基于流式分析技术的奶粉中金黄色葡萄球菌活菌快速定量检测方法研究

建立了一种奶粉中金黄色葡萄球菌活菌快速定量检测新方法。以异硫氰酸荧光素偶联的金黄色葡萄球菌多克隆抗体特异性标记金黄色葡萄球菌,再通过碘化丙啶来区分死活菌,建立流式分析法,并应用于奶粉样品中金黄色葡萄球菌活菌定量检测。结果表明,该流式分析法特异性好;当人工污染奶粉样品中金黄色葡萄球菌浓度在2.72×10^(3)~2.80×10^(8) CFU/mL之间时,流式检测方法与平板计数方法检测结果一致;该方法的检测限为2.72×10^(3) CFU/mL,检测时间为35 min。该方法具有快速和高效的优点,在食源性致病菌的快速检测和预警中具有良好的应用前景。

流式细胞仪分析法检测黑熊成纤维细胞周期同步化处理效果

分离培养黑熊皮肤成纤维细胞 ,传 3代 ,分别经血清饥饿 2～ 6 d和 10 g/ L Nocodazole处理 2 4 h后 ,用流式细胞仪分析 2个处理组和对照组细胞的周期相 ,以研究黑熊成纤维细胞同步化处理后的细胞周期时相的变化 ,探讨核移植供体细胞的细胞周期对核移植胚胎发育的影响。结果显示 ,血清饥饿组、Nocodazole处理组及对照组的 G0 +G1 期成纤维细胞的百分率分别为 (85 .0 5± 7.0 0 ) % ,(4 5 .9± 3.7) %和 (5 9.3± 6 .7) % ;G2 / M期细胞的百分率分别为 (10 .4± 6 .8) % ,(4 6 .3± 4 .2 ) %及 (2 3.0 5± 1.0 5 ) %。表明血清饥饿法能较好地使黑熊成纤维细胞同步于 G0 和 G1 期 ;Nocodazole处理可以使细胞较大程度同步于 G2 和 M期。

不同种类酵母菌对自动尿有形成分分析仪检测结果的影响及解决办法

有研究发现,酵母菌对UF-5000自动尿有形成分分析仪(简称UF-5000)检测红细胞有明显影响[1-3],但不同种类的酵母菌对红细胞检测结果影响的相关研究较少。为此,本研究拟分析不同种类和浓度酵母菌对尿液样本红细胞检测结果的影响,并提出相关解决办法。

全自动流式点阵免疫发光法测定抗MPO和抗PR3抗体的性能评估

目的评估全自动流式点阵免疫发光法(MBIA法)测定抗髓过氧化物酶(MPO)和抗蛋白酶3(PR3)抗体的检测性能。方法按照美国临床实验室标准化委员会(CLIS)EP15-A3文件进行精密度验证,按照EP28-A3文件验证参考区间。比较MBIA法和ELISA法检测抗PR3和抗MPO结果,结合间接免疫荧光法(IFT)评价不同方法对抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性血管炎(AAV)的诊断效能。结果 MBIA法检测抗PR3和MPO抗体批内、批间不精密度分别为3.65%、4.10%和2.28%、3.32%,小于厂家声明允许不精密度批内4.70%、批间8.60%,符合要求。MBIA和ELISA两种方法检测抗PR3和抗MPO的阳性、阴性、总符合率分别是40.00%、90.89%、90.72%和80.49%、97.65%、96.10%。MBIA法和ELISA法的敏感性、特异性以及阳性预测值分别是53.85%、91.69%、67.31%和55.38%、79.71%、46.45%。与IFT结果结合后,阳性预测值可分别提高至83.56%、73.48%。结论 MBIA法检测性能符合要求,其诊断AAV的效能要优于ELISA法,与IFT法结果结合可提高对AAV诊断的阳性预测值。

XN-2000血液分析仪低值PLT计数复检规则的制定

目的：通过评估XN-2000血液分析仪对PLT计数的检测性能，初步探讨联合人工镜检法和血液分析仪自动复检功能来制定低值PLT的复检规则。 方法：用XN-2000血液分析仪的3种通道计数650例新鲜全血标本的PLT，得出荧光PLT计数（PLT-F），电阻抗PLT计数（PLT-I）和光学PLT计数（PLT-O）。比较分析PLT-F、PLT-I和PLT-O的精密度及其与流式细胞分析法（FCM）和镜检法计数PLT的一致性。进而对本实验室原有的低值PLT复检规则重新进行制定。 结果：PLT-F变异系数（CV）为2.7%～4.7%，低于PLT-I和PLT-O的4.2%～16.2%。PLT在（2～50）×109/L区间时，PLT-F与FCM法PLT计数的一致性高于PLT-I和PLT-O，r分别为0.969、0.826和0.950,PLT-F与镜检法PLT的一致性也高于PLT-I和PLT-O，r分别为 0.914、0.874和0.898,提示PLT-F检测低值PLT的准确性优于PLT-I和PLT-O。通过对本实验室原有的低值PLT复检规则的重新制定，使复检的假阴性率降为零，人工复检率下降了51.47%（158/307）。新的复检规则为：当PLT-I＜80×109/L时，自动追加PLT-F检测，如果没有PLT相关报警出现，可直接报告PLT-F结果；当出现报警时，进行人工镜检，报告镜检PLT结果。 结论：与PLT-I及PLT-O相比，低值PLT-F检测具有更好的精密度和准确性。通过重新制定复检规则，可明显降低低值PLT的人工复检率。

病毒性皮肤病患者外周血淋巴细胞亚群的检测分析

目的探讨病毒性皮肤病患者的免疫功能状态。方法应用流式细胞仪分析检测486例病毒性皮肤病患者外周血中的淋巴细胞亚群,并与正常人进行比较。结果病毒性皮肤病患者之间外周血淋巴细胞亚群比较,CD4^+T细胞,CD8^+T细胞,CD3^-CD19^+细胞,CD3^-CD16^+56^+NK细胞,CD4^+/CD8^+差异有统计学意义(P<0.05)。单纯疱疹患者组与带状疱疹患者组比较,CD8^+T细胞,CD3^-CD16^+56^+NK细胞,CD4^+/CD8^+差异有统计学意义(P<0.05)。寻常疣患者组、扁平疣患者组与尖锐湿疣患者组三组相比较,CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、CD3^-CD19^+细胞、CD3^-CD16^+56^+NK细胞差异也有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比较,五种病毒性皮肤病患者组CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T、CD4^+/CD8^+细胞除带状疱疹患者组,CD3^-CD19^+细胞仅尖锐湿疣患者组,CD3^-CD16^+56^+NK细胞除尖锐湿疣患者组外差异均有统计学意义(P<0.05)。结论各类病毒性皮肤病患者均存在不同程度的免疫异常。免疫功能的紊乱是病毒性皮肤病患者发病的一个重要机制,在各类病毒性皮肤病患者的发生、发展过程中可能起到重要的作用。

3种方法对尿标本中红细胞与白细胞检测结果比较

尿液检查对泌尿系统疾病的诊治和疗效观察具有很高的临床应用价值。但是各种仪器和检测方法都有自身的优点和局限性,常出现检测结果不完全一致的现象,给临床医生判读带来困难。为此,本文对1 109份门诊尿液标本用UF-1000i尿流式细胞分析仪法（UF-1000i法）、

图像分析在骨肉瘤评价中的应用

目的:通过图像分析从骨肉瘤普通病理切片中获得光镜肉眼观察以外的信息。方法:对40例中央型骨肉瘤行计算机辅助的肿瘤细胞核形态分析。共设四个参数:核面积(Area)异形因子(EF)、颗粒/核面积比(P/N A-R)和颗粒/核密度比(P/N G-R)。同时用流式细胞分析法测定了核的DNA含量。结果:单一骨肉瘤各肿瘤细胞核Area有较大的分布范围。Area、P/N A-R、P/N G-R与流式细胞分析提供的DNA指数均有明确的相关性。按上述3个指标行核分级,各级骨肉瘤患者趋向于有不同的三年生存率。结论:细胞核形态图像分析能提供额外的评价骨肉瘤的信息。

化学发光法检测抗可提取核抗原抗体的临床应用研究

目的研究全自动、全定量和随机上样的化学发光法(CLIA)在针对抗可提取核抗原抗体(antiENA)检测结果在结缔组织病(CTD)的临床诊断价值,为临床实验室检测anti-ENA的方法学选择提供参考。方法同时利用CLIA、免疫斑点法(ID)和多重流式免疫分析法(MFI)对323例CTD患者、123例非结缔组织病组(Non-CTD)及70例健康对照组(NCs)开展针对抗核糖核蛋白/史密斯(RNP/Sm)抗体、抗史密斯(Sm)抗体、抗干燥综合征抗原A(SSA/Ro60)抗体、抗干燥综合征抗原B(SSB/La)抗体、抗组氨酰tRNA合成酶(Jo-1)抗体、抗硬皮病70(Scl-70)抗体和抗核糖体P蛋白(Rib-P)抗体的平行检测;分析CTD患者各抗体与ID和MFI检测结果一致性。使用ELISA方法就比对不同方法学差异样本进行复测验证。结果在NCs组中,CLIA法检测anti-ENA的阳性检出率均低于2%;在Non-CTD组中,各抗体阳性检出率均低于10%。在CTD中,CLIA分别与ID和MFI开展方法学比对分析。与ID相比,除抗SS-A抗体(71.21%)外,其他抗体一致性均大于85%;与MFI相比,除抗SSB抗体(69.66%)和抗Sm抗体(73.07%)外,其他抗体一致性均大于75%。针对抗Sm抗体,不同方法学差异样本进行ELISA方法学的重复验证,以其结果作为参考依据,再次开展一致性分析,总体一致性分别提升至96.28%;CLIA及MFI诊断效能分析中,抗Sm抗体的曲线下(AUC)面积分别为0.516 3及0.814 9,抗SSB抗体AUC面积分别为0.738 0及0.747 0。结论与ID和MFI相比较,CLIA在NCs中检测anti-ENA时具有最好的检测特异度,且与上述两种检测方法在CTD中的检测结果具有较好的一致性和符合率。由于不同检测方法在检测anti-ENA时灵敏度及特异度均存在一定差异,未来实验室方法学的选择时,应结合样本的临床诊断信息及方法学的具体特点(包括自动化程度、检测线性范围、样本随机上样和检测项目灵活组合)等方面综合判断。

CIK细胞体外培养的免疫表型

目的探讨体外培养过程中细胞因子激活的杀伤细胞(CIK)免疫表型的动态变化。方法通过向外周血单个粒细胞(PBMC)中加入白细胞介素2(IL-2)、γIL-1α、γ干扰素(γ-IFN)与抗CD3McAb,诱导出CIK细胞。经流式细胞分析法对CIK细胞进行动态表型分析。结果动态表型分析显示,在第14~21天时CD3+CD16+56+细胞为(31·6±5·5)%^(35·8±9·7)%,呈高表达的平台期。结论CIK细胞在体外培养14~21d,CIK细胞CD3+CD16+56+双阳性细胞呈高表达,此时临床应用可取得较好疗效。

银屑病患者外周血淋巴细胞亚群的研究

目的探讨各型银屑病患者免疫功能状态。方法应用流式细胞仪检测304例银屑病患者外周血淋巴细胞亚群,并与健康者进行比较。结果各型银屑病患者之间外周血淋巴细胞亚群比较,CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、CD3-CD16^+56^+NK细胞、CD4^+/CD8^+差异均有统计学意义(P<0.05)。与健康者比较,寻常型银屑病外周血CD3^+细胞降低,CD4^+细胞降低,CD8^+细胞升高;脓疱型银屑病外周血CD3^+细胞降低,CD4^+细胞降低;红皮病型银屑病外周血CD3^+细胞降低,CD4^+细胞降低,CD8^+细胞降低,CD4^+/CD8^+升高,关节病型银屑病外周血CD4^+细胞降低,CD8^+细胞升高,CD3-CD16^+56^+NK细胞降低,CD4^+/CD8^+降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论各型银屑病均存在不同程度的免疫异常,免疫功能紊乱是银屑病患者发病的一个重要机制,在银屑病的发生、分化过程中可能起到重要的作用。

乙型肝炎患者外周血单核细胞CD14^+ CD16^+亚群及HLA-DR的检测及其意义

目的:通过检测乙型肝炎患者外周血单核细胞各亚群分布情况以及HLA-DR表达水平,探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD14+CD16+单核细胞及HLA-DR的表达特点,以及与疾病进程之间的关系。方法:利用流式细胞仪(FCM)检测50例慢性乙型肝炎患者,其中21例免疫耐受(IT)患者、29例免疫活化(IA)患者,及31例正常人外周血CD14、CD16、HLA-DR的表达。同时调查肝功能、乙肝五项和血清HBV DNA等相应临床资料。结果:免疫活化组(IA)的CD14+CD16+亚群比率明显高于正常对照组和免疫耐受组(IT)(P<0.01);单核细胞CD14+CD16+亚群HLA-DR表达明显高于CD14++CD16-亚群(P<0.01);乙型肝炎患者CD14+CD16+单核细胞比率与ALT呈正相关(r=0.876,P<0.01),与HBV DNA载量成负相关(r=-0.267,P<0.01)。结论:CD14+CD16+单核细胞可能在乙型肝炎患者外周血中参与调节针对HBV的免疫反应,CD14+CD16+单核细胞与HBV复制和肝脏炎症之间存在相关性,因此检测单核细胞CD14+CD16+亚群及HLA-DR水平对于了解乙型肝炎患者疾病进程具有重要的临床应用价值。

表没食子儿茶素没食子酸酯对卡莫司汀处理后张氏肝细胞DNA损伤的保护作用

采用MTT法、Cometassay(彗星实验)和流式细胞分析法研究了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对卡莫司汀引起的张氏肝细胞DNA损伤的保护作用及其机制。结果表明:EGCG能阻止卡莫司汀所致张氏肝细胞的生长抑制,卡莫司汀单用对张氏肝细胞的IC50为43.31μg/ml,当用无毒浓度25μg/ml和50μg/ml的EGCG与卡莫司汀联用时,对张氏肝细胞的IC50分别提高至52.46μg/ml和46.65μg/ml。彗星分析结果表明EGCG还能减小卡莫司汀引起的张氏肝细胞DNA损伤,彗星Olive尾矩值由单用时的9.07±5.48降为联用时的6.02±2.46。EGCG还能减小卡莫司汀所致张氏肝细胞的早期凋亡率,25μg/ml的EGCG和20μg/ml的卡莫司汀联合处理4、6h和24h时,早期凋亡率分别从4.53±0.64(%)、6.01±0.14(%)、2.27±0.32(%)降至3.04±0.47(%)、5.61±0.10(%)、1.14±0.23(%)。说明EGCG能保护卡莫司汀对正常肝细胞的杀伤,其机理是它能减少这类药物引起的细胞DNA损伤,降低卡莫司汀所致细胞早期凋亡。

UF-100型全自动尿液沉渣检测仪测定参考范围调查

目的 确定UF - 10 0型全自动尿液沉渣检测仪检测健康人尿沉渣检测的参考值范围。方法 用UF - 10 0型全自动尿液沉渣检测仪随机检测 5 2 0例健康人不离心尿液标本 ,对尿液沉渣进行分析。结果 尿液中红细胞 (RBC)、白细胞 (WBC)、上皮细胞 (EC)、管型 (CAST)各年龄组之间检测值经 F 检验 ,差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ,但男、女性别之间差异有显著意义 (P <0 .0 5 )。结论 尿液RBC、WBC、EC的多少与年龄无关 ,但与性别有关。健康人参考值的确立 。

痤疮患者外周血淋巴细胞亚群的研究

目的探讨痤疮患者的免疫功能变化。方法应用流式细胞仪分析检测80例痤疮患者(痤疮组)外周血中的淋巴细胞亚群,并与80例正常人(正常组)进行比较。结果与正常组相比,痤疮组CD3+T细胞升高,CD3+CD4+T细胞降低,CD3+CD8+T细胞升高,CD3-CD19+细胞降低,CD3-CD16+56+NK细胞降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论免疫功能的紊乱是痤疮患者发病的一个重要机制,在痤疮的发生、发展过程中可能起到重要的作用。

泛发性湿疹患者外周血淋巴细胞亚群的研究

目的探讨泛发性湿疹患者的免疫功能变化。方法应用流式细胞仪分析检测200例泛发性湿疹患者(泛发性湿疹组)外周血中的淋巴细胞亚群,并与200例正常人(正常组)进行比较。结果与正常组相比泛发性湿疹组的CD3+T细胞降低,CD3+CD4+T细胞降低,CD3+CD8+T细胞升高,CD3-CD16+56+NK细胞降低,CD4+/CD8+降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫功能的紊乱是泛发性湿疹患者发病的一个重要机制,在泛发性湿疹的发生、发展过程中可能起到重要的作用。

红皮病性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群的研究

目的探讨红皮病性银屑病患者的免疫功能状态。方法采用免疫荧光染色标记法流式细胞分析检测红皮病性银屑病患者外周血中T细胞亚群的表达情况,并与正常人和寻常性银屑病患者比较。结果与正常人相比红皮病性银屑病患者外周血CD19+细胞、CD4+细胞、CD3-16+56+细胞、CD4+/CD8+比值均降低,差异有统计学意义,CD8+细胞升高,差异有统计学意义。结论细胞免疫功能紊乱是红皮病性银屑病发病的一个重要机制,但在寻常性银屑病进展致红皮病性银屑病的过程中体液免疫功能紊乱可能起一定作用。