荧光原位杂交-流式细胞术法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立并评价检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的荧光原位杂交-流式细胞术法。方法根据正交实验设计原则,分别对荧光原位杂交法的菌液浓度、探针浓度、杂交温度等实验条件进行优化,用流式细胞仪检测杂交后的荧光信号;检测结果与荧光实时PCR的结果进行比较。结果荧光原位杂交-流式细胞术法以每微升杂交缓冲液含细菌数40×105、探针4 ng以及杂交温度50℃时检测效果最佳;其检测敏感性为97.3%、特异性为100.0%,检测结果与荧光实时PCR法差异无统计学意义。结论荧光原位杂交-流式细胞术法检测MRSA的mecA基因,具有快速、准确的特点,可在临床实验室推广应用。

全自动图像细胞法、荧光原位杂交法、流式细胞仪对膀胱肿瘤的诊断和意义

目的探讨荧光原位杂交法(FISH)及全自动图像细胞法(ICM)对膀胱肿瘤的诊断价值。方法对20例非尿路上皮癌和40例膀胱肿瘤患者的尿液采用全自动图像细胞法及FISH、进行尿细胞学检查。另对确诊的45例膀胱肿瘤患者肿瘤组织及10例排除膀胱肿瘤患者的正常膀胱黏膜,行流式细胞VEGF及VEGFR检测。结果 FISH的敏感性显著高于ICM的敏感性(P<0.05)和常规尿细胞学的敏感性(P<0.05),同时ICM敏感性也显著高于常规尿细胞学的敏感性(P<0.05);ICM、FISH和常规尿脱落细胞学检测的敏感性与患者病理分期无相关性(P>0.05),但与肿瘤病理分级显著相关(P<0.05)。结论 FISH对膀胱尿路上皮癌诊断的敏感性高于ICM和尿细胞学检查。VEGF、VEGFR定量分析可作为膀胱肿瘤的生物学行为评估方法之一。

荧光原位杂交和流式细胞术结合(FISH-FCM)对肉食品中肠杆菌科细菌的快速定量检测

为建立一种新的荧光原位杂交与流式细胞术相结合(FISH-FCM)的方法,以快速鉴定肉食品中的肠杆菌科细菌,采用与肠杆菌科细菌16S rRNA保守序列互补的探针Enter1432并验证其特异性。结果表明:6种肠杆科细菌与探针Enter1432杂交率均在90%以上,而5种非肠杆菌科细菌与探针杂交率均低于1%;与SN/T 0738—1997《出口食品中肠杆菌科检验方法》传统培养法相比,FISH-FCM定量检测法全程约需4~5 h,检测8份猪肉样品中肠杆菌科细菌数为1.4万~640万个/g,4份鸡肉样品中肠杆菌科细菌数为5.0万~21万个/g,检出率为100%。综上所述,研究建立的FISH-FCM法可快速检测肉品中的肠杆菌科细菌,适于食品卫生、临床实验室推广使用。

MTT法与流式细胞术检测肺炎合剂促进T淋巴细胞转化的实验研究

目的：探讨肺炎合剂对小鼠Ｔ淋巴细胞转化的影响，并试图为中药研究淋巴细胞转化提供检测方法依据。方法：通过模仿病毒性肺炎患儿淋巴细胞转化率降低的机体，用氢化可的松建立免疫低下小鼠模型，以不同剂量药液灌胃给药后，采用ＭＴＴ法和流式细胞仪检测法对比观察肺炎合剂对ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾Ｔ淋巴细胞转化的作用。结果：肺炎合剂使正常和免疫低下小鼠脾Ｔ淋巴细胞增殖能力显著增强。结论：肺炎合剂对小鼠脾Ｔ淋巴细胞增殖反应的促进作用，可能是该药治疗作用机理之一。并认为流式细胞术是测定淋巴细胞转化的一种准确而可靠的万法。

全血法流式细胞术检测血小板抗体

目的 初步建立一种以全血为标本的流式细胞仪 (FCM)检测血小板抗体的方法。方法 FCM多参数分析全血中的CD6 1标记的血小板群。结果 每次检测需血以微升为数量级单位 ,所用时间 2h。能从正常的血小板中检出 3%含有CD6 1抗体的血小板 ,阳性率与理论值呈明显相关 (r >0 .9,P <0 .0 0 1) ;可检测血小板计数低达 10× 10 9/L的标本。结论 本法具有结果准确、重复性好的优点 ,需血量少 ,病人易接受 ,并且更接近生理状态 ;多参数检测 ,快速省时 ,更适用于血小板极低或抗体量少的患者。

SYBR-14/PI双染法流式细胞术检测精子质膜完整性的研究

目的:探讨应用荧光染料SYBR-14/碘化丙啶(SYBR-14/PI)双色标记法进行流式细胞术检测精子质膜完整性的可行性及其临床意义。方法:收集208例男性精液标本,按WHO精液分析标准分为正常组(n=31)与异常组(n=177)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本洗涤处理后经SYBR-14/PI双染后上流式细胞仪(FCM)分析,用发绿色荧光精子百分率(SYBR-14+/PI-%)表示质膜完整精子(PMI)的比例。结果:正常组与异常组SYBR-14+/PI-与SYBR-14-/PI+精子百分率均存在统计学差异(P均<0.05)。正常组精子SYBR-14+/PI-%为(55.66±20.64)%,显著高于异常组[(39.71±19.21)%,P=0.000]。208例标本中,SYBR-14+/PI-%与精子活动率呈显著正相关(r=0.408,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著正相关(r=0.398,P=0.000),与d级精子百分率呈显著负相关(r=-0.413,P=0.000);SYBR-14-/PI+%与精子活动率呈显著负相关(r=-0.380,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著负相关(r=-0.397,P=0.000),与d级精子百分率呈显著正相关(r=0.385,P=0.000);SYBR-14+/PI+%与精子活动率呈正相关(r=0.172,P=0.013),与(a+b)级精子百分率呈正相关(r=0.177,P=0.011),与d级精子百分率呈负相关(r=-0.164,P=0.018)。结论:应用流式细胞术SYBR-14/PI双染法检测精子质膜完整性具有可行性,可用于评估男性生育力。

流式细胞术微球阵列法检测急性白血病血清IL-6、IL-10和TNF水平

目的:探讨流式细胞术微球阵列法(CBA)在细胞因子检测中的应用及血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)在不同亚型急性白血病(AL)中的表达水平。方法:采用BD CBA F lex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒和流式细胞术检测29例急性白血病患者和20例正常人血清样本中3种细胞因子水平。结果:AL患者IL-6、IL-10和TNF水平显著高于正常对照组,急性淋巴细胞白血病(ALL)的IL-10和TNF水平较急性非淋巴细胞白血病(ANLL)有显著性提高(P<0.05)。在ANLL亚型中,M1型IL-6水平最高。结论:CBA法能快速、准确地定量检测细胞因子;AL血清中IL-6、IL-10和TNF水平升高,可能与疾病的发生发展存在相关性。

流式细胞术微球阵列法检测多种细胞因子在分泌性中耳炎患者中的表达

目的检测急性分泌性中耳炎(acute secretory otitis media,SOM)患者外周血及中耳积液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ的表达水平,以期综合分析免疫因素在其发病中的作用。方法采用BD CBA Flex SetIL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、γ-干扰素试剂盒,利用流式细胞术微球阵列法检测37例急性上呼吸道感染诱发急性分泌性中耳炎外周血、耳积液,8例鼻咽癌患者放疗后分泌性中耳炎耳积液和10例正常人血清样本中6种细胞因子水平。结果急性上呼吸道感染诱发的中耳积液中的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ表达水平显著高于外周血(P<0.05);其中IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ水平明显高于放疗后耳积液水平(P<0.05)。急性分泌性中耳炎外周血上述六种因子较正常对照组外周血差异无统计学意义(P>0.05)。结论中耳粘膜参与了急性分泌性中耳炎患者局部的免疫反应,在其发病中可能起到一定作用。

流式细胞术与定量PCR法检测HLA-B27的比对

目的评价实时荧光定量PCR法和流式细胞术两种方法检测人类白细胞抗原HLA-B27对强直性脊柱炎的临床诊断价值。方法将疑似强直性脊柱炎患者199例全血分别采用实时荧光定量PCR和流式细胞仪法检测HLA-B27,以流式细胞术HLA-B27阳性作为判断标准,确定实时荧光定量PCR法检测HLA-B27的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。将流式细胞术HLA-B27阳性的样本44例,按照实时荧光定量PCR检测结果将其分为疑似组、阴性组及阳性组,确定有无表达抗原表达强度的差异。结果91.5%样本分型结果相同,差异不具有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测HLA-B27的敏感度为95.1%,特异度达到96.8%,阳性预测值为88.6%,阴性预测值为98.7%。实时荧光定量PCR检测疑似组、阴性组及阳性组,无显著表达抗原表达强度的差异。结论实时荧光定量PCR与流式细胞术检测HLA-B27具有相似敏感度和特异度,是一种较为快速、简单、有效的检测方法。

流式细胞术法与^3H—TdR掺入法观察细胞增殖的相关性研究

目的:研究3H TdR掺入法和流式细胞术法研究指标的相关性, 探讨用流式细胞术法来替代3H-TdR掺入法的数据依据。方法: 用3H -TdR掺入法和流式细胞术法对细胞DNA合成和有丝分裂进行检测。结果: 流式细胞仪指标与3H-TdR掺入实验指标呈高度的正相关关系, 相关系数分别为: PI与cpm相关系数为r=0. 964;SPF与3H TdR,掺入的相关悉数r=0. 876,且经检验有统计学意义 (P<0. 01 )。结论:主动脉平滑肌细胞增殖指数、S期细胞分数与3H TdR掺入值密切相关。

流式细胞术(CD45/SSC设门法)检测恶性淋巴瘤骨髓受累的临床意义

目的:探讨流式细胞术(CD45/SSC设门法)检测恶性淋巴瘤骨髓受累的临床价值。方法:采用配对计数资料的实验设计,应用流式细胞仪对恶性淋巴瘤患者的骨髓标本进行检测,同时行骨髓涂片检查。结果:对34例恶性淋巴瘤患者的骨髓同时行上述两种方法检测,流式细胞术阳性率67.65%(23/34),95%可信区间(51.92%,83.37%),涂片法阳性率11.76%(4/34),95%可信区间(0.94%,22.58%)。经配对计数资料χ2检验,差别有统计学意义。结论:流式细胞术是检测恶性淋巴瘤骨髓受累的有效方法,检出率67.65%,优于传统的涂片法。

实时荧光PCR法与流式细胞术两种方法检测HLA-B27的比较

目的比较实时荧光PCR和流式细胞术两种方法检测人类白细胞抗原-B27(HLA-B27)。研究两种HLA-B27检测方法的差别和临床诊断的价值。方法分别采用实时荧光PCR法和流式细胞术两种方法检测138例病人血中HLA-B27,分析和比较两种方法的检测结果。结果两种检测方法检测结果的差异不具有统计学意义(P>0.05),两种方法的符合率为97.8%(135/138)。结论实时荧光PCR法与流式细胞术两种方法检测人类白细胞抗原-B27均准确和可靠,并且实时荧光PCR法能够判断流式细胞术所不能识别的双阳性结果。

免疫组织化学法与流式细胞术在非小细胞肺癌骨髓微转移检测中的效果

目的免疫组织化学法和流式细胞术检测非小细胞肺癌骨髓微转移状况的差异比较。方法选取2009年5月至2011年3月我院手术治疗的非小细胞肺癌160例，术前没有经历化疗及放疗，术中抽取肋骨骨髓，分别应用免疫组织化学法和流式细胞技术检测骨髓中阳性细胞表达率。结果160例非小细胞肺癌患者免疫组化检测骨髓转移阳性率为30．0％（48例），流式细胞术检测骨髓转移阳性率为34．4％（55例），112例免疫组化检查阴性的患者中，流式细胞术检测发现12例患者骨髓中存在微转移；而48例免疫组化检查阳性的患者中，有5例流式细胞术检测为阴性。结论流式细胞术和免疫组化技术都可检测非小细胞肺癌骨髓微转移，流式细胞技术有着更高的敏感性和检测效率。

涂片免疫组化法及流式细胞术观察性激素对子宫内膜脱落细胞PCNA的影响

目的探索反映子宫内膜增殖状态的细胞学检测方法,评价其在激素替代治疗(HRT)时子宫内膜监测中的可行性。方法对象为正常月经周期妇女(增殖中晚期组10例,分泌中晚期组9例)、绝经期组妇女(13例)、绝经后短期序贯使用17-β雌二醇和安宫黄体酮妇女(HRT组10例)。内膜吸管获取宫腔收集液制成细胞悬液,经流式细胞术(FCM)测定增殖细胞核抗原(PCNA),以及制成涂片进行免疫组化染色测定PCNA。比较两种方法所反映的性激素对子宫内膜PCNA的影响与传统的内膜组织免疫组化法所反映的性激素对子宫内膜PCNA的影响是否一致。结果三种方法显示一致的变化趋势:月经周期增殖中晚期组PCNA指数高于月经周期分泌中晚期组及绝经期组(P<0.01);月经周期分泌中晚期组PCNA指数最低,与绝经期组接近(P>0.05);HRT组PCNA指数介于绝经期组和月经周期增殖中晚期组之间。结论经内膜吸管获取宫腔收集液,用涂片免疫组化法及FCM测定子宫内膜脱落细胞的PCNA,均可反映性激素对子宫内膜增殖状态的影响,在HRT时子宫内膜监测中是可行的。

不同染色法对流式细胞术中DNA含量检测的影响

流式细胞术是目前对细胞进行定性和定量分析最有效的手段之一。本文从染色方法和染色样品存放时间在使用流式细胞术中对染色结果的影响进行了比较 ,旨在寻求一种简便、灵敏且重复性好的染色方法。流式细胞仪分析结果显示一步法同时具备了以上优点 ,并用经不同浓度三尖杉酯碱 (HT)处理的 HL - 6

基于流式细胞术与基因组Survey分析白及基因组大小及特征

目的研究白及的核型、基因组大小等特征信息。方法双色荧光原位杂交分析白及的染色体核型;以番茄为内参,流式细胞术检测白及基因组大小;基因组Survey分析获得白及基因组大小、杂合率、GC含量等生物学信息。结果DAPI荧光染色及端粒荧光原位杂交发现白及染色体为二倍体,染色体类型为sm和st型,核型类型为2C。rDNA荧光原位杂交发现白及染色体有1对显示较强的5S rDNA位点和1对18S rDNA位点,5S rDNA位点位于2个同源染色体间隙,18S rDNA位点位于染色体短臂的次缢痕部位。白及基因组大小为2.37 Gb,同时全基因Survey分析得到有效数据60.11 Gb,经过K-mer分析修正及Genomescope评估,白及基因组大小约为2.53 Gb,杂合率约为1.099%,重复序列约占67.45%,GC含量为36.11%,总测序深度为23.73。结论本研究首次获得白及基于5S rDNA和18S rDNA荧光原位杂交核型及增补了白及属植物的基因组大小数据,为白及后续的物种分类、种群进化研究及全基因组测序、组装及去冗余处理等工作提供基础参考数据。

灯盏花倍性的流式细胞术检测优化

染色体倍性鉴定是植物种质资源评价及多倍体品质选育的重要内容。通过对制样方式、细胞核悬液效果及荧光染料选择等工艺进行优化,建立流式细胞术测定灯盏花倍性的检验体系,并对灯盏花(Erigeron breviscapus Hand.)组培植株进行倍性鉴定。结果表明,采用刀片研磨法制备样品,选择解离液I[45 mmol/L MgCl2,30 mmol/L二水合柠檬酸三钠,20 mmol/L Mops,0.1%(体积比)Triton X-100]进行植物组织材料裂解,并以BioFroxx公司PI染料进行染色,能较好地检验灯盏花的倍性;使用该体系,能检验出组培灯盏花再生植株中的多倍体、混倍体和单倍体。

流式细胞术和LDH释放法检测NK细胞杀伤效能的实用性比较

目的流式细胞术和乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)体外杀伤功能的比较和优化。方法以人外周血PBMCS经体外诱导扩增的NK细胞为效应细胞,K562细胞作为靶细胞,按5:1、10:1、20:1、40:1效靶细胞比共培养,分别采用LDH法和流式细胞术检测靶细胞死亡率。结果在4个效靶细胞比实验组中,5:1效靶细胞比条件下LDH释放法检测的靶细胞死亡率显著低于CFSE/PI标记法,其他3个效靶细胞比组的两种方法检测结果无显著性差异。高效靶比、细胞毒作用较强时,LDH释放法的结果误差较大,可重复性不强。结论流式细胞术和LDH释放法检测NK细胞体外杀伤效能的最佳效靶细胞比为10:1。流式细胞术比LDH法灵敏度更高,稳定性更好;在效靶细胞比为10:1的实验条件下,LDH法可作为流式细胞术的替代方法。