流式微球分析技术联合检测Cys C、NGAL方法的建立及其在肾移植术后CMV感染患者中的应用

目的建立流式微球分析技术联合检测胱抑素(Cys)C和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的方法,并初步研究两者在肾移植术后巨细胞病毒(CMV)感染患者血清中的含量变化。方法实验方法的建立包括检测微球包被的效果和稳定性,优化Cys C和NGAL的检测含量范围,确定生物素化抗体浓度,确定PE-链霉亲和素浓度,绘制标准曲线图确定相关系数。采用该法检测对照组(10名健康人)、CMV阴性组(10例肾移植术后CMV-pp65阴性患者)和CMV阳性组(20例肾移植术后CMV-pp65阳性患者)的血清Cys C和NGAL含量。结果成功建立流式微球分析技术联合检测Cys C和NGAL的方法。对照组、CMV阴性组和CMV阳性组的血清NGAL含量分别为8 759(1 465)pg/ml、10 472(856)pg/ml、12 817(4 533)pg/ml,依次升高且差异有统计学意义(P<0.001)。3组间Cys C比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验建立流式微球分析技术联合检测Cys C和NGAL标准曲线的方法相关性和重复性良好,并初步验证NGAL含量在肾移植术后CMV感染中明显升高,提示肾移植术后CMV活动性感染可能对肾小管造成急性损伤。

流式微球分析技术检测人心肌钙蛋白T方法的建立

目的建立流式微球分析技术(cytoometric bead assay,CBA)检测人肌钙蛋白T(cTnT)方法。方法用鼠抗人的cTnT的单克隆抗体包被在已激活的羧基化聚苯乙烯微球上,然后再用包被好的微球与检测标本进行抗原抗体免疫反应,并加入羊抗人cTnT的多克隆抗体和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的驴抗羊的IgG,室温避光免疫反应一定时间后洗涤一次,上流式细胞仪检测FITC的荧光强度,以此测定标本中cTnT含量。结果通过正交试验,在100μl反应体系中,微球含量大约为1.25×106,选择10μg的鼠抗人cTnT单克隆抗体为最佳加入量,加入标本和抗体后,选择避光反应时间为120 min,洗涤选择一次,选择8μg/ml羊抗人cTnT多克隆抗体和20μg/ml FITC标记驴抗羊IgG为最佳工作浓度;方法检测灵敏度为16.0 pg/mL,线性范围是16-5 000 pg/mL,批内重复性变异系数为5.2-11.3%,回收率是94.7-111.5%,高浓度的胆红素、胆固醇和甘油三脂无明显干扰,与Roche Elecsys的电化学发光法有较好的相关性。结论自建CBA检测cTnT技术性能较好,可在临床工作中推广使用。

流式微球分析技术检测Hs-CRP对冠心病的临床诊断价值评价

目的探讨流式微球分析技术检测人血清中高敏C反应蛋白(Hs-CRP)水平对冠心病诊断的临床价值。方法采用流式微球分析技术检测健康人群和冠心病患者血清中Hs-CRP水平,用统计软件对其临床诊断效能进行评价。结果健康对照人群和患者血清标本中Hs-CRP水平差异有显著性。疾病组内不同病理类型(稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛和急性心肌梗死)之间Hs-CRP的检测结果差异均有显著性。根据Hs-CRP的ROC曲线下面积(AUC)进行统计分析,血清Hs-CRP水平用于诊断冠心病有显著意义,诊断灵敏度为87.5%,特异性为82.5%。结论血清中Hs-CRP水平对冠心病的诊断和分层有一定的应用价值,值得在临床上推广。

流式微球分析技术检测人心肌钙蛋白T的方法学性能评价

目的对自建的流式微球分析技术(Cytoometric bead assay,CBA)检测人肌钙蛋白T(cTnT)的方法进行性能评价。方法参照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)系列文件,结合工作实际,对方法的精密度、准确度、分析灵敏度、分析测量范围、回收试验、干扰试验进行了评价,并进行试验比对。结果 CBA检测cTnT在高低浓度范围内批内变异系数分别为5.21%和11.31%,批间变异系数分别为6.24%和13.16%,准确度相对偏倚在3.17%～5.39%之间,回收率在94.7%～111.5%之间;检测灵敏度为16.00ng/L,分析测量范围为16.00～5000ng/L,人体正常含量或含量偏高的三酰甘油、胆固醇和胆红素对cTnT检测的干扰很小,与电化学发光分析技术无显著差异。结论自建CBA检测cTnT技术性能较好,符合公认的质量指标,可在临床工作中推广使用。

流式微球分析技术联合检测血清MMP-9、MPO CD40L和t-PA的方法学建立及评价

目的建立流式微球分析技术联合检测人血清中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、髓过氧化物酶(MPO)、CD40配体(CD40L)、血浆纤溶酶原激活物(t-PA)的方法并对其进行系统性评价。方法分别将四种选择好一定浓度的捕获抗体(MMP-9、MPO、CD40L和t-PA鼠抗人单克隆抗体)包被在四种已激活的不同荧光强度编码的羧基化聚苯乙烯微球上,用棋盘法对试验条件进行优化选择,并应用CLSI的有关规则进行方法学评价。结果反应体系中四种鼠抗人单克隆抗体最佳加入量为10μg,最佳生物素标记抗体浓度为1:4000倍稀释,最佳反应时间为2h,亲和素最适孵育时间为1h。MMP-9线性范围是0.20～333.33ng/mL,批内变异系数为4.60%～8.80%,批间变异系数为8.80%～9.60%,准确度相对偏倚为2.80%～3.18%,回收率是94.8～102.50%,灵敏度为0.20ng/mL;MPO线性范围是0.26～111.11ng/mL,批内变异系数为5.90%～7.70%,批间变异系数为9.10%～11.40%,准确度相对偏倚为1.44%～4.12%,回收率是97.8～103.2%,灵敏度为0.26ng/mL;CD40L线性范围是0.32～111.11g/mL,批内变异系数为5.40%～6.50%,批间变异系数为8.90%～12.40%,准确度相对偏倚为2.72%～5.95%,回收率是97.20～105.30%,灵敏度为0.32ng/mL;t-PA线性范围是1.21～111.11ng/mL,批内变异系数为2.20%～2.90%,批间变异系数为6.30%～12.20%,准确度相对偏倚为1.23%～4.60%,回收率是97.20～101.30%,灵敏度为1.21ng/mL。高浓度的甘油三酯、胆固醇和胆红素对四种因子有一定的干扰率,低浓度的甘油三酯、胆固醇和胆红素对三种因子干扰较小。分别与ELISA方法比较无显著差异。结论自建的MMP-9、MPO、CD40L和t-PA1流式微球联合检测技术,可拓展流式细胞分析技术,值得临床推广使用。

自建流式微球分析技术联合检测动脉粥样硬化破裂标志物对急性冠脉综合征诊断价值的评价

目的探讨人血清中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、髓过氧化物酶(MPO)、CD40配体(CD40L)和组织型血浆纤溶酶原激活物(t-PA)水平含量对冠心病诊断的临床价值。方法采用自建的流式微球分析技术联合检测健康人群和冠心病患者血清中MMP-9、MPO、CD40L和t-PA水平,并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)方法比对,用统计软件对这些因子的临床诊断效能进行评价。结果健康对照人群和患者血清标本中MMP-9、MPO、CD40L和t-PA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),病例组内不同病例类型(稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛和急性心肌梗死)之间各因子的检测结果比较,差异有统计学意义(P<0.05),与ELISA方法比较差异无统计学意义(P>0.05),根据对各个因子工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)进行统计分析,血清MMP-9、MPO、CD40L和t-PA水平用于诊断冠心病有显著意义,各因子的诊断灵敏度分别为86.80%、83.43%、86.27%和88.58%;特异性分别为80.44%、84.62%、84.86%和78.27%。结论血清中MMP-9、MPO、CD40L和t-PA水平对冠心病的诊断和分层有一定的应用价值,值得在临床上推广。

流式微球分析技术检测重组人干扰素α-2b治疗的慢性乙肝患者血清干扰素-α浓度

目的探讨流式微球分析技术检测重组人干扰素α-2b（安福隆）治疗的慢性乙肝患者血清干扰素-α浓度的可行性。方法采集2012年6月～2014年10月的健康体检者和安福隆治疗的慢性乙肝患者血清及临床资料，采用流式微球分析技术检测慢性乙肝患者治疗组和健康体检人群血清干扰素-α浓度，并与ELISA方法进行比较。结果重组人干扰素α-2b治疗的慢性乙肝患者血清标本中,CBA法检测血清IFN吨的含量范围为15．85-641．40pg/mL，其浓度为（145．65±35．42）pg／mL；而ELISA法检测IFN-α的含量范围为10．43～495．90pg／mL，其浓度为（113．73±26．47）pg／mL；CBA法检测慢性乙肝治疗组IFN-α的含量略优于ELISA法（t=5．137,P=0．0065）。CBA法和ELISA法检测健康对照组中血清IFN—α的含量分别为（3．56±0．96）pg／mL和（3．49±0．92）pg／mL。结论流式微球分析技术能够很好检测血清中的干扰素-α的浓度，为临床上监测IFN—α治疗的慢性乙肝患者血清中的IFN-α的浓度提供参考价值。

流式微球分析技术应用于小鼠血清免疫球蛋白同种型的检测研究

目的：建立流式微球分析技术鉴定免疫球蛋白同种型的方法，为其应用于单克隆抗体制备提供参考。方法：采用绵羊红细胞致敏小鼠产生相应抗体，利用Mouse Immunoglobulin Isotyping CBA Kit检测血清中免疫球蛋白同种型及κ、λ轻链的表达。结果：阴性对照显示所有免疫球蛋白同种型检测阴性；标准样品1显示IgG1λ，IgG2bλ，IgAλ和IgG1κ，gG2bκ，IgAκ，IgEκ阳性，标准样品2显示IgG2aλ，IgG3λ。IgMλ和XgG2aκ，IgG3κ，IgMκ阳性；与标准一致。原血清检测显示所有免疫球蛋白同种型均阴性；血清1：10～1：10000稀释后检测结果显示IgMλ链及IgG1，IgG2a。IgG2b、IgG2b，IgG1，IgG2bκ链随稀释倍数不同有不同的表达。血清在1：1000～1：10000稀释范围检测结果较一致。其中又以1：5000为最佳检测浓度。而血清1：100稀释后虽然κ链的表达均能检测到，但与表达的水平不相关；血清1：100000稀释后只检测到IgG1，IgG2κ链的表达。结论：CBA方法分析免疫球蛋白同种型属于定性检测，方法灵敏、简便快速且便于大量检测，是目前鉴定免疫球蛋白同种型的较优方法。

流式微球分析技术检测急性心肌梗死患者血清肌钙蛋白T的临床意义

目的用自建的流式微球分析技术(CBA)对急性心肌梗死(AMI)患者和健康对照组进行肌钙蛋白T(cTnT)检测,并与电化学发光法进行比较,观察其临床应用价值。方法用鼠抗人cTnT的单克隆抗体包被在已激活的羧基化聚苯乙烯微球,使用羊抗人cTnT的多克隆抗体与cTnT结合,标记在驴抗羊多克隆抗体上的异硫氰酸荧光素(FITC)为指示剂,建立CBA。同时以电化学发光法作对照。结果 AMI组和对照组血清cTnT经CBA方法和电化学发光法检测,2组结果差异均有统计学意义。CBA方法和电化学发光检测结果比较差异无统计学意义,2种方法的回归方程为Y=0.987X+0.013,r=0.9976,具有显著的相关性。结论自建CBA检测技术检测cTnT,与电化学技术检测结果比较差异无统计学意义,具有显著的相关性,可在临床工作中推广使用。

流式微球技术在小分子化合物免疫检测中的应用

流式微球分析技术具有高通量、灵敏、快速且可同步进行多参数分析等特点,在过去的几年里主要应用于医疗诊断等领域,而用于小分子化合物的识别与检测的报道较少。该文介绍了小分子化合物流式微球免疫检测技术原理和临床疾病诊断、治疗方面的应用,探讨并分析了目前该技术存在的问题,展望了其在食品安全、环境监测等领域的应用前景,为开展小分子化合物流式微球检测技术研究提供了新的思路。

流式微球检测超敏C反应蛋白方法学的建立及性能评价

目的建立流式微球分析技术(CBA)检测人血清中超敏C反应蛋白(hs-CRP)的方法并对其进行系统性评价。方法将hs-CRP鼠抗人单克隆抗体包被在已激活的羧基化聚苯乙烯微球上,用正交试验对试验条件进行优化选择,并应用美国临床实验室标准化协会的有关规则进行方法学评价。结果试验选择hs-CRP鼠抗人单克隆抗体的加入量为10μg,生物素标记的羊抗人单克隆抗体的稀释倍数为1∶540,第一次反应时间为2h、洗涤2次,PE标记亲和素的稀释倍数为1∶1 000,第2次反应1h洗涤1次。方法学评价显示,CBA检测hs-CRP的分析灵敏度为0.03ng/mL,线性范围为0.03～333.33ng/mL,批内变异系数为2.70%～4.44%,批间变异系数为4.99%～9.52%,准确度相对偏倚为2.17%～4.39%,回收率为98.31%～104.60%。高浓度的三酰甘油、胆固醇和胆红素对3种因子有一定的干扰率,低浓度的三酰甘油、胆固醇和胆红素对3种因子干扰较小。分别与免疫荧光方法比较差异无统计学意义。结论自建的hs-CRP流式微球检测技术性能指标满足公认的质量指标,可拓展流式细胞分析技术,值得临床推广使用。

基于新型标记材料的免疫分析技术在真菌毒素检测中应用的研究进展

食品中真菌毒素污染成为近年来食品安全检测领域的热点和难点。免疫分析技术具有检测快速、操作简便、价格低廉且环境友好等优点,适合应用于食品安全检测领域。本文对基于新型标记材料的免疫分析技术,包括酶联免疫吸附法、免疫层析技术、电化学免疫传感技术、免疫芯片技术、基于免疫分析的流式微球技术和时间分辨荧光免疫分析技术,应用于粮食产品中真菌毒素快速检测的研究现状进行综述,系统分析了各种免疫分析技术的优缺点,为免疫分析技术在真菌毒素检测的应用及发展提供参考,同时也为保障粮食产品的安全提供了新思路。

Th1/Th2/Th17型细胞因子在口腔扁平苔藓患者血清和唾液中的表达及临床意义

目的探讨口腔扁平苔藓(OLP)患者血清和唾液中Th1/Th2/Th17型细胞因子水平表达及临床意义。方法选取2017年1月至2019年10月该院口腔科OLP患者26例,并分为非糜烂型OLP(NEOLP)组(14例)和糜烂型OLP(EOLP)组(12例)。同时选取健康志愿者25例作为对照组。采用流式微球分析技术(CBA)测定各组血清和唾液中Th1/Th2/Th17型细胞因子水平。结果3组血清和唾液中IL-2、IL-10和IFN-γ水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EOLP组、NEOLP组血清和唾液中IL-4、IL-6、IL-17A和TNF-α水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。EOLP组上述各指标与NEOLP组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。血清和唾液中Th1/Th2/Th17型细胞因子水平无相关性(P>0.05)。结论血清和唾液中IL-4、IL-6、IL-17A和TNF-α变化是促进OLP的部分原因。