流式细胞仪测定成人与儿童中性粒细胞功能

目的 建立评价中性粒细胞吞噬和氧化功能的流式细胞仪方法。方法 取健康成人、儿童外周血,佛波 脂(PMA)刺激中性粒细胞活化后吞噬并氧化二氢若丹明123(DHR)为可发出绿色荧光的若丹明123,用流式细胞 仪检测阳性细胞以评价中性粒细胞吞噬和氧化功能。结果10μg／mL佛波脂(PMA)可有效刺激中性粒细胞吞噬 和氧化功能。20例健康成人无刺激时中性粒细胞活化率<10％[(4±3)％],10μg／mL PMA刺激后中性粒细胞活 化率均>90％[(96±3)％];19例健康儿童无刺激时中性粒细胞活化率<10％[(5±4)％],10μg／mL PMA刺激后 中性粒细胞活化率均>90％[(95±4)％];8例足月儿脐带血无刺激时中性粒细胞活化率为(7±4)％,10μg／mL PMA刺激后中性粒细胞活化率(89±6)％。采用刺激指数(SI),PMA刺激与对照荧光强度几何均数,也可用于评 价中性粒细胞刺激后活化情况,但变异较大。结论 流式细胞仪-DHR分析可用于临床评价成人与儿童中性粒 细胞吞噬和氧化功能。

流式细胞仪检测哮喘患儿外周血单核细胞表型的变化

目的:探讨用流式细胞仪检测哮喘患儿外周血中单核细胞表型特征,以了解它与气管中巨噬细胞之间的相互关系和作用.方法:采用全血单克隆抗体CD14、CD16、HLA-DR、CD44、CD69三色或双色荧光标记方法,用流式细胞仪检测细胞的阳性百分率和平均荧光强度.结果:哮喘患儿CD14和CD14+/CD16+中的CD16细胞的平均荧光强度、CD14+/CD16+和CD16-粒细胞的百分率都明显高于健康对照组.结论:哮喘患儿外周血中的单核细胞具有组织中巨噬细胞的特征.

应用流式细胞仪检测强直性脊柱炎患者HLA-B27抗原的表达及临床应用价值

目的:探讨人类白细胞抗原B27(HLA-B27)的表达对强直性脊柱炎(AS)患者的临床诊断价值。方法:应用流式细胞仪法对328例AS患者1、113例腰背腿疼患者和40例健康体检人员进行了HLA-B27抗原检测。结果AS患者、腰背腿疼患者和健康体检人员HLA-B27抗原阳性率分别为90.2%(296/328)、12.5%(139/1113)和7.5%(3/40);AS患者中男性患者阳性率95.9%,女性患者阳性率77.8%,两组比较有显著性差异(P<0.01)。结论AS与HLA-B27抗原有高度的疾病相关性,检测HLA-B27对AS的早期诊断、鉴别诊断和治疗都具有重要的临床价值。

利用流式细胞仪检测解冻山羊精子活性氧和质膜完整性

将冻精颗粒分别用2·9%柠檬酸钠、2·9%柠檬酸钠+GSH、VB12和TALP解冻,用DCFH-DA染色,流式细胞仪分别检测各组的荧光强度(FI),测定各种处理的ROS生成。将用干、湿两种方式解冻的精液用羟化荧光素和PI双染色,上流式分析质膜完整性。结果表明用VB12解冻,荧光强度(FI)最低,为2·97,有96·76%解冻精子的质膜出现不同程度的破损。

平均荧光强度(MFI)在流式法分析HLA-B_(27)中的意义

目的 :探讨流式法检测 HL A- B2 7和平均荧光强度 (MFI)在强直性脊椎炎 (AS)诊断中的意义。方法 :采用 FITC标记的抗 HLA- B2 7抗体直接法 ,流式细胞仪分析。结果 :87例 AS病人中有 79例 HLA- B2 7阳性 ,其中 1 5例为弱阳性 ,其细胞 HL A- B2 7的表达峰为非正态分布 ,细胞间 HLA- B2 7抗原表达的荧光强度在 1 0 0～ 1 0 2 4通道之间。结论 :HLA- B2 7阳性结果判断时 ,应把细胞的 MFI与阳性细胞的百分率结合起来综合考虑。

流式细胞术检测多发性骨髓瘤中骨髓细胞表面免疫表型的价值

目的探讨流式细胞术检测多发性骨髓瘤中骨髓细胞表面免疫表型的价值。方法选取2017年1月—2018年9月我院收治的49例多发性骨髓瘤患者作为研究组,并同期选取25例继发性单克隆免疫球蛋白血症患者作为对照组,对比CD19、CD38、CD45、CD56、CD138的具体表达情况。结果研究组CD38和CD138荧光强度高于对照组,CD19荧光强度低于对照组(P <0.05)。CD19阳性率为6.1%(3/49),CD38阳性率为100.0%(49/49),为强表达;CD45阳性率为38.8%(19/49),为弱表达;CD56阳性率为81.6%(40/49),为高表达;CD138阳性率为100.0%(49/49),为强表达。结论使用流式细胞仪检测骨髓瘤细胞免疫表型可鉴别骨瘤细胞和正常细胞,具有重要诊断价值。

多聚甲醛固定对流式细胞术检测人外周血淋巴细胞亚群的影响

目的考察多聚甲醛(PFA)浓度和固定时间对流式细胞术检测人外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比和平均荧光强度的影响。方法以健康人外周血为研究对象,将六色荧光抗体标记后溶血处理的细胞分别用PBS、1%PFA(10 g/L)和4%PFA(40 g/L)进行重悬或固定,用流式细胞仪在固定0、4、8、12、24、48和72 h后检测CD19-CD3^+T、CD3^+CD4^+T、CD3^+CD8^+T、CD3-CD19^+B、CD3-CD56^+NK细胞占淋巴细胞百分比,及CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD56的平均荧光强度。结果与PBS对照组相比,72 h内,PFA浓度及固定时间对外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比均没有影响(P均>0.05);固定8 h内,PBS对各淋巴细胞亚群平均荧光强度均无影响,1%PFA组CD4平均荧光强度下降,4%PFA组CD45、CD3、CD4、CD8平均荧光强度均下降;固定24 h后,各淋巴细胞亚群平均荧光强度均下降,同时4%PFA固定后平均荧光强度均低于1%PFA(P<0.05)。结论使用流式细胞术检测人外周血淋巴细胞亚群,细胞染色后若8 h内检测用PBS进行细胞重悬检测效果最好,PFA固定不应超过12 h,1%PFA固定效果优于4%PFA。

荧光标记寡核苷酸探针检测变形链球菌

[目的]建立应用荧光标记寡核苷酸探针BC73快速检测变形链球菌的方法。[方法]应用流式细胞仪检测荧光标 记寡核苷酸探针EUB338和BC73与模式菌株和牙菌斑样品荧光原位杂交后的荧光强度和荧光计数。[结果]荧光标记寡核苷 酸探针BC73与变形链球菌S. mutans 10449杂交的荧光强度7倍于S.mitis 15914和E. coli K12。变形链球菌占牙菌斑中细 菌总数的1.7％。[结论]荧光标记寡核苷酸探针BC73能特异性检测牙菌斑中的变形链球菌数。

TLR1-TLR4在人嗜碱性粒细胞中的表达

目的分别在基因和蛋白水平上观察Toll样受体(Tolllikereceptor,TLR)家族成员中的TLR1、TLR2、TLR3和TLR4在人嗜碱性粒细胞系KU812中的表达。方法取1×106细胞,从细胞中提取总RNA后,用RT-PCR检测细胞中mRNA的表达;用抗人TLR1-TLR4单克隆抗体和小鼠同型抗体行免疫荧光染色后,在流式细胞仪上检测TLR1-TLR4蛋白的表达。结果人嗜碱性粒细胞有TLR1-14mRNA的组成型表达。在流式细胞仪检测中,用抗人TLR1-TLR4单克隆抗体染色的细胞,其荧光强度均明显高于同型对照。结论嗜碱性粒细胞中有TLR-TLR4的组成型表达,提示嗜碱性粒细胞可作为一种免疫细胞对病原微生物进行识别。

CD180在B细胞慢性淋巴增殖性疾病中的表达特点及其诊断价值

目的:通过多参数流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B细胞慢性淋巴增殖性疾病(B cell chronic lymphoproliferative disorders,B-CLPD)中CD180的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI),探讨CD180在B-CLPD中的表达特点及其在鉴别诊断中的价值。方法:利用FCM检测178例B-CLPD病人骨髓中异常B淋巴细胞表面CD180的MFI。以正常对照组为参照,分析各类型B-CLPD中CD180的表达情况,并比较不同亚型中的表达差异。结果:(1)除脾脏弥漫性红髓小B细胞淋巴瘤(SDRPL)外,各类型B-CLPD中CD180的表达强度均显著低于正常对照组;(2)慢性淋巴细胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)中CD180 MFI明显低于其余类型B-CLPD;(3) CD180在毛细胞白血病(HCL)中的表达强度显著高于边缘区淋巴瘤(MZL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症(LPL/WM);(4)在脾脏边缘区淋巴瘤(SMZL)、毛细胞白血病(HCL)、毛细胞白血病变异型(HCLv)以及SDRPL等原发于脾脏的淋巴瘤中,有绒毛组和无绒毛组CD180表达强度有显著差异。结论:利用多参数FCM,检测CD180和其他免疫标志表达水平,有助于区分B-CLPD不同亚型。

UF-100i尿沉渣全自动检测仪EC偏低的故障维修

UF-100i型尿沉渣全自动检测仪是对尿沉渣直接做荧光色素等染色后,利用流式细胞仪原理，以激光散射强度、散射波幅度及荧光强度和荧光波幅度技术，识别和计数尿中红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、细菌、结晶体、精子及酵母菌等。并对红细胞做形态分类（分为均一型、非均一型及混合型3种）,有助于判别血尿出血部位,并提供渗透压参数。现将该仪器发生的一故障现象、检修以及体会进行介绍。

聚肌胞对人早孕绒毛外滋养细胞TLR3表达的调节作用

目的通过体外实验研究Toll样受体3（TLR3）在人早孕绒毛外滋养细胞株TEV—I的表达及聚肌胞（PolyI：c）对TLR3mRNA和蛋白的调节作用，方法体外培乔TEV—I细胞；用不同时间及浓度聚肌胞刺激TEV～I细胞后RT—PCR和流式细胞仪检测其TLR3mRNA和蛋白的表达变化；免疫细胞化学SP染色法检测TLR3蛋白的定位表达。结果①PolyI：C刺激可上调TEv—I细胞株TLR3raRNA的表达（P〈0.01），且与刺激时间和剂量呈正相关。②PolyI：C刺激可上调TEV—I细胞株TLR3蛋白表达的平均荧光强度，（P〈0．01）；但荧光阳性细胞数刺激12h与刺激前比较无统计学意义（胗005）；刺激24h、48h的荧光阳性细胞数与刺激时间和剂量呈正关。（24hP〈0.05；48hP〈0.01）。③免疫细胞化学显示TLR3主要定位于TEV—I细胞株的细胞浆。结论TEV—I细胞株TLR3的mRNA及蛋白的表达与poly（I：C）刺激时间及剂量呈正相关；TLR3主要定位于TEV—I细胞株的细胞浆，而细胞核及细胞膜没有观测到明显表达。提示人早孕绒毛外滋养细胞可能通过细胞浆的TLR3参与早孕母一胎界面的免疫反应．

流式细胞术检测抗生素最低抑菌浓度

目的 建立一种流式细胞术 (FCM )快速检测抗生素最低抑菌浓度 (MIC)的方法 ,与常规药敏试验结果进行比较 ,探讨其应用价值。方法 取 2 0株肠杆菌科细菌 ,用碘化丙啶 (PI)染色 ,分别检测阴性对照管和MIC浓度抗生素作用管的平均荧光强度 (MFI) ,计算两者比值 ,据此 ,设定流式细胞药敏试验 (FCST)检测MIC的判断值 ,根据设定的判断值对 2 8株临床分离细菌同时进行常规药敏和FCST双盲测定。结果 2 0株肠杆菌科细菌测得的MFI比值 x为 2 .0 7,CV为 0 .3 1;将MFI大于阴性对照细菌 2倍 (增加 10 0 % )的最低药物浓度定义为该菌的MIC ,2 8株临床菌株FCST所测得的MIC与常规药敏试验相比r=0 .92 ,(P <0 .0 0 1) ,回归方程为 :Y =1.4X -0 .48。结论 FCST与常规药敏试验结果有显著相关性 ,并且具有快速、稳定、准确、便于自动化等优点 ,有着较大的临床应用前景。

流式细胞术用于眼部镰刀菌药物敏感性检测的初步探讨

目的探讨应阳流式细胞技术测定眼部常见真菌对抗真菌药物敏感性的可行性。方法用流式细胞术药敏试验（Flow Cytometry Susceptibility Testing，FCST）和标准药敏试验（肉汤稀释法M38-A）法检测1株标准镰刀菌和23株临床镰刀菌对两性霉素B（AMB）的敏感性。FCST法以碘化丙啶（PI）为染料，真菌与各浓度药物孵育3h后检测各管平均荧光强度（MFI），最低抑菌浓度（MIC）定义为相于生长对照管MFI增加50％时的最低药物浓度。结果两种检测方法有8株真菌的MIC完全相同，12株相差1个倍比稀释度，2株相差2个倍比稀释度，在1个稀释度范围内两种检测方法的一致性为83．3％，2个稀释度范围的一致性为91．6％。两组结果无统计学差异（P=0．5685）。结论FCST法检测眼部镰刀菌对抗真菌药物的敏感性所得结果与标准法所得结果有良好的一致性，且FCST法具有快速、敏感、准确的优势，是临床检测丝状菌药物敏感性较具发展潜力的一种新方法。

胃癌组织中周期蛋白D_1及Rb蛋白的表达及意义

胃癌在我国是常见肿瘤,发病率居恶性肿瘤的第二位。随着分子生物学的深入研究,人们逐渐认识到肿瘤相关基因的改变是多阶段积累的过程,涉及到多种癌基因的激活和抑癌基因的失活,其中细胞周期调控紊乱是导致肿瘤发生的重要环节。

UF-50尿沉渣检测及临床应用

当前肾病实验室诊断以尿蛋白、尿素、肌酐作为主要指标,然而这些项目无法全面反映肾脏损害,无法满足肾病科学的发展,肾组织活检虽然比较灵敏,但对肾脏具有创伤性,难以普遍推广.