流式细胞分析技术在外科疾病研究中的应用(文献综述)

流式细胞计是新近开发的仪器,国内已应用于外科疾病的研究,能检测细胞内DNA含量及其倍体分布,由此进一步探讨与临床的有关问题。在肿瘤病例中,更可用以判断其预后,可见流式细胞分析技术具有重要的临床应用价值和广阔的前景。

流式细胞技术在诊断B-NHL患者骨髓受累中的应用

本研究探讨流式细胞术(FCM)在诊断B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者骨髓受累中的应用意义。利用多参数FCM检测54例初治B-NHL患者的骨髓标本,并结合骨髓形态学和分子生物学检测结果进行分析。FCM诊断B-NHL患者骨髓受累的标准为出现单克隆B细胞。分子生物学方法诊断骨髓受累的标准为出现肿瘤性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排。结果表明,在诊断B-NHL患者骨髓受累方面,FCM的检出率最高(27.5%,14/54例),其次为分子生物学方法(22.2%,12/54例),而形态学检出率最低(5.6%,3/54例)。3种方法联合运用,可将B-NHL患者淋巴瘤骨髓受累的检出率提高至38.9%(21/54例)。FCM方法诊断淋巴瘤骨髓受累的14例患者中,骨髓B淋巴细胞kappa/lam bda轻链比值远超过诊断界值。FCM在早期患者(3/26例)中亦能检测到骨髓受累。在3例形态学诊断骨髓受累的患者中,FCM均检测到单克隆B细胞。FCM与分子生物学方法检测结果符合率为70.4%(38/54例,p=0.14)。结论:对于B-NHL患者,运用FCM检测骨髓中单克隆B细胞,在诊断淋巴瘤患者骨髓受累方面敏感性高、准确性好。B-NHL早期患者也存在骨髓受累的可能,应及时在治疗前评价骨髓是否受累。采用FCM、分子生物学检测技术能提高淋巴瘤患者骨髓受累的诊断效率。

将流式网织红细胞分析技术应用到新生儿贫血诊断的探讨

目的:探讨流式网织红细胞分析技术在新生儿贫血诊断中的应用价值,并进一步确定流式细胞术在网织红细胞中的分析方法。方法:选取我院2017年03月至2019年03月进行健康检查的新生儿60例,其中30例为贫血患儿,30例为健康新生儿,采集全部新生儿的血液标本,进行流式网织红细胞分析,对测定结果进行比较。结果:流式网织红细胞分析结果显示,健康新生儿组的网织红细胞百分数为(0.011±0.001)、贫血患儿组的网织红细胞百分数为(4.023±0.234)。且分析测定中应用噻唑橙为RNA荧光染料标记网织红细胞,在RNA残留荧光强度上,健康新生儿组为(22.49±33.89)au,贫血患儿组为(40.17±32.90)au。两组数据对比皆差异明显,具有统计学意义,P<0.05。结论:新生儿贫血在临床诊断中,可以通过测定网织红细胞百分数进行诊断,流式细胞分析技术在网织红细胞分析测定中具有良好应用效果,值得在临床上推荐。

慢性阻塞性肺疾病T淋巴细胞亚群与生化参数变化及其相关性分析

利用基于免疫荧光标记技术为原理的流式细胞分析技术研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者免疫功能与生化参数的变化及其相关性分析。对31例COPD患者与30名健康者T淋巴细胞亚群与生化参数等13项指标进行检测,并进行统计学相关分析。结果表明,COPD组和对照组免疫指标比较,CD3+CD4+T淋巴细胞计数无显著性差异(P>0.05),而COPD组中CD3+CD8+T淋巴细胞计数低于对照组(P<0.05),并且CD4/CD8比值升高(P<0.05);COPD组UN、UA、GLU、HDL-C均高于对照组(P<0.05),Cr则明显高于对照组(P<0.01),其余生化参数均无显著性差异(P>0.05);COPD组UA与CD3+CD8+T淋巴细胞呈负相关(r=-0.463,P<0.01),TG与CD3+T淋巴细胞呈负相关(r=-0.493,P<0.01),TG与CD3+CD4+T淋巴细胞呈负相关(r=-0.413,P<0.05)。COPD患者的免疫功能与尿酸和血脂水平相关。

HBeAg阴性的慢性乙型病毒性肝炎外周血T细胞亚群的变化

目的探讨乙型病毒性肝炎HBeAg与T细胞免疫状态的关系。方法对25例HBeAg阴性慢性乙型病毒性肝炎和34例HBeAg阳性慢性乙型病毒性肝炎患者的基因序列进行分析,并通过流式细胞仪检测外周血T细胞亚群。结果 25例HBeAg阴性慢性乙型病毒性肝炎患者发生前C变异10例,CD4+、CD4+/CD8+明显低于HBeAg阳性患者,2组比较均有显著性差异(P均<0.05)。结论 HBeAg阴性慢性乙型病毒性肝炎患者免疫功能紊乱,不利于宿主对病毒的清除。

主动免疫治疗对反复胚胎植入失败患者CD4^+CD25^+调节性T细胞表达的影响

目的探讨淋巴细胞主动免疫治疗对反复胚胎植入失败(RIF)患者外周血CD4^+CD25^+调节性T淋巴细胞(CD4^+CD25^+Treg)表达的影响。方法选择在郑州大学第三附属医院生殖中心就诊的30例RIF患者(RIF组),采用荧光标记流式细胞分析技术,检测其淋巴主动免疫治疗前、后2周的外周血CD4^+CD25^+ Treg表达,并选择同期正常未妊娠妇女20例作对照(对照组)。结果 (1)RIF组治疗前CD4^+CD25^+ Treg占CD4^+T细胞的比例显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)RIF组治疗后CD4^+CD25^+ Treg的表达率明显高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RIF的发生可能与CD4^+CD25^+ Treg的表达下降有关;淋巴细胞主动免疫治疗可上调CD4^+CD25^+ Treg的表达,调控母胎免疫耐受,有利于胚胎植入成功。

膀胱移行细胞癌组组织Bcl-2的表达及与临床生物学行为的关系

目的探讨Bcl-2在膀胱移行细胞癌及癌旁组织中的蛋白表达水平,分析其与临床病理指标的关系及意义,为膀胱移行细胞癌的诊断及临床治疗提供理论依据。方法用流式细胞分析技术检测45例膀胱移行细胞癌及对应的45例癌旁组织及10例正常膀胱黏膜移行上皮组织中的Bcl-2蛋白的表达。结果癌旁组织组Bcl-2阳性率高于正常膀胱组和膀胱移行细胞癌组,膀胱移行细胞癌组表达阳性率高于正常膀胱组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2表达与膀胱移行细胞癌的组织学分级关系密切(P<0.05),而与患者性别、年龄、淋巴转移情况及肿瘤临床分期等均无相关性(P>0.05)。膀胱移行细胞癌组织Bcl-2蛋白表达阳性的凋亡率明显低于阴性表达(P<0.05)。结论 Bcl-2在正常膀胱组织中低表达。Bcl-2随着膀胱癌病理分级的增加阳性率逐渐增加,在膀胱移行细胞癌中,Bcl-2发挥重要作用,与膀胱移行细胞癌的生物学行为密切相关。

结缔组织生长因子反义寡核苷酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导人近曲肾小管上皮细胞肥大

目的:进一步探讨结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管细胞肥大的影响。方法:采用体外培养的人肾近端小管上皮细胞株(HK2),分别采用考马斯亮蓝法、流式细胞分析技术及扫描电镜和透射电镜,观察CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导的细胞内总蛋白含量、细胞周期分布改变及细胞直径和超微结构改变的影响。结果:AngⅡ干预HK2细胞48h后,细胞内总蛋白含量显著增加(P<0·01);这种作用可被CTGF反义寡核苷酸显著抑制,且呈时间和浓度依赖性。AngⅡ干预HK2细胞后,细胞大部分阻滞在G0-G1期(P<0·01),而CTGF反义寡核苷酸可逆转这种周期阻滞现象(P<0·05)。经AngⅡ干预的HK2细胞,细胞平均直径显著增加,细胞超微结构显示表面微绒毛减少、细胞内粗面内质网增多、线粒体减少、高尔基体增加,这些作用均可被CTGF反义寡核苷酸所抑制。结论:CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导HK2细胞肥大具有显著的抑制作用,提示CTGF可能介导了AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞肥大。

膀胱移行细胞癌组织Livin的表达及其临床意义

目的探讨Livin在膀胱移行细胞癌及癌旁组织中的蛋白表达水平,分析其与临床病理指标的关系及意义,为膀胱移行细胞癌的诊断及临床治疗提供理论依据。方法用流式细胞分析技术检测45例膀胱移行细胞癌(膀胱转行细胞癌组)及对应的45例癌旁组织(癌旁组织组),及10例正常膀胱黏膜移行上皮组织(正常膀胱组)中的Livin蛋白的表达。结果正常膀胱组、膀胱移行细胞癌组、癌旁组织组Livin表达阳性率分别为0、71.11%、0,其中膀胱移行细胞癌组阳性率均高于正常膀胱组和癌旁组织组,差异有统计学意义(P<0.05),而正常膀胱组和癌旁组织组均未见表达。Livin表达与膀胱移行细胞癌淋巴转移密切相关(P<0.05),与肿瘤的分级有一定关系;而与患者性别、年龄及临床分期等指标均无相关性(P>0.05)。膀胱移行细胞癌组组织中Livin蛋白表达阳性的凋亡率明显低于阴性表达(P<0.05)。结论细胞凋亡抑制因子Livin在膀胱移行细胞癌组织中表达上调,并且与凋亡率呈负相关,提示Livin可能通过抑制细胞凋亡,对膀胱移行细胞癌的发生发展起重要作用,有望成为一种有效、敏感的肿肿瘤标志物志物,并为膀胱移行细胞癌的基因治疗提供新的靶点。

乙型肝炎病毒前C区基因变异与T细胞免疫状态的研究

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)前C区基因变异与T细胞免疫状态的关系。方法:通过DNA扩增、基因序列分析检测21例慢性乙型肝炎的基因序列,通过流式细胞分析技术(FCM)检测外周血T细胞亚群。结果:45例慢性乙肝发生前C变异有12例,变异株CD4+、CD8+相对数明显低于野生株组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性乙肝前C变异后病毒得以逃避机体的免疫攻击。

HIV原发感染者NKT细胞基线功能变化研究

目前国际上对NKT细胞在HIV感染过程中的功能变化研究甚少,特别是在HIV原发感染者NKT细胞的基线功能变化还未见报道.本实验主要应用多色流式细胞分析技术,以CD3＋CD56＋表面标志定义NKT细胞,检测了HIV原发感染者NKT细胞IFN-γ的分泌、CD107a分子表达情况,为探索HIV感染对NKT 细胞功能的影响提供科学依据.

咖啡因能增强顺铂抗人肝细胞性肝癌抗肿瘤效应

最近来自日本的一项研究，采用咖啡因（0-0．5Mm）单独或联合顺铂（0—1．2μg／mL）分别与人肝癌细胞（HepG2，HLF，HuH-7，andLi-7）及正常人肝细胞作用0—72小时，应用WST-8及流式细胞分析技术研究发现：咖啡因能轻度抑制所有肝癌细胞的增殖，咖啡凶能增强顺铂的抗肝细胞癌的增殖效应；咖啡因与各种肝癌细胞单独作用并不能增加各肝癌细胞的早期及晚期凋亡，相反，

辛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移及Ras表达的影响

目的：研究辛伐他汀（SIM）通过抑制法尼基化途径对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移相关能力及Ras信号转导作用的影响。方法：以MTT法、流式细胞技术分析检测SIM对HO-8910PM细胞生长增殖和细胞周期的影响；用Transwell小室法及细胞粘附人工重组基底膜实验检测SIM对HO-8910PM细胞侵袭粘附能力的影响；RT-PCR、Western blot法检测SIM对HO-8910PM细胞Ras、ERK2表达水平的影响；采用7-32P掺人法检测MAPK活性。结果：（1）4～64μmol／L的SIM处理24～72h后，HO-8910PM细胞的生长增殖受到一定的抑制；各给药组内G1期细胞明显增多，G2、S期细胞减少，用药浓度高时有指示细胞凋亡的亚G1期“凋亡峰”出现。以上作用均有浓度一效应和时间依赖关系。（2）SIM能够明显地抑制HO-8910PM细胞的体外趋化运动、侵袭和粘附能力（P〈O．05）。（3）随用药浓度的增高，K-RasmRNA的表达没有明显的变化，细胞膜上Ras蛋白水平逐渐降低，胞浆中Ras蛋白水平逐渐增加，总Ras蛋白的表达变化不大；SIM能明显下调HO-8910PM细胞的ERK2蛋白表达。（4）激酶活性检测结果显示，SIM能明显抑制MAPK活性（P〈O．01）。结论：SIM能抑制人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭、运动和粘附能力。SIM抗肿瘤转移的作用机制与它们抑制某些蛋白（如Ras蛋白）的法尼基化反应有关。SIM能抑制Ras蛋白的法尼基化即抑制它锚定于细胞膜上，抑制了其生物活性，从而影响Ras-MAPK信号转导作用和其下游靶蛋白。

基于微球的多重流式分析技术

1 简介 生化分析是生物基础研究及医学临床诊断的重要手段,其中有30多年历史的流式细胞分析技术已广泛应用于生物医学基础研究及实际应用的各个领域.尽管在流式分析技术的大多数实际应用中都以细胞作为载体或研究目标,但诸如微球之类的小固态颗粒同样也可以应用于流式分析技术.

禽流感H5N1亚型病毒感染恒河猴模型的建立及禽流感发病机制初探

[目的]建立禽流感H5N1病毒感染恒河猴的动物模型,探讨禽流感在哺乳类动物的发病机制。[方法]通过“环甲膜穿刺术”经气管注射鸡胚培养的禽流感H5N1病毒(AF148678;ACGoose/Guangdong/11961H5N1)感染恒河猴,观察恒河猴染毒后出现的临床体征,用显微计数法检测外周血白细胞的动态变化,用ELISA检测禽流感病毒特异性抗体变化规律,用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞及其亚群的动态变化。在染毒后第1天、第3天、第10天和第14天分别剖杀染毒组恒河猴1只,HE染色观察主要组织器官的病理变化,用病毒分离、免疫组化和RT-PCR三种方法分析禽流感病毒侵袭机体的特点。[结果]临床症状和体征:急性起病,表现为发热,呼吸困难,精神状态下降,活动度明显减少,食欲下降,咳嗽,紫绀等,肺部听诊双肺可闻及干、湿音。1、病理特点:以肺部损伤为主,伴多器官病变。肺部的病变主要表现为弥漫性肺泡损伤,先后经历渗出期、增生期和纤维化期;在肝脏、肾脏和中枢神经系统中也观察到变性、坏死等病理变化。2、病毒侵袭机体的特点:病毒只在呼吸系统中复制,不在呼吸道以外的组织器官中复制;肺内支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞和肺巨噬细胞是...

不同单克隆抗体检测封闭抗体的结果比较

目的比较不同厂家单克隆抗体检测封闭抗体的结果差异。方法使用BD公司及贝克曼-库尔特(BC)公司的复合CD4/CD8/CD3三色荧光抗体,对30例反复自然流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)患者进行流式细胞术封闭抗体(Blocking antibody,BA)检测,用kappa系数评价两种抗体检测结果的一致性,用McNemar检验比较两种抗体的差异及其对临床决策的影响。结果经McNemar检验,当以BA单项阴性为需要接受主动免疫治疗的标准,则两组差异有统计学意义(P<0.05);若以BA双项阴性为需要治疗的标准,则两组差异无统计学意义(P>0.05);两种抗体检测结果一致性较差,kappa系数=0.2。结论两种单克隆抗体检测封闭抗体的结果存在差异,实验室应明确使用抗体的厂家,尤其是对同一患者治疗前后检测封闭抗体变化时应使用相同厂家的抗体。

膀胱尿路上皮癌组织Livin和BCL-2的表达及其相关性研究

目的探讨Livin与BCL-2在膀胱尿路上皮癌及癌旁组织中的蛋白表达水平及二者在膀胱尿路上皮癌中的相关关系,分析其致癌机制,为膀胱尿路上皮癌的诊断及临床治疗提供理论依据。方法用流式细胞分析技术检测90例膀胱尿路上皮癌及对应的90例癌旁组织,及20例正常膀胱粘膜移行上皮组织中的Livin、BCL-2蛋白的表达。90例膀胱尿路上皮癌中,男66例,女24例,年龄26~68(平均50.24±9.87)岁。按照WHO病理分级:G124例,G240例,G326例;TNM临床分期诊断标准:非浸润性癌(Ta-1期)38例,浸润性癌(T2-4期)52例;单发48例,多发42例;初发54例,复发36例;20例正常对照为前列腺增生症、膀胱结石患者经膀胱手术所取膀胱黏膜组织,均经病理检查证实为正常膀胱黏膜组织。将表达结果进行分析。结果 Livin在正常膀胱组织中不表达。于癌旁组织中亦无表达。Livin在膀胱尿路上皮癌组织中阳性率为71.11%,其中阳性64例,阴性26例。Livin的蛋白表达与细胞的凋亡率呈负相关。BCL-2阳性表达结果膀胱癌癌组织(51.11%)与癌旁组织(73.33)BCL-2的表达差异有显著性(P<0.05)。90例膀胱尿路上皮癌中46例BCL-2蛋白表达阳性,阳性率为51.11%,与正常膀胱粘膜阳性表达率10%比较,阳性率明显上升(P<0.05)。Bcl-2的蛋白表达与细胞的凋亡率呈负相关。在膀胱尿路上皮癌中Livin与BCL-2表达有密切关系,在膀胱癌BCL-2的表达随着膀胱肿瘤的分化程度越差阳性表达就增加,而Livin蛋白的表达亦明显增加,呈现正相关(P<0.05)。结论细胞凋亡抑制因子Livin在膀胱尿路上皮癌组织中表达上调,并且与凋亡率呈负相关,提示Livin可能通过抑制细胞凋亡,对膀胱尿路上皮癌的发生、发展起重要作用,有望成为一种有效、敏感的肿肿瘤标志物志物,并为膀胱尿路上皮癌的基因治疗提供新的靶点。Livin与BCL-2在膀胱尿路上皮癌细胞凋亡的调控方面可能起着协同作用。

内毒素结合蛋白样分子p48体内外生物学活性的初步研究

目的以LBP为对照,对比研究p48的体内、外生物学功能。方法采用生物传感器、流式细胞分析技术研究p48与LPS及Lipid A的结合力。通过体外培养人单核细胞(U937)和小鼠体内TNF-α的分泌实验,研究p48的生物学功能。采用ELISA方法初步探索p48与LBP是否具有一定相似的空间结构。结果p48能促进LPS与PBMC结合,其活性为LBP的81%。p48能与LPS及Lipid A结合,其亲和常数(KD)分别为1.59×10-6、1.48×10-6mol/L。体内外实验中p48均能促进TNF-α的分泌,其生物学活性约为LBP的77%。高浓度抗NH-LBP Fab抗体能与p48特异性结合,p48部分空间结构与LBP可能有一定的相似性。结论p48具有与LBP相近似的生物学功能,在机体炎症反应中也发挥较重要的作用。

体外受精-胚胎移植反复失败患者外周血中CD4^+CD25^+Treg的表达

目的:探讨外周血中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Treg)在体外受精-胚胎移植反复失败(RIF)发病机制中的作用。方法:用流式细胞分析技术检测12例RIF组、15例胚胎移植妊娠组、15例正常未孕组患者外周血中CD4+CD25+Treg的表达。结果:RIF组患者外周血中CD4+CD25+Treg的表达率为(0.80±0.56)%,低于正常未孕组的(4.05±0.91)%,两组差异有统计学意义(P<0.05);胚胎移植妊娠组患者外周血中CD4+CD25+Treg的表达率为(11.01±2.09)%,高于RIF组,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:辅助生殖中反复植入失败可能与CD4+CD25+Treg的表达下降有关,这为免疫治疗提供了理论依据。