多重微球流式免疫荧光法检测外周血细胞因子影响因素分析与对策

为提高临床利用多重微球流式免疫荧光法检测细胞因子结果的准确性,收集临床患者的外周血标本,比较血清、血浆、不同保存条件以及干扰物质对12种细胞因子(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、IFN-γ、IFN-α和TNF-α)检测结果的影响。结果显示,血浆和血清中IFN-α、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12p70和IL-17水平差异无统计学意义(P>0.05),而IL-6和IL-8在血清中的水平显著高于血浆(P<0.05);EDTA-K2抗凝全血在4℃保存24 h对部分细胞因子浓度有一定影响,而离心获得的血浆在4℃保存48 h细胞因子水平显著降低(P<0.05);对检测过程中微球丢失或微球荧光信号异常增强的血浆标本经小鼠免疫球蛋白预处理后,检测信号与分析结果均恢复正常。该研究提示,临床检测细胞因子建议采用EDTA-K2抗凝的血浆标本,且细胞因子在4℃保存24 h较稳定;对于检测过程中出现微球丢失或荧光信号异常增强的标本,采用小鼠免疫球蛋白进行预处理是有效的解决方法。

多重微珠流式免疫荧光法检测系统性红斑狼疮患者自身抗体的价值

目的探讨多重微珠流式免疫荧光法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者自身抗体的结果和应用价值。方法选取2020年10月-2021年3月广东省中医院大学城医院门诊或住院确诊为SLE的患者46例(试验组),健康体检者30名(对照组),利用多重微珠流式免疫荧光法和免疫印迹法检测自身抗体并分析结果,包括抗组蛋白抗体、抗着丝点抗体、抗U1核糖核蛋白(U1-RNP)抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、抗拓扑异构酶(Scl-70)抗体、抗组氨酰转运核糖核酸合成酶(Jo-1)抗体、抗双链DNA(dsDNA)抗体。结果试验组采用多重微珠流式免疫荧光法和免疫印迹法检测抗核抗体谱(ANAs)阳性率分别为73.9%和80.4%,差异无统计学意义(χ^(2)=0.80,P>0.05);但抗U1-RNP抗体阳性率分别为28.2%和47.8%,差异有统计学意义(χ^(2)=4.97,P<0.05)。利用多重微珠流式免疫荧光法检测SLE患者和健康体检者ANAs,其中抗组蛋白抗体、抗U1-RNP抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、抗Scl-70抗体、抗dsDNA抗体水平比较差异均有统计学意义(P均<0.05),抗着丝点抗体和抗Jo-1抗体水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论多重微珠流式免疫荧光法可以一次性同时进行多种自身抗体的联合检测,且用该方法与现有常规方法检测SLE患者自身抗体具有一致性,能为临床提供良好实验室数据。

流式免疫多重微球芯片技术检测干燥综合征自身抗体的评价及应用

目的建立多重微球芯片流式免疫荧光发光法检测原发性干燥综合征(pSS)自身抗体的评价及应用。方法采用多重微球流式免疫荧光发光法,以聚苯乙烯微球为反应界面,将8种[SSA(60kD)、SSB、α-fodrin、M3、ds-DNA、nRNP/Sm、Sm、M2]抗人IgG单克隆抗体包被微球后,用该方法检测同一血清样本中的多种可溶性蛋白抗体。选取pSS患者206例、非pSS患者110例和健康人69例,用多重微球流式免疫荧光发光法检测8种自身抗体。结果多重微珠流式免疫荧光发光法检测8种抗体的批内差异及批间差异均较小;检测pSS组的8种抗体水平与非pSS组、健康组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);诊断pSS的总敏感度可达97.20%,总特异性可达96.34%。结论多重微球流式免疫荧光发光法检测pSS自身抗体方法可以一次同时进行8种自身抗体的联合检测,为pSS及其他自身免疫病的确诊创造了一种准确、便捷的检测新方法。

精神障碍患者外周血细胞因子12项表达谱分析及其临床意义

目的观察12项细胞因子(IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-1β、IL-12p70、IFN-α、IFN-γ、TNF-α)在常见精神障碍(抑郁障碍、双相障碍和精神分裂症)患者外周血中的表达谱并探讨其临床意义。方法纳入2022年7月至2023年6月南京医科大学附属脑科医院住院确诊为精神障碍的288例患者,采用多重微球流式免疫荧光法检测患者外周血中12项细胞因子水平,同时收集患者血常规、C反应蛋白(CRP)结果及临床精神病情等资料。比较分析12项细胞因子在不同精神障碍患者中的水平差异,以及主要细胞因子间及与血常规、CRP、病情的相关性。结果与试剂盒提供的参考区间相比,精神障碍患者外周血细胞因子IL-5、IL-6和IL-1β异常升高。与抑郁障碍患者比较,双相障碍组外周血IL-2、IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-17、IL-12p70、IFN-α、IFN-γ和TNF-α水平均显著降低(P均<0.05);精神分裂症组(除IL-5和IL-17外)也显著降低(P均<0.05),但IL-1β水平显著升高(P<0.05);3组中IL-6水平无明显差异(P>0.05)。3组患者的主要阳性细胞因子IL-5与IL-6(r分别为0.5,0.33,0.26,P均<0.05)和IL-1β(r分别为0.71,0.24,0.50,P均<0.05)呈正相关;IL-6与IL-1β(r分别为0.4,0.24,0.46 P均<0.05)呈正相关,此外,精神分裂症患者外周血IL-6水平与CRP值呈正相关(r=0.30,P<0.05)。多因素Logistic回归分析,暴力危险分级评估、自杀风险评估是发生重性精神障碍的独立风险因素(P均<0.05)。诊断重性精神障碍时,4种细胞因子联合、IL-8、IL-1β和IL-5的ROC曲线下面积(AUCROC)依次为0.751、0.817、0.622和0.613(P均<0.05)。结论精神障碍患者发病过程中其外周血存在独特的细胞因子谱,对判断精神障碍的病情具有较高的临床参考价值。

中枢神经系统感染患者脑脊液中12种细胞因子的变化及临床意义

目的探讨12种细胞因子(IFN-α、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70和IL-17)在中枢神经系统感染性疾病患者脑脊液中的变化特征及其临床意义。方法收集徐州市中心医院临床诊断为中枢神经系统感染患者52例,对采集的脑脊液进行脑脊液常规、生化以及脑脊液细胞学检测;利用流式细胞仪检测脑脊液中12种细胞因子的变化情况。结果在检测的12种细胞因子中仅IL-5、IL-6和IL-83个细胞因子的浓度显著升高,阳性率分别为23.08%、42.31%和96.15%;与脑脊液中白细胞计数和中性粒细胞百分比呈显著正相关,与淋巴细胞的百分比呈负相关。另外,与白细胞计数结果相一致,细胞因子IL-5、IL-6和IL-8在患者治疗获益后均明显下降。结论脑脊液中IL-5、IL-6和IL-8水平的检测可作为今后中枢神经系统感染患者诊治以及病情严重程度判断的依据。

呼吸道感染患儿血浆中12种细胞因子的变化特征及其临床意义

目的:探讨12种细胞因子(IFN-α、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70和IL-17)在常见呼吸道感染(急性上呼吸道感染、支气管肺炎和急性化脓性扁桃体炎)患儿血浆中水平的变化特征及其临床意义。方法:收集2020年4月至2022年7月徐州市中心医院收治的诊断为呼吸道感染疾病的271例患儿,采用多重微球流式免疫荧光法检测外周血血浆和血清中12种细胞因子水平。结果:在呼吸道感染患儿血清中IL-6、IL-8、TNF-α和IFN-γ的水平显著高于血浆(P<0.05)。IFN-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10在儿童急性上呼道感染组中的水平显著升高(P<0.05);IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10在支气管肺炎患儿中的水平也显著升高(P<0.05);而在急性化脓性扁桃体炎患儿中12种细胞因子水平变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论:儿童常见呼吸道感染发病过程中外周血血浆和血清中特定细胞因子谱会发生改变,可作为判断上述疾病病情严重程度的临床免疫学监测指标。

厦门市6827例0~14岁患儿TORCH病原体感染状况调查

目的了解厦门市0~14岁患儿中TORCH病原体的感染状况和感染模式,为相关疾病的预防、诊断和治疗提供实验室参考依据。方法回顾性分析2018—2021年于厦门大学附属第一医院就诊的6827例0~14岁患儿的TORCH病原体[弓形虫(TOX)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型/Ⅱ型(HSVⅠ/HSVⅡ)]的血清抗体IgM检查结果。结果6827例患儿的TORCH-IgM总阳性率为4.83%,其中TOX-IgM、RV-IgM、CMV-IgM、HSVⅠ-IgM和HSVⅡ-IgM的阳性率分别为0.42%、0.50%、2.42%、1.26%和2.29%,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别比较,男性五项病原体阳性率均高于女性,且男、女性的RV-IgM、CMV-IgM、HSVⅠ-IgM和混合模式IgM阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);男、女性的TOX-Ig M、HSVⅡ-IgM阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄比较,婴儿组、幼儿组、儿童组的五项病原体阳性率均高于新生儿组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2018—2021年,HSVⅠ-IgM阳性率总体呈上升趋势,HSVⅡ-IgM阳性率总体呈下降趋势,TOX-IgM、RV-IgM、CMV-IgM阳性率无明显变化,但CMV-IgM阳性率始终处于较高水平。TORCH-IgM阳性患儿中不同疾病的构成比不同,其中以呼吸系统疾病构成比最高,神经系统疾病次之,且呼吸系统疾病和其他病种的构成比比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论厦门市0~14岁患儿中TORCH病原体感染较普遍,且以CMV和HSV感染为主,CMV-IgM阳性率仍然处于较高水平且HSVⅠ-IgM阳性率有逐年上升趋势,可见TORCH病原体的防治形势依然很严峻。

妊娠期高血压疾病患者外周血IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6的变化与意义

目的观察妊娠期高血压疾病患者外周血IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6水平的变化,探讨部分外周血细胞因子在疾病发病中的作用,与疾病严重程度是否相关。方法用基于免疫荧光技术的流式法测定60例患者(其中包含27例妊娠高血压患者、18例子痫前期患者、15例重度子痫前期患者)外周血IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6的水平,同时测定20例正常孕妇外周血IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6的水平。结果妊娠期高血压疾病患者外周血IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6水平分别是(12.53±1.32)pg/mL、(10.69±1.40)pg/mL、(1.02±6.77)pg/mL、(4.41±1.29)pg/mL、(23.32±4.58)pg/mL,正常孕妇分别是(10.25±1.42)pg/mL、(4.41±1.32)pg/mL、(6.86±4.62)pg/mL、(5.31±1.31)pg/mL、(6.82±1.02)pg/mL,2组比较IL-2、IL-4、IL-6,差异有统计学意义(P<0.05),IL-1β、IL-5,差异无统计学意义(P>0.05)。妊娠期高血压、子痫前期、重度子痫前期组间比较IL-2、IL-6差异有统计学意义(P<0.05),而IL-4差异无统计学意义(P>0.05)。结论妊娠期高血压疾病患者外周血IL-2、IL-6水平显著增高,并随病情严重程度而升高,IL-4水平显著降低但与疾病严重程度无关。外周血IL-2、IL-6和IL-4的表达水平异常可能诱导内皮细胞损伤、异常免疫激活,促进妊高症的发生及发展。

P-糖蛋白表达在食管贲门癌中的临床意义

目的探讨P-糖蛋白(P-gp)在食管贲门癌中的表达及临床意义。方法采用流式细胞免疫荧光法检测P-gp在32例食管鳞癌和32例贲门腺癌及相应癌旁组织中的表达。分析P-gp的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移之间的关系。结果P-gp在食管癌中的阳性表达率为85%,贲门癌中为65%,并且P-gp在食管贲门癌组织的表达均高于相应的癌旁组织(P<0.01)。P-gp的表达与淋巴结转移有关(P<0.01),而与肿瘤组织浸润深度无关(P>0.05)。结论食管贲门癌组织中P-gp有先天性高表达,这是造成食管癌化疗效果差的一个重要的原因。P-gp的表达可在一定程度上反映肿瘤淋巴结转移的生物学特征。

强直性脊柱炎患者疾病活动度与细胞因子的相关性研究

目的:研究强直性脊柱炎患者疾病活动度与细胞因子的相关性。方法:选取2020年9月至2021年3月在贵州中医药大学第二附属医院风湿科住院诊治的强直性脊柱炎患者180例,记录其年龄、身高、体质量和强直性脊柱炎病情活动度评分(ASDAS)的相关指标,采用流式免疫荧光法检测多种细胞因子[白细胞介素(IL)-2、IL-6、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,并进行相关性分析。结果:与低疾病活动度患者相比,活动度高的患者IL-6和IFN-γ水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析显示,ASDAS与IL-6(r=0.693)、IL-10(r=0.154)和IFN-γ(r=0.153)呈正相关(P<0.05)。二元Logistic回归分析结果显示,IL-6(OR=1.085,95%CI=[1.043,1.128],P<0.05)是强直性脊柱炎患者疾病活动度升高的独立危险因素。结论:强直性脊柱炎疾病活动度与IL-6和IFN-γ升高相关,可作为初步评估疾病活动度的参考指标。IL-10可能与AS疾病活动存在相关性,需要更多研究证实。

外周血淋巴细胞和贲门癌细胞体外化疗药敏相关性研究

目的研究外周血淋巴细胞和贲门癌细胞体外药敏相关性。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)快速比色法检测32例贲门癌患者外周血淋巴细胞与贲门癌细胞对9种化疗药物的敏感性。采用流式细胞免疫荧光法检测20例贲门癌患者外周血淋巴细胞与贲门癌细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达。结果外周血淋巴细胞与贲门癌细胞对9种化疗药物的平均抑制率呈正相关,其相关系数最大者为0.91,最小者为0.51,P均<0.05;而且两者P-糖蛋白(P-gp)的表达也呈正相关,相关系数为0.54(P<0.01)。结论贲门癌患者当不能取得手术标本时,可以用外周血淋巴细胞代替癌细胞进行MTT法体外药敏检测,为肿瘤患者的个体化用药提供一个新的治疗途径。

39428例抗着丝点抗体检测结果分析

目的分析不同疾病中抗着丝点抗体(ACA)的阳性分布情况。方法收集39428例不同疾病检测ACA抗体的患者资料,回顾性分析ACA分布情况。ACA采用间接免疫荧光法和多重微珠流式免疫荧光法检测。结果不同疾病中ACA的阳性率不同,原发性胆汁性肝硬化的阳性率最高(33.33%),其次为雷诺现象(16.82%),干燥综合征的阳性率为7.32%,自身免疫性肝炎的阳性率为6.52%,混合性结缔组织病的阳性率为5.84%,系统性硬化症的阳性率为6.11%,强直性脊柱炎的阳性率为3.49%,类风湿性关节炎的阳性率为3.60%。在649例ACA阳性(任一种方法结果为阳性)患者中,有272例2种方法检测均为阳性,有377例其中一种方法检测阳性;647例间接免疫荧光法阳性的患者中,1:1000有191例,1:100有104例,1:320有85例,1:3200有38例,1:10000有8例。结论ACA可在多种疾病中存在,自身免疫性疾病ACA阳性率高于非自身免疫性疾病;自身免疫性疾病2种方法检测ACA同时阳性的概率大于非自身免疫性疾病;自身免疫性疾病患者ACA荧光滴度以中高滴度为主,非自身免疫性疾病患者ACA荧光滴度以低滴度为主;ACA阳性患者血清中可出现其他多种自身抗体;当患者出现ACA阳性时,需进一步结合其他检测指标和临床症状进行综合判断。