、定量限、精密度和回收率均能满足国家标准方法要求。结论:沈阳市食品药品检验所实验室有能力进行食品中4-己基间苯二酚残留量的测定。

超高效液相色谱-串联质谱测定巧克力中7种色胺类精神活性物质

目的:建立一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱同时测定巧克力中7种色胺类精神活性物质的方法。方法:采用甲醇超声提取法提取巧克力中7种色胺类精神活性物质,通过Acquity HSS T_3(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱分离,电喷雾离子源正离子模式,多反应监测模式检测。结果:巧克力中7种色胺类精神活性物质检出限为1.10~2.40μg·kg^(-1),定量限为3.60~7.95μg·kg^(-1),在10~1 000μg·kg^(-1)线性关系良好,R~2均大于0.998 6,在低、中、高(10μg·kg^(-1)、100μg·kg^(-1)、1 000μg·kg^(-1))3种添加浓度中基质效应为94.12%~112.13%,提取回收率为89.68%~105.20%,日内、日间的相对标准偏差分别为1.22%~6.06%和2.48%~7.26%。结论:本方法灵敏度高、准确性好,可用于快速测定巧克力中7种色胺类精神活性物质。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定当归9种真菌毒素

通过优化液相色谱条件和质谱条件等,建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定当归中药材中9种真菌毒素的检测方法。样品经70%甲醇溶液超声提取,经固相萃取柱净化;采用流动相A:2 mmol/L甲酸铵0.1%甲酸水溶液;流动相B:甲醇,经C18色谱柱分离后注入质谱仪,电喷雾电离源(ESI)和多反应监测模式(MRM)进行检测,基质外标法定量。经方法学验证,9种真菌毒素标准曲线线性关系良好(R^(2)>0.9950),方法的检出限0.04~1.43μg/kg,定量限0.12~4.75μg/kg,高、中、低3个浓度加标回收率为77.8%~113.6%,测定结果的相对标准偏差为0.2%~17.7%。该检测方法应用于72批当归样品9种真菌毒素同时检测,2批当归样品检出真菌毒素,检出率为2.8%,样品中主要的污染真菌毒素为黄曲霉毒素B_(1)(AFTB_(1))、黄曲霉毒素B2(AFTB_(2))、黄曲霉毒素G_(1)(AFTG_(1))。本研究建立的方法具有预处理简便、经济等优点,适用于当归样品9种真菌毒素的快速检测。

高效液相色谱和高效液相色谱-离子阱质谱测定花生、玉米和大米中黄曲霉毒素方法比较

比较花生、玉米和大米中黄曲霉毒素(AFT)测定的两种分析方法。样品经70%甲醇溶液(含NaCl 4g/100mL)提取,自制免疫亲和柱净化。洗脱液一分为二,一份经正己烷、三氟乙酸衍生后用配有荧光检测器的液相色谱检测;另一份无需衍生用液相色谱-串联离子阱质谱检测。液相色谱测定的AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的检出限(RSN=3)分别为0.5～1.5μg/kg,相关系数在0.9979～0.9999,加标回收率50.29%～126.54%;液相色谱-串联质谱测定的AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的检出限分别为0.1～0.2μg/kg;相关系数在0.9993～0.9998,加标回收率50.38%～121.27%。结果表明液相色谱-离子阱质谱法无论在选择性还是在灵敏度上都优于高效液相色谱。

北五味子对糖尿病脑病大鼠脑中神经活性物质含量影响的在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用分析

采用在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用方法,测定了糖尿病脑病大鼠大脑海马区的8种脑递质的含量,从脑中神经活性物质的角度研究五味子改善学习记忆能力的作用机制.实验结果表明,经五味子治疗后,痴呆大鼠脑透析液中的谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、多巴胺(DA)及5-羟色胺(5-HT)的含量显著降低(P<0.05),牛磺酸(Tau)及乙酰胆碱(Ach)的含量显著升高(P<0.01),天冬氨酸(Asp)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量有降低趋势(P>0.05),8种神经活性物质的水平均向正常水平发生了调节.此结果说明五味子可能通过调节糖尿病大鼠大脑中神经活性物质的含量发挥保护中枢神经系统的作用,从而改善糖尿病脑病大鼠的学习记忆能力.Morris水迷宫实验结果表明,五味子水提物可以明显缩短糖尿病脑病大鼠的逃避潜伏期,增加穿越目标区域次数及中心区域(%)(P<0.05).

高效液相色谱-质谱联用快速筛选并鉴定黄芩甲醇提取物中抗氧化活性成分

建立了高效液相色谱-质谱联用技术快速筛选和鉴定黄芩甲醇提取物中抗氧化活性成分的方法。在黄芩甲醇提物中加入适量的二苯基三硝基苯肼(DPPH.)作为实验组,避光室温反应30 min后直接经液相色谱分析,并与不加入DPPH.的空白组进行比较。有抗氧化活性的成分因会与DPPH.反应而使峰面积减少,而不具有抗氧化活性的成分峰面积则不变。基于色谱数据可以获得有抗氧化活性组分的相对活性强度,基于质谱数据可获得活性组分的结构信息用于结构鉴定。本方法成功地从黄芩甲醇提取物中筛选并鉴定出了黄芩苷、千层纸素A-7-O-Β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷和千层纸素A4种较强的抗氧化活性成分。本方法利用HPLC-MS技术对复杂体系(如中药提取物)中小分子的分离和鉴定优势,可以直接筛选出黄芩甲醇提取物中的抗氧化活性成分,而不需要繁琐的前期分离和纯化,并且不需要仪器改装工作,有利于实现复杂体系中抗氧化活性成分的高通量筛选。

高效液相色谱-质谱联用法同步测定城市污水处理厂活性污泥中的多类抗生素残留

采用超声萃取、固相萃取及高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS),建立了活性污泥中3类共9种抗生素(包括5种磺胺类、3种四环素类及1种大环内酯类)的同时分析方法。样品经甲醇-Na2EDTA/McIlvaine缓冲液(1∶1,体积比)超声萃取,HLB固相萃取柱净化富集后,以Symmetry C18反相柱为分析柱,0.2%甲酸-乙腈为流动相梯度洗脱,采用电喷雾电离源在选择离子扫描模式下进行抗生素的定性及定量分析。方法的线性范围为0.001～1 mg/L,相关系数均大于0.99,在3个加标水平下的回收率分别为80%～108%(磺胺类)、91%～112%(四环素类)及50%～59%(大环内酯类),日内及日间相对标准偏差分别不大于7.4%和13.7%,方法检出限为1～16μg/kg。该方法被成功地应用于北京市两家污水处理厂活性污泥中的抗生素残留分析,5种目标抗生素被检出,其中磺胺类的检出量为124.9～523.3μg/kg,四环素类的检出量为166.5～2 296.4μg/kg。

超高效液相色谱-串联质谱法对癍痧凉茶中18种活性成分的定量分析

建立了超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）测定癍痧凉茶中18种活性成分的定量分析方法。癍痧凉茶样品经甲醇萃取后,采用RRHD SB-C18（100 mm×3.0 mm,1.8μm）超高效液相色谱柱进行分离,以0.5%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱。18种活性成分的定量分析采用三重四极杆串联质谱以负离子检测模式多重反应离子监测进行。实验结果表明,所建立的方法线性良好,18种目标化合物的线性相关系数（r）不小于0.996 4;分析方法的灵敏度高,检出限和定量下限分别为0.001~0.08μg/m L和0.002~0.27μg/m L;同时具备精密度高、准确度好、稳定性理想等优点。建立的分析方法用于测定11批＂黄振龙＂癍痧凉茶和8批＂平安堂＂凉茶。结果表明,＂黄振龙＂和＂平安堂＂样品中18种活性成分的浓度分别为0.7~149.8μg/m L和0.9~110.3μg/m L。采用主成分分析（PCA）对这19批次癍痧凉茶样品进行来源追踪,并对其质量的稳定性和一致性进行了评价。PCA得分图可将两个厂家的癍痧凉茶明显区分开,提示两种凉茶的配方组成及生产工艺不同,所建立的分析方法可有效用于癍痧凉茶的质量评价与控制。

应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱建立茶叶中农药残留的筛查与确证方法

基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS),使用UNIFI软件建立91种农药残留的筛查与确证方法,进行定性方法验证并应用于流通市场中茶叶的筛查检测。通过对收集的农药认证标准物质(CRM)分析,构建91种农药化合物的质谱数据库。样品经乙腈提取,固相萃取柱净化,Acquity BEH C18色谱柱分离,在MSE模式下进行全信息采集(ESI+),UNIFI软件对数据进行匹配分析。设置保留时间最大偏差为±0.1 min,精确质量偏差阈值为±5×10^-6,可识别加合物形式包括[M+H]^+、[M+Na]^+、[M+K]^+、[M+NH4]^+。参照SANTE/11813/2017指南进行定性方法学验证。在21份茶叶样品中添加混合标准溶液至4个水平(0.01、0.05、0.10、0.20 mg/kg),确定每种农药在茶叶样品中的筛查检出限(SDL),共评估了1911种农药/样品组合。发现有66种农药的SDL为0.01 mg/kg,8种农药的SDL为0.05 mg/kg,1种农药的SDL为0.10 mg/kg,3种农药的SDL为0.20 mg/kg,共有13种农药的SDL大于0.20 mg/kg。一种农药在筛查检测中存在基质抑制效应。最后,应用建立的方法分析了流通市场中22份茶叶样品的农药残留情况,从6份茶叶样品中筛查检测出6种农药化合物,经人工鉴定均为阳性。该法为茶叶中农药残留的高通量筛查检测提供了参考。

基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱的高通量血清代谢组学方法

采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC-QTOFMS)联用技术,对血清前处理进行了考察和优化,并对液-质联用分析条件进行了优化,旨在建立用于血清中广谱小分子代谢物分析的高通量强耐用代谢组学方法,以期满足大批次生物样本数代谢组学研究的要求(样本数≥400个).通过考察不同有机溶剂沉淀蛋白对血清中蛋白的去除程度及38个代表性标准品化合物的提取效果,确定采用甲醇/乙腈(体积比1∶9)沉淀蛋白法.血清和有机溶剂的体积比不小于1∶4时,达到最佳的沉淀蛋白处理效果,符合大批量样本测试的要求;预先冷藏沉淀蛋白的有机溶剂,涡旋2 min,超声1 min,加入有机溶剂后冷冻静置10 min,可以进一步提高前处理沉淀蛋白和化合物提取的效果.通过对不同流动相体系和梯度条件的考察,对液-质联用分析条件进行了优化.方法学考察结果表明,本方法重现性、精密度及稳定性均良好.对重现性和48 h稳定性数据进行变异系数分析和主成分分析法的多维分析,证明本方法在代谢组学研究中的可重复性及所得数据的可靠性.本方法高通量强耐用,每天可测定100多个血清样本(13 min测定1个样本),适用于代谢组学研究,特别是大批次生物样本的代谢组学研究.

超高效液相色谱-串联质谱法检测饲料中氯霉素、氟苯尼考药物的方法研究

根据贵州省实际情况,试验建立浓缩饲料和配合饲料中氯霉素、氟苯尼考的超高效液相色谱串联质谱快速检测方法,作为国家饲料标准对该类物质检测的有效补充,保障贵州省动源性食品安全。称取粉碎后的饲料,加适量D5-氯霉素和D3-氟苯尼考混合工作液,经乙酸乙酯提取后,分取部分上清液,氮气吹干,水复溶,正己烷脱脂,取下层溶液过0.22μm滤膜。采用C18色谱柱分离,乙腈:水(40:60)等度洗脱。结果表明,氯霉素、氟苯尼考在0.2~10.0μg/kg范围内线性良好,相关系数均大于0.99,方法检测限和定量限都为0.2μg/kg,3个加标浓度(0.2、1.0和5.0μg/kg)的氯霉素的平均回收率在80.2%~116.0%之间,氟苯尼考的平均回收率在82.4%~113.5%,相对标准偏差小于15%。试验结果完全符合饲料相关国家标准检测需求,适用于浓缩饲料和配合饲料中氯霉素、氟苯尼考定性定量检测。

柱前衍生化-超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定人血清中11种雌激素的方法学研究

目的建立一种快速、高效、灵敏度高、稳定可靠的柱前衍生化-超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,检测人血清中包括雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、2-羟基雌酮(2-OHE1)、16α-羟基雌酮(16α-OHE1)等在内的11种超微量雌激素的浓度。方法采用叔丁基甲醚液-液萃取法,并通过丹磺酰氯对萃取后样品进行衍生化处理,以同位素标记的雌酮-13C作为内标,采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),0.1%甲酸水-乙腈为流动相,以0.3 mL·min^-1流速等度洗脱,柱温40℃,进样量5μL,在电喷雾离子源(ESI)正离子模式下扫描,多重反应监测(MRM)下测定血清中各类雌激素浓度,分析时间5 min。结果丹磺酰氯衍生化法可大幅度提高各种雌激素在ESI源下的离子化效率,血清中11种雌激素的线性范围为20~2000 pg·mL^-1,定量下限均到达20 pg·mL^-1,提取回收率均可达到70%,批内、批间精密度与准确度均在15%以内,血清样本室温放置24 h、反复冻融3次、-4℃进样盘放置24 h、70℃放置1个月均稳定,满足生物样品测定要求。结论该方法分析时间短、灵敏度高、稳定性好、专属性强,可用于临床血清样本中雌激素代谢网络的定量分析。

高效液相色谱法测定多巴胺-β-羟化酶活性

目的建立一种通过高效液相色谱法测定酶促反应的产物真蛸胺(Octopamine)的量来确定大鼠血清及脑组织中多巴胺-β-羟化酶活性的方法。方法采用ODS柱,流动相为缓冲液(0.02mol/L柠檬酸三钠和0.05mol/L磷酸氢二钠)∶甲醇=85∶15的溶液,流速1.0mL/min。结果待测物真蛸胺标准溶液的保留时间和峰面积的RSD分别在0.29～0.67之间和0.09～0.36之间,重现性好;回收率在85.3%～95.4%之间,检测限1.58pmol/mL;真蛸胺的线性范围在10～160pmol/mL之间,相关系数为0.9996。结论该方法为神经毒理学、药理学等研究提供了一个简单灵敏、稳定可靠的方法。

基于超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱技术的柚果实不同成熟期生物活性成分的靶向筛查与定量

为探究柚果实生长过程中生物活性成分的动态变化规律,选取了西南地区6种特色柚果(东风早柚、琯溪蜜柚、长寿沙田柚、梁平柚、龙安柚和丰都红心柚),利用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱技术,靶向筛查和定量分析了5个成熟期、3个重要部位(外皮层、内皮层和果肉)中主要活性成分。结果表明,6~11月期间,在6个品种柚果实中共筛查出72种活性成分,包括34种类黄酮,8种酚酸、3种类柠檬苦素、5种生物碱和22种香豆素。对筛查出的活性成分进行了定量分析,共计26种,包括11种类黄酮(柚皮苷、维采宁-2和野漆树苷为主)、8种香豆素(橙皮内酯水合物、橙皮内酯、橙皮油素、6′,7′-二羟基香柠檬亭、6′,7′-环氧香柠檬亭为主)、4种酚酸(香草酸、对香豆酸、阿魏酸为主)和3种类柠檬苦素(柠檬苦素和诺米林为主)。随着成熟度的增加,外皮层和内皮层的柚皮苷含量均呈现先升高后降低趋势,且在生长膨大期达到最大值,果肉的柚皮苷和3个部位的维采宁-2和野漆树苷整体呈现下降趋势。较果肉,柚果实外皮层和内皮层有更丰富的香豆素,3个部位的香豆素含量随着成熟度大多呈现下降趋势。3个部位的类柠檬苦素含量随着成熟期均呈现降低的趋势,大多在膨大期附近达到最高值。该研究结果明确了柚果果实不同成熟期的生物活性成分差异,为柚果功能食品的开发、品种选育及深加工领域提供可靠的数据支撑。

超高效液相色谱-质谱/质谱串联法快速测定苦碟子注射液中10种活性成分的含量

目的建立快速、灵敏的超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定苦碟子注射液中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、单咖啡酰酒石酸、菊苣酸、Ixerin Z和11,13α-dihydroixerin Z的含量。方法采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.7μm）;以乙腈-0.5%甲酸水流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1,柱温40℃;在ESI负离子模式下,采用多反应离子监测（MRM）扫描方式进行检测。结果 10种待测成分在5 min内完全分离;线性范围内呈良好的线性关系（r〉0.9997）,加样回收率在96.6%-101.0%;RSD值均〈2.7%。结论该方法简便、准确、重复性好,且能同时测定苦碟子注射液中10种活性成分,可用于苦碟子注射液质量的控制。

土壤中典型人工甜味剂的前处理方法优化及高效液相色谱-串联质谱分析

优化了同时提取土壤中4种典型人工甜味剂的前处理与净化方法,并结合高效液相色谱-串联质谱（HPLCMS/MS）技术,建立了一种快速高效的分析方法。样品采用25 mL0.01 mol/L醋酸-醋酸钠溶液（pH4）提取2次,每次提取20 min;萃取样品进一步采用CNW Poly-Sery PWAX固相萃取小柱净化浓缩;最后采用HPLC-MS/MS进行测定。在干燥土壤中添加1、10、100μg/kg标准品时,4种甜味剂的平均回收率为86.5%-105%,日内精密度（RSD）≤5.94%,日间精密度（RSD）≤6.53%;在1-100μg/kg范围内的线性关系良好（r2〉0.995）;方法的检出限为0.01-0.21μg/kg,定量限为0.03-0.70μg/kg。利用该方法对天津某污水灌溉的农田土壤进行了分析测定,结果表明该方法快捷可靠,可用于土壤中人工甜味剂的环境调查。