药物流出泵基因在白假丝酵母菌生物膜耐药性产生机制中的作用

目的利用药物流出泵基因缺陷株,初步阐明药物流出泵基因CDR1、CDR2、MDR1在生物膜耐药性产生和表现型耐药菌株产生中的作用。方法以3种咪唑类抗真菌药物以及CDR1药物流出泵抑制剂作用于药物流出泵基因缺陷株形成的生物膜,采用XTT法和菌落计数的方法,分析药物流出泵基因在生物膜耐药性产生中的作用。结果药物流出泵基因对缺陷株形成的24h生物膜SMIC80影响不大,生物膜表现型耐药株的产生与药物流出泵基因有关,抗真菌药物联合CDR1基因抑制剂在一定程度上能够帮助杀灭白假丝酵母菌生物膜耐药株。结论药物流出泵基因对24h生物膜表现出来的耐药性影响不大,而对生物膜产生的耐药株有重要作用。

药物流出泵抑制剂联合咪康唑清除白假丝酵母菌生物被膜的研究

目的观察咪康唑分别与两种药物流出泵抑制剂联用清除耐药株（persister）的效果。方法白假丝酵母菌参考株YEM30，在96孔板中形成生物被膜（biofilm），CDR1抑制剂Enniatin B、CDR1／CDR2抑制剂Milbemycins α25单独或联合与咪康唑作用后，采用菌落形成单位（CFU）计数的方法统计耐药株的数量。采用SAS8．0统计软件包对数据进行q检验。结果咪康唑分别联合两种药物流出泵抑制剂清除生物被膜耐药株的效果明显优于咪康唑单独使用（P〈0．001），其中咪康唑与Enniatin B联用效果更佳。结论咪康唑与药物流出泵抑制剂联合应用具有清除生物被膜中表现型耐药株的作用，这为提高抗真菌治疗的效果提供了一条新途径和新思路。

多重PCR和反向线点杂交技术快速检测鲍曼不动杆菌21个主动外排基因及临床应用

目的建立一种新的多重PCR和反向线点杂交技术(mPCR-RLB)快速同时检测鲍曼不动杆菌21个主动外排基因的方法并评价其临床应用价值。方法根据GenBank中收录的多重耐药鲍曼不动杆菌AYE株5个外排泵蛋白基因家族,选取其中21个基因(4个来自MFS家族,13个来自RND家族,2个来自MATE家族,1个来自SMR家族,1个来自ABC家族)。设计22对引物及寡核苷酸探针(1对鲍曼不动杆菌通用引物及探针),mPCR同时扩增22个目的基因,PCR产物再与固定在尼龙膜上的特异性寡核苷酸探针反向线点杂交,同时检测上述22个基因。用该法对40株经过鉴定的鲍曼不动杆菌进行检测。结果除cmlA5和cmlA基因未检出阳性外,其余19个外排泵基因均呈阳性。除第16号菌株外排泵基因检测阴性外,其余39株鲍曼不动杆菌临床株携带外排泵基因数量从5～18个不等。外排系统在多重耐药菌株及相对敏感菌株中均有分布。11个外排泵基因在多重耐药鲍曼不动杆菌菌株中阳性率明显高于敏感株,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立的mPCR-RLB技术可快速同时检测鲍曼不动杆菌多个外排泵基因,短时间内明确菌株携带外排泵基因情况,对明确其多重耐药性的发生机制、避免药物成为外排泵对象、找到更有效的特异外排系统抑制剂均有重要意义。

念珠菌耐药机制在分子水平上的研究进展

念珠菌耐药现象日益增多引起了人们对念珠菌耐药机制的关注。念珠菌耐药在分子水平上存在三种机制 :药物流出泵的过度表达。

细菌对消毒剂抗性机理研究进展

消毒剂通过抑制膜的主动运输、抑制微生物的代谢、扰乱微生物的DNA复制、使微生物细胞裂解而导致胞内成分渗漏以及使胞内物质凝结等方面发挥灭菌作用。消毒剂在杀灭细菌和控制细菌污染方面具有重要作用,但细菌对消毒剂也会产生抗性。细菌对消毒剂的抗性机制主要通过形成生物被膜,阻挡或外排机制减少消毒剂分子进入细胞,使消毒剂分子失活,以及其他表型性耐药等4个途径来实现,其中通过形成生物被膜阻止消毒剂分子进入细菌细胞或在进入细胞前使消毒剂失去效用,在细菌对消毒剂的抗性机制中具有重要作用。以实际污染的主要菌株为对象,研究它们对常用消毒剂的抗性机制,对控制细菌污染具有极大的应用价值和现实意义。

连续5年鲍氏不动杆菌主动外排基因分布变迁及耐药性研究

目的了解5年鲍氏不动杆菌(ABA)主动外排基因分布变迁及耐药性,为抗菌药物合理应用提供依据。方法收集2005年2月-2009年12月住院患者送检标本分离出的162株ABA,采用K-B法进行抗菌药物敏感试验,多重PCR-反向线点杂交技术检测21个主动外排基因。结果 162株ABA中多药耐药菌(MDR)占80.9%,除cmlA5外,其余20个外排泵基因均有阳性携带株;外排系统在MDR及相对敏感菌株中均有分布,部分外排泵基因在MDR中的分布明显高于相对敏感株(P<0.05);外排泵基因MATE36_127、ABC2_694、adeA、adeB、adeC、adeR、adeS及qacEdelta1在MDR中阳性率呈逐年上升趋势(P<0.05);一株菌同时携带多个外排泵家族,优势外排基因各年度情况不尽相同。结论临床分离的ABA耐药情况严峻,主动外排基因分布广泛,外排泵基因型的变化与耐药表型之间可能存在一定关系。