流式细胞光度术的初步建立——在MPVⅡ显微光度计基础上改装的流式细胞光度计

流式细胞光度术(Flow Cytometry)是六十年代末发展起来的一项新技术。它可以在细胞群体中对单个细胞逐个进行高速的定量分析和分类,从一个细胞中可同时测得蛋白质、DNA、细胞体积及核与细胞直径比例等多种参数,具有高速度多信息分析的特点,是研究细胞生物学、免疫生物学、体细胞遗传学、生物化学、肿瘤学的有力手段。目前使用的流式光度计基本上有两种类型:一种是以汞灯作光源,在落射光照明条件下,激发通过流动室的细胞悬液,测量细胞发出的荧光强度。

流式细胞光度术分析胃癌石蜡标本DNA含量及P53蛋白含量的测定

用免疫组织化学的方法检测了４９例胃癌组织和１０例胃良性病变组织Ｐ５３蛋白的含量，用流式细胞光度术检测了ＤＮＡ倍体和１０例免疫组化Ｐ５３蛋白表达阳性标本的Ｐ５３蛋白含量。结果提示，ＤＮＡ倍体和Ｐ５３蛋白表达与胃癌生物学行为有重要关系，ＦＣＭ定量基因表达产物及ＤＮＡ含量双参数分析预后，对临床有重要指导意义。

流式细胞光度术DNA分析在非何杰金氏淋巴瘤预后中的意义

用流式细胞光度术对一组非何杰金氏淋巴瘤(NHL)存档石蜡标本进行DNA分析。DNA异倍体肿瘤占总例数的47.4％,高、中度恶性组异倍体肿瘤的比例(76.8％和51.9％)分别高于低度恶性组(17.6％)(P<0.05)。S期细胞比例(synthetic phase fraction,SPF)随组织学恶性程度升高而增大,低、中和高度恶性淋巴瘤平均SPF值分别是6.5(0.6—18.8)％,13.5(3.2—37.3)％和23.4(4.4—41.4)％。二倍体和异倍体肿瘤患者的生存率无差别。全部病例中高SPF值肿瘤患者具有生存短的趋向(P=0.1)。低度恶性组内也存在此种趋向(P=0.08)。上述结果表明流式细胞光度术DNA分析对估价非何杰金氏淋巴瘤生物学行为是一种不依赖形态学的有用方法。

人食管鳞癌细胞及癌旁细胞流式细胞光度术分析

本研究应用流式细胞光度术对１４例人食管鳞癌手术切除标本的癌、癌旁组织和正常食管上皮细胞进行细胞动力学和细胞ＤＮＡ含量分析。结果表明；处于Ｓ期癌细胞的数量明显高于癌旁细胞和正常食管上皮细胞；癌细胞ＤＩ值明显高于癌旁细胞。因此，应用流式细胞光度术作癌和癌旁细胞核的ＤＮＡ分析，对于食管鳞癌的临床诊断有一定的帮助。

流式细胞光度术用于草莓倍性鉴定的研究

利用流式细胞光度术对草莓３个二倍体、１个五倍体、２个八倍体试管苗的细胞核ＤＮＡ的相对含量进行测定。结果表明，随着倍性水平的增加，细胞核ＤＮＡ相对含量随之成倍增加，说明可利用流式细胞光度术测定细胞核ＤＮＡ含量来进行倍性鉴定；利用这一技术对草莓几个杂交后代及诱变植株的倍性水平进行了鉴定，发现一诱变植株存在两群核ＤＮＡ相对含量相差近一倍的细胞，初步认为这一诱变植株为倍性嵌合体，该结果进一步证明这种方法的可靠性。

利用流式细胞光度术鉴定苹果倍性的研究

利用流式细胞光度术测定了苹果１２个二倍体，５个三倍体细胞核ＤＮＡ含量。结果表明：二倍体细胞核ＤＮＡ含量平均为２．２７ｐｇ，三倍体细胞核ＤＮＡ含量平均为３．１３ｐｇ。不同倍性品种间细胞核ＤＮＡ含量差异显著；对６个苹果实生苗诱变植株细胞核ＤＮＡ含量测定的结果表明，这些诱变植株均存在两群细胞核ＤＮＡ含量相差１倍的细胞，这说明这些诱变植株均为倍性嵌合体。研究表明，利用流式细胞光度术可以进行倍性鉴定。利用流式细胞光度术测定细胞核ＤＮＡ含量，试样制备简单，测量快速，精度高，因此是进行倍性鉴定的理想方法之一。

睾丸肿瘤的流式细胞光度分析

睾丸肿瘤的流式细胞光度分析霍红旭李景东杨书文黑兰荪张玉敏附属二院泌尿外科（０５００００）关键词睾丸肿瘤；流式细胞光度分析流式细胞光度分析（ＦＣＭ）是近年来发展的一种对单细胞快速分析的新技术。本研究采用该技术对睾丸肿瘤石蜡包埋组织进行测定，分析其ＤＮ...

雌激素对乳腺癌细胞作用的流式细胞光度分析

用流式细胞光度计分析雌激素及其拮抗剂对 ER(+)和 ER(-)乳腺癌细胞的作用。所测结果表明:雌激素对 ER(+)乳腺癌细胞具有显著促分裂作用,而雌激素的拮抗剂三苯氧胺则能对抗这种促分裂作用;雌激素及其桔抗荆对 ER(-)乳腺癌细胞无显著作用。

流式细胞光度法早期诊断大鼠肝癌

采用细针吸引肝细胞和新鲜组织块流式细胞光度法(FCM)对比分析大鼠正常肝脏、肝硬化、非典型增生和肝癌组织,以探讨其对肝脏病变程度估计及肝癌早期诊断的可行性及临床意义。材料与方法1.动物模型制备体重120g 左右的 Wistar 大鼠70只,分为两组:一组为60只饮用150ppm 的二乙基亚硝胺水溶液,另组10只饮用自来水,饲养1.5个月。2.材料收集将大鼠在全麻下剖腹,用7号注射用针头抽吸肝脏,后在同一部位取活组织块,均固定于70%冷酒精中,再处死动物,10%甲醛固定肝脏,依据病理改变分为:正常肝脏、肝硬化、非典型增生和肝癌四组。将细针吸引物和组织块分别制成单细胞悬液,后采用溴化乙啶一步插入法将细胞悬液中的 DNA 定量染色。使用 FACS420型流式细胞仪测定 DNA 含量,根据细胞核发出的荧光信号和光散射信号,经计算机分析得出细胞核相对 DNA 含量的分布频率。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人外周血单个核细胞HLA-I分子表达的影响

研究探讨了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人外周血单个核细胞HLA-I(human leuco-cyte antigen I)分子表达影响。采用流式细胞术(FCM)和免疫印迹方法研究了不同剂量DON对体外培养人外周血单个核细胞表面HLA-I分子表达的影响及其量效关系。FCM定量检测结果表明,不同浓度DON处理均可一定程度降低人外周血单个核细胞表面HLA-I分子的表达,DON 50ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL和2000 ng/mL组HLA-I类分子的平均表达量分别为6.92±0.68、6.64±0.69、5.95±0.48和5.48±0.77,在50～2000ng/mL范围内随着DON浓度增加,外周血单个核细胞HLA-I分子表达降低,两者是显著负相关(r=0.737,P<0.01)。Western印迹结果显示,大剂量DON(1000ng/mL和2000 ng/mL)组人外周血单个核细胞HLA-I分子表达明显减弱。研究结果表明脱氧雪腐镰刀菌烯醇可剂量依赖地抑制体外培养的人外周血单个核细胞HLA-I分子的表达。

脂蟾毒配基诱导人肝癌细胞凋亡作用的研究

目的探讨脂蟾毒配基对体外培养人肝癌细胞(Bel7402)的诱导凋亡作用,为研究其对肿瘤细胞生长抑制作用的机制提供依据。方法应用流式细胞光度术检测细胞凋亡;采用细胞免疫细胞化学显色检测和Westernblotting分析凋亡相关基因蛋白的表达来研究脂蟾毒配基对人肝癌细胞(Bel7402)凋亡的诱导作用。结果表明脂蟾毒配基能够诱导Bel7402细胞发生凋亡,凋亡率大于50%;脂蟾毒配基提取液(浓度1.0μm)作用于Bel7402细胞24h后,bc1-2蛋白的表达下调,到48h、72h后下调更明显;而Bax蛋白的表达从24h后开始上调,到48h、72h后表达上调明显。使用方差分析法与对照组相比较,P<0.05,统计学有显著意义。结论提示诱导肿瘤细胞凋亡可能是脂蟾毒配基抑制、杀伤人肝癌细胞的机制之一。

表没食子儿茶素没食子酸酯增强阿糖胞苷对HL-60细胞的抗肿瘤活性

目的 :研究表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)增强阿糖胞苷 (AraC)对人白血病HL 6 0细胞的抗肿瘤活性。方法 :采用生长曲线法、MTT法测定AraC合并应用EGCG前后对HL 6 0细胞的增殖抑制作用 ;以对消实验研究EGCG能否逆转脱氧胞苷 (dCdR)的补救作用 ;以流式细胞光度仪分析联合用药前后对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果 :合并EGCG能增强AraC对HL 6 0细胞的增殖抑制作用 ,倍增时间从 4 8h延长到 70h ,生长饱和密度从 5 .78减少到对 5 .5 4 ;MTT法表明合并EGCG后 ,AraC对HL 6 0细胞的IC50 从 (0 .0 8± 0 .0 7) μg·ml-1减少到 0 .0 2 4± 0 .0 2 6 μg·ml-1(P <0 .0 5 ) ;对消实验表明单用AraC的IC50 为 6 .2 5ng·ml-1,加上dCdR后IC50 为 5 .2 4 μg·ml-1,而在给予EGCG后IC50 减少到 1.17μg·ml-1。细胞周期研究结果表明AraC可使HL 6 0细胞阻滞于G1期 ,S期细胞减少 ,低浓度的EGCG对细胞周期几无影响 ,但增强了AraC的细胞周期阻滞作用及细胞凋亡。结论 :AraC合并应用EGCG可增强对人白血病HL 6 0细胞的抗肿瘤活性。

抗癌药莪棱舌草Ⅰ号诱导人肝癌细胞凋亡的研究

用流式细胞光度术检测细胞凋亡 ,运用细胞化学方法检测凋亡相关基因蛋白的表达 ,以及用Westernblot ting分析研究抗癌药莪棱舌草Ⅰ号对人肝癌细胞 (772 1细胞 )凋亡的诱导作用。结果表明药物能够诱导 772 1细胞发生凋亡 ,凋亡率可达 4 0 % ;药物作用可以使细胞中凋亡抑制基因bc1 2表达减少 ,凋亡促进基因Bax表达增加。

大蒜油不同给药途径对癌细胞周期移行过程的影响

本研究采用流式细胞光度术(FCM)分析癌灶局部及肌注大蒜油(GO)后,S180腹水癌细胞周期移行过程的变化。实验结果表明癌灶局部注射 GO 后,组方图上高倍体 DNA 峰值减少,癌细胞由 G_1期向 S 期运行受阻,S 期细胞显著减少,G_1期与 Go 期细胞积累。肌注 Go 对癌细胞周期影响远不如癌灶局部给药明显。Go 与 G_1期癌细胞积累的原因可能与 GO 对癌细胞周期活动选择性的抑制,或特异性杀伤 S 期或 G_2+M 期癌细胞有关。

仙九冲剂诱导肿瘤细胞凋亡及抑瘤效应的实验研究

用光镜、透射电镜和流式细胞光度术 ,观察中药仙九冲剂诱导荷S180肉瘤小鼠肿瘤细胞凋亡及抑瘤效应 ,结果显示 :仙九冲剂能有效地诱导肿瘤细胞凋亡 ,凋亡指数为 2 7 3± 2 6 2 ,凋亡峰为 32 5 ;超微结构变化表现为肿瘤细胞染色质发生边移 ,沿核膜分布 ,染色体浓缩破裂 ,并出现凋亡小体。抑瘤率为 5 8 8%,接近化疗药环磷酰胺组 ,P <0 0 5。

去甲斑蝥素杀伤HeLa细胞机制研究

目的研究去甲斑蝥素(NCID)杀伤肿瘤细胞的机制。方法用流式细胞光度术测量 NCTD 对细胞 DNA 复制的作用;用同步化 HeLa 细胞检测 NCTD 作用的时相性;间接免疫荧光显示胞质微管结构的改变及与 M 期阻滞、细胞死亡的相关性。结果 NCTD 不抑制细胞 DNA 复制,不杀伤 G_1期、S 期细胞;5、10μg/ml时,使胞质微管改变、M 期阻滞、畸形率升高,强烈杀伤 HeLa 细胞。2μg/ml 时,不杀伤细胞,仅促进增殖。结论 NCTD 具有刺激细胞增殖和杀伤肿瘤细胞的双向作用,并呈剂量依赖性。临床应用须达到足够剂量方有抗癌效果。

抗6—TG的人外周血淋巴细胞的研究进展

近年来,体细胞基因突变的主要发展是检测人外周血中抗6-TG(硫代鸟嘌呤)的T淋巴细胞。目前此方法在国外已被用于职业人群致突变效应的监测及环境和工业化学物致突变效应的研究。