基于流式细胞仪提高乳制品商业无菌检验时效性的研究

目的基于流式细胞仪探究提高乳制品商业无菌检验项目时效性。方法以地衣芽孢杆菌CMCC(B)63552和蜡样芽孢杆菌CMCC(B)63303菌株制备定量参考品。以4种灭菌乳为基质,制备染菌浓度分别为800、8000、80000 CFU/mL的菌悬液,测试流式细胞仪法灵敏度。制备染菌浓度为8 CFU/样品和80 CFU/样品的灭菌乳和调制乳样品,经(36±1)℃保温(24±2)h后,按照GB 4789.26法和流式细胞仪法进行检测,并分析比较两种方法检测结果。结果在灭菌乳基质中,染菌浓度为800 CFU/mL时,流式细胞仪法对人工污染地衣芽孢杆菌样品的阳性检出率为75%,而对人工污染蜡样芽孢杆菌的样品均未检出阳性;染菌浓度为8000 CFU/mL和80000 CFU/mL时,流式细胞仪法对地衣芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌污染样品的阳性检出率均为100%。对人工污染8 CFU和80 CFU地衣芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的灭菌乳和调制乳样品,经保温处理后,流式细胞仪法检出率为100%,GB 4789.26法中未见样品膨胀,但是镜检和培养结果检出率为100%。结论当样品中染菌浓度≥8000 CFU/mL时,流式细胞仪法可稳定检出。人工污染地衣芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的灭菌乳和调制乳样品经保温处理(24±2)h后,流式细胞仪法和GB 4789.26法检出率均为100%。

流式细胞仪平台支撑本科细胞生物学实验课教学改革的实践

在流式细胞术检测细胞凋亡实验中,借助流式细胞仪平台,从教学模式、实验内容、仪器准备、教学素材等方面对细胞生物学实验课进行改革,取得了较好的教学效果。这种仪器平台与教学团队共同探索教学改革的模式,充分发挥大型仪器设备在人才培养方面的潜能,可为其他高校仪器平台建设提供参考。

流式细胞仪样品预处理系统的设计与实现

根据流式细胞仪对样品“均一化”的需求,研制了一套基于微流控细胞分选技术的流式细胞仪样品预处理系统,装置可以实现对粒径小于100µm细胞或微粒的驱动和分选.系统主要包含微流控分选芯片和样品驱动模块两部分,通过聚焦不同位置,实现了对不同粒径细胞/颗粒的有效分离.系统无需对细胞进行标记处理,经分选的细胞便于后续流式细胞仪检测.经验证,系统能够有效去除牡蛎血淋巴细胞样品中的大粒子杂质,提高细胞样品的稳定性和均一性,增加流式细胞仪检测结果的准确性.

基于流式细胞仪的激光器驱动系统研究与设计

为获得适用于流式细胞仪的功率稳定、波长稳定、低噪声的激光光源,设计了一款恒功率控制的半导体激光器驱动系统。系统采用多量子阱激光二极管,以STM32为主控核心,以MAX8521芯片为温度控制核心,采用双闭环功率控制,实现对激光器输出光功率的高精度低噪声控制。实验结果表明,该系统的温度波动在±0.016℃范围内,温度控制不稳定度为±0.055%,输出光功率长期不稳定度为±0.078%,光噪声率为0.109%,输出光波长稳定在637~638 nm,仪器分辨率的全峰宽变异系数均小于等于1.70%,优于YY/T0588-2017流式细胞仪行业标准的要求。所设计的半导体激光器驱动系统温控精度高、输出长期稳定、光噪声小、成本低,能够有效满足流式细胞仪检测的需求。

流式细胞仪在大白菜倍性育种中的应用

为建立一套能够快速准确鉴定四倍体大白菜倍性的流式细胞术应用方法,以12种已知倍性的蔬菜作物验证流式细胞仪倍性检测结果,同时以二倍体大白菜‘冀白4号’和四倍体大白菜‘多维462’、‘多505’和‘多育2号’为材料,对不同时期、不同部位取材并进行倍性鉴定,最终筛选出合适的取样时期与部位。结果表明,12种已知倍性的蔬菜验证了本研究所用流式细胞仪鉴定结果的准确性与可靠性;‘冀白4号’、‘多维462’、‘多505’和‘多育2号’在子叶期取幼嫩子叶的倍性检测结果均与已知倍性相符。因此,子叶期的幼嫩子叶为大白菜鉴定倍性取材的最佳时期与部位。

自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗新方法

自动清洗类型流式细胞仪长期高负荷使用,会存在碎片信号过多问题,对低浓度定量实验产生严重干扰。本工作设计了一种三阶段清洗进样端的新方法,清洗的同时进行信号采集,监视仪器状态变化。结果表明,通过预清洗,可基本清除悬浮颗粒并且附着在进样端的生物膜发生了活化;正式清洗可以有效地去除进样端内壁附着物;复清洗则使破碎悬浮的生物膜碎片颗粒被充分冲洗去除并且背景颗粒数及荧光值达最低水平。通过这种新的清洗方法,能使得细胞仪保持良好的工作工况状态。

流式细胞仪对甘蓝花粉倍性的测定

利用流式细胞仪测定甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)花粉的倍性,以甘蓝GL21028的花粉为材料,以叶片为对照,比较花粉2种处理方式、3种不同细胞裂解液、2种核酸染料的效果差异。通过B缓冲液处理后获取的花粉细胞可以直接染色,为最简便处理方式;采用“Aru”buffer和Y 2种裂解液,染色剂DAPI,处理甘蓝叶片和花粉,通过流式细胞仪检测,样本细胞DNA成峰集中,细胞碎片很少;配制的Y裂解液能够适用甘蓝材料流式细胞仪的观察。甘蓝花粉通过B缓冲液处理后,可以直接作为流式细胞仪倍性鉴定的材料,不再需要其他处理,配制的Y裂解液可以得到较好的试验结果。

荧光显微镜与流式细胞仪融入医学实验技术专业实验教学探究

针对构建多层次实验教学平台、改进实验教学方法以及丰富实验教学内容等教学改革问题,将大型仪器的使用与医学实验技术专业本科生实验教学相融合,优化实验教学模式的同时,提升大型仪器在实验技术人才培养上的作用。以探究“H2O2诱导RAW264.7细胞系细胞凋亡”为出发点,学生利用研究级倒置荧光显微镜观察细胞核Hoechst 33258染色情况,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并自行查阅文献分析实验结果,完成开放性实验教学。通过这种模式,提高医学实验技术专业学生对细胞凋亡知识和大型仪器实践操作的掌握水平,为学生未来胜任实验技术工作打下良好基础。

流式细胞仪及光学系统设计

本文设计了流式细胞仪和光学系统,以实现对细胞的高效分析和检测。首先,介绍流式细胞仪的原理和结构,重点讨论设计参数的选择与优化。其次,对鞘流系统进行仿真设计,以保证流体的稳定流动和样本的准确检测。再次,设计激发光源和光束成形系统并进行验证,保证光源的稳定性和光束的精准成形。最后,对散射光探测光路进行设计和验证,以准确捕获和分析样本散射光。本文研究可为流式细胞仪和光学系统设计提供参考。

流式细胞仪在恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群中的检测价值

目的 探讨流式细胞仪在恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群中的检测价值。方法 选取2019年4月至2023年4月于南昌市一人民医院住院的82名恶性淋巴瘤患者作为试验组,另选择同期82名健康体检者作为对照组,均采用流式细胞术测定外周血T细胞亚群(CD3^(+),CD4^(+),CD8^(+),CD4^(+)/CD8^(+))。比较所有受检者外周血T细胞亚群的变化。结果 试验组CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);两组CD4^(+)、CD8^(+)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。根据肿瘤类型将试验组分为霍奇金淋巴瘤组和非霍奇金淋巴瘤组,两组间各项外周血T细胞亚群指标比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组的CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);三组CD4^(+)、CD8^(+)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。根据肿瘤分期将试验组分为Ⅰ~Ⅱ期组和Ⅲ~Ⅳ期组,Ⅰ~Ⅱ期组CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于Ⅲ~Ⅳ期组,差异均有统计学意义(P <0.05)。Ⅰ~Ⅱ期组CD3^(+)水平低于对照组,CD8^(+)高于对照组;Ⅲ~Ⅳ期组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平低于对照组,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 采取流式细胞仪检测恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群水平,可以有效诊断患者病情、分期和免疫状态,应用效果显著。

CytoFLEX流式细胞仪的常见故障诊断与处理措施

流式细胞术普遍应用在肿瘤学、细胞生物学、免疫学等诸多领域中,是临床疾病的重要诊疗手段,也是科研工作中常用的一种技术方法。CytoFLEX流式细胞仪是我国研发的一种新型仪器,运用了“Clear Focus”技术与专利的WDM收集模块,大幅缩减了仪器的体积及成本,与传统的流式细胞仪有着明显的区别。本文简述CytoFLEX流式细胞仪的常见故障,介绍其相应的处理措施,以期让更多的仪器使用者能够更好地应对突发故障,促进仪器高效运行。

流式细胞仪用于监测HIV/AIDS患者CD4+T淋巴细胞计数的临床应用

本项探究专注于流式细胞仪对HIV/AIDS病例中CD4+ T淋巴细胞数量的有效监测。方法 借助流式细胞仪科技,对HIV/AIDS病例中CD4+ T淋巴细胞亚群进行逐一剖析。样本涵盖了40位身心健康的人士,25位患有轻度至中度HIV/AIDS的病例以及25位深受重度HIV/AIDS影响的病例。结果 无差别于病例的严重程度,轻中度或重度HIV/AIDS病例的CD4+ T细胞估计数均比健康个体有明显下降,尤其在CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+亚群,这种差距表现得更为明显。统计分析结果中,参照组与重度组在CD8+CD45RA+(t=6.571, p<0.001)和CD8+CD45RO+(t=9.581, p<0.001)亚群中的差异具有统计学意义。结论 流式细胞仪技术能有效监测HIV/AIDS患者的CD4+ T淋巴细胞计数,对不同病情程度的患者提供精确的细胞亚群分析,有助于医生更好地理解病情进展和治疗响应,从而为患者提供更合适的治疗方案。

流式细胞仪在肾移植术后慢性肾衰竭患者免疫功能监测中的应用价值分析

目的分析流式细胞仪在肾移植术后慢性肾衰竭患者免疫功能监测中的应用价值,为临床治疗提供参考。方法选取2021年10月至2022年10月益阳市中心医院收治的45例行肾移植手术的慢性肾衰竭患者,将其纳入手术组;将同期未行肾移植手术的45例慢性肾衰竭患者纳入非手术组,进行回顾性分析。比较两组患者T淋巴细胞亚群(CD4^(+)T淋巴细胞百分比、CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值)水平、自然杀伤细胞(NK)水平及不良反应发生情况。结果手术组患者CD4^(+)T淋巴细胞百分比、CD3^(+)T淋巴细胞百分比、NK水平均低于非手术组,CD4^(+)/CD8^(+)比值水平高于非手术组(均P<0.05)。两组患者不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论流式细胞仪在肾移植术后慢性肾衰竭患者免疫功能监测中具有积极意义,能够有效对患者的免疫情况进行预警和提示,从而指导临床后续治疗,值得临床应用。

利用流式细胞仪计数微型浮游生物的方法

微型浮游生物(细胞粒径<20μm)在水生生态系统的物质循环和能量流动中起着重要的作用,对其丰度的准确测定是进一步研究微型浮游生物在不同水生生态系统中作用的重要基础.相对于传统的显微镜检测技术,流式细胞术不仅具有分析速度快、灵敏度和准确度高等优点,而且可以同时测量单个细胞的多个生理参数.不同类型微型浮游生物流式细胞术的应用原理是不同的.对于自养型浮游藻类,主要根据藻体内色素的自发荧光对其进行分辨和计数;而对于异养型细菌、原生动物及浮游病毒等,还需借助外源荧光染料对细胞核酸染色后再进行分析.目前流式细胞术已成为浮游藻类和异养细菌丰度检测的常规方法,但是,由于原生动物具有更大的细胞体积且在自然水体中丰度较低;而浮游病毒粒径又太小,甚至低于光源激发波长,因此流式细胞术应用一直受到限制,直到近10年来才有相关报道.本文对运用流式细胞术计数浮游藻类、浮游细菌、原生动物和浮游病毒的具体原理、方法和进展进行综述,并对流式细胞仪在未来水生微生物学领域的应用进行展望.

利用流式细胞仪研究温度对两种藻竞争的影响

为研究温度对微囊藻优势形成的影响,本试验利用流式细胞仪研究了不同温度时铜绿微囊藻(Microcystis aerugi- nosa)与蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)间的竞争关系,在单独培养和混合培养条件下分别对两种藻细胞密度比值和细胞内叶绿素a(Chla)荧光强度进行了测定．结果表明在本试验条件下,随着温度的升高(18℃,25℃和32℃),混合培养组中微囊藻优势逐渐明显,小球藻Chla荧光强度随着温度的升高而升高,微囊藻Chla荧光强度随着温度的升高却有所降低．说明在光照适宜、高营养盐的水体中,较高的温度对铜绿微囊藻成为优势种具有明显的促进作用,进而影响着微囊藻水华的形成．

用流式细胞仪鉴定中华猕猴桃的多倍体

中华猕猴桃叶中酚类物质多而黏性较大,对流式细胞仪检测多有不便。文章参照已有方法,改进细胞核提取液配方和提取方法,建立了快速、准确鉴定秋水仙素诱导中华猕猴桃多倍体的方法,效果较好。

流式细胞仪鉴定猕猴桃倍性技术研究

利用流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)对不同倍性猕猴桃DNA的相对含量进行测定,建立一套简易、快速的鉴定猕猴桃倍性方法。以二倍体"红阳"猕猴桃为对照,‘81-5'、‘皖翠'猕猴桃为试材,通过筛选最优鉴定叶片部位;改良解离液配方;提高滤膜的目数;过滤次数;增加离心次数等优化鉴定技术。结果表明,露地栽培条件下,茎尖下初展叶是倍性鉴定的最佳部位;两次离心;解离液中2%PVP-30;500目滤膜抽滤两次可以有效解决仪器堵管现象,有效去除杂质峰并获得清晰样品峰。通过优化后的鉴定技术可实现同时测定2个以上倍性的猕猴桃混合样品。

使用流式细胞仪分离精子进行仔猪性别控制的研究

本研究旨在探索流式细胞仪分离精子在猪性别控制中的应用。使用流式细胞仪分离猪XY精子,而后通过母猪输卵管授精生产"预知"性别的仔猪,并使用吖啶橙染色法检测粗分离对精子核酸含量的影响。结果,成功利用分离获得的猪X和Y精子对母猪进行输卵管授精,母猪怀孕率、产仔率均为100%;输Y精子母猪产仔雄性率100%(♂6/6),对照母猪产仔雄性率57.14%(♂8/14);3头输X精子母猪产母仔率91.67%(♀11/12),对照母猪产雌性仔猪40%(♀2/5);使用性别分离精子不影响母猪的怀孕率、产仔率,但窝产仔数较低;吖啶橙染色法检测结果表明,流式细胞仪粗分离对猪精子核酸含量没有显著影响(P>0.05)。本研究结果提示,使用流式细胞仪分离精子授精可以有效改变仔猪的性别比例。本研究结果为猪分离精子性别控制技术的推广应用奠定了基础。

外周血循环中肺癌细胞的流式细胞仪定量分析

目的 运用流式细胞仪定量分析外周血循环中肺癌细胞。方法 外周血经Ficoll梯度离心分离单核细胞组分,后者用CD45、细胞角蛋白(CK)及肺癌特异性单抗(2F7/S5A)染色后,应用流式细胞仪检测CD45- CK+ 2F7/S5A+ 细胞。然后计算每升血中上述细胞含量。结果 (1)外周血单核细胞的表型为CD45+ CK- 2F7/S5A- ,而小细胞和非小细胞肺癌细胞系均为CD45- CK+ 2F7/S5A+ 。因此,应用此方法能从106 白细胞中检测到1个肺癌细胞,敏感性达到每毫升血中检测到5 个肺癌细胞;(2)15 例正常人及7 例肺部良性疾患外周血中CD45- CK+ 2F7/S5A+ 细胞均为阴性,而40例肺癌患者外周血14 例发现阳性细胞,阳性率达35 % ,阳性细胞含量平均为1×105 /L。结论 本方法具有较好的敏感性和特异性。

利用流式细胞仪快速鉴定桑树细胞的染色体倍数性

用化学和物理的方法诱导桑树染色体加倍通常发生于分生组织的部分细胞,形成的无性繁殖个体多为混倍体。为了快速、准确鉴定桑树混倍体及倍数性细胞比率,利用流式细胞仪,以细胞群体为检测对象,从DNA水平对供试桑树诱变株系的叶、芽、茎3个部位的细胞进行染色体倍数性鉴定。经染色体压片法鉴定为二倍体或三倍体的供试植株,用流式细胞仪检测的倍数性结果完全一致;经染色体压片法鉴定为四倍体的供试植株,用流式细胞仪检测仅有编号为403-1的诱变材料为四倍体,而编号为403-9的诱变材料为三倍体,其余的材料则均以二倍体、四倍体细胞构成的混倍体形式存在,且倍数性细胞比率在株系和部位间存在差异。采用流式细胞仪能准确检测桑树细胞的染色体倍数性,可促进桑树混倍体形成机制和多倍体无性分离纯化规律的研究,加快优良单株筛选,提高桑树多倍体育种效率。