基于流式细胞术对不同倍性草莓基因组大小的测定

以不同倍性草莓资源的嫩叶为材料,根据待测样品倍性预估基因组大小后分别选择水稻“日本晴”(基因组大小为430 Mb)、番茄(基因组大小为900 Mb)、玉米“B73”(基因组大小为2.3 Gb)作为内参,利用流式细胞仪测定样品的基因组大小。结果表明,二倍体资源,森林草莓基因组大小为(233±0.78)Mb,绿色草莓为(234±0.82)Mb;四倍体资源,西南草莓基因组大小为(492±2.12)Mb,伞房草莓(雄株)为(488±7.07)Mb,伞房草莓(雌株)为(491±4.95)Mb,伞房草莓雄株和雌株基因组大小均为首次测定;六倍体资源,麝香草莓基因组大小为(644±1.73)Mb;八倍体资源,栽培品种“章姬”基因组大小为(793±7.78)Mb,“蒙特瑞”为(761±0.00)Mb;十倍体资源,野生的择捉草莓基因组大小为(938±6.36)Mb,栽培品种“桃熏”为(1007±6.36)Mb。

基于流式细胞术的尿有形成分分析对细菌性尿路感染的诊断价值研究

目的:探讨尿有形成分分析结果在快速筛查尿路感染中的应用价值,减少不必要的培养,提高抗生素使用的针对性。方法:收集2023年1月-4月在我院门诊或住院的1626例疑似尿路感染患者的尿有形成分检测结果及相关参数,与尿培养结果作比较。以尿培养结果为金标准,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC)及最佳截断值(cut-off值)以评估筛查性能,采用Kappa值评估细菌报警信息与培养鉴定结果的一致性。结果:1626例中段尿培养细菌阳性424例(26.1%),主要致病菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、屎肠球菌和粪肠球菌。与尿培养阴性患者相比,尿培养阳性患者的WBC和BACT均明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线分析显示,BACT诊断UTI的效能优于WBC。对总体人群使用BACT<12.5/μL筛查培养阴性标本时,灵敏度为95.0%,阴性预测值为97.3%,可减少培养率47.2%。男性人群使用BACT<5.5/μL,灵敏度为95.4%,阴性预测值为98.4%,可减少培养率49.2%。女性人群使用BACT<15/μL,灵敏度为96.4%,阴性预测值为95.3%,可减少培养率为28.1%。培养阳性标本中,UF5000对革兰氏阳性细菌与革兰氏阴性细菌的总体识别符合率为72.9%(248/340),Cohen'skappa一致性为0.836(P<0.001)。结论:基于流式细胞术的尿有形成分分析可以有效筛选尿培养阴性标本,减少不必要的培养,UF5000全自动尿有形成分分析仪所提供细菌信息可为临床抗生素治疗提供参考依据。

基于流式细胞术对观赏海棠品种的基因组大小测定

核DNA C值和基因组大小是重要的生物多样性特征,本研究以18个观赏海棠(Malus spp.)品种的嫩叶为材料,并以玉米(Zea mays L.)品种‘B73’为内参样本,利用流式细胞术对观赏海棠基因组大小进行了测定。结果显示:18份观赏海棠C值大小范围为0.74~1.50 pg,平均为0.96 pg;其中,‘玛丽波特’(‘Mary Potter’)C值最大,达到1.50 pg,而‘红珠宝’(‘Red Jewel’)C值最小,为0.74 pg。方差分析结果表明观赏海棠品种间C值大小存在显著差异。观赏海棠不同品种间DNA C值和基因组大小存在显著的多样性。

流式细胞术在鉴别良恶性浆膜腔积液的应用现状与进展

流式细胞分析术是一种高效快速的细胞分析技术,可通过检测细胞表面的标记物或细胞内生物分子来分析细胞的性质和功能。在浆膜腔积液的诊断中,流式细胞术可帮助区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞,从而辅助良恶性的鉴别诊断。该研究主要就流式细胞术的基本原理、在浆膜腔积液诊断中的应用及研究现状进行全面的分析和总结,并探讨其优缺点及未来发展方向。

采用流式细胞分选术区分中枢神经系统内小胶质细胞和浸润巨噬细胞

目的建立通过流式细胞分选术区分中枢神经系统内小胶质细胞和浸润巨噬细胞的方法。方法用成年C57BL/6小鼠建立双侧颈总动脉狭窄模型,分别采用集落刺激因子1受体抑制剂PLX5622或氯膦酸盐脂质体处理。将分离、匀浆、重悬后的小鼠脑和脊髓组织进行Percoll密度梯度离心,得到单核细胞悬液。采用CD45、CD11b和淋巴细胞抗原6家族成员C(Ly6C)抗体进行流式分选,获得小胶质细胞(CD11b^(+)CD45^(low)Ly6C^(-)细胞)和浸润巨噬细胞(CD11b^(+)CD45^(high)Ly6C^(+)细胞),并验证PLX5622和氯膦酸盐脂质体2种给药范式获得的处理效果。结果通过CD45、CD11b和Ly6C抗体可以有效区分中枢神经系统中小胶质细胞和浸润巨噬细胞。与对照组比较,PLX5622处理后小胶质细胞数量减少(P=0.001),而氯膦酸盐脂质体处理后浸润巨噬细胞数量减少(P<0.001)。结论所建立的流式细胞分选方法可有效区分中枢神经系统中小胶质细胞和浸润巨噬细胞,PLX5622和氯膦酸盐脂质体2种给药范式可分别选择性清除中枢神经系统内的小胶质细胞和浸润巨噬细胞。

传染病教学中开设多色流式细胞术课程的实践

多色流式细胞术是一种高效、精准、快速的细胞学检测技术,已广泛应用于传染病检测和研究中。在传染病研究生教学中,本团队建立多色流式课程体系并通过教学实践过程总结教学经验。文章阐述了传染病研究生教学中开设多色流式细胞术课程的几个方面,并进行了总结,包括确定课程目标、设计课程结构、确定课程内容、确定课程形式和确定课程大纲五个方面。笔者进一步通过重点推动多色流式细胞术实践课程并总结实践的初步经验,包括明确多色流式细胞术可以检测的样本类型、多色流式细胞术的仪器类型、染色策略和实验方案、加强流式数据分析和结果判读能力、多色流式细胞术实践过程中应强化生物安全操作五个要点。该课程的开展有助于传染病研究生对免疫学和传染病发病机制的理解,为其未来从事传染病防治和免疫学研究的教学工作提供坚实的基础。

细胞遗传学联合流式细胞术在骨髓增生异常综合征诊断效果和危险分层及预后中的价值研究

目的探讨细胞遗传学联合流式细胞术在骨髓增生遗传综合征(MDS)患儿中的诊断效果、危险分层及预后的价值。方法选取2019年5月至2021年5月赣州市人民医院检验科收治的97例疑似MDS患者作为研究对象,常规给予细胞遗传学和流式细胞术检查,并以临床最终检查结果为金标准,分析细胞遗传学、流式细胞术在骨髓增生遗传综合征中的诊断效能;对患儿随访12个月,根据流式细胞术积分系统对患者进行危险分层评估,分析不同危险分层下患者的预后并进行相关性分析。结果细胞遗传学联合流式细胞术检查确诊65例,检查准确度为88.66%、灵敏度为89.71%、特异度为86.21%;细胞遗传学联合流式细胞术检查在MDS中检查准确度高于单一检查方法(P<0.05);灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值略高于单一细胞遗传学、流式细胞术检查,但其诊断效能差异无统计学意义。低危患者总体生存时间长于中危和高危患者,且中危患者总体生存时间长于高危患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,MDS患者分层与患者总生存时间呈负相关(r<0,P<0.05)。结论细胞遗传学与流式细胞术用于MDS患者中均具有较高的检出率,且二者联合检测能提高诊断效能,利用流式细胞术积分系统能完成患者危险分层,与患者预后存在强相关性。

流式细胞术检测药用植物基因组大小的研究策略

流式细胞术是一种可以对悬浮于液体中微小颗粒进行分选和计数的方法。该方法的步骤包括制备完整的细胞核悬浮液、对核酸荧光染色、根据相关荧光含量分类。分析荧光标记悬液中的单细胞或其他微小颗粒信号,可以实现蛋白质含量、细胞DNA含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原、细胞体积等参数的快速测定。该技术可以用于植物倍性分析和基因组大小估测等研究。目前利用流式细胞术对药用植物进行基因组大小评估的研究较少,未来有待深入研究,以期为利用流式细胞术检测基因组大小提供相关资料。

流式细胞术检测皮肤组织在母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤诊断中的应用

目的:探讨流式细胞术(FCM)检测皮肤组织样本在诊断母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)中的作用。方法:利用多色流式检测皮肤组织与骨髓,并结合组织病理学、骨髓细胞形态学、遗传学、二代测序(NGS)等检测结果对3例已确诊的BPDCN进行回顾性分析。结果:3例患者均以皮肤损害为首发症状,FCM检测骨髓仅发现1例患者标本存在BPDCN细胞,而3例患者皮肤组织标本中均发现BPDCN细胞;与皮肤组织病理免疫组化结果诊断一致;病例2患者骨髓细胞学和遗传学检查均未发现BPDCN细胞,病例1患者骨髓细胞学中发现BPDCN细胞,病例3患者NGS检测到BPDCN相关基因突变。结论:流式细胞免疫分型是BPDCN诊断的实用辅助手段,可以在早期皮肤组织标本中快速精准地诊断BPDCN,同时进行鉴别诊断。

中医院校本科生层次递进式开展流式细胞术实验方法课程的实践

目的探索在本科生中开展流式细胞术的实验教学与实践,激发本科生的主观能动性,将学到的理论知识进行拓展应用,以便应用到未来的科研中。方法文章以参与“橘井青苗”计划的本科生为研究对象,层次递进式开展流式细胞术实验方法课程的实践与初探。此实践计划设置了2个递进层次的教学科研一体的实践范例,初阶为小鼠成肌细胞缺氧造模,并通过CCK-8法检测细胞的存活率,进阶为应用流式细胞仪检测小鼠成肌细胞的凋亡情况等。结果本科生在一周时间内全程参与到实践计划中,通过实验设计和实践,学生掌握细胞扩增、细胞存活率检测、细胞凋亡检测与数据分析,提高了学生的动手能力和创新能力,调查问卷课程满意度达到95%以上。结论层次递进式开展流式细胞术实验方法课程适合本科生,这种融合科研创新思路、课题设计与执行能力的教学培养方法,能带动学生在实验研究中进行科学规划和使用大型仪器。

外周血涂片+骨髓涂片+流式细胞术联合应用对MDS早期诊断准确性的影响

目的 探讨在骨髓增生异常综合征(MDS)应用外周涂片联合骨髓涂片与流式细胞术进行早期诊断的临床效果。方法 选取2019年6月—2022年6月本院接收诊治的骨髓增生异常综合征患者120例作为此次研究对象,按照检验方式的不同将患者分为实验组和对照组,每组60例。其中,对照组单独使用外周血涂片进行MDS的早期诊断,实验组则联合外周血涂片、骨髓涂片和流式细胞术进行MDS的早期诊断。对比两组患者的诊断结果。结果 经过检查后,实验组患者的检测结果明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 将外周血涂片、骨髓涂片和流式细胞术联合起来进行MDS的早期诊断,检测准确性更高,能够为临床治疗提供更精准的数据支持。

流式细胞分析术的教学改革初探

流式细胞分析术是一种多参数、定量且高效的检测分析技术,是科学研究重要的技术手段之一,也是研究生必须掌握的一门实验技术。现行流式细胞分析术的教学存在“重理论、轻实践”的问题,学生在具体科研中难以开展相关实验项目。本文探索推行以研究需求为导向的流式教学改革,充分考虑专业差异,多维的教学模式极大调动了学生的自主能动性,提高了学生科研工作的实际能力。

基于流式细胞仪鉴定番石榴倍性方法的建立及应用

【目的】利用流式细胞仪鉴定番石榴的染色体倍性,为番石榴倍性育种和杂交育种奠定基础。【方法】以番石榴为材料,比较了样品部位、离心处理和保存方式对倍性检测结果的影响。【结果】番石榴花瓣作为倍性检测材料时,收集到的细胞核DNA数目最多,CV值为1.96%,峰形效果最佳;在制备细胞核悬浮液时,过滤后不离心,直接染色后上机的测定效果最好;新鲜番石榴花瓣得到的细胞核DNA含量明显高于冷藏和其他冷冻处理组,且背景碎片少,主峰明显;-80℃冷冻处理对样本的破坏性最小,检测效果仅次于新鲜的番石榴花瓣。本研究建立的番石榴流式细胞术倍性分析的方法为:取番石榴花瓣0.50-1.00 cm^(2),加入1 mL的mGb裂解液中混合切碎,过滤后加入30μL PI染色1 min即可上机检测。【结论】利用建立的流式细胞术对33份番石榴种质资源进行倍性鉴定,共检测出二倍体32份,六倍体1份。该方法执行简便、高效准确,为番石榴种质资源倍性鉴定提供了有效方法。

流式细胞术检测初诊儿童急性淋巴细胞白血病患者脑脊液状态与预后的相关性分析

目的:探讨流式细胞术(FCM)检测初诊儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的脑脊液状态及与预后的相关性。方法:回顾性分析华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院2020年9月至2021年12月资料完整的75例新诊断ALL患儿的临床资料、脑脊液常规细胞学(CC)检查、不同时期骨髓及脑脊液微小残留病灶(MRD)等结果。通过FCM与CC对比分析脑脊液状态,分析初诊时不同脑脊液状态患儿的临床特征及其预后。结果:75例新诊断ALL患儿中,FCM检出16例(21%)中枢神经系统浸润(central nervous system infiltration,CNSI)阳性患儿,而CC检出异常幼稚细胞2例(3%),FCM检测CNSI阳性率明显高于常规细胞学检查(P<0.05)。与CNSI^(-)ALL患儿相比,CNSI^(+)ALL患儿初诊时的中位年龄更小[2.6(0.3-12.0)岁vs 4.5(0.8-14.5)岁]且血小板中位计数更低[23(2-180)×10^(9)/L vs 65(5-355)×10^(9)/L],具有统计学差异(P<0.05)。截至随访终点(2022年8月31日),4例ALL患儿死亡,其中CNSI^(+)患儿1例;复发3例,其中CNSI^(+)患儿1例。不同CNSI状态患儿的总体生存(OS)率及无复发生存(RFS)率均无明显统计学差异。结论:对使用FCM评估初诊ALL患儿的CNSI状态比CC更敏感。初诊时不同CNSI状态的ALL患儿接受积极治疗后OS率及RFS率无明显差异。

流式细胞术估测胡椒属植物基因组大小方法的建立及应用

为建立胡椒属资源基因组大小流式细胞术测定方法,本研究筛选了6种细胞核提取液和3种不同部位叶片,以已知基因组大小的黄瓜为标样,运用流式细胞术对胡椒属资源基因组大小进行了测定。结果表明:改良细胞核提取液和倒一叶是适合胡椒流式细胞术的提取液和取样部位;栽培胡椒品种古晋、Aman和EMAS胡椒的基因组大小为667.94~719.32 Mb,而热引1号、柬埔寨小叶种、班尼约尔1号和73F5的基因组大小为759.69~785.38 Mb,因此不同栽培品种之间基因组大小存在差异;推算基因组大于900 Mb的石楠藤和山蒟的染色体条数应该是大于52且为13的倍数,基因组大小在600~800 Mb范围内种质的染色体数可能是52条。杂交种不但具有与栽培胡椒和黄花胡椒相近的表型,其基因组大小也几乎等于栽培胡椒和黄花胡椒的平均值,推测杂交种可能是栽培胡椒和黄花胡椒的杂交后代。本研究可为胡椒属资源基因组大小测定提供方法,也将为胡椒属种质资源评价及远源杂交等研究提供技术基础。

基于流式细胞术的兰属杂交后代倍性鉴定

倍性鉴定是热带花卉种质资源鉴定及新品种选育的基础工作之一。本研究利用流式细胞仪对兰属杂交后代进行倍性鉴定。针对裂解液种类、试验材料组织器官等关键环节,以细胞核解离情况、主峰清晰程度、变异系数及取材容易程度等方面为评价指标,建立鉴定体系,并比较不同倍性植株的气孔性状差异。结果表明:CyStain UV Precise P为3种裂解液中最优,组织器官以嫩叶为宜;从3个杂交组合后代中鉴定出三倍体6株,四倍体2株,不同倍性间的气孔长度、宽度和密度均差异显著(P<0.05),气孔长度和宽度的排序为四倍体>三倍体>二倍体,而气孔密度的排序则相反。该研究结果对杂交兰多倍体选育及开展不同倍性间杂交育种具有重要应用价值。

流式细胞术检测儿童流感淋巴细胞亚群和NK细胞变化的研究

目的探讨流式细胞术检测儿童流感淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)表达水平的变化。方法选取2022年4月—2023年4月于湘潭市第一人民医院儿科就诊的20例流感患儿作为本研究的观察组,再选取同时期于湘潭市第一人民医院进行体检的20名健康儿童作为对照组。采用BriCyte E6流式细胞仪分别检测两组儿童的成熟T淋巴细胞(mature T lymphocytes,CD3^(+))、诱导性T细胞/辅助性T细胞(helper T cells,CD4^(+))、抑制性T细胞/细胞毒性T细胞(cytotoxic T cells,CD8^(+))、T淋巴细胞亚群和NK细胞表达水平,并进行对比分析。结果与对照组儿童比较,观察组患儿的CD3^(+)、CD4^(+)、NK细胞、T淋巴细胞亚群表达水平均明显偏低(P<0.05);与对照组儿童比较,观察组患儿的CD8表达水平均明显偏高(P<0.05)。结论经流式细胞术检测发现,流感儿童均存在明显的体液以及细胞免疫功能紊乱,主要表现为CD3^(+)、CD4^(+)、NK细胞、T淋巴细^(+)胞亚群表达水平下降,CD8表达水平上升,可为流感患儿的临床治疗、减少并发症及预后评估提供理论依据。

人肺癌细胞原位移植瘤小鼠模型免疫细胞的多色流式细胞术检测方法的建立

目的对肺癌原位接种的小鼠模型,设计并建立了11色的免疫细胞分类方法,对肿瘤微环境中的T细胞、巨噬细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞进行更加细致的分型,从而获得有关影响肿瘤细胞进展的研究手段。方法建立11色的上皮细胞、T细胞、巨噬细胞和NK细胞的标志物荧光基团的搭配方案,对有免疫功能的小鼠血液样本进行鉴定。进一步原位接种PC-9细胞于裸鼠体内,通过该搭配方案分析鉴定M1型、M2型巨噬细胞,以及不同成熟程度的NK细胞。结果11色免疫细胞的搭配方案能够使各种标志物发挥到最大的荧光效应,减少荧光串色。对小鼠血液标本,通过流式细胞学分析可以得到准确的淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞的分类和分型。对原位移植瘤样本,能够更精准的区分肿瘤细胞和各种免疫细胞及细胞亚型。采用溶瘤病毒干预措施,发现干预后的免疫细胞各个分型之间差异有统计学意义。结论在原位移植瘤的模型中,该11色免疫细胞的流式荧光抗体搭配方案可以对肿瘤微环境中的多种免疫细胞进行精确分类,为研究不同免疫细胞和肿瘤细胞之间的相互作用提供了有效的手段,并可以应用于大量的肿瘤微环境研究中。

四色与八色流式细胞术检测急性髓细胞白血病微小残留病灶的比较分析

目的比较分析四色和八色流式细胞术检测急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)相关性、阳性率和比例差异。方法采用骨髓细胞形态学方法、四色流式细胞术和八色流式术检测22例AML患者的40份骨髓标本中微小残留病灶。通过Pearson相关性分析比较骨髓细胞形态学方法、四色和八色流式细胞术检测MRD结果之间的相关性,通过Mann-Whitney检验分析MRD比例之间的差异。结果四色和八色流式细胞术检测40份AML患者骨髓MRD相关性较好(R^(2)=0.9922,P<0.0001),同时四色、八色流式与骨髓细胞形态学检测MRD相关性好(四色:R^(2)=0.8453,P<0.0001;八色:R^(2)=0.8065,P<0.0001)。两种流式细胞术检测40份骨髓MRD阳性率均为85%,两者阳性率一致。四色流式细胞术分析MRD比例均值为6.45%(0.04%~45%),中位数为0.4%;八色流式细胞术分析的MRD比例均值为6.20%(0.04%~44.81%),中位数为0.37%。八色流式分析MRD比例略低于四色流式,但两者MRD比例差异没有统计学意义。四色和八色流式分析MRD比例均小于骨髓细胞形态学检测比例(P分别0.020,0.016)。结论四色和八色流式细胞术检测骨髓标本MRD相关性较好,阳性率一致。八色流式分析MRD结果可靠,适合临床流式分析使用。

尿流式细胞术在快速筛查及鉴别尿路感染病原菌中的应用

目的 探讨尿流式细胞术在尿培养前对于疑似菌尿进行快速筛查的价值,以规范抗菌药物使用和减少不必要的尿培养。方法 收集2022年1-8月在该院就诊或住院的1 221例疑似尿路感染患者的UF-5000尿有形成分分析仪检测相关参数,并与尿培养结果比较。以尿培养为金标准,绘制受者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC)及最佳cut-off值以评估筛查性能,采用Kappa值评估革兰阳性/阴性菌鉴定的一致性。结果 1 221例患者中,尿培养阳性率为31.6%,最常见革兰阴性菌感染占64.5%,真菌感染占12.4%。与大肠埃希菌尿路感染患者比较,肺炎克雷伯菌尿路感染患者的白细胞计数(WBC)和红细胞计数(RBC)升高(P=0.008、0.026),而肠球菌属尿路感染患者的WBC降低(P=0.003)。在明确尿路感染诊断方面,细菌计数(BACT)优于WBC,对于BACT,老年女性优于老年男性,但老年男性最佳cut-off值略高于老年女性。在筛查尿培养阴性方面,老年男性人群中采用BACT<156.4/μL或WBC<15/μL时,灵敏度为88.6%,阴性预测值为93.4%,与尿培养一致率为73.0%,可减少47.1%不必要的尿培养;老年女性人群中,BACT<134.7/μL或WBC<15/μL时,灵敏度为90.8%,阴性预测值为91.3%,与尿培养一致率为71.3%。在革兰阳性/阴性菌鉴定方面,UF-5000尿沉渣分析仪正确识别率为76.1%,与尿培养结果的Cohen′s Kappa值为0.764(P<0.001)。结论 尿流式细胞术是一种快速、简便、有效的疑似尿路感染筛查方法,特别是针对老年人群,有利于建立尿路感染筛查最佳cut-off值,为临床诊疗提供参考依据。