流式微球联合检测炎症性因子IL-6、TNF-α和MCP-1方法学的建立

目的建立流式微球联合检测技术检测人血清中IL-6、TNF-α和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的方法并对其进行性能评价。方法以包被在3种羧基化聚苯乙烯微球上的IL-6、TNF-α和MCP-1单克隆抗体作为捕获抗体,相应的生物素化单克隆抗体作为检测抗体,用双抗体夹心法检测血清标本中的IL-6、TNF-α和MCP-1含量。用正交试验对试验条件优化选择,用CLSI的有关规则进行方法学评价。结果检测IL-6、TNF-α、MCP-1的线性范围分别为1.52～3 333.33 pg/mL、1.52～1 111.11 pg/mL、4.57～3 333.33 pg/mL;灵敏度分别为1.13 pg/mL、1.07 pg/mL、2.52 pg/mL;低值、高值批内变异系数(CV)分别为1.98%和2.31%、2.90%和2.67%、2.92%和2.63%;批间CV分别为3.52%和4.17%、4.91%和4.27%、4.23%和3.70%;准确度相对偏倚分别为2.19%～3.66%、1.85%～2.53%、3.06%～5.15%;回收率分别为95.4%～101.5%、97.3%～104.2%、95.2%～104.3%;三酰甘油、胆固醇和胆红素对本法基本无干扰;本法与Flow Cytomix试剂盒检测结果无显著差异。用本法检测血清中IL-6、TNF-α、MCP-1参考值分别为2.68～6.16 pg/mL、4.10～8.80 pg/mL、23.27～82.73pg/mL。结论流式微球联合检测血清IL-6、TNF-α、MCP-1的分析性能良好,可实现IL-6、TNF-α、MCP-1的联合检测。

接种纯化人用狂犬病疫苗对Th1／Th2类细胞因子谱的影响

目的研究人用狂犬病纯化疫苗（RV）对人体抗原特异性Th1／Th2细胞因子谱的影响。方法对20例暴露者进行RV的全程接种，在开始接种RV的第0天、14天、45天时分别采血并分离人外周血单个核细胞（PBMC）与RV进行培养，采用ELISA法检测血清抗狂犬病病毒抗体，体外培养检测淋巴细胞转化增殖能力（MTT法），流式微球分析技术（CBA）法检测细胞培养上清液中Th1类细胞因子（IFN-γ、TNF、IL-2）及Th2类细胞因子（IL--4、IL-5、IL-10）的水平。结果暴露组全程注射RV后，19例于第45天、1例于第60天检测血清抗狂犬病病毒抗体阳性，阳性率100％。RV刺激后，暴露组第14天、第45天淋巴细胞增殖能力显著增高，第45天淋巴细胞增殖能力明显高于第0天（P〈0．05）；当RV刺激后，暴露组第14天、第45天产生IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5的含量高于未刺激组及暴露组第0天水平（P〈0．05）；TNF、IL-10的含量各组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论RV在刺激机体产生体液免疫的同时，可以诱导机体产生特异性细胞免疫，Th1的免疫应答尤为显著，提示细胞免疫在预防和控制狂犬病病毒感染中发挥重要的协同作用。

褐藻胶对小鼠脾淋巴细胞Th1/Th2细胞因子谱影响的体内外研究

目的研究褐藻胶对小鼠脾淋巴细胞Th1/Th2细胞因子谱的影响。方法体内实验:分别设阴性对照组和两个褐藻胶组(0.50g/kgbw和1.50g/kgbw),每组各5只C57BL/6小鼠,分别经口给予纯净水和褐藻胶,30天后分离脾淋巴细胞,培养48h后取上清采用流式微球分析术(CBA)方法分析白细胞介素(IL-2、IL-4、IL-5)、肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。体外实验:分离C57BL/6种小鼠脾淋巴细胞,与褐藻胶(25mg/ml和50mg/ml)培养48h后取上清采用CBA方法分析IL-2、IL-4、IL-5、TNF和IFN-γ水平。结果体内实验:0.5g/kgbw和1.5g/kgbw褐藻胶组IFN-γ表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01),而IL-2和IL-4表达水平下降(P<0.01,P<0.05)。体外实验:25mg/ml和50mg/ml褐藻胶组TNF、IL-2和IL-4表达均明显高于阴性对照组(P<0.05,P<0.01),50mg/ml褐藻胶组IL-5表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01)。结论无论是在体内还是体外实验条件下,褐藻胶对小鼠脾淋巴细胞分泌的Th1/Th2细胞因子谱均有影响。

接种纯化人用狂犬病疫苗对妊娠期Th1/Th2类细胞因子谱的影响

目的研究人用狂犬病纯化疫苗(RV)对妊娠期Th1/Th2类细胞因子谱的影响。方法对所有可疑狂犬病毒暴露者进行RV的全程接种,在接种RV的第0、14、45天时采血并分离外周血单个核细胞与RV进行培养,采用ELISA法检测抗狂犬病病毒抗体,体外培养检测淋巴细胞增殖能力,CBA法检测细胞培养上清液中Th1类细胞因子:干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-2(IL-2)以及Th2类细胞因子:IL-4、IL-5、IL-10的水平。结果 17例暴露者于RV全程注射后17d(第45天)抗体检测阳性;RV刺激后,暴露者第45天淋巴细胞增殖能力明显高于第0天(P<0.05);当RV刺激后,暴露组第14天、第45天产生IL-2、IL-4、IL-5的含量显著高于未刺激组及暴露组第0天水平(P<0.05)。结论妊娠期注射RV在刺激机体产生体液免疫的同时,可以有效地诱导Th1/Th2类细胞因子的产生。