活泼酯法合成绿原酸人工抗原及其鉴定

目的人工合成绿原酸(chlorogenic acid,CGA)完全抗原并进行鉴定,为制备绿原酸单克隆抗体奠定基础。方法采用活泼酯法,将绿原酸分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和卵白蛋白(ovalbumin,OVA)进行偶联,用紫外扫描法、SDS-PAGE电泳法进行鉴定;间接ELISA法测定免疫小鼠血清抗体效价。结果经紫外扫描法和电泳法检测,CGA与载体蛋白成功偶联,免疫小鼠后获得的多抗血清效价达到1×106。结论成功合成绿原酸完全抗原,可用于绿原酸单克隆抗体的制备。

两种方法制备氟苯尼考人工抗原及其鉴定

目的:通过两种不同方法制备氟苯尼考人工抗原并将制备的人工免疫原用于动物免疫。方法:分别采用琥珀酸酐法和强碱水解法制备两种人工半抗原(HP1和HP2)。将两种半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)通过活泼酯法和戊二醛法进行偶联,制备人工免疫原和人工包被原,分别命名为HP1-BSA、HP1-OVA、HP2-BSA和HP2-OVA。分别将两种方法合成的人工免疫原用于动物免疫,用两种人工包被原对获得的两种抗血清进行评价。结果:经质谱、紫外光谱表征,氟苯尼考两种半抗原均合成成功,并且与载体蛋白的偶联比分别为12.4:1(HP1-BSA)、8.5:1(HP1-OVA)、21.8:1(HP2-BSA)、15.4:1(HP2-OVA)。动物实验结果表明,获得的针对HP1-BSA的抗血清与HP2-OVA包被原结合最为灵敏。结论:活泼酯法和戊二醛法均成功制备了氟苯尼考人工抗原。

动物源食品中磺胺二甲嘧啶人工抗原的合成研究

该文以丁二酸酐为间隔臂合成了人工半抗原,利用薄层层析法和高效液相色谱法进行半抗原的鉴定,通过活泼酯法合成了人工抗原,用Bradford法测定蛋白质含量,用紫外分光光度法测定偶联率。分析结果为:通过高效液相色谱法测定半抗原,显示合成成功,用紫外分光光度法测定其与BSA和OVAde偶联率分别为15和4。

莠去津人工抗原的合成与鉴定

以除草剂莠去津原药、巯基丙酸等为起始原料,经过亲核取代反应合成了莠去津的半抗原:2-硫丙酸基-4-乙胺基-6-异丙胺基-1,3,5-三嗪,并用UV、IR以及NMR等手段证明合成成功,用活泼酯法将半抗原与载体蛋白成功的进行偶联,根据紫外吸收的加和性原理,比较测定半抗原、载体蛋白及偶联物的吸光值,并计算出半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)的结合比为16:1和6:1。

海洋毒素大田软海绵酸完全抗原的制备与分析

为了建立大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)的免疫学检测方法,利用活泼酯法将OA分子中的羧基与载体蛋白上的氨基偶联,人工制备OA的免疫抗原(OA-IgG)和检测抗原(OA-BSA),经电泳、动物实验及ELISA法进行了鉴定,完全抗原的偶联成功,为利用杂交瘤技术制备OA的单克隆抗体和海产品OA免疫学检测方法奠定了良好的基础。

动物组织中氟苯尼考残留的半定量快速检测胶体金试纸条的研制——氟苯尼考抗原的合成与鉴定

[目的]为动物组织中氟苯尼考残留快速检测试纸条的制备奠定基础。[方法]采用琥珀酸酐法制备氟苯尼考人工半抗原,用活泼酯法将氟苯尼考人工半抗原与牛血清蛋白进行偶联制备氟苯尼考人工抗原。紫外光谱法和光谱分析法对氟苯尼考人工抗原FFCHS-BSA进行鉴定。[结果]与BSA和FFC相比,FFC-HS-BSA的最大吸收峰发生了变化,曲线形状也发生了改变,FFC-HS与BSA的偶联比为18.9∶1。[结论]FFC-HS-BSA人工抗原的合成是成功的,其偶联比在最适范围内。

软骨藻酸多克隆抗体的制备

为建立软骨藻酸(DA)的免疫检测法,本研究采用活泼酯法将DA与载体蛋白KLH(BSA)偶联形成完全免疫抗原(包被抗原),并通过紫外光谱扫描证明偶联成功与否。用完全免疫抗原DA-KLH对新西兰白兔进行免疫,间接ELISA法测定血清效价。实验结果表明偶联成功,经过19周免疫后血清效价达到1:1600,纯化后获得效价为1:800的多克隆抗体,同时也间接证明了合成的完全抗原具有免疫原性,为以后建立免疫分析法奠定了基础。

人血凝结因子Xa发色底物的合成研究

利用混合酸酐法和活泼酯法及廉价的试剂较方便地合成了人血凝结因子 Xa的一种发色底物。

玉米赤霉烯酮多克隆抗体的制备及特性分析

合成玉米赤霉烯酮半抗原,应用液相色谱-质谱联用法进行鉴定,并采用活泼酯法将半抗原与载体蛋白OVA或BSA偶联,分别作为免疫原或包被原,并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和紫外扫描法鉴定偶联效果,免疫3只BALB/c小鼠,制备玉米赤霉烯酮多克隆抗体。结果表明:抗血清效价最高达1∶32 000,以此多抗建立的玉米赤霉烯酮间接竞争标准曲线IC50为39.8ng/mL,IC10为0.71ng/mL,多抗与玉米赤霉烯酮类似物β-zearalenol、zear-alanone、α-zearalanol、β-zearalanol交叉反应率分别为4.80%,3.07%,0.96%,0.09%。说明试验成功制备了玉米赤霉烯酮人工抗原及高特异性多克隆抗体。

三唑磷多克隆抗体的制备及鉴定

采用活泼酯法将三唑磷半抗原(TZPM-Hap)与牛血清蛋白(BSA)和卵血清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原(TZPM-A-BSA)和包被抗原(TZPM-A-OVA),经紫外扫描证明人工抗原合成成功。用免疫抗原TZPM-A-BSA免疫雌性Balb/c小鼠,获得了特异性的三唑磷多克隆抗体。以所获得的抗体建立间接竞争酶联免疫吸附分析法,三唑磷多抗的IC50值为0.01μg/mL;交叉反应表明,三唑磷的特异性多抗与其他有机磷农药结构类似物无明显的交叉反应。

有机磷农药三唑磷人工抗原合成及鉴定

[目的]合成并鉴定有机磷农药三唑磷人工抗原。[方法]采用活泼酯法将三唑磷半抗原(TZPM-Hap)与牛血清蛋白(BSA)和卵血清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原(TZPM-A-BSA)和包被抗原(TZPM-A-OVA),并通过紫外扫描和动物免疫试验对其进行了鉴定。[结果]紫外扫描和动物免疫试验结果表明人工抗原合成成功。[结论]为制备单抗及开发快速、简便的三唑磷ELISA试剂盒奠定了基础。

毒死蜱完全抗原的合成与表征

在碱性条件下将毒死蜱原药与3-巯基丙酸反应,得到毒死蜱半抗原(O,O二乙基-O-[3,5-二氯-6-(2-羧乙基)硫代-2-吡啶基]硫代磷酸酯),采用活泼酯法将生成的半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原。红外光谱、气相色谱-质谱联用仪及紫外光谱测试结果表明,所合成的物质均为目标产物。本方法简便易行,为利用免疫传感器快速检测有机磷农药毒死蜱残留量解决了一个关键技术问题。