应用流式细胞小球微阵列术法检测趋化因子的变化

目的探讨流式细胞小球微阵列术(cytometricBeadArray,CBA)检测类风湿性关节炎患者服用灵芝三妙散胶囊后趋化因子白细胞介素8(IL8),调节活化的正常T细胞表达和分泌的因子(RANTES),γ干扰素诱导的单核因子(MIG),单核细胞趋化蛋白1(MCP1),以及γ干扰素诱导蛋白10(IP10)的变化。方法收集类风湿关节炎患者65例,设立安慰剂组和中药组,采用CBA法检测类风湿性关节炎患者服用灵芝三妙散胶囊后的血浆和全血在体外用脂多糖(LPS)和植物凝血素(PHA)刺激后趋化因子IL8、RANTES、MIG、MCP1、以及IP10的含量,然后比较分析。结果用CBA法检测类风湿性关节炎患者在服用灵芝三妙散胶囊后,体外试验中药组的IP10变化的百分率比安慰剂组明显升高(P<0.05)。结论CBA法检测血浆趋化因子是一种简便、可靠、灵敏度高、精确的新方法。

流式细胞小球微阵列术检测恶性肿瘤患者血清六种细胞因子的临床意义

目的探讨流式细胞小球微阵列术(CytometricBeadArray,CBA)检测恶性肿瘤患者血清干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素(IL-10、IL-5、IL-4、IL-2)含量改变在恶性肿瘤诊断中的意义。方法连续收集各类恶性肿瘤患者共101例,同时设立健康体检组作为对照。采用流式细胞术的微阵列技术代替传统的ELISA方法来检测血清IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-5、IL-4、IL-2的含量,然后分析比较。结果恶性肿瘤组患者血清IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-5、IL-4、IL-2含量分别为(62.05±127.96),(19.53±37.41),(10.68±12.00),(4.43±7.95),(7.32±13.68)和(2.99±9.73)pg/ml;除IL2外,其余5项均明显高于健康体检组,差异有显著性(P<0.05)。IFN-γ、TNF-α、IL0-10、IL-05、IL-04、IL-02测定的敏感度分别为72.3%、17.8%、39.6%、85.2%、80.2%和9.9%。大多数恶性肿瘤患者血清中有多种细胞因子水平同时升高,其中以IL-5、IL-4和IFN-γ三种细胞因子均升高最多见,占60.4%,与对照组相比,差异有高度显著性(P<0.01)。结论通过对比与分析,细胞因子的单项检测在肿瘤诊断中的意义并不大,但联合检测血清IL-5、IL-4、IFN-γ等的含量在肿瘤临床诊断中有较重要的应用价值。

流式细胞术微球阵列法检测急性白血病血清IL-6、IL-10和TNF水平

目的:探讨流式细胞术微球阵列法(CBA)在细胞因子检测中的应用及血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)在不同亚型急性白血病(AL)中的表达水平。方法:采用BD CBA F lex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒和流式细胞术检测29例急性白血病患者和20例正常人血清样本中3种细胞因子水平。结果:AL患者IL-6、IL-10和TNF水平显著高于正常对照组,急性淋巴细胞白血病(ALL)的IL-10和TNF水平较急性非淋巴细胞白血病(ANLL)有显著性提高(P<0.05)。在ANLL亚型中,M1型IL-6水平最高。结论:CBA法能快速、准确地定量检测细胞因子;AL血清中IL-6、IL-10和TNF水平升高,可能与疾病的发生发展存在相关性。

流式细胞术微球阵列法检测多种细胞因子在分泌性中耳炎患者中的表达

目的检测急性分泌性中耳炎(acute secretory otitis media,SOM)患者外周血及中耳积液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ的表达水平,以期综合分析免疫因素在其发病中的作用。方法采用BD CBA Flex SetIL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、γ-干扰素试剂盒,利用流式细胞术微球阵列法检测37例急性上呼吸道感染诱发急性分泌性中耳炎外周血、耳积液,8例鼻咽癌患者放疗后分泌性中耳炎耳积液和10例正常人血清样本中6种细胞因子水平。结果急性上呼吸道感染诱发的中耳积液中的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ表达水平显著高于外周血(P<0.05);其中IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ水平明显高于放疗后耳积液水平(P<0.05)。急性分泌性中耳炎外周血上述六种因子较正常对照组外周血差异无统计学意义(P>0.05)。结论中耳粘膜参与了急性分泌性中耳炎患者局部的免疫反应,在其发病中可能起到一定作用。

流式细胞术微球阵列法在慢性鼻-鼻窦炎细胞因子临床检测中的应用

目的检测慢性鼻-鼻窦炎伴有鼻息肉(CRSwNP)和不伴鼻息肉(CRSsNP)患者细胞因子的表达,探讨免疫因素在其发病中的作用。方法采用流式细胞术微球阵列法(CBA)检测20例CRSwNP患者、17例CRSsNP患者及13例正常对照组织样本及血清中IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、TNF、IFN-γ六种细胞因子水平。结果 CRSwNP组织中IL-4、IL-5、IL-10、IFN-γ,CRSsNP组织中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ表达显著高于血清;CRSwNP组织中IL-5、IL-10的表达明显高于对照且IL-5明显高于CRSsNP;CRSsNF组织中IFN-γ、IL-10的表达明显高于对照和CRSwNP。结论 CRSsNP以高表达IFN-γ为代表的Th_1细胞因子为主,而CRSwNP主要表现为以高水平的IL-5为代表的Th_2细胞因子,CBA技术具有一定优势,能够比较全面反应免疫因素在此两型慢性鼻-鼻窦炎(CRS)中的差异,从而为应用细胞因子抗体等治疗CRS提供科学依据。

体外培养的神经球中表达神经巢蛋白细胞的流式细胞术检测

采用体外培养不同时间的神经干细胞球 ,间接荧光法标记神经巢蛋白 (nestin) ,以流式细胞术检测神经干细胞球中表达nestin细胞的情况。结果显示 :在培养不同时间的细胞群体中均检出 nestin阳性细胞 ,培养 7d、1月、3月和 6月的细胞群含nestin阳性细胞数百分比分别为 (4 2 .2± 7.6) %、(4 1.7± 7.3 ) %、(3 3 .8± 12 .9) %和 (3 7.1± 5 .0 ) % ,几个时间点的细胞群体所含的 nestin阳性细胞数的百分比之间无显著性差异。提示 ,在体外培养条件下 ,神经干细胞群体可能通过自我更新和分化的调控 ,保持 nestin阳性细胞于一种较为恒定的比例。

用荧光微球-流式细胞术检测流行性出血热的初步研究

发展了一种应用荧光微球进行流行性出血热流式细胞术检测的新方法。方法为先在荧光微球表面连接上流行性出血热特定的抗体以及相应的抗原等物质,然后,通过TEM(透射电子显微镜)和流式细胞仪等技术对实验结果进行了表征和解释。方法的进一步研究正在进行中。

荧光编码微球—流式细胞和生化分析技术及其最新发展

简述了流式细胞术的发展历史和工作原理。对该技术与荧光编码微球技术相结合而发展起来的高通量细胞和生化分析技术及其最新发展作了评述。流式细胞术是一种对流动液体中排成单列的细胞逐个进行检测的技术 通过检测得到相应细胞的光散射和荧光信号 进而测定细胞的大小、形状、DNA、RNA、表面受体、酶活性、膜通透性和钙流量等 在癌症和爱滋病研究 新药开发、干细胞和基因治疗、遗传学、家畜性别选择、农作物新品种开发等方面部有广泛应用。采用顺序进样技术,则可不必加压而实现少量样品的自动分析和作亚秒水平分子相互作用的动力学测量。将该技术与近年发展起来的荧光染料编码微球技术相结合,则成为一种可以与生物芯片技术相媲美的多组分同时分析技术。采用微流控芯片技术和发光半导体量子点编码微球技术 进一步改善了方法的适用性,某些主要性能甚至超过了生物芯片技术,有望从研究实验室逐步进入临床实验室,最终进入病房和寻常百姓家 成为防病、诊断和监护病人的重要手段。

流式细胞术和微球技术分析应激细胞内HSP70表达

目的建立检测细胞内HSP70的流式细胞分析技术,并应用其分析炎症、化疗药物(紫杉醇)和物理因素(热处理)对U937细胞、A549细胞和Hela细胞HSP70表达的影响。方法培养U937、A549和Hela细胞,分别用细菌脂多糖(LPS)、紫杉醇(PTX)和热应激(42℃)上述细胞;采用流式细胞术检测细胞内活性氧、细胞周期和细胞凋亡;分别采用传统的免疫印迹技术和自制液相微球结合流式细胞术来分析HSP70的表达水平。结果 LPS诱导U937细胞后,其细胞内活性氧(ROS)增加并发生凋亡,PTX处理A549细胞后,细胞发生G2/M期阻滞和凋亡,热处理导致Hela细胞发生凋亡。采用自制液相微球结合流式细胞术以及传统的免疫印迹技术,均可发现细胞内HSP70随处理因素强度或时间延长而表达增加。结论所建立的自制液相微球结合流式细胞术可用于细胞内蛋白表达量的分析。

用定量荧光微球作对照的流式细胞术对细胞表面抗原分子数的测定

定性、定位和定量地确定细胞表达的各种重要分子是在分子水平上认识细胞功能的前提,其中以确定特定分子在细胞膜表面的绝对数目较为困难。

流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的方法学探讨

目的：探讨利用流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球能力试验方法的灵敏性、稳定性以及易操作性，以期获得一套最优化的方案。方法：取ICR小鼠腹腔巨噬细胞，以原液和1∶1稀释液使用，采用三个微球浓度（5×106/孔、1×107/孔和1.5×107/孔），经1 h、1.5 h和2 h孵育，通过酶消化或细胞刮刀法将贴壁细胞消化处理后，利用流式细胞仪检测含不同数量荧光微球的巨噬细胞数值，计算吞噬率及吞噬指数。为验证实验条件的可靠性，取ICR小鼠每日灌胃金葵素胶囊30 d后，取腹腔巨噬细胞分别用流式细胞术和传统鸡红细胞方法检测吞噬能力。结果：微球浓度越高，吞噬率和吞噬指数越大；细胞浓度为1×105～2×105 ml-1，孵育时间1.5 h，微球浓度为1.5×107/孔时吞噬率（PP）和吞噬指数（PI）最高（89.87％，1.54），孵育至2 h时出现下降（57.71％，1.51）；细胞浓度对吞噬率和吞噬指数的影响与荧光微球浓度呈负相关。贴壁巨噬细胞经胰酶加EDTA消化后PP为44.51％，PI为0.68，单独使用EDTA消化后PP为37.92％，PI为0.57，均低于使用细胞刮刀处理组。流式细胞术法与鸡红细胞法测定金葵素胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力影响的结果一致，均为高剂量组吞噬率与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：小鼠腹腔巨噬细胞浓度调整为1×105～2×105，孵育1 h，1×107/孔微球浓度可使实验快速而又精确地反映巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，且与传统方法结果有良好的一致性。

微流控芯片用于流式细胞术的基础研究

自行设计并加工了玻璃微流控芯片 ,并将其与流式细胞术相结合 ,采用羟丙基甲基纤维素 ( HPMC)的磷酸盐溶液为缓冲体系和鞘液 ,解决了微粒在微芯片中流动的若干问题 ,使其状态可以得到更有效的控制 .采用自行组装的激光诱导荧光装置并结合动电聚焦技术 ,实现了对荧光微球的计数 ,并可通过荧光倒置显微镜实时观察到微通道内微球的实际流动情况 .方法简单 ,操作方便 ,并且具有仪器体积小。

流式细胞仪检测肾小球肾炎患者尿巨噬细胞的临床意义

目的研究尿巨噬细胞含量与肾小球肾炎细胞增生程度的关系。方法用流式细胞仪(FCM)测定69例肾小球肾炎患者尿巨噬细胞含量,并与肾活检结果进行对照。结果30例急性增生性肾炎患者尿巨噬细胞含量为(22.52±4.73)%;39例非急性增生性肾炎患者尿巨噬细胞含量为(5.13±1.92)%,急性增生性肾炎患者尿巨噬细胞含量明显高于非急性增生性肾炎组(P<0.05)。结论尿巨噬细胞含量检测可作为判断肾小球肾炎细胞增生程度的指标之一。

原发性肾小球肾炎患者细胞表面CD44和CD62P的流式细胞计量

目的:研究原发性肾小球病变患者外周血细胞表面糖蛋白(CD 44)和粘附分子P选择素(CD 62P)的表达及其与病理学的关系。方法:采用流式细胞计量术对96例原发性肾小球肾炎患者外周血CD 44和CD 62P进行了检测分析,以30例正常献血员作为对照,同时比较不同组织学类型的变化。结果:原发性肾小球肾炎患者CD 44和CD 62P表达均较正常组显著增高(P<0.01),其中尿毒症CD 44阳性细胞数增高极为显著,IgA肾病CD 44和CD 62P表达均较其他肾脏疾病降低(P<0.05),CD 44和CD 62P表达呈正相关(P<0.05),但CD 44和CD 62P的表达与肾病病理类型无相关性(P>0.05)。结论:原发性肾小球病变患者外周血CD 44和CD 62P表达明显增高,但与肾病病理类型无相关性。

流式微珠阵列术在医学中的研究进展

随着高分子微球技术的日益创新,流式细胞术与高分子微球技术相结合的流式细胞微球芯片捕获技术也随之产生,流式细胞微球芯片捕获技术又称为流式微球分析技术、流式微球技术、流式微珠阵列术,具有检测灵敏度高、特异性强、分析速度快等优点,应用前景广阔。我们就流式细胞微球捕获芯片技术在医学中的研究进展做简要综述。

术前消化道恶性肿瘤患者外周血Th1/Th2细胞外因子漂移分析

目的探讨术前消化道肿瘤患者血清中Th1/Th2细胞因子的漂移情况。方法收集食管癌患者163例,胃癌患者24例,肠癌患者80例,另选取70例健康体检者(对照组)进行试验。流式细胞小球微阵列术(CBA)检测两组血清中Th1类细胞因子[干扰素(IFN-)、肿瘤坏死因子-(TNF-)、白介素-2(IL-2)]与Th2类细胞因子[(白介素-10(IL-10)、白介素-5(IL-5)、白介素-4(IL-4)]的水平。结果食管癌组的IL-5水平与对照组差异有统计学意义(<0.05);胃癌组的IFN-水平与对照组差异有统计学意义(<0.05),IL-4水平与对照组差异有统计学意义(<0.05);肠癌组的IL-5水平与对照组差异有统计学意义(<0.05),IL-4水平与对照组差异有统计学意义(<0.05)。食管癌和肠癌患者为Th2上漂,胃癌患者为Th1、Th2双上漂。结论分析细胞因子漂移变化特点,以了解患者Th1/Th2类细胞因子的免疫调节功能状况,能为术前消化道肿瘤患者的免疫治疗提供依据。

基于量子点编码微球的流式检测技术用于白血病诊断的研究

采用种子聚合法制备了微米级的聚苯乙烯微球(Polystyrene Microspheres,PS),并将微球羧基化和多孔化.将量子点(Quantum Dots,QDs)作为荧光分子,合成了不同发射波长的量子点,并成功将其装载到多孔微球当中形成荧光编码微球(QDs@PS),最后检测急性白血病(Acute Leukemia,AL)患者血清样本,通过流式实现对血清中抗原的定量分析.扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscope,SEM)和流式细胞术图像显示,微球的球形规整,尺寸均一.荧光显微镜观察,QDs基本均匀渗透到整个微球中.此外,QDs@PS显示了良好的光稳定性,未见QDs泄漏,并可保持其荧光至少两周.荧光光谱分析对人免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)检测的性能表明,荧光微球表面的羧基有利于生物大分子的高效共价结合,可应用于三明治免疫夹心反应偶联白血病高表达抗原白介素6(Interleukin 6,IL-6).结合白血病患者血清样品,通过流式细胞仪检测出量子点的荧光,计算其平均荧光强度(Mean Fluorescence Intensity,MFI)来表示血清中IL-6的含量.这些结果表明,设计的光学编码微载体可以成功地应用于高通量和多路生物分子分析,在血液疾病检测和诊断中有很大潜力.

流式微球捕获蛋白定量检测技术的原理与应用

流式微球捕获蛋白定量检测技术也被称为悬浮点阵技术、液态芯片技术,是基于流式检测技术和荧光微球捕获技术的液相、高通量、多重蛋白定量技术,基本原理是在荧光编码捕获微球表面进行的荧光标记液相抗原抗体反应,具有流式技术检测速度快、定量准确、多参数、高通量的特点,检测所需样品量小,可同时检测一个样品中数种到数十种可溶性蛋白,具有良好的可重复性,是固相酶联免疫吸附检测的一项良好的替代技术,在病毒感染、各类炎症、过敏性疾病、自身免疫病、肿瘤、移植、药物研发等相关的研究领域具有应用价值,在儿科危重病患儿的诊断和治疗、急性公共传染性疾病的研究和临床诊治中具有特殊意义。文章主要介绍流式微球捕获蛋白定量检测技术的技术原理、特点、应用与局限性。

新城疫病毒流式微球免疫检测新方法

本研究基于新城疫病毒多克隆抗体的制备及优化,以聚苯乙烯微球作为蛋白质载体建立免疫检测体系,建立了快速检测新城疫病毒的流式细胞术新方法。以藻红蛋白荧光染料对新城疫多克隆抗体荧光标记,取1μL荧光微球与100μL新配制的单克隆抗体溶液反应,依次加入一定量待测抗原和藻红蛋白标记的多克隆抗体,漩涡振荡10s,室温振荡反应充分,形成双抗体夹心复合物,用流式细胞仪进行检测。采用ELISA法对免疫试剂进行了匹配性筛选实验,优选了试剂用量,并与传统ELISA方法进行了对比分析。实验结果表明,单克隆抗体350mg/L、多克隆抗体300mg/L时可获得最佳分析效果,与传统的ELISA方法呈现出良好的相关性,不与鸡传染性支气管炎病毒、鸡痘病毒、鸡马立克氏病病毒等发生交叉反应。

慢性肾小球肾炎患者外周血Th1/Th2及CD28^+细胞的变化及其临床意义

目的探讨慢性肾小球肾炎(CGN)患者外周血Th1/Th2及CD28+细胞百分率的变化在疾病进程中可能的细胞免疫学机制。方法采用流式细胞术检测50例CGN患者及30名正常人(对照组)外周血Th1/Th2和CD28+细胞的百分率,用SPSS 16.0软件对试验结果进行统计分析。结果与对照组比较,CGN患者外周血CD3+CD4+细胞百分率和CD4/CD8比值明显降低(P<0.05),Th1和Th2细胞百分率差异无统计学意义(P>0.05),但Th1/Th2比值明显增高(P<0.05);CGN患者CD28+、CD4+CD28+细胞百分率明显减少(P均<0.01)。结论 CGN患者体内T细胞免疫功能紊乱和活化受限,细胞免疫功能低下,Th1和Th2细胞失衡,通过对CGN患者外周血Th1/Th2及CD28+细胞的检测,有助于了解患者的细胞免疫状态,为临床诊断和免疫治疗提供参考依据。