基于网络药理学和分子对接探究活血通降方治疗反流性食管炎的分子机制

目的:通过网络药理学以及分子对接技术来研究活血通降方治疗反流性食管炎的分子靶点及作用机制。方法:通过检索TCMSP数据库获取活血通降方中7味中药相关化学成分和作用靶点;结合GeneCards数据库筛选反流性食管炎疾病主要靶点;利用Venny2.1软件筛选活血通降方活性成分与反流性食管炎的共同作用靶点;提交二者交集靶点至STRING平台,分析二者的蛋白质互作网络;利用DAVID平台对其进行基因本体(GO)分析和通路富集(KEGG)分析。利用Cytoscape3.8.2和String数据库构建“药物活性成分-靶点”网络、蛋白质相互作用(PPI)网络、“活性成分-作用靶点-通路”网络以及利用Cytoscape3.8.2软件对该网络进行拓扑分析。利用分子的对接技术,由Autodock Vina实现核心成分白细胞介素(IL)-6与关键靶点分子对接。结果:本研究共筛选出活血通降方119个活性成分及相应靶点268个。反流性食管炎潜在作用靶点89个。经Cytoscape拓扑分析得到STAT3、TP53、JUN、AKT1、IL6、TNF等17个核心靶点,槲皮素、木犀草苷、山奈酚、黄芩素、柚皮素等20个核心活性成分。生物信息学富集分析中共获得711个GO条目,其中包括571个生物过程(biological process,BP)、53个细胞组成(cellular component,CC)、87个分子功能(molecular function,MF)。KEGG通路富集分析得到106条通路,主要涉及癌症通路(pathways in cancer)、HIF-1信号传导途径(HIF-1 signaling pathway)、TNF信号传导途径(TNF signaling pathway)等。利用分子对接技术发现黄芩苷元、柚皮素、川陈皮素与IL-6靶点有较强的亲和能力。结论:活血通降方通过降低炎症通路的激活,导致炎症因子分泌减少,从而起到修复食管黏膜炎症的作用。系统性揭示了活血通降方多途径、多靶点、多层次的调节作用,为活血通降方治疗反流性食管炎的临床应用研究提供了参考。

活血通降方对瘀血阻络型反流性食管炎临床疗效及胃排空的影响

目的:观察活血通降方治疗瘀血阻络型反流性食管炎(RE)的临床疗效及对胃排空的影响,从胃动力角度探讨该方药的作用机制。方法:选取2017年1月—2017年12月就诊于我院瘀血阻络型RE患者89例,随机分为三组,A组(西药治疗组):予雷贝拉唑+伊托必利;B组(中药治疗组):活血通降方;C组(中西医结合组):西药+活血通降方。三组疗程均为8周。比较治疗前后三组患者的消化道症状学积分(RDQ问卷)、中医证候积分、胃镜分级(LA)及胃排空(固体半排空)时间。结果:三组患者治疗后消化道症状评分、中医证候评分较治疗前均有明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后消化道症状评分改善:C组优于A组和B组(P<0.05),A组和B组无明显差异(P>0.05);治疗后三组中医证候评分改善程度C组优于B组,B组优于A组(P<0.05)。胃镜下LA分级治疗后三组较治疗前均有不同程度好转,A组和C组较治疗前明显改善(P<0.05),改善程度C组优于B组(P<0.05),其他两两相比无显著差异(P>0.05)。三组胃排空指标治疗后较治疗前均有明显改善(P<0.05),改善程度C组优于A、B组(P<0.05),而A组和B组无明显差异(P>0.05)。结论:活血通降方可改善瘀血阻络型RE患者临床症状及胃镜下黏膜表现,调节胃排空及胃动力可能是其治疗RE的机制之一。

活血通降方对瘀血阻络证反流性食管炎患者胃电图的影响

目的:观察活血通降方治疗瘀血阻络证反流性食管炎(RE)对胃电图的影响,从电生理角度探讨该方药的作用机制。方法:筛选瘀血阻络证RE患者60例,随机分为两组予以治疗,西药组30例:奥美拉唑+多潘立酮+铝碳酸镁,中西药组30例:奥美拉唑+活血通降方,对患者治疗前及治疗后4周及8周后症状学积分、胃镜表现及胃电图进行比较分析。结果:西药组:西医症状学积分:治疗前(20.59±4.25)分,治疗4周(16.21±3.02)分,治疗8周(9.32±2.08)分,差异有统计学意义(P <0.05);中医症状学积分:治疗前(43.28±8.09)分,治疗4周(35.06±5.03)分,治疗8周(18.23±4.09)分,差异有统计学意义(P <0.05);胃镜分级:治疗前A级8例,B级16例,C级6例,治疗8周后14例恢复正常,A级10例,B级5例,C级1例;中西药组:西医症状学积分:治疗前(19.38±3.05)分,治疗4周(15.23±2.12分),治疗8周(7.23±3.12)分,差异有统计学意义;中医症状学积分:治疗前(45.41±7.12)分,治疗4周(35.34±4.11)分,治疗8周(15.12±5.21)分,差异有统计学意义(P <0.05);胃镜分级:治疗前A级7例,B级15例,C级8例,治疗8周后16例恢复正常,A级9例,B级5例,C级0例;与西药组比较,中西药组治疗后症状学及内镜改善更明显,胃电图主要表现为主频下降,慢波百分比区趋于正常,胃动过速、胃动过缓及节律紊乱百分比减低。结论:活血通降方可缓解瘀血阻络证RE患者临床症状及情志,改善胃镜下黏膜表现,具有黏膜保护、动力调节的作用,其机制可能是通过调节胃食管肌电活动及电节律紊乱而发挥作用的。

活血通降方对糜烂性食管炎瘀血阻络型食管黏膜、运动功能及LES压力的影响

目的通过对比观察不同治疗方法对糜烂性食管炎(EE)瘀血阻络型患者的疗效,以及对食管运动功能的影响,探讨活血通降方的作用机制,为临床寻找有效治疗方案提供理论依据。方法将96例糜烂性食管炎瘀血阻络证患者随机分为西药组、中药组、中西医结合组各32例。西药组予雷贝拉唑肠溶胶囊(每次20 mg,1次/d,早餐前口服)和伊托必利(每次50 mg,3次/d,三餐后口服),中药组予活血通降方(1剂/d,早晚分服,50 mL/次),中西医结合组予雷贝拉唑、伊托必利及活血通降方联合治疗,疗程8周,比较治疗前后3组患者胃镜下黏膜表现、中医证候评分、高分辨率食管测压结果及安全性指标。结果3组患者经治疗后胃镜下LA分类,西药组和中西医结合组较治疗前改善明显(P<0.05),治疗后组间相比无显著差异(P>0.05)。3组治疗后中医证候学评分较治疗前均有明显改善(P<0.05或P<0.01),改善程度为中西医结合组优于中药组优于西药组(P<0.05或P<0.01)。3组治疗后LESP均较治疗前有明显改善(P<0.05或P<0.01);治疗后西药组和中药组对LESP的改善作用无明显差异(P>0.05),而中西医结合组较其他两组更能改善LESP(P<0.05或P<0.01)。治疗后3组DCI均明显升高(P<0.05或P<0.01),西药组和中药组对DCI升高作用差别不明显(P>0.05),而中西医结合组较其他两组升高更显著(P<0.01)。药物治疗对改变LESL、IBP、CFV的作用不明显(P>0.05)。结论活血通降方联合西药治疗瘀血阻络型EE在对食管黏膜、中医证候、食管压力、动力的改善方面优于单纯西药或中药治疗,且安全性较好。

活血通降方对反流性食管炎大鼠食管损伤和xCT/VEGF-B/GPX4信号通路的影响

目的观察活血通降方对反流性食管炎(RE)大鼠食管损伤的影响,从xCT/VEGF-B/GPX4铁死亡信号通路探讨其作用机制。方法采用改良部分贲门肌切开术+外置幽门部分结扎术制备RE大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组及活血通降方低、高剂量组,每组12只,另取12只作为空白组。造模成功当日开始给药,活血通降方低、高剂量组给药剂量分别为3.68、7.35 g/(kg·d),每日早晚各1次,连续灌胃14 d,空白组和模型组予5 mL生理盐水灌胃。观察大鼠食管黏膜损伤情况,HE染色观察黏膜组织病理变化,试剂盒检测食管组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)含量,Western blot检测食管组织胱氨酸/谷氨酸反向转运体(xCT)、血管内皮生长因子B(VEGF-B)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-17、IL-10含量。结果与空白组比较,模型组大鼠食管黏膜损伤明显,肉眼及病理评分显著升高,食管组织MDA、ROS含量增加,GSH含量减少,xCT、VEGF-B、GPX4蛋白表达降低,血清IL-1β、IL-17含量增加,IL-10含量减少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,活血通降方低、高剂量组大鼠食管黏膜损伤改善,肉眼及病理评分显著降低,食管组织MDA、ROS含量减少,xCT、VEGF-B、GPX4蛋白表达升高,血清IL-1β、IL-17含量减少,IL-10含量增加,活血通降方高剂量组大鼠食管组织GSH含量增加,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论活血通降方可缓解RE大鼠食管黏膜炎症,修复食管损伤,其机制可能与激活xCT/VEGF-B/GPX4信号通路,增加其抗氧化性,提高抗氧化因子GSH水平,清除食管中过多的ROS,调节相关炎症因子水平,影响食管细胞铁死亡有关。

活血通降方对反流性食管炎大鼠食管黏膜NF-κB/MAPK信号转导通路的影响

目的:观察活血通降方对反流性食管炎(RE)大鼠模型食管黏膜NF-κB/MAPK信号通路的影响,探讨中药治疗RE的作用机制。方法:将40只大鼠随机平均分为对照组、造模组、西药组、中药组4组。对照组不处理,正常饲养;余3组采用改良部分贲门肌切开加外置幽门部分结扎术进行RE造模。术后14 d,造模组予0.9%生理盐水灌胃,西药组予西药悬浊液(奥美拉唑、铝碳酸镁及多潘立酮)灌胃,中药组予中药混悬液(活血通降方)灌胃,均治疗14 d。灌胃第7、14天,各组处死半数大鼠,观察食管下端黏膜大体及病理评分变化,并进行p38MAPK、NF-κBP65免疫组化染色,取血清检测白细胞介素(IL)-6及肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度。结果:治疗第7天,西药组和中药组食管黏膜大体及病理评分降低,与造模组相比差异显著(P>0.05),西药组和中药组差异无统计学意义(P>0.05);治疗第14天,西药组和中药组食管黏膜大体及病理评分进一步降低,与造模组相比,差异更显著(P<0.01),与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),西药组和中药组差异无统计学意义(P>0.05)。造模后,造模组与对照组对比,p38MAPK及NK-κB免疫组化染色、血清IL-6及TNF-α表达显著升高(P>0.01),治疗第7、14天,西药组和中药组上述检测内容表达低于造模组,差异有统计学意义(P<0.05);但与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),西药组和中药组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:活血通降方可以有效改善食管黏膜炎症反应,抑制p38MAPK/NF-κB炎症信号通路,减少炎性因子的产生,通过控制RE免疫炎症可治疗RE,且疗效与治疗时间呈正相关。

活血通降方对反流性食管炎大鼠食管内脏高敏感及LPS/TLR4/MC通路的影响

目的研究活血通降方对反流性食管炎(reflux esophagitis,RE)模型大鼠脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/肥大细胞(mast cell,MC)通路的影响,探讨其对食管内脏高敏感的疗效机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、西药组、中药高剂量组及中药低剂量组5个组,每组10只。对照组行腹腔开关术,其余各组均采用改良部分贲门肌切开术+外置幽门部分结扎术联合束缚应激建立RE大鼠模型。造模7 d后,各组分别给予相应剂量药物或相同体积生理盐水灌胃,连续给药14 d,2次/d。苏木精-伊红染色评价食管黏膜病理表现及评分;采用行为学评分和观察肌电图变化评价大鼠食管的内脏敏感性;采用甲苯胺蓝染色检测食管组织中MC数目;采用免疫组织化学法检测食管组织类胰蛋白酶(tryptase,TPS)和结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1及Occludin的表达。采用酶联免疫吸附法检测血清LPS、IL-8含量,采用蛋白免疫印迹法检测食管组织中TLR4的表达,结果与对照组比较,模型组大鼠滴酸刺激时的行为学评分及颈斜方肌肌电图曲线下面积(area under curve,AUC)比值均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,西药、低剂量及高剂量中药干预后,各组大鼠行为学评分及肌电图AUC比值均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。其中,与西药组比较,中药各组肌电图AUC比值降低更为显著,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组血清LPS、IL-8的含量、食管黏膜病理评分和TLR4表达水平、食管组织中MC数目及TPS表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);结肠组织中Occludin与ZO-1的表达均显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。给予药物干预后,中药低剂量组及高剂量组大鼠血清LPS、IL-8含量、食管黏膜病理评分和TLR4表达、食管组织中MC数目及TPS的表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);结肠组织中Occludin与ZO-1的表达均上调,差异有统计学意义(P<0.05)。中药高剂量组对上述指标的作用均优于西药组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论活血通降方可改善RE大鼠食管黏膜炎症和内脏高敏感,机制可能与保护肠黏膜屏障功能,降低LPS水平,抑制LPS/TLR4/MC通路,减少MC脱颗粒和TPS的释放有关。

活血通降方合并针灸治疗难治性反流性食管炎瘀血阻络型63例临床研究

[目的]通过对比观察不同治疗方法对难治性反流性食管炎瘀血阻络型患者的症状学、中医证候学、内镜下黏膜损伤程度、24h阻抗-pH监测以及复发率的影响,为临床寻求有效的治疗方案提供理论依据。[方法]将临床筛选出的63例难治性反流性食管炎瘀血阻络型患者随机分为西药组(雷贝拉唑20mg qd,铝碳酸镁2片tid,依托必利50mg tid。)、中药组(活血通降方每次1袋,每天2次)、针药并用组(活血通降方每次1袋,每天2次;足三里、中脘、内关、血海、合谷、公孙进行手法操作,每日1次,每穴行针2~3min,留针30~40min),疗程为8周。治疗前后观察患者的各项指标,24h阻抗-pH监测中记录Demesster评分、胃食管反流次数、阻抗通道反流次数、较长反流次数(>5min)、最长反流时间、pH<4的总时间。对不同治疗方法治疗前后的数据进行比较分析。[结果]针药并用组在症状学改善方面明显优于中药组以及西药组(P<0.05),中药组对于症状改善优于西药组(P<0.05);针药并用组治疗后中医证候学评分较治疗前改善明显(P<0.05),优于中药组(P<0.05),中药组优于西药组(P<0.05),西药组改善不明显(P>0.05);内镜下黏膜愈合方面,西药组优于针药并用组优于中药组,差异有统计学意义(P<0.05);24h阻抗-PH监测方面,针药并用组优于中药组优于西药组,但是差异无统计学意义(P>0.05);随访患者半年内复发率中医治疗组和针药并用组低于西药组,差异有统计学意义(P<0.05),中医治疗组合针药并用组之间差异无统计学意义。[结论]活血通降法联合针灸治疗难治性反流性食管炎瘀血阻络型在改善消化道症状、中医证候、控制复发方面具有优势。

活血通降方对反流性食管炎模型大鼠食管动力、血清炎症因子及食管下括约肌SCF/c-kit信号通路的影响

目的探讨活血通降方治疗反流性食管炎的可能作用机制。方法将60只大鼠随机分为空白组、模型组及活血通降方低、高剂量组,每组15只。除空白组外,其余各组均采用改良部分贲门肌切开术+外置幽门部分结扎术制备反流性食管炎模型大鼠。造模成功后当天开始给药,活血通降方低、高剂量组给药量分别为3.68、7.35 g/(kg·d),空白组和模型组给予生理盐水5 ml灌胃,均连续14天。检测食管下括约肌平均肌张力变化率和平均振幅变化率、胃重量及胃排空率。HE染色观察大鼠食管组织病理形态学变化,并进行食管黏膜病理评分;测定血清中炎症因子白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;免疫荧光法测定Cajal间质细胞(ICCs)数量;免疫印记法检测食管下括约肌中酪氨酸激酶受体(c-kit)、干细胞因子(SCF)、亮氨酸拉链和不育-α基序激酶(ZAK)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达。结果与空白组比较,模型组食管下括约肌平均肌张力变化率和平均振幅变化率、胃排空率、ICCs阳性细胞数、c-kit和SCF表达均降低,胃重量、食管黏膜损伤病理评分、IL-8和TNF-α浓度、ZAK和p-ERK表达均升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,活血通降方高剂量组食管下括约肌平均肌张力变化率和平均振幅变化率升高(P<0.01),活血通降方低、高剂量组胃排空率、ICCs阳性细胞数、c-kit和SCF表达均升高,胃重量、食管黏膜病理评分、IL-8和TNF-α浓度、ZAK和p-ERK表达均降低(P<0.05或P<0.01)。活血通降方高剂量组食管下括约肌平均肌张力变化率、平均振幅变化率、ICCs阳性细胞数均高于活血通降方低剂量组(P<0.05或P<0.01)。结论活血通降方可能通过降低食管下括约肌中ZAK表达,抑制p-ERK表达,一方面激活SCF/c-kit信号通路,促进食管及胃动力;另一方面降低血清中IL-8和TNF-α浓度改善食管下括约肌黏膜炎症,从而治疗反流性食管炎,且以高剂量效果更好。

活血通降方对反流性食管炎大鼠肠道菌群及Caspase-3/GSDME通路的影响

目的:探讨活血通降方对反流性食管炎大鼠肠道菌群及半胱氨酸蛋白酶3/焦孔素E(Caspase-3/GSDME)通路的影响。方法:将30只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、活血通降方组,每组10只。除对照组外,其余两组均采用改良部分贲门肌切开术+外置幽门部分结扎术建立反流性食管炎大鼠模型。造模成功后,对照组及模型组予2.5 mL生理盐水灌胃,活血通降方组予2.5 mL活血通降方(3.68 g/kg)灌胃,2次/d,连续给药14 d。采用苏木精-伊红染色法观察各组大鼠食管组织病理变化;采用蛋白组学检测差异蛋白变化;采用酶联免疫吸附法检测血清中内毒素、IL-1β和IL-18的表达;采用蛋白免疫印迹法检测食管组织中Caspase-3和GSDME的表达,采用16S rDNA高通量测序检测肠道菌群的变化。结果:模型组大鼠食管组织病理评分较对照组增高(P<0.05),活血通降方组大鼠食管组织病理评分较模型组下降(P<0.05);蛋白组学分析表明,Caspase-3是各组的主要差异蛋白;与对照组比较,模型组肠道菌群的物种丰度显著降低,未分类拟杆菌属、Prevotellaceae_UCG-003属、螺旋菌属及Prevotellaceae_UCG-001属等革兰阴性菌的相对丰度显著增加,Akkermansia与Ruminococcaceae_UCG-005属的相对丰度显著降低,血清中内毒素、IL-1β和IL-18的含量及食管组织中Caspase-3和GSDME蛋白的表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,活血通降方可改善肠道菌群组成,显著增加有益菌Ruminococcaceae_UCG-005的丰度,降低革兰阴性菌如Prevotellaceae_UCG-003属、拟杆菌属及未分类拟杆菌属的相对丰度,显著降低血清中内毒素、IL-1β和IL-18的含量,且可明显下调食管组织中Caspase-3和GSDME蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:活血通降方可能通过调节肠道菌群降低体内内毒素水平,从而下调食管组织中Caspase-3和GSDME蛋白的表达及降低焦亡相关炎症因子的释放,对反流性食管炎大鼠黏膜损伤起保护作用。