多重微球流式免疫荧光技术对肺癌患者外周血IL-1β、IL-6、IFN-γ水平测定及与hs-CRP的相关性分析

目的探讨多重微球流式免疫荧光技术在肺癌患者外周血白细胞介素(IL)-1β、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)细胞因子的表达情况及与超敏C反应蛋白(hs-CRP)相关性分析。方法采用回顾性研究的方法,选择张家港市中医医院(下称该院)肿瘤科和肺病科收治的30例肺癌患者作为肺癌组,另选择同期该院收治的30例肺炎患者作为肺炎组,同时选取同期该院体检健康者30例作为对照组,通过多重微球流式免疫荧光技术检测血清中IL-1β、IL-6和IFN-γ水平,同时利用乳胶增强免疫散射比浊法测定外周血全血中hs-CRP水平。结果肺癌组与对照组比较,IL-1β、IL-6和hs-CRP水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.001),而IFN-γ水平差异无统计学意义(P>0.05);肺炎组与对照组比较,IL-1β、IL-6、IFN-γ、hs-CRP水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);肺癌组与肺炎组比较,IL-6、IFN-γ、hs-CRP水平明显降低且IL-1β水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);肺癌组、肺炎组IL-6和hs-CRP水平分别进行Pearson相关性分析,均无明显的相关性。结论IL-1β、IL-6、IFN-γ可以作为有效评估肺癌患者免疫功能的辅助指标,多重微球流式免疫荧光技术的应用对于肺癌的诊断及监测具有潜在的临床应用价值。

猴D型逆转录病毒p27基因的原核表达及流式免疫荧光微球检测技术的建立

目的构建猴D型逆转录病毒的p27蛋白,并建立流式免疫荧光微球检测技术用于猴D型逆转录病毒的检测。方法通过PCR扩增p27基因片段,与p GEX-4T-1表达载体进行连接,转化至BL21(DE3)进行表达。通过SDS-PAGE分析蛋白表达的形式及最佳诱导时间。采取GST树脂纯化目标蛋白,包被磁珠,建立流式免疫荧光微球检测技术,用于临床样本的检测。结果重组蛋白以可溶的上清液进行表达,诱导的最佳时间为4 h。包被磁珠后,成功建立流式免疫荧光微球检测技术,对阳性血清稀释81倍仍可检测为阳性,对猴类其他病原的阳性血清无交叉反应,特异性强,与ELISA法同时对24份临床样本进行检测,其中3份样品的流式免疫荧光微球检测结果为阳性,ELISA检测结果为2份阳性,1份阴性,两种方法的检测结果符合率为96%。结论成功表达猴D型逆转录病毒p27蛋白,并运用该蛋白建立了灵敏度高,特异性强,样本需求少的流式免疫荧光微球检测技术,为后续推广应用多重流式免疫荧光微球检测技术奠定了基础。

多重微球流式荧光免疫技术检测抗核抗体谱的评价与临床应用

目的:分析和评估多重微球流式荧光免疫技术(MBFFI)检测抗核抗体谱的结果和临床应用价值。方法:同时用MBFFI和免疫印迹技术检测333例自身免疫病患者、44例其他疾病患者和59例健康者血清的抗核抗体谱,进行结果的一致性检验,并用间接免疫荧光技术检测抗核抗体,比较3种方法的灵敏度、特异度。结果:MBFFI与免疫印迹技术检测所有标本抗核抗体谱一致率为83. 26%,Kappa值=0. 655;病例组各项目一致率在79. 88%至99. 40%之间,Kappa值在0. 106至0. 958之间。对照组各项目一致率在96. 61%至100. 00%之间,其他疾病组各项目一致率在95. 45%至100. 00%之间。间接免疫荧光技术诊断自身免疫病的灵敏度最高(P<0. 01),MBFFI诊断自身免疫病的特异度最高(P<0. 05),MBFFI与间接免疫荧光技术联合检测可提高灵敏度(P<0. 01)。结论:多重微球流式荧光免疫技术检测抗核抗体谱与免疫印迹技术相比,一致性尚可,特异度更高,可以替代免疫印迹技术成为新一代的抗核抗体确认试验检测方法。

主客体结构微球的流式免疫荧光检测的方法

采用纳米氧化硅客体子球和聚苯乙烯磁性主体母球设计并制备了一种新型的主客体组装结构复合微球,将抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)抗体化学固载于组装微球表面,在流式免疫荧光检测平台中研究其免疫检测性能,并与传统的酶联免疫(ELISA)检测方法进行了比较.结果表明,主客体组装结构微球在流式免疫荧光检测中具有优异的检测性能,在微球用量极低的情况下仍然具有非常好的检测线性和检测重复性,并且空白限较传统的ELISA方法降低了6/7.

流式免疫微球技术定量检测人血清胰岛素方法学研究和评价

目的建立流式免疫微球定量检测人血清胰岛素的方法并对其重复性实验和线性实验以及最低检测限进行评价。方法将兔抗人胰岛素单克隆抗体标记在微球表面制备免疫诊断微球,与血清中胰岛素结合后,加入荧光标记的鼠抗人胰岛素单克隆抗体,使微球表面呈现荧光,并通过流式细胞仪检测其平均荧光强度(mean fluorescent intensity,MFI)并记录。结果微球表面MFI与人血清胰岛素浓度呈正比,流式免疫微球技术检测同一标本的重复性实验变异系数以及最低检测限均低于酶联免疫吸附试验,流式免疫微球技术线性范围大于酶联免疫吸附实验。结论流式免疫诊断微球技术可用于人血清胰岛素定量检测,其测定重复性,线性范围和灵敏度均优于酶联免疫吸附试验。

流式免疫多重微球芯片技术检测干燥综合征自身抗体的评价及应用

目的建立多重微球芯片流式免疫荧光发光法检测原发性干燥综合征(pSS)自身抗体的评价及应用。方法采用多重微球流式免疫荧光发光法,以聚苯乙烯微球为反应界面,将8种[SSA(60kD)、SSB、α-fodrin、M3、ds-DNA、nRNP/Sm、Sm、M2]抗人IgG单克隆抗体包被微球后,用该方法检测同一血清样本中的多种可溶性蛋白抗体。选取pSS患者206例、非pSS患者110例和健康人69例,用多重微球流式免疫荧光发光法检测8种自身抗体。结果多重微珠流式免疫荧光发光法检测8种抗体的批内差异及批间差异均较小;检测pSS组的8种抗体水平与非pSS组、健康组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);诊断pSS的总敏感度可达97.20%,总特异性可达96.34%。结论多重微球流式免疫荧光发光法检测pSS自身抗体方法可以一次同时进行8种自身抗体的联合检测,为pSS及其他自身免疫病的确诊创造了一种准确、便捷的检测新方法。

流式荧光微球技术在实验动物质量控制中的应用

ELISA和IFA是实验室主要的血清学检测方法,在过去的数十年中得到广泛的应用。但其存在着操作繁琐、耗时长的问题。美国Luminex公司开发的xMAP是一种快速、高通道的技术平台,可在同一反应孔内同时检测上百种抗原、抗体、核苷酸片段、受体/配体等生物分子,在医学界已广泛应用。MFIATM是美国Charles River Laboratories应用xMAP平台开发的应用于实验动物质量控制的多通路、高效率的抗体检测技术,该技术的应用大大改善了实验动物质量控制的水平。

免疫微球检测技术----用于BCR-ABL融合蛋白的流式细胞测定

本文介绍了BD TM BCR-ABL蛋白分析工具包。它是一种检测白血病细胞溶解液中p190和p210等BCR-ABL蛋白可靠、快速、简单、方便的技术。这种分析方法不依赖于BCR和ABL基因的断裂位置,除了一台流式细胞仪之外,该方法不需要其他专门的实验室仪器,并且可在几小时内得到结果。因而,这种蛋白分析工具包,较传统方法而言,能实现对BCR-ABL阳性样品快速而简单的鉴定。

流式微球捕获蛋白定量检测技术的原理与应用

流式微球捕获蛋白定量检测技术也被称为悬浮点阵技术、液态芯片技术,是基于流式检测技术和荧光微球捕获技术的液相、高通量、多重蛋白定量技术,基本原理是在荧光编码捕获微球表面进行的荧光标记液相抗原抗体反应,具有流式技术检测速度快、定量准确、多参数、高通量的特点,检测所需样品量小,可同时检测一个样品中数种到数十种可溶性蛋白,具有良好的可重复性,是固相酶联免疫吸附检测的一项良好的替代技术,在病毒感染、各类炎症、过敏性疾病、自身免疫病、肿瘤、移植、药物研发等相关的研究领域具有应用价值,在儿科危重病患儿的诊断和治疗、急性公共传染性疾病的研究和临床诊治中具有特殊意义。文章主要介绍流式微球捕获蛋白定量检测技术的技术原理、特点、应用与局限性。

多重微球流式免疫荧光法检测外周血细胞因子影响因素分析与对策

为提高临床利用多重微球流式免疫荧光法检测细胞因子结果的准确性,收集临床患者的外周血标本,比较血清、血浆、不同保存条件以及干扰物质对12种细胞因子(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、IFN-γ、IFN-α和TNF-α)检测结果的影响。结果显示,血浆和血清中IFN-α、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12p70和IL-17水平差异无统计学意义(P>0.05),而IL-6和IL-8在血清中的水平显著高于血浆(P<0.05);EDTA-K2抗凝全血在4℃保存24 h对部分细胞因子浓度有一定影响,而离心获得的血浆在4℃保存48 h细胞因子水平显著降低(P<0.05);对检测过程中微球丢失或微球荧光信号异常增强的血浆标本经小鼠免疫球蛋白预处理后,检测信号与分析结果均恢复正常。该研究提示,临床检测细胞因子建议采用EDTA-K2抗凝的血浆标本,且细胞因子在4℃保存24 h较稳定;对于检测过程中出现微球丢失或荧光信号异常增强的标本,采用小鼠免疫球蛋白进行预处理是有效的解决方法。

微流控芯片用于流式细胞术的基础研究

自行设计并加工了玻璃微流控芯片 ,并将其与流式细胞术相结合 ,采用羟丙基甲基纤维素 ( HPMC)的磷酸盐溶液为缓冲体系和鞘液 ,解决了微粒在微芯片中流动的若干问题 ,使其状态可以得到更有效的控制 .采用自行组装的激光诱导荧光装置并结合动电聚焦技术 ,实现了对荧光微球的计数 ,并可通过荧光倒置显微镜实时观察到微通道内微球的实际流动情况 .方法简单 ,操作方便 ,并且具有仪器体积小。

流式微珠阵列术在医学中的研究进展

随着高分子微球技术的日益创新,流式细胞术与高分子微球技术相结合的流式细胞微球芯片捕获技术也随之产生,流式细胞微球芯片捕获技术又称为流式微球分析技术、流式微球技术、流式微珠阵列术,具有检测灵敏度高、特异性强、分析速度快等优点,应用前景广阔。我们就流式细胞微球捕获芯片技术在医学中的研究进展做简要综述。

流式免疫微球芯片技术分析特异性血小板自身抗体

目的建立流式免疫微球芯片技术（FCIBA）分析特异性血小板自身抗体的新方法。方法使用不同红色荧光强度的微球，包被不同血小板膜蛋白单克隆抗体（抗GPⅡb／Ⅲa、抗GPⅠa／Ⅱa、抗GPⅣ、抗GPⅠb／Ⅸ和抗HLA-ABC单克隆抗体），制备特异性血小板自身抗体检测微球，用流式细胞仪检测微球捕获的血小板抗原-自身抗体复合物，检测结果与微孔板改进抗原捕获ELISA（MACE）进行比较，并检测了部分免疫性以及非免疫性血小板减少性紫癜患者血清中的5种特异性血小板自身抗体。结果FCIBA分析抗GPⅡb／Ⅲa、抗GPⅠa／Ⅱa、抗GPⅣ、抗GPⅠb／Ⅸ和抗HLA-ABC5种特异性血小板自身抗体，批内重复性变异系数（CV）分别为4．82％、6．09％、5．04％、5．73％、5．30％；稀释试验呈对数线性相关，相关系数（r）分别为0．9972．0．9966．0．9988．0．9965、0．9982；新方法对5种特异性血小板自身抗体的分析结果均与MACE试验结果高度相关，r值分别为0．9289、0．9224、0．8894、0．9100、0．9134（P均〈0．01）。新方法分析98例免疫性血小板减少性紫癜患者的血清样本，血小板特异性自身抗体检出的阳性率为51．69％；其中，抗GPⅡb／Ⅲa为40．82％，抗GPⅠa／，Ⅱa为24．45％，抗GPⅣ为19．39％，抗GPⅠb／Ⅸ为32．65％，抗HLA-ABC为17．35％。新方法分析40例非免疫性血小板减少性紫癜患者的血清样本，阳性率为0。结论本研究建立了FCIBA分析特异性血小板自身抗体的新方法，可同时分析抗血小板GPⅡb／Ⅲa、GPⅠa／，Ⅱa、GPⅣ、GPⅠb／Ⅸ和HLA-ABC5种特异性血小板自身抗体。

多重细胞因子检测试剂的开发及其在骨髓瘤中的应用

目的:开发多重细胞因子检测试剂,分析复发难治性多发性骨髓瘤(RRMM)的细胞因子、血管生成、骨重塑蛋白表达水平变化。方法:采用多重微球流式荧光免疫技术建立多重细胞因子定量检测试剂,并应用于55例RRMM患者和22例健康对照血清样本的测定,分析患者细胞因子、血管生成、骨重塑蛋白表达水平及其与临床特征的相关性。结果:本研究成功开发了十重细胞因子免疫分析检测试剂,平均灵敏度为7.1 pg/ml,平均回收率为97.4%,平均批内变异系数为4.8%,平均批间变异系数为9.0%。此外,RRMM样本结果发现IL-2、IL-17、DKK1、RANKL、OPG水平与IgG单克隆蛋白水平呈正相关,TIMP1与IgG、IgA单克隆蛋白水平呈正相关。结论:本研究开发出10种具有较高灵敏度和特异性的细胞因子检测试剂,并发现IL-2、IL-17、DKK1、RANKL、OPG、TIMP1在RRMM中具有追踪疾病进程的潜在价值。建立的多重细胞因子试剂开发流程对今后拓展蛋白标志物多重检测试剂的研发和应用具有重要参考价值。

炎症相关细胞因子表达升高与类风湿关节炎病情程度的相关性分析

目的检测类风湿关节炎(RA)患者血清中细胞因子的含量,探讨炎性相关细胞因子联合检测对RA病情程度评估的临床应用价值。方法募集RA患者28例和同期15例健康体检者。多重微球流式免疫荧光发光法检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-2、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12P70、IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、α干扰素(IFN-α)、IFN-γ、IL-4、IL-10炎症相关细胞因子表达情况,全自动生化分析仪检测C反应蛋白(CRP),魏氏法测量红细胞沉降率(ESR),获取炎症指标数据。计算RA组患者28关节疾病活动指数(DAS28),比较各细胞因子与RA疾病活动度的曲线下面积,分析RA患者炎症相关细胞因子血清水平与CRP、ESR的相关性。结果RA患者血清中IL-2、IL-6、IL-12P70、IL-4、IL-10与RA疾病活动度的指标DAS28-CRP显著相关,IL-12P70、TNF-α、IL-4与RA疾病活动度的指标DAS28-ESR显著相关,反映RA患者病情程度的指标CRP与IL-6(r=0.515)、IL-12P70(r=0.530)、IL-4(r=0.539)、IL-10(r=0.434)呈正相关,ESR与IL-6(r=0.403)、IL-12P70(r=0.475)、TNF-α(r=0.497)、IL-4(r=0.450)呈正相关。与CRP、ESR正常组比较,CRP异常组中IL-6、IL-12P70、IL-2、IL-4、IL-10水平升高,ESR异常组中IL-12P70、IL-4、TNF-α水平升高。RA组患者IL-8、IFN-α、IFN-γ表达较健康组升高。结论血清中炎症相关细胞因子检测对RA的早期诊断和病情程度判断有重要的参考价值,可作为确诊RA的重要预测指标。

基于微球的多重流式分析技术

1 简介 生化分析是生物基础研究及医学临床诊断的重要手段,其中有30多年历史的流式细胞分析技术已广泛应用于生物医学基础研究及实际应用的各个领域.尽管在流式分析技术的大多数实际应用中都以细胞作为载体或研究目标,但诸如微球之类的小固态颗粒同样也可以应用于流式分析技术.

精神障碍患者外周血细胞因子12项表达谱分析及其临床意义

目的观察12项细胞因子(IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-1β、IL-12p70、IFN-α、IFN-γ、TNF-α)在常见精神障碍(抑郁障碍、双相障碍和精神分裂症)患者外周血中的表达谱并探讨其临床意义。方法纳入2022年7月至2023年6月南京医科大学附属脑科医院住院确诊为精神障碍的288例患者,采用多重微球流式免疫荧光法检测患者外周血中12项细胞因子水平,同时收集患者血常规、C反应蛋白(CRP)结果及临床精神病情等资料。比较分析12项细胞因子在不同精神障碍患者中的水平差异,以及主要细胞因子间及与血常规、CRP、病情的相关性。结果与试剂盒提供的参考区间相比,精神障碍患者外周血细胞因子IL-5、IL-6和IL-1β异常升高。与抑郁障碍患者比较,双相障碍组外周血IL-2、IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-17、IL-12p70、IFN-α、IFN-γ和TNF-α水平均显著降低(P均<0.05);精神分裂症组(除IL-5和IL-17外)也显著降低(P均<0.05),但IL-1β水平显著升高(P<0.05);3组中IL-6水平无明显差异(P>0.05)。3组患者的主要阳性细胞因子IL-5与IL-6(r分别为0.5,0.33,0.26,P均<0.05)和IL-1β(r分别为0.71,0.24,0.50,P均<0.05)呈正相关;IL-6与IL-1β(r分别为0.4,0.24,0.46 P均<0.05)呈正相关,此外,精神分裂症患者外周血IL-6水平与CRP值呈正相关(r=0.30,P<0.05)。多因素Logistic回归分析,暴力危险分级评估、自杀风险评估是发生重性精神障碍的独立风险因素(P均<0.05)。诊断重性精神障碍时,4种细胞因子联合、IL-8、IL-1β和IL-5的ROC曲线下面积(AUCROC)依次为0.751、0.817、0.622和0.613(P均<0.05)。结论精神障碍患者发病过程中其外周血存在独特的细胞因子谱,对判断精神障碍的病情具有较高的临床参考价值。

中枢神经系统感染患者脑脊液中12种细胞因子的变化及临床意义

目的探讨12种细胞因子(IFN-α、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70和IL-17)在中枢神经系统感染性疾病患者脑脊液中的变化特征及其临床意义。方法收集徐州市中心医院临床诊断为中枢神经系统感染患者52例,对采集的脑脊液进行脑脊液常规、生化以及脑脊液细胞学检测;利用流式细胞仪检测脑脊液中12种细胞因子的变化情况。结果在检测的12种细胞因子中仅IL-5、IL-6和IL-83个细胞因子的浓度显著升高,阳性率分别为23.08%、42.31%和96.15%;与脑脊液中白细胞计数和中性粒细胞百分比呈显著正相关,与淋巴细胞的百分比呈负相关。另外,与白细胞计数结果相一致,细胞因子IL-5、IL-6和IL-8在患者治疗获益后均明显下降。结论脑脊液中IL-5、IL-6和IL-8水平的检测可作为今后中枢神经系统感染患者诊治以及病情严重程度判断的依据。

免疫性血小板减少症患儿外周血T淋巴细胞相关细胞因子水平变化

目的探讨免疫性血小板减少症(ITP)患儿外周血T淋巴细胞相关细胞因子水平的变化及临床意义。方法选取2016年7月至2017年10月新乡医学院第一附属医院收治的新诊断ITP患儿40例为观察组,并选择同期门诊体检的健康儿童31例为对照组,采用流式细胞微球阵列技术检测2组受试者外周血中Th1细胞因子白细胞介素(IL)-2、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)及Th2细胞因子IL-4、IL-6、IL^(-1)0和Th17细胞因子IL^(-1)7A水平,对2组患者治疗前后血清IL-2、IL-4、IL-6、IL^(-1)0、TNF、IFN-γ、IL^(-1)7A水平进行比较,并分析观察组患者外周血T淋巴细胞相关细胞因子与血小板计数的相关性以及各血清细胞因子之间的相关性。结果观察组患者治疗前血清IL-2、IL-6、TNF、IFN-γ、IL^(-1)7A水平显著高于对照组受试者(P <0. 05),IL-4、IL^(-1)0水平显著低于对照组受试者(P <0. 05)。观察组患者治疗后血清IL-2、IL-6、TNF、IFN-γ、IL^(-1)7A水平较治疗前显著降低(P <0. 05),IL-4、IL^(-1)0水平较治疗前显著升高(P <0. 05)。观察组患者治疗后血清IL-2、IL-4、IL-6、IL^(-1)0、TNF、IFN-γ、IL^(-1)7A水平与对照组比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。观察组患者血清各细胞因子水平与血小板计数无显著相关性(P> 0. 05)。观察组患者血清IL-2与IL-6水平呈正相关(r=0. 382,P=0. 00),IL-6与IFN-γ水平呈正相关(r=0. 759,P=0. 00),其他细胞因子之间无相关性(P> 0. 05)。结论新诊断ITP患儿体内存多种T淋巴细胞细胞因子紊乱,以Th1、Th17细胞因子升高为主,提示ITP患儿体内存在Th1、Th17细胞优势。