化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺法治疗急性脑梗死疗效及NLRP3信号通路研究

目的观察化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺法治疗急性脑梗死(ACI)的疗效,以及对患者神经功能和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体信号通路的影响。方法80例ACI患者采用随机数字表法分为两组,对照组采用化浊解毒活血通络方治疗,观察组采用化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺治疗。观察两组疗效、神经功能、残疾程度、NLRP3炎性小体信号通路相关分子mRNA表达、炎症因子和氧化应激的差异。结果观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。两组治疗后中医证候积分、美国国立卫生院脑卒中量表(NIHSS)、改良RANKIN量表(mRS)评分,外周血单核细胞NLRP3 mRNA、凋亡相关点样蛋白(ASC)mRNA、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)mRNA表达,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)水平较治疗前降低(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)水平较治疗前增高(P<0.05)。观察组治疗后中医证候积分、NIHSS、mRS评分,外周血单核细胞NLRP3 m RNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA表达,血清TNF-α、IL-6、MDA水平低于对照组(P<0.05),SOD水平高于对照组(P<0.05)。结论化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺法可更有效抑制NLRP3炎性小体信号通路,缓解炎症反应和氧化应激,改善神经功能,减轻残疾程度,提高临床疗效。

基于化浊解毒活血通络法治疗浊瘀毒损型脑梗死的疗效及对炎症反应和复发率的影响

目的观察化浊解毒活血通络法治疗浊瘀毒损型脑梗死的临床疗效及对炎症相关因子、同型半胱氨酸(Hcy)、复发率的影响。方法选择2018年1月—2019年6月河北省沧州中西医结合医院与河北省中医院脑病科收治的120例急性脑梗死患者,按照随机平行分组法分为对照组与观察组各60例。对照组采用神经科常规治疗,观察组在常规治疗基础上按照"化浊解毒活血通络法"给予中药及普通针刺治疗,2组均连续治疗2周。观察2组患者治疗前后美国国立卫生院卒中评分(NIHSS)、中医症状积分、血清炎症相关因子[白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]和Hcy水平变化情况,记录2组治疗安全性,并随访12个月观察2组患者的复发情况。结果 2组治疗后的NIHSS评分、中医症状积分及血清IL-4、TNF-α、hs-CRP、Hcy水平均明显低于治疗前(P均<0.05),且观察组各指标均明显低于对照组(P均<0.05)。2组均未发生严重不良反应。随访12个月,观察组复发率为3.3%(2/60),低于对照组的15.0%(9/60),差异有统计学意义(P<0.05)。结论对浊瘀毒损型脑梗死施以化浊解毒活血通络法治疗可更明显减轻患者的神经功能缺损程度,改善中医证候,并能减轻炎症反应及降低复发率。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠ZO-1和occludin表达的影响

目的观察化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠紧密连接蛋白ZO-1和occludin表达的影响,探讨其神经保护机制。方法以改进后的Zea-Longa线栓法制备局部梗死性脑缺血再灌注损伤模型,以Longa评分法进行神经功能缺损评分,光镜下观察脑组织形态改变,免疫组化法观察ZO-1和occludin的分布及表达,RT-PCR法评测其在各组大鼠缺血侧脑组织中表达量。结果免疫组化结果显示,与假手术组相比,模型组ZO-1表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,各用药组ZO-1的表达水平均有升高(P<0.05),其中以尼莫地平组和中药高剂量组最为明显。与假手术中相比,模型组occludin表达明显减弱(P<0.05),与模型组相比,各用药组occludin表达均有增加(P<0.05);中药低剂量组、中剂量组、高剂量组表达依次增加(P<0.05),高剂量组与尼莫地平组差别不明显(P>0.05)。RT-PCR法显示:与假手术组相比,模型组ZO-1及occludin表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,各用药组ZO-1及occludin的表达水平均有升高(P<0.05),其中以尼莫地平组和高剂量组最为显著。结论化浊解毒活血通络方可能通过增加ZO-1和occludin的表达、调节血脑屏障通透性等机制,发挥神经保护作用。

化浊解毒活血通络法对血管性痴呆小鼠学习记忆能力的影响

目的观察化浊解毒活血通络法对血管性痴呆小鼠学习记忆能力的影响。方法将60只昆明小鼠随机分为模型组、阳性对照组、中药治疗组、假手术组,每组15只,前3组采用反复脑缺血再灌注法制备血管性痴呆模型。造模成功后假手术组、模型组灌服生理盐水,阳性对照组灌服脑复康液,中药治疗组给予化浊解毒活血通络中药灌服。治疗后对各组小鼠采用跳台试验进行行为学测试。结果与模型组相比,化浊解毒活血通络法能够提高血管性痴呆小鼠的行为学成绩。结论化浊解毒活血通络法可以改善血管性痴呆小鼠的学习记忆能力。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤小鼠血清IL-6和TNF-α水平的影响

目的:观察化浊解毒活血通络方对小鼠脑缺血再灌注损伤的局部炎症反应的影响。方法:将50只昆明小鼠随机均分为模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、尼莫地平组、假手术组。采用双侧颈总动脉结扎法合并尾端放血制造脑缺血再灌注模型。手术造模成功分别给予高、低剂量组化浊解毒活血通络方中药灌服。在治疗后用放免法检测各组小鼠血清中IL-6、TNF-α的表达水平。结果:化浊解毒活血通络方高剂量组小鼠中IL-6和TNF-α的表达水平明显低于模型组,与假手术组及尼莫地平组比较无统计学意义。结论:化浊解毒活血通络方可以抑制小鼠脑缺血再灌注损伤时炎症细胞因子的表达,减少白细胞的浸润,降低脑缺血再灌注损伤的程度。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠PKCδ、PKCθ和PKCε表达的影响

目的探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠蛋白激酶(PK)Cδ、PKCθ和PKCε表达的影响及其神经保护机制。方法以改进后的Zea-Longa线栓法制造局部梗死性脑缺血再灌注模型。随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组,中药高剂量组、中剂量组、低剂量组,以Longa评分法进行神经功能评分,免疫组化法观察PKCδ、PKCθ和PKCε的分布及表达。Western印迹法评测其在各组大鼠缺血侧脑组织中的表达量。结果免疫组化结果显示:与假手术组相比,模型组PKCδ、PKCθ表达升高,PKCε表达降低(P<0.05),与模型组相比,各用药组PKCδ、PKCθ均降低,PKCε表达升高(P<0.05),其中以中药高剂量组及尼莫地平组较为明显(P<0.05)。Western印迹法显示:与假手术组相比,模型组PKCδ、PKCθ表达升高,PKCε表达降低(P<0.05),与模型组相比,各用药组PKCδ、PKCθ均降低,PKCε表达升高(P<0.05),其中以中药高剂量组及尼莫地平组较为明显(P<0.05)。结论化浊解毒活血通络方可能通过降低PKCδ、PKCθ的表达、上调PKCε的表达,降低CIRI的程度。

化浊解毒活血通络法治疗脑梗死浊瘀毒损证疗效及对患者神经元特异性烯醇化酶及S100蛋白的影响

目的:研究化浊解毒活血通络法治疗脑梗死浊瘀毒损证患者疗效及对神经元特异性烯醇化酶(NSE)及S100蛋白的影响。方法:选择210例脑梗死浊瘀毒损证患者作为研究对象,利用随机数表法将其分为观察组和对照组,每组105例。对照组采用常规西医治疗,观察组在西医常规治疗的基础上使用化浊解毒活血通络法进行治疗。对比分析两组患者治疗的总有效率、日常生活活动能力(ADL)评分、Fugl-Meyer运动功能评分和血清中NSE、S100蛋白水平,另外观察治疗期间不良反应发生率。结果:观察组的总有效率94.29%高于对照组74.29%,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后2周和治疗后4周ADL评分及Fugl-Meyer运动功能评分有所提高,与治疗前比较差异有统计学意义(均P<0.05)。与对照组相比,观察组治疗后2周、治疗后4周ADL评分及Fugl-Meyer运动功能评分更高,差异有统计学意义(均P<0.05)。两组治疗后2周和治疗后4周血清NSE和S100蛋白水平较治疗前有所下降,差异有统计学意义(均P<0.05)。与对照组相比,观察组治疗后2周、治疗后4周NSE和S100蛋白水平更低,差异有统计学意义(均P<0.05)。观察组不良反应发生率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:化浊解毒活血通络法治疗脑梗死浊瘀毒损证疗效较好,可改善患者日常生活能力和运动能力,抑制NSE和S100蛋白表达水平,且安全性较好。

化浊解毒活血通络法对脑缺血再灌注损伤小鼠行为学及海马CA1区神经细胞形态学的影响

目的:观察应用化浊解毒活血通络法对脑缺血再灌注损伤小鼠学习记忆能力及海马CA1区神经细胞形态学的影响。方法:将50只昆明小鼠随机分为模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、尼莫地平组、假手术组。前4组采用双侧颈总动脉结扎法合并尾端放血制造脑缺血再灌注模型,假手术组只分离颈总动脉不结扎。手术造模成功后假手术组、模型组灌服生理盐水,尼莫地平组灌服尼莫地平液,中药高剂量组、中药低剂量组分别给予高、低剂量的化浊解毒活血通络中药灌服。在治疗后进行行为学测试,并通过光镜观察小鼠海马CA1区的病理形态学改变。结果:与模型组相比,化浊解毒活血通络法能提高脑缺血再灌注损伤小鼠的学习成绩,改善小鼠海马CA1区的神经细胞形态学表现。结论:化浊解毒活血通络法对小鼠的脑缺血再灌注损伤有保护作用。

常规治疗联合化浊解毒活血通络法治疗浊瘀毒损型脑梗死的临床疗效观察

目的观察常规治疗联合化浊解毒活血通络法治疗浊瘀毒损型脑梗死的临床疗效。方法选取2018年1月-2020年7月沧州市中心医院收治的102例浊瘀毒损型脑梗死病人,采用随机数字表将病人分为对照组(给予常规治疗)和试验组(在常规治疗基础上应用化浊解毒活血通络法),各51例。比较两组干预前和干预后(治疗14 d后)美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分和中医证候积分、肿瘤坏死因子和白细胞介素4含量;两组用药后12个月并发症发生率及疾病复发率。结果与干预前比较,两组NIHSS评分、中医证候积分、肿瘤坏死因子、白细胞介素4含量均降低,差异均有统计学意义(P<0.001),且试验组均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.001)。试验组用药后12个月并发症发生率低于对照组,差异有统计学意义(37.25%与70.59%,P=0.001)。结论浊瘀毒损型脑梗死病人在常规治疗基础上应用化浊解毒活血通络法进行干预,能有效改善神经功能及中医证候,降低机体炎症状态。

活血通腑泄浊法治疗脑梗塞50例临床观察

以活血通腑泄浊法治疗痰热腑实、风痰上扰型脑梗塞 ,与常规西药治疗进行对照观察 ,治疗组总有效率为 92 .0 % ,对照组总有效率为 83.3% ,治疗组明显优于对照组 (P <0 .0 5 ) ,两组红细胞压积、全血粘度比和血浆粘度比均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,表明通腑泄浊活血疗效较好。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠LPS及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:观察化浊解毒活血通络方对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护作用及对LPS及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、化浊解毒活血通络方低(TCM-L)、中(TCM-M)、高(TCM-H)剂量组,每组12只。Longa法结合既往研究经验制备永久性大脑中动脉梗塞大鼠模型。化浊解毒活血通络方低、中、高剂量组大鼠灌胃给予6.25、12.5、25 g/kg化浊解毒活血通络方,假手术与模型组灌胃给予2 ml生理盐水,给药后72 h检测大鼠神经功能缺失情况;HE染色观察脑、肠组织病理改变;TUNEL检测脑组织凋亡;TTC染色观察脑梗死面积;鲎试剂检测血清LPS浓度;ELISA检测血清DAO、脑组织IL-1β、TNF-α表达;Western blot检测脑组织TLR4、NF-κB、肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达;RT-PCR检测脑组织MyD88、IRAK、TRAF6 mRNA表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺失加重,脑梗死面积增大,脑组织细胞凋亡增加,血清DAO、脑组织IL-1β、TNF-α表达升高(P<0.05),血清LPS表达升高(P<0.05),肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达降低,脑组织TLR4、NF-κB、MyD88、IRAK、TRAF6蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,化浊解毒活血通络方各组大鼠神经功能缺失减轻,脑梗死面积减小,脑组织细胞凋亡减少,血清DAO、脑组织IL-1β、TNF-α表达降低(P<0.05),血清LPS表达降低(P<0.05),肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达升高,脑组织TLR4、NF-κB、MyD88、IRAK、TRAF6蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05),TCM-H组最为显著,血清LPS表达下降(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可改善CIRI,其机制可能与降低LPS含量、保护肠道屏障、调控TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应有关。

活血化浊通汤联合马来酸桂哌齐特注射治疗缺血性头晕40例

目的探讨活血化浊通汤联合马来酸桂哌齐特注射治疗缺血性头晕的临床疗效。方法选取我院2014年4月—2015年10月间接收的80例缺血性头晕患者,随机分为对照组和观察组,每组各40例,对照组采用马来酸桂哌齐特注射治疗,观察组采用活血化浊通汤联合马来酸桂哌齐特注射治疗,比较两组治疗效果。结果观察组患者有效率92.5%高于对照组患者75%,不良反应发生率2.5%低于对照组不良反应发生率7.5%,两组比较差异明显,P<0.05,差异具有统计学意义。结论活血化浊通汤联合马来酸桂哌齐特注射治疗缺血性头晕,能够有效增加脑部血液流量,提高治疗的有效率,减少不良反应的发生率,总体治疗效果显著,故该方法值得在临床中推广使用。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑水通道蛋白的影响

目的观察化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑水肿的治疗作用,并探索其改善脑水肿是否与调节水通道蛋白(aquaporin,AQP)的变化有关。方法选择健康清洁级成年雄性SD大鼠,采用随机数字表法随机分为假手术组和模型组。假手术组只将线栓插入10 mm即拔出。模型组采用大脑中动脉栓塞再灌注法造模。造模成功后再次随机分为模型组、化浊解毒活血通络方高剂量组、化浊解毒活血通络方低剂量组和尼莫地平组。化浊解毒活血通络方高剂量组和低剂量组于造模后连续3天分别给25 g/(kg·d)、6.25 g/(kg·d)灌胃,尼莫地平组于造模后连续3天给10 g/(kg·d)灌胃,模型组及假手术组连续3天接受等剂量生理盐水。大鼠脑缺血再灌注3天后解剖取材,采用改良神经功能缺损评分对大鼠进行神经功能评估;苏木精—伊红染色观察脑组织病理改变;TTC染色观察脑梗死体积;测干湿重比检测脑水肿;用蛋白免疫印迹法检测AQP-4、AQP-9蛋白的表达;逆转录聚合酶链式反应检测AQP-4、AQP-9mRNA表达。结果(1)与假手术组相比,模型组神经功能评分显著升高(P<0.01),病变侧脑组织变性坏死程度显著升高(P<0.05),脑梗死面积显著升高(P<0.05),脑组织含水量显著升高(P<0.05),脑组织AQP-4、AQP-9mRNA表达明显升高(P<0.05),脑组织AQP-4、AQP-9蛋白表达明显升高(P<0.05)。(2)与模型组相比,中药各组和尼莫地平组神经功能评分显著降低(P<0.05),中药各组和尼莫地平组病变侧脑组织变性坏死程度显著降低(P<0.05),中药各组和尼莫地平组脑梗死面积显著减小(P<0.05),中药各组和尼莫地平组脑组织含水量显著降低(P<0.05),中药各组和尼莫地平组脑组织AQP-4、AQP-9mRNA表达明显降低(P<0.05),中药各组和尼莫地平组脑组织AQP-4、AQP-9蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论化浊解毒活血通络方能显著改善脑水肿,其作用机制可能与抑制AQP4、AQP9的表达有关。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠氧化损伤和炎症因子的影响

目的:观察化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其抗氧化、抗炎性损伤的作用机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,中药高、中、低剂量组,每组10只。采用改良线栓法制备大脑中动脉阻塞/再灌注大鼠模型,造模24 h后,中药高、中、低剂量组给予相应浓度化浊解毒活血通络方灌胃,连续给药14 d,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水。观察各组大鼠一般情况,记录大鼠体质量;评定神经功能缺损程度;HE染色观察脑组织结构变化;免疫荧光检测梗死侧脑组织活性氧(ROS)含量;比色法检测大鼠血清中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠一般情况较差,取材前体质量显著下降(P<0.05),神经功能缺损评分显著升高(P<0.05),梗死侧脑组织有大量细胞变形、坏死、液化,伴有炎症细胞浸润,脑组织ROS荧光范围和强度明显增加,血清MDA、IL-1β和IL-18含量均显著升高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠一般情况有所改善,取材前体质量显著增加(P<0.05),中药高剂量组神经功能缺损评分显著下降(P<0.05),各给药组脑组织病理状态有所改善,脑组织ROS荧光范围均有所减少,荧光强度均有不同程度的减弱,各给药组血清MDA含量均显著下降(P<0.05),中药高、中剂量组SOD活性显著提升(P<0.05),血清IL-1β和IL-18含量均显著下降(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可能通过减少大鼠脑组织ROS含量和血清MDA含量,增加SOD活性,减少脑组织炎症细胞浸润和炎症因子IL-1β、IL-18的表达而发挥脑保护作用,且药物剂量与疗效总体呈现量效关系。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的影响

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及对线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导激酶1(PINK1)、Parkin的影响。方法:将48只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组(化浊解毒活血通络方)、抑制剂组[3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制剂],每组12只。按照Longa法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,造模成功给药3 d后,行大鼠神经功能缺损评分,HE染色观察脑组织病理改变,TTC染色观察脑梗死体积,Western Blot检测脑组织PINK1、Parkin蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测脑组织中PINK1、Parkin mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分和脑梗死体积显著增加(P<0.05),病理损伤加重,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,中药组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积显著减少(P<0.05),病理损伤减轻,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组及中药组比较,抑制剂组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积显著增加(P<0.05),病理损伤加重,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠具有脑保护作用,其机制可能与上调线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达相关。

基于JNK信号通路调控细胞自噬探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究化浊解毒活血通络方通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路调控神经细胞自噬减轻脑缺再灌注损伤的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组、大脑中动脉阻塞/再灌注(MCAO/R)组(模型组)、化浊解毒活血通络方(中药)组(25.0 g·kg^(-1))、JNK抑制剂SP600125(SP)组(5 mg·kg^(-1))、中药+SP组和JNK激动剂Anisomycin(Ani)组(15 mg·kg^(-1))6组。造模24 h后中药组和中药+SP组给予中药汤剂灌胃,连续给药3 d,其余各组灌胃等容积蒸馏水。神经功能评分评估神经功能缺损程度,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色确定脑梗死体积;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织结构变化;尼氏染色检测神经元损伤;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡;透射电镜观察自噬小体超微结构;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑组织中微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因5(Atg5)、自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin1)、p62、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、JNK、磷酸化(p)-JNK和c-Jun的蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠脑组织中LC3A/B、Beclin1、p62、Atg5、Bcl-2、JNK、c-Jun mRNA表达量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高(P<0.05),脑组织梗死体积明显变大(P<0.05),海马区及其周围脑组织形成典型梗死表现,皮层有大量神经元细胞变性、坏死、液化、固缩和深染,有炎性细胞浸润,电镜下可见炎症细胞浸润,线粒体、溶酶体、自噬体和自噬溶酶体严重肿胀。细胞凋亡情况较重,TUNEL阳性细胞明显增加(P<0.05),脑组织内神经元核膜和核仁模糊,突起不连续,胞质尼氏体色浅且数量减少。Western blot结果显示大鼠脑组织LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、p-JNK、c-Jun蛋白表达明显升高(P<0.05),p62和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),Real-time PCR结果显示LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、c-Jun mRNA表达明显增加(P<0.05),p62、Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,中药组、SP组与中药+SP组大鼠神经功能缺损评分均明显降低(P<0.05),梗死体积明显缩小(P<0.05),脑组织病理状态均有所改善,尤以中药组改善明显;线粒体M嵴丰富,基本正常,内质网轻度扩张,高尔基体轻度肿胀,细胞核核膜轻度融合,溶酶体、自噬小体、自噬溶酶体可见,但数量较少,TUNEL阳性细胞明显减少(P<0.05),凋亡情况有所减轻,尤以中药组最为显著,脑组织神经元核仁、核膜可辨,胞浆尼氏体有一定程度的脱失,但较模型组明显减轻。Western blot结果显示中药组、SP组与中药+SP组LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、p-JNK、c-Jun蛋白表达明显降低(P<0.05),中药组和SP组p62蛋白表达明显升高(P<0.05),中药组和中药+SP组Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。Real-time PCR显示中药组、SP组和中药+SP组大鼠脑组织LC3A、LC3B、Beclin1、Atg5、JNK、c-Jun mRNA表达明显降低(P<0.05),p62 mRNA表达明显增加(P<0.05);中药组和中药+SP组Bcl-2 mRNA表达明显增加(P<0.05)。Ani组评分明显升高(P<0.05),梗死体积显著增加,神经元细胞坏死情况加重,炎性浸润明显,神经元核膜融合、异型凸起,异染色质增加,边缘聚集,线粒体肿胀严重,内质网扩张,溶酶体增加,胞浆内囊泡增多,可见自噬体和自溶酶体,TUNEL阳性细胞增加(P<0.05),凋亡情况较重,尼氏小体数量明显减少,脱失较重,着色浅,核仁核膜模糊;Ani组Atg5、c-Jun、JNK mRNA表达增加(P<0.05),Beclin1、p62、Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与中药组和SP组比较,Ani组LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、p-JNK、c-Jun蛋白表达明显升高(P<0.05),p62、Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05)。与中药组比较,SP组和中药+SP组大鼠脑组织JNKmRNA表达降低(P<0.05);Ani组LC3A、LC3B、Atg5、c-Jun、JNK mRNA表达增加(P<0.05),Bcl-2表达明显降低(P<0.05)。与SP组比较,Ani组Atg5、c-Jun、JNK mRNA表达明显升高(P<0.05),Beclin1、p62、Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可上调LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、p-JNK、c-Jun蛋白的表达,下调p62、Bcl-2蛋白表达;提高LC3A/B、Beclin1、Atg5、JNK、p-JNK、c-Jun mRNA表达,降低p62、Bcl-2 mRNA表达,表明化浊解毒活血通络方可通过JNK信号通路抑制自噬减少大鼠缺血/再灌注损伤。

化浊解毒活血通络方对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法:采用改良的Zea-Longa线栓法通过阻断大鼠右侧大脑中动脉制造局部梗死性脑缺血再灌注损伤模型。运用TUNEL法标记凋亡细胞统计阳性细胞数并计算凋亡率,应用RT-PCR法检测各组大鼠缺血侧脑组织中Bcl-2及Bax mRNA的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组及各用药组细胞凋亡率、Bax表达均明显上升(P<0.05),Bcl-2明显降低(P<0.05);与模型组比较,中药各组及阿司匹林组细胞凋亡率下降(P<0.05),Bcl-2基因表达升高,Bax基因表达降低(P<0.05);在调高Bcl-2基因表达方面,中药3组效果不如阿司匹林组(P<0.05),中药3组疗效与浓度呈正相关;在下调Bax基因表达方面,阿司匹林组及中药中、高剂量组3组表达无显著性差异,中药低剂量组Bax基因表达较其余治疗3组明显较高(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络法可以通过上调细胞凋亡基因Bcl-2、下调Bax表达从而降低细胞凋亡率,发挥其脑保护作用。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠模型血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用改良的线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型。采用PCR法检测缺血侧脑组织VEGF表达。结果:模型组VEGF表达含量高于假手术组(P<0.05);中药中、高剂量组VEGF表达含量均高于模型组(P<0.05);且中药高剂量组效果优于中药中剂量组(P<0.05);中药低剂量组VEGF表达含量与模型组相比无明显差异。结论:化浊解毒活血通络方可以明显促进脑缺血再灌注损伤大鼠模型VEGF的表达,存在一定的剂量相关性。

化浊解毒活血通络方对大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3表达的影响

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能评分及Caspase-3表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法:采用改良线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型。运用Longa法进行神经病学评分,用光镜观察脑组织形态学改变,用PCR法检测Caspase-3的表达。结果:模型组及各用药组均出现不同程度的神经功能缺损,模型组Caspase-3表达明显多于假手术组(P<0.05);与模型组相比,中药各组及阿司匹林组组织变性坏死程度轻、Caspase-3阳性细胞减少(P<0.05),中药高剂量组及阿司匹林组神经功能缺损评分显著降低(P<0.05);中药中、高剂量组和阿司匹林组效果优于中药低剂量组(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可以通过抑制Caspase-3的阳性表达来抑制细胞凋亡,从而发挥其神经保护作用。

化浊解毒活血通络法对脑缺血再灌注损伤小鼠行为学及海马神经细胞形态学的影响

目的探讨化浊解毒活血通络法对脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法将50只昆明小鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、尼莫地平组,每组10只。采用线栓法制造小鼠右侧大脑中动脉脑缺血再灌注模型。手术造模成功后假手术组、模型组灌服生理盐水20ml/(kg.d),尼莫地平组灌服尼莫地平液19.6g/(kg.d),中药高剂量组、中药低剂量组分别给予化浊解毒活血通络中药19.6g/(kg.d)及9.8g/(kg.d)灌服。均每日1次,14天后进行行为学测试,并通过光镜观察小鼠海马CA1区的病理形态学改变。结果与模型组相比,中药高剂量组能提高脑缺血再灌注损伤小鼠的学习和记忆成绩,改善小鼠海马CA1区的神经细胞形态学表现,并且优于尼莫地平组和中药低剂量组(P<0.05)。结论化浊解毒活血通络法对脑缺血再灌注损伤小鼠的行为学能力及海马CA1区的神经细胞具有保护作用,这可能是该法对抗脑缺血再灌注损伤的机制之一。