流产布鲁氏菌2308株磷酸甘露糖变位酶pmm基因缺失株构建及鉴定

旨在构建流产布鲁氏菌2308株pmm基因缺失株。PCR扩增流产布鲁氏菌2308株pmm基因的上、下游同源臂片段,并与枯草芽孢杆菌上SacB基因片段融合。连接至自杀载体PGEM-7Zf+,构建自杀载体PGEM-7Zf+Δpmm-SacB。电转化至流产布鲁氏菌2308株感受态细胞内,通过氨苄抗性和蔗糖敏感性筛选,获得基因缺失株2308Δpmm,对其进行PCR鉴定和稳定性检测。成功构建可稳定遗传的2308Δpmm基因缺失株,并在15代内未发生回复。在此基础上可以对2308Δpmm进行深入研究。

流产布鲁氏菌疫苗A19-ΔVirB12突变株生物学特性研究

目的为了开发布鲁氏菌病新型标记疫苗,对流产布鲁氏菌A19-ΔVirB12突变株生物学特性研究。方法以亲本A19菌株为参照,对A19-ΔVirB12突变株的菌落形态、生物学特性、毒力、遗传稳定性、免疫原性进行实验比较。结果 A19-ΔVirB12突变株形态及生化特性同亲本株A19基本一致,其毒力弱于A19。A19-ΔVirB12突变株遗传稳定性良好且与A19具有相似的免疫原性。结论流产布鲁氏菌A19-ΔVirB12株毒力较低、遗传性状稳定、并具有良好的免疫保护效力,可作为新型动物布鲁氏菌病标记疫苗研制的候选株。

流产布鲁氏菌ATP／GTP结合蛋白基因缺失株保护力及安全性研究

为筛选具有诊断标记的布鲁氏菌病疫苗菌株，本研究利用同源重组和负筛选技术，构建了流产布鲁氏菌株2308的ATP／GTP结合蛋白基因缺失株BDA14，并通过菌落染色和凝集特性，培养传代，小鼠接种试验及怀孕羊攻毒试验对其生物学特性、安全性和免疫效果进行了研究。

转录调控因子GntR10在布鲁氏菌感染细胞和小鼠模型中的毒力作用研究

探讨转录调控因子GntR10在布鲁氏菌感染过程中的毒力作用.采用分子生物学方法,构建牛种布鲁氏菌2308 gntR10基因突变株(2308ΔGntR10)和互补株(2308ΔGntR10-C),利用突变株和互补株感染上皮细胞系(HPT-8)、小鼠巨噬细胞系(RAW 264.7)和小鼠模型(BALB/c),检测突变株在细胞和小鼠模型中的胞内存活能力和毒力.2308ΔgntR10突变株在细胞模型中的胞内存活能力显著降低,在小鼠模型中是减毒的.转录调控因子GntR10的缺失影响了布鲁氏菌在细胞和小鼠内的毒力,并且在布鲁氏菌感染期间,GntR10基因与细菌的存活和胞内繁殖有关.

布鲁氏菌磷酸甘油酸激酶(PGK)的毒性作用研究

探讨磷酸甘油酸激酶(PGK)对布鲁氏菌存活和引发细胞毒性的作用.将流产布鲁氏菌2308 pgk基因突变株(2308Δpgk)和互补株(2308Δpgk-C)置于不同环境压力中,检测突变株的存活能力.突变株和互补株感染小鼠巨噬细胞系(RAW264.7),检测突变株引起的细胞毒性.2308Δpgk突变株在不同应激条件下的存活率降低,并且对多粘菌素B和脱氧胆酸钠的敏感性增加,表明PGK的缺失降低了布鲁氏菌的应激状态.乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验显示,2308Δpgk引起的细胞毒性显著低于亲本株,表明PGK的突变影响了布鲁氏菌引发的细胞毒性.结果表明,布鲁氏菌感染过程中PGK参与了其存活和引发细胞毒性的作用.

布鲁氏菌磷酸甘油酸激酶(PGK)的毒性作用研究

探讨磷酸甘油酸激酶(PGK)对布鲁氏菌存活和引发细胞毒性的作用.将流产布鲁氏菌2308 pgk基因突变株(2308Δpgk)和互补株(2308Δpgk-C)置于不同环境压力中,检测突变株的存活能力.突变株和互补株感染小鼠巨噬细胞细胞系(RAW264.7),检测突变株引起的细胞毒性.2308Δpgk突变株在不同应激条件下的存活率降低,并且对多粘菌素B和脱氧胆酸钠的敏感性增加,表明PGK的缺失降低了布鲁氏菌的应激状态.乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验显示,2308Δpgk引起的细胞毒性显著低于亲本株,表明PGK的突变影响了布鲁氏菌引发的细胞毒性.结果表明,布鲁氏菌感染过程中PGK参与了其存活和引发细胞毒性的作用.

S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗对山羊免疫效果的比较试验

为了研究S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗对本地杂交山羊诱导的抗体消长动态规律、安全性及免疫效果,试验对36只不同日龄、不同性别的健康山羊(含妊娠母羊9只)随机平均分组,采用虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)方法分别对口服S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗的试验山羊,在免疫后第7,14,21,42,90天时对血液中布鲁氏菌抗体进行检测。结果表明:两种疫苗一次免疫对本地杂交山羊的最长保护期为90 d,其中S2株布鲁氏菌减毒活疫苗可适用于不同日龄、不同性别本地杂交山羊使用,也适用于妊娠期间山羊的免疫;M5株布鲁氏菌减毒活疫苗可引起妊娠母羊免疫副反应及严重的流产症状。说明较M5株布鲁氏菌减毒活疫苗,S2株布鲁氏菌减毒活疫苗具有使用方便且安全有效的优势。