人体外周血CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞体外扩增的实验研究

目的探讨人体外周血CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞(DNT细胞)在体外进行分离和扩增的方法。方法取健康的成人外周血20ml,应用Rosettesep抗体吸附法去除CD4^+T细胞和CD8^+T细胞;再将DNT细胞放入anti-CD3mAb包被的培养板中,并加入rhIL-2、rhIL-4,共同培养,第10天和第14天计数细胞扩增倍数及记录扩增曲线;利用Easysep免疫磁珠法纯化,采用流式细胞仪检测其纯度。结果经分选、纯化后的DNT细胞,纯度可达94%以上;体外培养第10天和第14天,DNT细胞扩增倍数分别为53倍和41倍。结论通过Rosettesep抗体吸附法及Easysep免疫磁珠法分离及纯化DNT细胞是可行的,可获得大量高纯度的DNT细胞。

磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/FoxO1信号通路和白细胞介素17在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中的表达变化

目的探讨磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/FoxO1和白细胞介素17(IL-17)与自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病的相关机制。方法将C57BL/6小鼠60只随机分为对照组和模型组(EAE),每组30只。采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35~55)联合完全弗氏佐剂诱导建立EAE模型。观察各组小鼠的行为学评分,并于评分4分时取各组小鼠的脊髓、脾脏和外周血。HE染色及Luxol fast blue染色观察脊髓炎性细胞浸润及髓鞘脱失情况;脾细胞在体外用a-CD3和MOG35~55分别刺激7 d,收集其上清液,ELISA检测小鼠脾细胞上清液和血清中细胞因子白细胞介素17(IL-17)和干扰素γ(IFN-γ)的含量;流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+IL-17+细胞的百分比;Western blotting检测IL-17及PI3K/Akt/FoxO1在小鼠脊髓中表达。结果与对照组相比,EAE组小鼠行为学评分明显高于对照组(P<0.05);HE染色及Luxol fast blue染色结果显示,EAE组脊髓病理组织表现出炎性浸润和髓鞘脱失显著增多(P<0.05)。ELISA结果显示,EAE组血清中及体外培养脾细胞的上清中IL-17和IFN-γ的含量明显升高。流式结果表明,EAE组小鼠脾细胞中CD4+IL-17+T细胞的百分比明显增加(P<0.05)。Western blotting结果显示,EAE组小鼠脊髓IL-17、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平明显升高,但磷酸化FoxO1(p-FoxO1)蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论 EAE组小鼠脊髓中促炎因子IL-17分泌增加,可能与PI3K/Akt/FoxO1信号通路活化进而激活T细胞功能有关。

外用红色诺卡氏菌细胞壁骨架效力测试实验方法的研究

摸索改进外用红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)细胞壁骨架的两种效力测试方法,即流式细胞术-荧光微球法、流式细胞术-免疫双标法(荧光微球+荧光抗体),并与国家食品药品监督管理局原审批方法进行比较,经过统计学评估,评价两种方法的可行性。通过抽取小鼠免疫后获得的腹腔液注入到流式细胞仪,在发射光的荧光通路中,检测巨噬细胞的荧光强度,测定未吞噬荧光微球的巨噬细胞和吞噬荧光微球的巨噬细胞的比例,全部数据经统计学分析,按公式计算吞噬率及吞噬指数完成流式细胞术检测过程。分别采用荧光微球以及荧光微球+荧光抗体两种方式上机检测巨噬细胞吞噬结果。测得的结果与原检验方法——人工显微镜观察法的结果进行比较,确定评估方法的有效性和准确性。结果表明,显微镜人工计数法与流式细胞术-免疫双标法(荧光微球+荧光抗体)的3次实验结果与正常对照组比较,吞噬率明显升高(P<0.01),吞噬指数明显增大(P<0.01),有显著性差异,判定结果为阳性;3次流式细胞术-荧光微球法实验,结果不稳定。流式细胞术-免疫双标法(荧光微球+荧光抗体)由于加入了成熟小鼠巨噬细胞表面特异性标志物抗体F480荧光抗体,可有效标记小鼠巨噬细胞,加强了流式细胞仪收集巨噬细胞的准确性,两者结合应用更能准确反映供试品对小鼠巨噬细胞吞噬功能的作用。利用此方法检测外用红色诺卡氏菌细胞壁骨架增强免疫力的结果和药品原检验方法的统计学结果一致。该方法获取的巨噬细胞数量远多于原方法,加入的荧光微球及荧光抗体,能更准确反应供试品对小鼠巨噬细胞的吞噬作用。该方法灵敏性高、稳定性好,并且易操作,可作为原实验方法的改良参考。

环氧化酶-2选择性抑制剂抑制人食管癌细胞的生长及其诱导凋亡

目的:探讨NS-398对食管癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法:常规方法培养食管癌Eca-109和TE-13细胞,以不同浓度NS-398(5,10,20,40,80μmol/L)处理24,48,72h.采用四甲基唑蓝法(MTT)检测NS-398对Eca-109和TE-13细胞生长的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及COX-2,Bcl-2,Bax蛋白的表达;TUNEL法检测2种细胞凋亡情况;用放射免疫分析(RIA)检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)含量.结果:NS-398可抑制2种细胞的生长,并随药物浓度的增高及作用时间的延长抑制率逐渐增高,并使2种细胞产生的PGE2明显降低.NS-398使2种细胞G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少(Eca-109:F=22.39,P<0.01;TE-13:F=46.99,P<0.01),并引起了明显的细胞凋亡.NS-398使2种细胞COX-2和Bcl-2表达显著减少,而Bax表达显著增高.COX-2和Bcl-2的表达呈显著正相关(Eca-109:r=0.925,P<0.01;TE-13:r=0.925,P<0.01),COX-2和Bax表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.937,P<0.01;TE-13:r=-0.703,P<0.01)、Bax和bcl-2表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.926,P<0.01;TE-13:r=-0.753,P<0.01).结论:NS-398可抑制食管癌细胞的增殖并可诱导其凋亡,应用COX-2选择性抑制剂对食管癌进行化学预防或辅助治疗具有可能性.

弓形虫感染大鼠外周血T淋巴细胞亚群及IFN-γ、TNF-α、IL-4动态变化

目的观察弓形虫感染大鼠外周血T淋巴细胞亚群及干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)动态变化。方法将54只清洁级Sprague-Dawley(SD)成年大鼠随机分成9组,其中8组每鼠腹腔注射经纤维素-11(CF-11)纯化的活弓形虫速殖子悬液2ml(2×105/L)。分别于弓形虫感染后1、3、7、14、28、35、42、60d时取大鼠外周全血,流式细胞术检测T细胞亚群变化,ELISA检测外周血IFN-γ、TNF-α、IL-4动态变化。对照组腹腔注射2ml生理盐水。结果T淋巴细胞亚群CD8+水平在感染弓形虫后3d(14.22%)、7d(14.93%)、14d(16.08%)均显著低于正常水平(23.08%)(P<0.05),至感染后28d恢复正常水平,而CD4+水平在整个感染过程中无明显变化。IFN-γ和IL-4水平在感染后第7d分别升高至6.73pg/ml和6.91pg/ml(P<0.05),至感染60d仍高于正常水平;TNF-α至感染后28d(14.37pg/ml)及60d均高于正常水平(10.81pg/ml)(P<0.05)。结论弓形虫感染后大鼠外周血CD8+水平一度降低,28d后恢复正常,CD4+无明显变化,IFN-γ、IL-4和TNF-α均高于正常水平,但出现时间有差异。

骨髓造血干/祖细胞自身抗体与免疫相关性全血细胞减少

背景:免疫相关性全血细胞减少涉及多个临床学科,近年来受到高度重视。骨髓造血早期细胞自身抗体及免疫调节功能可能是其症结所在。目的:分析骨髓造血早期(干/祖)细胞自身抗体在免疫相关性全血细胞减少症发病机制中的作用及其进展。方法:由作者电子检索1992年3月至2012年3月PubMed、万方医学网以及CHKD数据库中关于骨髓造血细胞相关抗体的文章,中文检索词为"免疫相关性全血细胞减少症、骨髓造血细胞、自身抗体、辅助性T细胞17",英文检索词为"Immunorelated pancytopenia,Bone marrow hematopoietic cells,Autoantibody,Th17cells"。排除重复性研究共保留30篇进行总结分析。结果与结论:骨髓造血细胞自身抗体是由于T淋巴细胞调控失衡,导致B淋巴细胞及其亚群数量和功能异常而产生的一类抗体。它破坏或抑制骨髓早期造血细胞成熟分化,最终引起外周血细胞减少而致病。T辅助细胞17细胞数量增多、功能亢进可能与免疫相关性全血细胞减少症患者自身抗体产生呈一定相关性,是免疫相关性全血细胞减少症发病的重要因素。

Survivin shRNA对食管癌细胞c-myc、核因子-κB基因表达的影响

目的探讨Survivin对c-myc、核因子(NF)-κB基因的调控作用。方法 shRNA干扰沉默食管癌ECA109细胞系中Survivin基因表达,观察c-myc、NF-κB基因的表达变化,流式细胞术检测细胞周期的改变。结果1.食管癌ECA109细胞系中,Survivin shRNA干扰下调Survivin表达后,c-myc mRNA及蛋白的表达水平明显降低;2.Survivin表达后,NF-κB mRNA及NF-κB总蛋白无明显变化,但其蛋白活化表达水平明显降低,NF-κB上游调控核因子κB抑制物激酶(IKK)α、IKKβmRNA表达下调; 3.Survivin表达下调导致G2期延长,G2期细胞比例增加,细胞增殖阻滞。结论 Survivin在转录及蛋白水平对c-myc具有正向调控作用,Survivin表达下调抑制了IKKα、IKKβmRNA的表达及NF-κB的磷酸化。

腺病毒介导的IL-24基因对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα及Caspase-3表达的影响

目的探讨腺病毒介导的IL-24基因(Ad5F35-hIL-24)对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα(topoⅡα)及Caspase-3表达的影响。方法应用腺病毒载体将IL-24基因转染U251细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞的抑制作用;Hoechst33258荧光染色,以及流式细胞术测定细胞凋亡;应用免疫组织化学方法检测topoⅡα表达;免疫印迹法检测topoⅡα和Caspase-3蛋白质表达变化;Transwell实验观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞侵袭力的影响。结果与对照组相比,Ad5F35-hIL-24对胶质瘤细胞有明显抑制作用,能显著诱导细胞凋亡,且呈浓度依赖性;免疫组织化学法显示,Ad5F35-hIL-24能明显抑制topoⅡα表达;免疫印迹检测表明,topoⅡα表达明显降低,而Caspase-3蛋白的表达水平增加;Transwell实验表明,Ad5F35-hIL-24能明显降低U251细胞的侵袭能力。结论外源性IL-24基因能显著抑制胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡;topoⅡα及Caspase-3是其重要的作用靶点。该结果对于IL-24基因用于临床治疗胶质瘤有一定参考意义。

Flt3和c-kit在脐血CD34^+干/祖细胞中功能性表达及意义

为了解作用于早期造血的细胞因子受体Flt3和c-kit在脐血CD34^+造血干/祖细胞中的表达及功能,从蛋白和基因水平对其进行了研究。采用常规双色直接免疫荧光标记法,使用流式细胞术测定新鲜分离的和体外不同培养时间的脐血CD34^+造血干/祖细胞中Flt3和c-kit蛋白水平的表达,用RT-PCR法测定Flt3和c-kit的mRNA水平表达,并在体外对受体功能进行了探讨。研究结果显示,新鲜脐血CD34^+细胞中(68.8±15.4)％为Flt3^+,(50.6±12.7)％为c-kit^+,随着体外培养时间的延长,二者表达逐渐下降。结论:脐血CD34^+造血干/祖细胞在体外液体培养条件下Flt3和c-kit阳性表达可维持2-3周,其配体FL和SCF在培养的第1周内对细胞扩增效果最显著。

普伐他汀对人单核细胞源树突状细胞免疫功能的影响

目的探讨普伐他汀对在免疫调控中起重要作用的人单核细胞源树突状细胞(DC)免疫功能的影响.方法采用免疫磁珠法分离人外周血CD14+单核细胞,经含重组粒细胞-巨噬细胞刺激因子(100 ng/ml)和重组白介素(rhIL)-4(20 ng/ml)的Cellgro培养,使其分化为DC.DC与50～100 μmol/L普伐他汀孵育72 h后,采用流式细胞术检测DC表型(CD1a、CD40、CD86、HLA-DR),混合T淋巴细胞反应检测DC对淋巴细胞增殖的影响,采用酶联免疫吸附试验法检测细胞培养上清液中Th1/Th2 [白介素(IL)-12、干扰素(IFN)-γ/ IL-2、IL-10]细胞因子的浓度.结果与对照组相比,经普伐他汀处理的DC可下调CD80、CD86、 HLA-DR和CD1a的表达,对T淋巴细胞增殖作用明显减弱,明显抑制DC Th1细胞因子IL-12和IFN-γ的分泌(P<0.05),但对Th2细胞因子IL-2 和IL-10水平无明显影响.100 μmol/L甲羟戊酸可逆转普伐他汀的作用.结论普伐他汀可明显抑制DC的成熟和免疫活性,此作用与甲羟戊酸途径有关.这可能是他汀类药物免疫调节的新机制.

“芪香”气雾剂对小鼠细胞免疫功能的影响

目的:观察中药配方“芪香”气雾剂对小鼠细胞免疫功能的影响,给临床用药提供新药。方法:将小鼠随机分成4组,灌胃给药7 d后,用流式细胞术检测“芪香”气雾剂对小鼠细胞免疫功能的影响,用酶联免疫吸附法检测“芪香”气雾剂对小鼠脾细胞诱生的IL-2细胞活性的影响。结果:“芪香”气雾剂能显著升高小鼠CD3+、CD4+T细胞的阳性细胞百分率(P<0.05)。而对于CD8+T细胞的阳性细胞百分率,药物组和药物+Cy组有降低趋势(P<0.05)。“芪香”气雾剂能促进白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)的生成作用(P<0.05)结论:“芪香”气雾剂可能通过刺激Th细胞产生细胞因子来达到对病毒性疾病的防治。

三叶因子3/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/核因子-κB在人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖和凋亡中的作用

目的探讨三叶因子3(TFF3)对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法构建TFF3基因过表达和敲低表达的慢病毒表达载体,包装293T细胞,产生慢病毒颗粒,病毒液转染TPC-1细胞,构建稳定增强TFF3表达的TFF3-TPC-1细胞系以及增强对照组细胞系ConT FF3-TPC-1;构建抑制TFF3表达的shRNA-TFF3-TPC-1细胞系以及沉默对照组细胞系shC on-TPC-1;利用Western blotting实验与Real\|time PCR验证TFF3过表达和沉默效率;生长曲线和集落形成实验检测4组细胞增殖状况;流式细胞术检测4组细胞凋亡情况;Western blotting和免疫细胞化学染色检测凋亡相关蛋白和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、核因子-κB(NF-κB)通路蛋白表达水平。结果1.成功构建TFF3过表达和抑制表达稳转细胞系TFF3-TPC-1及细胞系shRNA-TFF3-TPC-1;2.TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显高于ConT FF3-TPC-1组(P<0.05或P<0.01),shRNA-TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显低于shC on-TPC-1组(P<0.01);3.TFF3-TPC-1细胞凋亡率低于ConT FF3-TPC-1(0.75%±0.08%vs 5.62%±0.3%,P<0.01),shRNA-TFF3-TPC-1凋亡率高于shC on-TPC-1(22.2%±1.2%vs 5.34%±0.4%,P<0.01);4.沉默TFF3基因后,Bax、细胞色素C(Cyt-C)、cleaved-Caspase-9、cleaved-Caspase-3表达升高,Bcl-2、通路蛋白Akt、p-Akt、NF-κB-P65表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论TFF3可能通过影响PI3K/Akt/NF-κB信号通路调节TPC-1细胞的增殖和凋亡。

17-烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对人绒毛膜癌JAR细胞系细胞周期和凋亡的影响及其相关机制

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人绒毛膜癌JAR细胞系细胞周期和凋亡的影响及其相关机制。方法体外培养人绒毛膜癌JAR细胞系,经不同浓度的17-AAG作用24 h后,采用TUNEL细胞凋亡法及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;Real-time PCR法和Western blotting法检测血管内皮生长因子(VEGF)、cyclinD1、cyclin A1和Caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果 17-AAG对JAR细胞生长具有明显的抑制作用,并存在浓度依赖性。各组细胞发生G_2期阻滞及明显凋亡;5、10、20 mg/L 17-AAG作用24 h后,各组细胞增殖相关基因cyclinD1mRNA及蛋白表达水平相对于0 mg/L 17-AAG处理组(对照组)均下调,VEGF蛋白表达水平相对于0 mg/L 17-AAG处理组(对照组)下调,且下调程度与处理浓度成正比,而凋亡相关基因Caspase-3的mRNA未出现明显上调,但其在蛋白表达水平上调。结论 17-AAG能够抑制JAR细胞增殖活力,诱导细胞凋亡,17-AAG可能通过下调VEGF的表达,产生抗肿瘤血管新生作用;可能通过下调cyclinD1使细胞周期发生G_2期阻滞;且可能通过上调Caspase-3诱导细胞凋亡。

骨髓间充质干细胞对大鼠硅沉着病纤维化形成的影响

目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠硅沉着病(矽肺)纤维化形成的影响,并初步探讨其机制。方法体外分离、培养BMSCs。将54只健康雌性SD大鼠随机分为生理盐水对照组、硅沉着病模型组、干细胞移植组,每组18只。分别在造模后1、3、7、14、28及56d处死各组大鼠,HE染色观察肺组织形态变化;Masson染色观察胶原增生情况;免疫荧光双标技术检测性别决定基因(sry)和肺泡表面活性蛋白C(SP-C)示踪雄性大鼠BMSCs在雌性硅沉着病大鼠肺组织内的分布及分化情况;免疫印迹法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况。结果 HE及Masson染色显示,细胞移植组大鼠肺组织肺泡炎、肺纤维化程度及胶原面积均轻于模型组。免疫荧光双标显示,细胞移植组的雌性大鼠肺组织中有sry阳性的细胞,并且部分sry阳性细胞同时表达SP-C。免疫印迹法结果显示,模型组肺组织TNF-α和MMP-9的蛋白表达均较对照组增高(P<0.05),不同时间点在肺组织内的表达有不同的特点;BMSCs移植组肺组织TNF-α和MMP-9的蛋白表达在各时间点均低于模型组,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSCs可以减轻二氧化硅(SiO2)所致的大鼠硅沉着病纤维化程度,可能与其在肺组织中分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞,降低肺组织中TNF-α和MMP-9的蛋白表达有关。

乙醇对大鼠脑内5-HT能神经体系的影响

目的观察乙醇处理大鼠脑内色氨酸羟化酶（TPH）、5-羟色胺（5-HT）和5-羟色胺转运体（SERT）的表达改变,判断乙醇对脑内5-HT能神经体系的影响。方法以20%乙醇代替饮水饲养30只Wistar大鼠6个月;利用免疫组织化学、免疫印迹及流式细胞术等方法,分析乙醇处理大鼠有关脑区5-HT能神经体系相关指标的改变。结果1.免疫组织化学法可见,乙醇处理组大鼠脑内中缝背核TPH、5-HT免疫反应阳性神经元数量少于对照组（P〈0.01）;TPH免疫阳性神经元直径小于对照组（P〈0.01）;相关脑区TPH、5-HT和SERT免疫反应灰度值比对照组增高（P〈0.05）。2.流式细胞术检测可见,乙醇处理组大鼠TPH、5-HT和SERT的表达量低于对照组（P〈0.05）。3.免疫印迹法检测可见,乙醇处理组大鼠SERT和TPH与-βactin相对吸光度比值均小于相应对照组（P〈0.05）。结论乙醇降低脑内TPH、5-HT和SERT的表达,可能改变脑内5-HT能神经体系的功能活动。

转基因细胞模型L02/HBx的构建及HBx对细胞周期的影响

目的:构建L02/HBx转基因细胞模型并研究HBx对肝细胞周期的影响.方法:运用脂质体转染和G418筛选获得L02/ HBx阳性克隆,并分别用RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达.进一步用四唑蓝(MTT)比色试验、流式细胞仪检测L02/HBx的增殖、凋亡和细胞周期.结果:RT-PCR和Western blot分别检测到L02/ HBx细胞中HBx mRNA和蛋白的表达.MTT比色试验显示L02/HBx生长速度加快,流式细胞仪检测发现L02/HBx凋亡率低(0.09%±0.13% vs 3.74%±1.29%,P<0.05),G1期细胞比例减少(61.35%±0.82% vs 67.80±6.84%,P<0.05),S期细胞比例相应增加(36.59%±2.54% vs 22.37%±2.17%,P<0.05).经阿霉素(ADM)培养后,L02/HBx的凋亡率显著增加(34.91%±5.85% vs 0.09%±0.13%,P<0.05),G1期细胞比例明显增加但低于对照组(82.81%±6.48% vs 61.35%±0.82%,P<0.05;82.81%±6.48% vs 87.19%±1.92%,P<0.05),S期细胞比例降低但较对照组高(13.84%±6.16% vs 36.59%±2.54%,P<0.05;13.84%±6.16% vs 2.22%±1.26%,P<0.05).结论:L02/HBx构建成功,HBx能促进细胞周期进程,加快细胞的生长并抑制细胞的凋亡;转染HBx基因的肝细胞凋亡更易受凋亡因子所触发,表明HBx可能会增加正常肝细胞对诱导凋亡因素的敏感性.

趋化性细胞因子受体CXCR4基因沉默对大肠癌细胞体外侵袭及增殖能力的影响

目的:研究趋化性细胞因子受体CXCR4短干扰RNA(siRNA)对大肠癌细胞系体外侵袭及增殖能力的影响.方法:利用T7 RNA聚合酶体外合成以CXCR4为靶基因的siRNA,用脂质体转染大肠癌SW480细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.于转染后48h采用RT-PCR方法检测CXCR4 mRNA水平,免疫印迹方法检测CXCR4和MT1-MMP的蛋白质水平,Boyden小室模型检测体外侵袭能力的变化,流式细胞术检测细胞周期的分布情况,MTT法测定细胞增殖状况.结果:SW480细胞转染CXCR4 siRNA 48h后,与空白对照和无关对照相比,CXCR4 mRNA水平明显下调(51.53%±6.1% vs 78.4%±3.3%.P<0.01:51.53%±6.1% vs 87.4%±5.3%,P<0.01),CXCR4的蛋白质水平明显降低(47.3%±3.7% vs 107.2%±3.6%,P<0.01;47.3%±3.7% vs 114.7%±4.8%,P<0.01),MT1-MMP蛋白表达水平也明显下降(43.8%±2.5% vs 64.4%±4.4%,P<0.01;43.8%±2.5% vs 67.0%±2.9%,P<0.01),细胞的体外侵袭能力减弱(26.5%±6.1% vs 73.7%±3.4%,P<0.01;26.5%±6.1% vs 64.5%±5.7%,P<0.01),细胞周期的分布无明显差异.在无SDF-1存在的情况下,各组细胞的增殖无明显改变;经SDF-1刺激后,各组细胞增殖增加,但CXCR4 siRNA转染组细胞的增殖显著低于空白对照组和无关对照组(24h:0.55±0.03 vs 0.68±0.06,0.71±0.04,P<0.05;48h:0.67±0.04 vs 0.89±0.03,0.94±0.07,P<0.05;72 h:0.72±0.06 vs 1.36±0.08,1.53±0.07,P<0.01).以上各指标在空白对照和无关对照之间无显著性差异(P>0.05).结论:以CXCR4为靶向的siRNA能够有效下调CXCR4基因,降低SDF-1诱导的大肠癌细胞系体外侵袭能力及增殖海性.

复方中药木疏胶囊抗大鼠肝纤维化的免疫机制

目的:探讨木疏胶囊抗大鼠肝纤维化的免疫作用机制.方法:400g/LCCl4诱导大鼠肝纤维化模型.Wister大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,木疏胶囊预防组和治疗组,鳖甲软肝片预防组和治疗组.HE染色和Masson染色观察肝右叶相同部位组织病理改变.放免法测定血清细胞因子IL-2、IL-6、IL-8及TNF-α,流式细胞术检测血淋巴细胞CD4、CD8表达.结果:木疏胶囊与鳖甲软肝片各组两两比较,对IL-2和IL-6作用均无显著性差异;对IL-8的降低作用木疏胶囊优于鳖甲软肝片(预防组:0.4±0.2mg/Lvs0.6±0.1mg/L;治疗组:0.5±0.2mg/Lvs0.6±0.2mg/L;均P<0.05);对TNF-α的降低作用为木疏胶囊预防组优于鳖甲软肝片(1.1±0.3mg/Lvs1.4±0.3mg/L,P<0.05),而治疗组无显著差异.与模型对照组比较,木疏胶囊预防组和治疗组使CD4和CD4/CD8均显著升高(CD4:36.4%±7.5%,34.6%±5.0%vs28.0%±5.1%;CD4/CD8:1.9%±0.4%,1.8%±0.3%vs1.5%±0.2%;均P<0.01),鳖甲软肝片预防组使CD4显著升高(33.4%±4.9%vs28.0%±5.1%,P<0.05),治疗组无显著性差异,鳖甲软肝片使CD8和CD4/CD8升高,但均无显著性差异;木疏胶囊和鳖甲软肝片对CD4、CD8、CD4/CD8的作用无显著性差异.结论:木疏胶囊可升高肝纤维化大鼠血清IL-2,降低IL-6、IL-8和TNF-α水平,升高CD4、CD4/CD8.

COPD急性加重期患者诱导痰白细胞介素17和中性粒细胞CD11b/CD18的测定及意义

目的探讨细胞因子IL-17及粘附分子CD11b/CD18在COPD发病机制中的作用。方法2007年3月至2007年12月在遵义医学院附属医院住院的COPD急性加重期患者20名及健康对照组20名。ELISA法检测诱导痰上清液中IL-17水平、流式细胞术(FCM)检测诱导痰中性粒细胞百分数及中性粒细胞表面CD11b/CD18的表达,分析COPD急性加重期患者IL-17、中性粒细胞百分数和CD11b/CD18三组数据之间的相关性。两两比较采用配对t检验,相关资料做直线相关分析。结果COPD急性加重期患者诱导痰中IL-17水平(38.90±13.45pg/ml)明显高于健康对照组(24.45±10.16pg/ml),(t=3.834,P<0.01),与COPD急性加重期患者诱导痰中中性粒细胞百分数呈正相关(r=0.631,P<0.05),与COPD急性加重期患者诱导痰中性粒细胞表面表达的CD11b/CD18呈正相关(r=0.509,P<0.05);COPD急性加重期患者诱导痰中性粒细胞表面表达的CD11b/CD18百分数(74.80±11.94%)明显高于健康对照组(48.40±14.44%),(t=6.301,P<0.01),与COPD急性加重期患者诱导痰中中性粒细胞百分数呈正相关(r=0.860,P<0.01)。结论细胞因子IL-17及粘附分子CD11b/CD18可能参与了COPD的气道炎症反应过程。