应用改良流式法检测猕猴和食蟹猴体内血型抗体水平的分布情况

绝大部分灵长类动物存在与人类相似的ABO血型系统,该研究采用改良流式法(flow cytometry method,FCM)检测猕猴及食蟹猴血清中血型抗体水平的分布情况。以流式细胞术为基础,使用商品化人源红细胞为靶细胞,并通过加入特异性荧光标记的抗人IgM或IgG二抗,对收集的实验用猕猴及食蟹猴的血清样本进行检测,以人类健康受试者的血清样本为对照,比较两者血型抗体水平的差异。结果显示:预先用人O型浓缩红细胞吸附猴血清中所含种属间非特异性抗体后,FCM法能够准确检测其血型抗体水平及分型,并且发现猴血清中天然血型抗体的水平明显低于健康人(P<0.05)。由此得出:通过预处理清除非特异性抗体的干扰后,FCM法同样适用于灵长类动物血清中血型抗体的检测,也为构建灵长类动物模拟人ABO血型不合器官移植模型提供了技术保障和实验数据。

Vero-E6细胞培养中汉坦病毒抗原流式细胞术检测方法的建立及与ELISA、IFA方法的比较

目的建立运用流式细胞仪检测Vero-E6细胞中汉坦病毒抗原的方法,并与间接免疫荧光法(IFA)、ELISA进行比较。方法将汉坦病毒感染10d的Vero-E6细胞以A35单克隆抗体为一抗,FITC标记羊抗鼠抗体为二抗,采用流式细胞仪检测表达抗原的细胞,并将病毒不同感染天数及病毒不同载量感染情况下的抗原检测结果与IFA、双抗体夹心法ELISA进行比较。结果流式细胞术在感染后的第2天可检出的阳性细胞数为2.60%,其最低检出的病毒感染载量为50pfu/ml;而IFA和双抗体夹心法ELISA则分别在感染后的第3天、第2天能检出抗原,最低检出的病毒感染载量均为50pfu/ml。结论流式细胞术检测法作为一种检测细胞内汉坦病毒抗原的方法具有简便、灵敏快速,与ELISA、IFA方法比较,可更直接准确定量。

不同标记法及去红细胞法对检测微量脐血CD34^+造血干细胞含量的影响

目的 采用 ISHAGE(international society of hematotherapy and graft engineering)法和常用的 CD34+造血干细胞流式检测方法对同一脐血样品进行比较实验 ,确定更适用于微量脐血 CD34+造血干细胞含量检测的方法。方法 分别采用 ISHAGE造血干细胞计数协会推荐方法、低渗 NH4 Cl去红细胞 CD4 5 / CD34双色标记法 (NH4 Cl双标法 )、Optilyse C溶血剂去红细胞 CD34单色标记法 (Optilyse C单标法 )、低渗 NH4 Cl去红细胞 CD34单色标记法 (NH4 Cl单标法 )、羟乙基淀粉沉淀去红细胞 CD4 5 / CD34双色标记法 (HES双标法 )检测脐血造血干细胞含量 ,并比较不同方法测得数据的差异。结果 8份脐血标本用 ISHAGE方法测得 CD34+造血干细胞含量的中位数为 0 .2 78% ,NH4 Cl双标法测得结果为 0 .2 97% ,与 ISHAGE方法相比差异无显著性。用 HES双标、Optilyse C单标法和 NH4 Cl单标法测得的结果分别为 5 .715 % ,0 .391%和 0 .74 1% ,与ISHAGE方法相比差异有显著性。结论 ISHAGE方法是一种公认的准确性高 ,重复性好的检测造血干细胞方法。Optilyse C单标法、NH4 Cl单标法和 HES双标法测定结果比实际值偏高。

用三种检测方法对尿液中的有形成分进行检测的结果对比

目的:探讨用三种检测方法对尿液中的有形成分进行检测的结果。方法 :对2014年6月~12月期间我院检验科采集的1000份尿液标本的检测资料进行回顾性研究。对这1000份尿液标本中的有形成分均使用尿干化学法、尿流式细胞仪法和尿液沉渣镜检法进行检测。然后,比较用这三种检测方法对尿液标本中的有形成分进行检测的阳性率。结果 :对白细胞和管型用尿沉渣镜检法进行检测的阳性率明显高于使用尿干化学检测法和尿流式细胞仪检测法进行检测的阳性率,对红细胞用尿干化学检测法进行检测的阳性率明显高于用尿流式细胞仪检测法和尿液沉渣镜检法进行检测的阳性率,差异具有显著性(P<0.05)。结论 :这三种检测方法均可对尿液中的有形成分进行检测。但是,用尿液沉渣镜检法对尿液中的有形成分进行检测的的阳性率均较高,可作为临床上对尿液中的有形成分进行检测的首选方法。

细胞凋亡检测技木的研究进展

细胞凋亡是一种不同于细胞坏死的细胞死亡方式,是在一定的生理或病理情况下,机体为维护内环境的稳定,通过基因调控,激活内源性核酸内切酶而发生的细胞自动消亡的过程,亦称为程序化细胞死亡(programmed celldeath,PCD)。自1972年 Kerr

前癃通含药血浆对前列腺间质细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨前癃通胶囊含药血浆对体外培养前列腺间质细胞增殖和凋亡的影响,为中药复方治疗前列腺增生(BPH)提供实验理论依据。方法按随机原则对入选患者进行实验分组,制备低、中、高剂量前癃通含药血浆,当细胞接近长成单层后进行免疫荧光检测间质细胞鉴定,加含药血浆后培养0、24、48、72 h再分别进行[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT法3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]检测,培养到24 h进行流式细胞分析法检测(Flow Cytometry,FCM)。结果 MTT法检测,不同剂量含药血浆作用于前列腺间质细胞以后,24 h时高剂量组与各组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);48 h时各剂量组间比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);72 h时高、中剂量组与空白组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01),高剂量组与各组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。流式细胞检测,中剂量组与空白组比较差异有显著统计学意义(P<0.01);高剂量组与各组间比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论中药前癃通含药血浆可抑制体外培养前列腺间质细胞增殖,促进前列腺间质细胞凋亡。

中药配合GP方案对非小细胞肺癌晚期患者生活质量及免疫功能的影响

目的观察芪连扶正胶囊配合吉西他滨联合顺铂(GP方案)化疗对非小细胞肺癌(NSCLC)晚期患者生活质量及免疫功能的影响。方法选取NSCLC晚期患者64例,随机分为观察组与对照组,各32例。观察组采用芪连扶正胶囊联合GP化疗治疗,对照组仅给予GP方案化疗,观察2组治疗前后KPS评分、体质量变化,采用流式细胞术检测法检测2组T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞(NK细胞)变化,并通过蛋白芯片技术检测法观察治疗前后肿瘤标志物CEA、CA125变化。结果观察组治疗2个周期后生活质量卡氏评分、体质量改善均显著优于对照组(P<0.05);且观察组治疗后机体免疫功能较对照组明显提高,肿瘤标志物各项指标较对照组显著降低(P<0.05)。结论芪连扶正胶囊联合GP方案化疗可有效改善NSCLC患者临床症状,提高营养状态及免疫功能,具有增效减毒作用。

藻类生长抑制试验中藻细胞计数方法比较

[目的]研究农药制剂对藻类生长抑制试验中应用分光光度法、流式细胞仪检测法替代血球计数法用于藻细胞计数的可行性。[方法]采用连续扫描(400-780 nm)确定分光光度法的最佳测试波长;并通过对比血球计数法、分光光度法、流式细胞仪检测法之间的测试结果,为稀释液类型不同的农药选择合适的藻细胞计数方法。[结果]扫描获得对小球藻的最佳检测波长为687 nm;分光光度法与流式细胞仪检测法检测结果间无显著差异,2者与血球计数法所得EC50值有时会存在显著差异,但这种差异不影响毒性等级的划分;稀释液中有微米级固体颗粒存在的农药,采用流式细胞仪检测时易发生堵塞;且流式细胞仪存在将农药稀释液中的固体颗粒与油珠误识别成藻活细胞的可能性。[结论]稀释液无论是哪种类型,分光光度法均可以作为血球计数法的替代方法;对于稀释液为纳米溶液及真溶液的农药,流式细胞仪可以替代血球计数法进行检测。

穿孔素和颗粒酶B的表达与肾移植术后急性排斥反应的关系

目的探讨急性排斥反应发生的机制,寻找适合临床早期诊断急性排斥反应(AR)的敏感指标。方法采用免疫组织化学法检测移植肾组织中穿孔素和颗粒酶B的表达;利用流式细胞仪检测法和免疫细胞化学ABC法,检测外周血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B的表达。结果AR的移植肾病理标本均100%表达穿孔素和颗粒酶B,二者的表达情况类似,主要定位于肾小管上皮细胞和间质淋巴细胞的胞浆和胞膜,与病理分级呈正相关,颗粒酶B的相关程度更好。发生AR的患者外周血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B的表达较肾功能稳定的患者有明显的升高,而且在出现明显的AR临床症状前3d就已经开始升高,经过有效的抗排斥治疗后,表达明显减弱或转阴。结论监测外周血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B的表达水平,可做为早期发现AR的一种检测方法。穿孔素和颗粒酶B可以反映急性排斥的病情,对移植肾的预后有一定的指导价值。