基于流式细胞术对不同倍性草莓基因组大小的测定

以不同倍性草莓资源的嫩叶为材料,根据待测样品倍性预估基因组大小后分别选择水稻“日本晴”(基因组大小为430 Mb)、番茄(基因组大小为900 Mb)、玉米“B73”(基因组大小为2.3 Gb)作为内参,利用流式细胞仪测定样品的基因组大小。结果表明,二倍体资源,森林草莓基因组大小为(233±0.78)Mb,绿色草莓为(234±0.82)Mb;四倍体资源,西南草莓基因组大小为(492±2.12)Mb,伞房草莓(雄株)为(488±7.07)Mb,伞房草莓(雌株)为(491±4.95)Mb,伞房草莓雄株和雌株基因组大小均为首次测定;六倍体资源,麝香草莓基因组大小为(644±1.73)Mb;八倍体资源,栽培品种“章姬”基因组大小为(793±7.78)Mb,“蒙特瑞”为(761±0.00)Mb;十倍体资源,野生的择捉草莓基因组大小为(938±6.36)Mb,栽培品种“桃熏”为(1007±6.36)Mb。

流式细胞术检测细胞周期影响因素及不同免疫细胞亚群周期分析

细胞周期检测对于了解细胞增殖状态、细胞功能研究、药物筛选与评估等领域具有重要意义。流式细胞仪分析细胞周期是目前较为经典且广泛应用的检测手段之一。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染是最常用的基于流式的检测细胞周期方法,然而,该方法在使用过程有诸多处理因素会对检测结果造成影响。此外,不同免疫细胞亚群在不同细胞周期阶段的分布差异也有助于研究免疫反应,了解疾病状态。本文以B16-F10细胞系为例,采用PI单染法,从固定条件、上机条件和软件分析3个角度,评价多种处理因素对细胞周期检测结果的影响。根据结果分析,在进行细胞周期检测时,建议取3×10^(6)个细胞,用300μL预冷PBS重悬细胞后逐滴滴入700μL预冷的无水乙醇,放置于4℃或-20℃过夜固定,低速收样,收样速率为每秒400~600颗粒数,去黏连后需收集至少3000个细胞。另外,通过EdU、PI双指标染色可以精确划分细胞周期,而细胞表面标志物染色联合Ki-67和PI染色法,可在不进行细胞分选的情况下进行不同免疫细胞亚群周期分析。本文较为系统的探讨了PI单染法检测细胞周期的影响因素,提供了标准的实验操作流程。建立了EdU联合PI检测细胞周期和针对不同免疫细胞亚群周期分析方案,拓宽了细胞周期检测方式。

基于虚拟实验数据库的流式细胞术线上教学应用研究

目的探讨线上教学在流式细胞术及其应用课程实验课教学中的应用效果。方法研究时间为2022年3月至2023年12月。选取首都医科大学2019级和2021级选修流式细胞术及其应用课程的37名硕士研究生为对照组,2022级和2023级选修流式细胞术及其应用课程的31名硕士研究生为试验组。对照组接受实验课线下教学,试验组接受实验课线上和线下混合教学模式教学。对试验组实验课线上教学模式满意度进行调查和评价,比较两组流式数据分析成绩和实验操作成绩。结果调查显示,试验组线上教学模式提升流式数据分析能力和线上教学模式满意度最高(96.7%),线上教学模式提升科研能力满意度最低(83.9%)。试验组流式数据分析成绩和实验操作成绩均高于对照组(P<0.05)。结论基于虚拟实验数据库的流式细胞术线上教学可提高研究生流式细胞术数据分析及实验操作能力。

基于流式细胞术的江西10个油茶农家品种基因组大小测定

油茶农家品种具有较高经济价值和地方特色,是油茶育种的重要资源,然而目前有关油茶的遗传基础研究较少。为了探明江西省油茶农家品种的基因组大小,为油茶农家品种的遗传评价与合理利用提供基础,文章采用流式细胞术对江西省10个油茶农家品种的基因组大小进行测定,结果表明,江西油茶农家品种白皮中子、观音桃、茅岗大果、珍珠子、二水桃、霜降红皮、赣萍茶、石市红皮、遂中子、夏讲的基因组大小分别为:5 480.06、8 531.31、8 751.11、8 545.69、8 422.12、8 756.84、8 477.28、8 591.20、8 763.49、8 684.92 Mb,白皮中子的基因组大小接近其他农家品种的2/3,赣石84-8的基因组大小与除白皮中子外的其他油茶农家品种的基因组大小接近。

基于流式细胞术的尿有形成分分析对细菌性尿路感染的诊断价值研究

目的:探讨尿有形成分分析结果在快速筛查尿路感染中的应用价值,减少不必要的培养,提高抗生素使用的针对性。方法:收集2023年1月-4月在我院门诊或住院的1626例疑似尿路感染患者的尿有形成分检测结果及相关参数,与尿培养结果作比较。以尿培养结果为金标准,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC)及最佳截断值(cut-off值)以评估筛查性能,采用Kappa值评估细菌报警信息与培养鉴定结果的一致性。结果:1626例中段尿培养细菌阳性424例(26.1%),主要致病菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、屎肠球菌和粪肠球菌。与尿培养阴性患者相比,尿培养阳性患者的WBC和BACT均明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线分析显示,BACT诊断UTI的效能优于WBC。对总体人群使用BACT<12.5/μL筛查培养阴性标本时,灵敏度为95.0%,阴性预测值为97.3%,可减少培养率47.2%。男性人群使用BACT<5.5/μL,灵敏度为95.4%,阴性预测值为98.4%,可减少培养率49.2%。女性人群使用BACT<15/μL,灵敏度为96.4%,阴性预测值为95.3%,可减少培养率为28.1%。培养阳性标本中,UF5000对革兰氏阳性细菌与革兰氏阴性细菌的总体识别符合率为72.9%(248/340),Cohen'skappa一致性为0.836(P<0.001)。结论:基于流式细胞术的尿有形成分分析可以有效筛选尿培养阴性标本,减少不必要的培养,UF5000全自动尿有形成分分析仪所提供细菌信息可为临床抗生素治疗提供参考依据。

基于流式细胞术对观赏海棠品种的基因组大小测定

核DNA C值和基因组大小是重要的生物多样性特征,本研究以18个观赏海棠(Malus spp.)品种的嫩叶为材料,并以玉米(Zea mays L.)品种‘B73’为内参样本,利用流式细胞术对观赏海棠基因组大小进行了测定。结果显示:18份观赏海棠C值大小范围为0.74~1.50 pg,平均为0.96 pg;其中,‘玛丽波特’(‘Mary Potter’)C值最大,达到1.50 pg,而‘红珠宝’(‘Red Jewel’)C值最小,为0.74 pg。方差分析结果表明观赏海棠品种间C值大小存在显著差异。观赏海棠不同品种间DNA C值和基因组大小存在显著的多样性。

利用流式细胞术鉴定3种李属植物基因组大小及染色体倍性检测

【目的】研究适合不同李属资源的FCM检测体系,估测其基因组大小及倍性,为李属资源的鉴定、分类及基因组和转录组等深入研究提供依据。【方法】利用FCM对3种常用的细胞核裂解液进行筛选与优化,选取最适宜的裂解液鉴定3种李属植物进行基因组大小和检测染色体倍性。【结果】LB01、Marie’s和WPB 3种裂解液对樱桃李检测效果均较好,而WPB裂解液检测效果最佳;Marie’s和LB01裂解液与欧洲李不匹配,改良的WPB裂解液最适合欧洲李;杏李与LB01裂解液不匹配,WPB裂解液对杏李的裂解效果好于Marie’s裂解液,而改良的WPB裂解液对杏李的裂解效果均最好。樱桃李和杏李基因组大小范围分别为491.22~566.40 Mb和514.46~573.83 Mb,欧洲李资源平均基因组大小为1678.37 Mb。【结论】樱桃李和杏李资源均为二倍体,欧洲李资源全部为六倍体,李属植物每个种内不同品种之间的基因组大小存在一定差异。

成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞Ahr入核的比较

目的探究成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞中Ahr入核的差别。方法用15%的DMEM培养人来源的成纤维样滑膜细胞细胞株MH7A,分别用激光共聚焦显微镜和量化成像流式细胞仪(ImageStreamX MarkⅡ)检测空白对照组、Kyn组和Kyn+CH223191组对MH7A中Ahr的入核水平,并采用非参数检验比较两种检测技术检测结果的相关性。结果与空白对照组相比,免疫荧光技术和成像流式细胞术测得的MH7A细胞中Kyn组和Kyn+CH223191组Ahr入核能力增加(P<0.05),两种实验方法测得的三组结果相关性良好,R 2值分别是0.8638、0.9287和0.9018,差异有统计学意义(P<0.05)。结论相较于免疫荧光技术的操作和结果,成像流式细胞术数据处理比较复杂,但所得结果精确度高,避免了实验者的主观性,减少实验误差。

流式细胞术在鉴别良恶性浆膜腔积液的应用现状与进展

流式细胞分析术是一种高效快速的细胞分析技术,可通过检测细胞表面的标记物或细胞内生物分子来分析细胞的性质和功能。在浆膜腔积液的诊断中,流式细胞术可帮助区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞,从而辅助良恶性的鉴别诊断。该研究主要就流式细胞术的基本原理、在浆膜腔积液诊断中的应用及研究现状进行全面的分析和总结,并探讨其优缺点及未来发展方向。

基于流式细胞术的蜘蛛抱蛋属植物倍性检测和核DNA含量测定体系的建立

为建立适用于蜘蛛抱蛋属植物的倍性检测及其核DNA含量的流式细胞术方法,以蜘蛛抱蛋属植物成熟叶片为材料,比较了WPB解离液、LB01解离液、Galbraith’s解离液以及改良Galbraith’s解离液制备的细胞核悬液的效果。结果表明:改良Galbraith’s解离液能够更广泛地适用于蜘蛛抱蛋属植物成熟叶片的细胞核悬液的制备且效果较好。利用改良Galbraith’s解离液对12种13个居群的蜘蛛抱蛋属植物进行倍性检测,并通过染色体制片计数法进行验证。结果表明:12种蜘蛛抱蛋属植物的DNA含量的荧光强度峰值范围为1753078.81~5817826.99。其中,11种二倍体植物的峰值范围为1753078.81~2937690.80,四倍体辐花蜘蛛抱蛋的峰值为3892503.69,六倍体泰国蜘蛛抱蛋的峰值为5817826.99。此外,以葱为内标,对以上蜘蛛抱蛋属植物的核DNA含量进行测定和估算,首次估测了11种蜘蛛抱蛋植物的核DNA含量,蜘蛛抱蛋的DNA含量与已有报道的结果相近。其中,二倍体植物的核DNA含量为14.16~18.73 Gb;四倍体辐花蜘蛛抱蛋的核DNA含量为28.33 Gb;六倍体泰国蜘蛛抱蛋的核DNA含量为43.03 Gb。结果可为蜘蛛抱蛋属植物的遗传育种研究、全基因组研究以及喀斯特植物的起源与演化研究提供重要科学依据。

流式细胞术检测药用植物基因组大小的研究策略

流式细胞术是一种可以对悬浮于液体中微小颗粒进行分选和计数的方法。该方法的步骤包括制备完整的细胞核悬浮液、对核酸荧光染色、根据相关荧光含量分类。分析荧光标记悬液中的单细胞或其他微小颗粒信号,可以实现蛋白质含量、细胞DNA含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原、细胞体积等参数的快速测定。该技术可以用于植物倍性分析和基因组大小估测等研究。目前利用流式细胞术对药用植物进行基因组大小评估的研究较少,未来有待深入研究,以期为利用流式细胞术检测基因组大小提供相关资料。

流式细胞分选技术及其在单克隆抗体制备中的应用

单克隆抗体是一类在疾病防治、药物开发、生命科学研究领域具有重要作用的生物活性蛋白质,目前已有多种制备途径。随着PCR技术的发展,单个细胞生产抗体技术迅速兴起;与其他制备技术相比,流式细胞分选技术依靠强大的光学分析与分选系统能够精准高效地将免疫细胞分群,后续通过基因工程的方法获得单克隆抗体。利用该技术生产的单克隆抗体具有可变区天然构象与抗原结合特异性强等显著优势,在病毒感染机制研究、抗肿瘤治疗、抗自身免疫病等方面具有重要价值。论文对单克隆抗体开发过程中各技术优劣对比与流式细胞分选在单克隆抗体开发中的过程、应用与发展趋势进行综述,以期为单克隆抗体制备技术的研究进展提供参考。

采用基于γ-H2AX焦点分析的流式细胞术检测纳米金颗粒的遗传毒性

目的:建立基于磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)生物标志物的流式细胞术遗传毒性检测方法,为纳米金颗粒的遗传毒性评价提供参考。方法:在加与不加体外代谢活化系统(S9)的条件下,分别设+S9短时处理组,选择终浓度为7.5、3.75和1.875μg/mL的环磷酰胺(CP)处理4 h;-S9长时处理组,选择终浓度为6.4、1.6和0.4μg/mL的依托泊苷(ETO)连续接触24 h,建立γ-H2AX生物标志物的流式细胞术检测方法。选择两种纳米金颗粒(样品1为溴化十六烷基三甲基溴化铵修饰,样品2为聚乙二醇修饰)作为实验材料,根据细胞毒性试验结果样品1和2分别选取3个不同浓度处理人成淋巴TK6细胞,分为+S9短时4 h组和-S9长时24 h组处理后收获细胞,采用γ-H2AX荧光抗体进行标记,流式细胞术分析γ-H2AX阳性细胞比例。同时设CP或ETO阳性对照和相应溶剂对照组。结果:与溶剂对照组相比,在有或无S9条件下,阳性对照组诱导产生的γ-H2AX阳性细胞比例显著增加(P<0.05),并存在剂量反应关系(CP:R2=0.837,P=0.01;ETO:R2=0.903,P<0.01),说明方法成功建立。在加与不加S9的条件下,两种纳米金样品各剂量组的γ-H2AX阳性细胞比例较溶剂对照组差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论:本实验建立了基于γ-H2AX焦点分析的流式细胞术遗传毒性检测方法,可用于纳米金颗粒的遗传毒性评价。

多参数流式细胞术识别与急性髓系白血病微小残留病具有类似表型的再生细胞

目的探讨如何利用多参数流式细胞术(MFC)鉴别与急性髓系白血病(AML)微小残留病(MRD)具有类似表型的正常细胞。方法回顾性分析2020年3月-2022年4月在我院利用MFC检测的AML患者MRD骨髓标本157例次,识别容易被误认为是MRD的正常细胞。结果AML患者治疗后再生的骨髓样本中会出现如下易误判为MRD的正常细胞群:CD117 dim CD56^(+)CD7^(+)CD45^(str)自然杀伤(NK)细胞、CD19 dim CD56^(+)CD7^(+)CD45^(str) NK细胞、CD300e^(+)HLA-DR^(+)CD14^(part) CD64^(part)非经典单核细胞;这些细胞群占骨髓有核细胞比例的中位值分别是0.084%(范围:0~0.6200%)、0%(范围:0~0.2134%)、0.1549%(范围:0~2.0940%)。结论MFC检测AML患者MRD过程中,应避免将治疗后骨髓再生的正常细胞,误判为残留病。

传染病教学中开设多色流式细胞术课程的实践

多色流式细胞术是一种高效、精准、快速的细胞学检测技术,已广泛应用于传染病检测和研究中。在传染病研究生教学中,本团队建立多色流式课程体系并通过教学实践过程总结教学经验。文章阐述了传染病研究生教学中开设多色流式细胞术课程的几个方面,并进行了总结,包括确定课程目标、设计课程结构、确定课程内容、确定课程形式和确定课程大纲五个方面。笔者进一步通过重点推动多色流式细胞术实践课程并总结实践的初步经验,包括明确多色流式细胞术可以检测的样本类型、多色流式细胞术的仪器类型、染色策略和实验方案、加强流式数据分析和结果判读能力、多色流式细胞术实践过程中应强化生物安全操作五个要点。该课程的开展有助于传染病研究生对免疫学和传染病发病机制的理解,为其未来从事传染病防治和免疫学研究的教学工作提供坚实的基础。

细胞遗传学联合流式细胞术在骨髓增生异常综合征诊断效果和危险分层及预后中的价值研究

目的探讨细胞遗传学联合流式细胞术在骨髓增生遗传综合征(MDS)患儿中的诊断效果、危险分层及预后的价值。方法选取2019年5月至2021年5月赣州市人民医院检验科收治的97例疑似MDS患者作为研究对象,常规给予细胞遗传学和流式细胞术检查,并以临床最终检查结果为金标准,分析细胞遗传学、流式细胞术在骨髓增生遗传综合征中的诊断效能;对患儿随访12个月,根据流式细胞术积分系统对患者进行危险分层评估,分析不同危险分层下患者的预后并进行相关性分析。结果细胞遗传学联合流式细胞术检查确诊65例,检查准确度为88.66%、灵敏度为89.71%、特异度为86.21%;细胞遗传学联合流式细胞术检查在MDS中检查准确度高于单一检查方法(P<0.05);灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值略高于单一细胞遗传学、流式细胞术检查,但其诊断效能差异无统计学意义。低危患者总体生存时间长于中危和高危患者,且中危患者总体生存时间长于高危患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,MDS患者分层与患者总生存时间呈负相关(r<0,P<0.05)。结论细胞遗传学与流式细胞术用于MDS患者中均具有较高的检出率,且二者联合检测能提高诊断效能,利用流式细胞术积分系统能完成患者危险分层,与患者预后存在强相关性。

采用流式细胞分选术区分中枢神经系统内小胶质细胞和浸润巨噬细胞

目的建立通过流式细胞分选术区分中枢神经系统内小胶质细胞和浸润巨噬细胞的方法。方法用成年C57BL/6小鼠建立双侧颈总动脉狭窄模型,分别采用集落刺激因子1受体抑制剂PLX5622或氯膦酸盐脂质体处理。将分离、匀浆、重悬后的小鼠脑和脊髓组织进行Percoll密度梯度离心,得到单核细胞悬液。采用CD45、CD11b和淋巴细胞抗原6家族成员C(Ly6C)抗体进行流式分选,获得小胶质细胞(CD11b^(+)CD45^(low)Ly6C^(-)细胞)和浸润巨噬细胞(CD11b^(+)CD45^(high)Ly6C^(+)细胞),并验证PLX5622和氯膦酸盐脂质体2种给药范式获得的处理效果。结果通过CD45、CD11b和Ly6C抗体可以有效区分中枢神经系统中小胶质细胞和浸润巨噬细胞。与对照组比较,PLX5622处理后小胶质细胞数量减少(P=0.001),而氯膦酸盐脂质体处理后浸润巨噬细胞数量减少(P<0.001)。结论所建立的流式细胞分选方法可有效区分中枢神经系统中小胶质细胞和浸润巨噬细胞,PLX5622和氯膦酸盐脂质体2种给药范式可分别选择性清除中枢神经系统内的小胶质细胞和浸润巨噬细胞。

流式细胞术检测皮肤组织在母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤诊断中的应用

目的:探讨流式细胞术(FCM)检测皮肤组织样本在诊断母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)中的作用。方法:利用多色流式检测皮肤组织与骨髓,并结合组织病理学、骨髓细胞形态学、遗传学、二代测序(NGS)等检测结果对3例已确诊的BPDCN进行回顾性分析。结果:3例患者均以皮肤损害为首发症状,FCM检测骨髓仅发现1例患者标本存在BPDCN细胞,而3例患者皮肤组织标本中均发现BPDCN细胞;与皮肤组织病理免疫组化结果诊断一致;病例2患者骨髓细胞学和遗传学检查均未发现BPDCN细胞,病例1患者骨髓细胞学中发现BPDCN细胞,病例3患者NGS检测到BPDCN相关基因突变。结论:流式细胞免疫分型是BPDCN诊断的实用辅助手段,可以在早期皮肤组织标本中快速精准地诊断BPDCN,同时进行鉴别诊断。

中医院校本科生层次递进式开展流式细胞术实验方法课程的实践

目的探索在本科生中开展流式细胞术的实验教学与实践,激发本科生的主观能动性,将学到的理论知识进行拓展应用,以便应用到未来的科研中。方法文章以参与“橘井青苗”计划的本科生为研究对象,层次递进式开展流式细胞术实验方法课程的实践与初探。此实践计划设置了2个递进层次的教学科研一体的实践范例,初阶为小鼠成肌细胞缺氧造模,并通过CCK-8法检测细胞的存活率,进阶为应用流式细胞仪检测小鼠成肌细胞的凋亡情况等。结果本科生在一周时间内全程参与到实践计划中,通过实验设计和实践,学生掌握细胞扩增、细胞存活率检测、细胞凋亡检测与数据分析,提高了学生的动手能力和创新能力,调查问卷课程满意度达到95%以上。结论层次递进式开展流式细胞术实验方法课程适合本科生,这种融合科研创新思路、课题设计与执行能力的教学培养方法,能带动学生在实验研究中进行科学规划和使用大型仪器。

流式细胞分析术的教学改革初探

流式细胞分析术是一种多参数、定量且高效的检测分析技术,是科学研究重要的技术手段之一,也是研究生必须掌握的一门实验技术。现行流式细胞分析术的教学存在“重理论、轻实践”的问题,学生在具体科研中难以开展相关实验项目。本文探索推行以研究需求为导向的流式教学改革,充分考虑专业差异,多维的教学模式极大调动了学生的自主能动性,提高了学生科研工作的实际能力。