流式荧光微球技术在实验动物质量控制中的应用

ELISA和IFA是实验室主要的血清学检测方法,在过去的数十年中得到广泛的应用。但其存在着操作繁琐、耗时长的问题。美国Luminex公司开发的xMAP是一种快速、高通道的技术平台,可在同一反应孔内同时检测上百种抗原、抗体、核苷酸片段、受体/配体等生物分子,在医学界已广泛应用。MFIATM是美国Charles River Laboratories应用xMAP平台开发的应用于实验动物质量控制的多通路、高效率的抗体检测技术,该技术的应用大大改善了实验动物质量控制的水平。

多重微球流式免疫荧光技术对肺癌患者外周血IL-1β、IL-6、IFN-γ水平测定及与hs-CRP的相关性分析

目的探讨多重微球流式免疫荧光技术在肺癌患者外周血白细胞介素(IL)-1β、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)细胞因子的表达情况及与超敏C反应蛋白(hs-CRP)相关性分析。方法采用回顾性研究的方法,选择张家港市中医医院(下称该院)肿瘤科和肺病科收治的30例肺癌患者作为肺癌组,另选择同期该院收治的30例肺炎患者作为肺炎组,同时选取同期该院体检健康者30例作为对照组,通过多重微球流式免疫荧光技术检测血清中IL-1β、IL-6和IFN-γ水平,同时利用乳胶增强免疫散射比浊法测定外周血全血中hs-CRP水平。结果肺癌组与对照组比较,IL-1β、IL-6和hs-CRP水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.001),而IFN-γ水平差异无统计学意义(P>0.05);肺炎组与对照组比较,IL-1β、IL-6、IFN-γ、hs-CRP水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);肺癌组与肺炎组比较,IL-6、IFN-γ、hs-CRP水平明显降低且IL-1β水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);肺癌组、肺炎组IL-6和hs-CRP水平分别进行Pearson相关性分析,均无明显的相关性。结论IL-1β、IL-6、IFN-γ可以作为有效评估肺癌患者免疫功能的辅助指标,多重微球流式免疫荧光技术的应用对于肺癌的诊断及监测具有潜在的临床应用价值。

流式微球技术高通量筛查中重度盆腔内异症患者细胞因子谱的变化

目的观察中重度盆腔子宫内膜异位症(内异症)患者外周血和腹腔液多种细胞因子水平的变化及相互关系,探讨细胞因子谱变化在内异症发病机制中的意义。方法选取2019年3月至2021年10月该院收治的中重度盆腔内异症患者28例作为内异症组,选取同期健康体检者30例作为对照组。利用流式荧光微球高通量技术检测2组研究对象血浆或腹腔液γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17A、IL-17F、IL-22、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TNF-β等14种细胞因子水平,分析比较2组研究对象血浆细胞因子谱的差异、血浆各细胞因子之间的相关性,以及患者腹腔液与血浆细胞因子的相关性。结果与对照组比较,内异症组患者血浆IL-1β、IL-2水平均明显降低,IL-4、IL-6、IL-8、IL-17A、TNF-α、TNF-β水平,以及IL-17A/IL-10、IF-17F/IL-10比值均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);内异症患者血浆TNFβ与IL-1β、IL-4与IL-17A、IL-22与IL-17F分别呈正相关;内异症患者腹腔液与血浆部分细胞因子具有相关性。结论中重度内异症患者血浆细胞因子谱异常,并影响腹腔液局部细胞因子水平的改变,可能在疾病的发病机制中发挥着重要作用。

猴D型逆转录病毒p27基因的原核表达及流式免疫荧光微球检测技术的建立

目的构建猴D型逆转录病毒的p27蛋白,并建立流式免疫荧光微球检测技术用于猴D型逆转录病毒的检测。方法通过PCR扩增p27基因片段,与p GEX-4T-1表达载体进行连接,转化至BL21(DE3)进行表达。通过SDS-PAGE分析蛋白表达的形式及最佳诱导时间。采取GST树脂纯化目标蛋白,包被磁珠,建立流式免疫荧光微球检测技术,用于临床样本的检测。结果重组蛋白以可溶的上清液进行表达,诱导的最佳时间为4 h。包被磁珠后,成功建立流式免疫荧光微球检测技术,对阳性血清稀释81倍仍可检测为阳性,对猴类其他病原的阳性血清无交叉反应,特异性强,与ELISA法同时对24份临床样本进行检测,其中3份样品的流式免疫荧光微球检测结果为阳性,ELISA检测结果为2份阳性,1份阴性,两种方法的检测结果符合率为96%。结论成功表达猴D型逆转录病毒p27蛋白,并运用该蛋白建立了灵敏度高,特异性强,样本需求少的流式免疫荧光微球检测技术,为后续推广应用多重流式免疫荧光微球检测技术奠定了基础。

多重微球流式荧光免疫技术检测抗核抗体谱的评价与临床应用

目的:分析和评估多重微球流式荧光免疫技术(MBFFI)检测抗核抗体谱的结果和临床应用价值。方法:同时用MBFFI和免疫印迹技术检测333例自身免疫病患者、44例其他疾病患者和59例健康者血清的抗核抗体谱,进行结果的一致性检验,并用间接免疫荧光技术检测抗核抗体,比较3种方法的灵敏度、特异度。结果:MBFFI与免疫印迹技术检测所有标本抗核抗体谱一致率为83. 26%,Kappa值=0. 655;病例组各项目一致率在79. 88%至99. 40%之间,Kappa值在0. 106至0. 958之间。对照组各项目一致率在96. 61%至100. 00%之间,其他疾病组各项目一致率在95. 45%至100. 00%之间。间接免疫荧光技术诊断自身免疫病的灵敏度最高(P<0. 01),MBFFI诊断自身免疫病的特异度最高(P<0. 05),MBFFI与间接免疫荧光技术联合检测可提高灵敏度(P<0. 01)。结论:多重微球流式荧光免疫技术检测抗核抗体谱与免疫印迹技术相比,一致性尚可,特异度更高,可以替代免疫印迹技术成为新一代的抗核抗体确认试验检测方法。

流式免疫多重微球芯片技术检测干燥综合征自身抗体的评价及应用

目的建立多重微球芯片流式免疫荧光发光法检测原发性干燥综合征(pSS)自身抗体的评价及应用。方法采用多重微球流式免疫荧光发光法,以聚苯乙烯微球为反应界面,将8种[SSA(60kD)、SSB、α-fodrin、M3、ds-DNA、nRNP/Sm、Sm、M2]抗人IgG单克隆抗体包被微球后,用该方法检测同一血清样本中的多种可溶性蛋白抗体。选取pSS患者206例、非pSS患者110例和健康人69例,用多重微球流式免疫荧光发光法检测8种自身抗体。结果多重微珠流式免疫荧光发光法检测8种抗体的批内差异及批间差异均较小;检测pSS组的8种抗体水平与非pSS组、健康组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);诊断pSS的总敏感度可达97.20%,总特异性可达96.34%。结论多重微球流式免疫荧光发光法检测pSS自身抗体方法可以一次同时进行8种自身抗体的联合检测,为pSS及其他自身免疫病的确诊创造了一种准确、便捷的检测新方法。

多重微球流式免疫荧光法检测外周血细胞因子影响因素分析与对策

为提高临床利用多重微球流式免疫荧光法检测细胞因子结果的准确性,收集临床患者的外周血标本,比较血清、血浆、不同保存条件以及干扰物质对12种细胞因子(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、IFN-γ、IFN-α和TNF-α)检测结果的影响。结果显示,血浆和血清中IFN-α、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12p70和IL-17水平差异无统计学意义(P>0.05),而IL-6和IL-8在血清中的水平显著高于血浆(P<0.05);EDTA-K2抗凝全血在4℃保存24 h对部分细胞因子浓度有一定影响,而离心获得的血浆在4℃保存48 h细胞因子水平显著降低(P<0.05);对检测过程中微球丢失或微球荧光信号异常增强的血浆标本经小鼠免疫球蛋白预处理后,检测信号与分析结果均恢复正常。该研究提示,临床检测细胞因子建议采用EDTA-K2抗凝的血浆标本,且细胞因子在4℃保存24 h较稳定;对于检测过程中出现微球丢失或荧光信号异常增强的标本,采用小鼠免疫球蛋白进行预处理是有效的解决方法。

多重细胞因子检测试剂的开发及其在骨髓瘤中的应用

目的:开发多重细胞因子检测试剂,分析复发难治性多发性骨髓瘤(RRMM)的细胞因子、血管生成、骨重塑蛋白表达水平变化。方法:采用多重微球流式荧光免疫技术建立多重细胞因子定量检测试剂,并应用于55例RRMM患者和22例健康对照血清样本的测定,分析患者细胞因子、血管生成、骨重塑蛋白表达水平及其与临床特征的相关性。结果:本研究成功开发了十重细胞因子免疫分析检测试剂,平均灵敏度为7.1 pg/ml,平均回收率为97.4%,平均批内变异系数为4.8%,平均批间变异系数为9.0%。此外,RRMM样本结果发现IL-2、IL-17、DKK1、RANKL、OPG水平与IgG单克隆蛋白水平呈正相关,TIMP1与IgG、IgA单克隆蛋白水平呈正相关。结论:本研究开发出10种具有较高灵敏度和特异性的细胞因子检测试剂,并发现IL-2、IL-17、DKK1、RANKL、OPG、TIMP1在RRMM中具有追踪疾病进程的潜在价值。建立的多重细胞因子试剂开发流程对今后拓展蛋白标志物多重检测试剂的研发和应用具有重要参考价值。

精神障碍患者外周血细胞因子12项表达谱分析及其临床意义

目的观察12项细胞因子(IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-1β、IL-12p70、IFN-α、IFN-γ、TNF-α)在常见精神障碍(抑郁障碍、双相障碍和精神分裂症)患者外周血中的表达谱并探讨其临床意义。方法纳入2022年7月至2023年6月南京医科大学附属脑科医院住院确诊为精神障碍的288例患者,采用多重微球流式免疫荧光法检测患者外周血中12项细胞因子水平,同时收集患者血常规、C反应蛋白(CRP)结果及临床精神病情等资料。比较分析12项细胞因子在不同精神障碍患者中的水平差异,以及主要细胞因子间及与血常规、CRP、病情的相关性。结果与试剂盒提供的参考区间相比,精神障碍患者外周血细胞因子IL-5、IL-6和IL-1β异常升高。与抑郁障碍患者比较,双相障碍组外周血IL-2、IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-17、IL-12p70、IFN-α、IFN-γ和TNF-α水平均显著降低(P均<0.05);精神分裂症组(除IL-5和IL-17外)也显著降低(P均<0.05),但IL-1β水平显著升高(P<0.05);3组中IL-6水平无明显差异(P>0.05)。3组患者的主要阳性细胞因子IL-5与IL-6(r分别为0.5,0.33,0.26,P均<0.05)和IL-1β(r分别为0.71,0.24,0.50,P均<0.05)呈正相关;IL-6与IL-1β(r分别为0.4,0.24,0.46 P均<0.05)呈正相关,此外,精神分裂症患者外周血IL-6水平与CRP值呈正相关(r=0.30,P<0.05)。多因素Logistic回归分析,暴力危险分级评估、自杀风险评估是发生重性精神障碍的独立风险因素(P均<0.05)。诊断重性精神障碍时,4种细胞因子联合、IL-8、IL-1β和IL-5的ROC曲线下面积(AUCROC)依次为0.751、0.817、0.622和0.613(P均<0.05)。结论精神障碍患者发病过程中其外周血存在独特的细胞因子谱,对判断精神障碍的病情具有较高的临床参考价值。

炎症相关细胞因子表达升高与类风湿关节炎病情程度的相关性分析

目的检测类风湿关节炎(RA)患者血清中细胞因子的含量,探讨炎性相关细胞因子联合检测对RA病情程度评估的临床应用价值。方法募集RA患者28例和同期15例健康体检者。多重微球流式免疫荧光发光法检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-2、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12P70、IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、α干扰素(IFN-α)、IFN-γ、IL-4、IL-10炎症相关细胞因子表达情况,全自动生化分析仪检测C反应蛋白(CRP),魏氏法测量红细胞沉降率(ESR),获取炎症指标数据。计算RA组患者28关节疾病活动指数(DAS28),比较各细胞因子与RA疾病活动度的曲线下面积,分析RA患者炎症相关细胞因子血清水平与CRP、ESR的相关性。结果RA患者血清中IL-2、IL-6、IL-12P70、IL-4、IL-10与RA疾病活动度的指标DAS28-CRP显著相关,IL-12P70、TNF-α、IL-4与RA疾病活动度的指标DAS28-ESR显著相关,反映RA患者病情程度的指标CRP与IL-6(r=0.515)、IL-12P70(r=0.530)、IL-4(r=0.539)、IL-10(r=0.434)呈正相关,ESR与IL-6(r=0.403)、IL-12P70(r=0.475)、TNF-α(r=0.497)、IL-4(r=0.450)呈正相关。与CRP、ESR正常组比较,CRP异常组中IL-6、IL-12P70、IL-2、IL-4、IL-10水平升高,ESR异常组中IL-12P70、IL-4、TNF-α水平升高。RA组患者IL-8、IFN-α、IFN-γ表达较健康组升高。结论血清中炎症相关细胞因子检测对RA的早期诊断和病情程度判断有重要的参考价值,可作为确诊RA的重要预测指标。

中枢神经系统感染患者脑脊液中12种细胞因子的变化及临床意义

目的探讨12种细胞因子(IFN-α、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70和IL-17)在中枢神经系统感染性疾病患者脑脊液中的变化特征及其临床意义。方法收集徐州市中心医院临床诊断为中枢神经系统感染患者52例,对采集的脑脊液进行脑脊液常规、生化以及脑脊液细胞学检测;利用流式细胞仪检测脑脊液中12种细胞因子的变化情况。结果在检测的12种细胞因子中仅IL-5、IL-6和IL-83个细胞因子的浓度显著升高,阳性率分别为23.08%、42.31%和96.15%;与脑脊液中白细胞计数和中性粒细胞百分比呈显著正相关,与淋巴细胞的百分比呈负相关。另外,与白细胞计数结果相一致,细胞因子IL-5、IL-6和IL-8在患者治疗获益后均明显下降。结论脑脊液中IL-5、IL-6和IL-8水平的检测可作为今后中枢神经系统感染患者诊治以及病情严重程度判断的依据。

3种不同方法全自动自身抗体分析仪检测抗核抗体谱结果分析

目的探究临床常用的3种不同方法全自动自身抗体分析仪检测抗核抗体谱结果的差异。方法选取2021年4月至5月在蚌埠医学院第一附属医院确诊为系统性自身免疫病(autoimmune disease,AID)的患者72例作为AID组,留取患者相关项目检测剩余的血清样本72份,同时按照性别相同、年龄相近的原则,选取同期体检无AID的31例健康者作为对照组,留取血清样本31份。采用目前临床常用的进口全自动流式点阵发光免疫分析仪(方法A)、国产全自动流式荧光发光分析仪(方法B)和多重液相芯片免疫分析仪(方法C)分别检测两组患者血清样本中的10种抗核抗体,比较3种方法的检测阳性率,分析其阳性符合率、阴性符合率、敏感度、特异性等。为了帮助选择出对临床检验更可靠的方法学及检验设备,对3种方法进行两两比较,进行一致性评价。结果方法A、B和C与间接免疫荧光法检测的AID组阳性检出率均显著高于对照组(P<0.05)。采用方法A、B和C检测对照组10种抗体的结果均为阴性,AID组10种抗体检测结果中,方法B、C检测抗Sm抗体和抗SSA60抗体的阳性率均显著低于方法A(P<0.05),3种方法检测的其他抗体阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在方法A与方法B的一致性分析中,二者的平均符合率为92.22%,有1项一致性差,3项一致性一般,6项一致性好;方法A与方法C的一致性分析中,二者的平均符合率为93.89%,有5项一致性一般,5项一致性好;方法B与方法的一致性分析中,二者的平均符合率为92.65%。有1项一致性差,4项一致性一般,5项一致性好。结论目前两种国产品牌的全自动流式荧光发光分析仪和多重液相芯片免疫分析仪与进口全自动流式点阵发光免疫分析仪检测自身抗体总符合率较高,但是检测血清抗Sm抗体的一致性较差,应密切结合临床与其他实验室指标综合判断。

呼吸道感染患儿血浆中12种细胞因子的变化特征及其临床意义

目的:探讨12种细胞因子(IFN-α、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70和IL-17)在常见呼吸道感染(急性上呼吸道感染、支气管肺炎和急性化脓性扁桃体炎)患儿血浆中水平的变化特征及其临床意义。方法:收集2020年4月至2022年7月徐州市中心医院收治的诊断为呼吸道感染疾病的271例患儿,采用多重微球流式免疫荧光法检测外周血血浆和血清中12种细胞因子水平。结果:在呼吸道感染患儿血清中IL-6、IL-8、TNF-α和IFN-γ的水平显著高于血浆(P<0.05)。IFN-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10在儿童急性上呼道感染组中的水平显著升高(P<0.05);IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10在支气管肺炎患儿中的水平也显著升高(P<0.05);而在急性化脓性扁桃体炎患儿中12种细胞因子水平变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论:儿童常见呼吸道感染发病过程中外周血血浆和血清中特定细胞因子谱会发生改变,可作为判断上述疾病病情严重程度的临床免疫学监测指标。

外周血IL-2水平状态与淋巴细胞亚群比例的关系在乳腺良恶性肿瘤之间的区别

目的:分析外周血白细胞介素2(IL-2)水平与淋巴细胞亚群比例的关系在乳腺良恶性肿瘤患者之间的区别及临床意义。方法:用流式荧光免疫微球分析技术检测46例乳腺癌及41例乳腺增生症伴乳腺纤维腺瘤形成患者外周血Th1/Th2细胞因子水平,用流式荧光免疫标记技术检测患者外周血CD25+IL-2受体细胞(CD25+IL-2R)、CD3+总T淋巴细胞(CD3+T)、CD4+辅助T辅助细胞(CD4+TH)、CD8+杀伤/抑制T细胞(CD8+TCS)、CD56+NK细胞(CD56+NK)和CD19+总B淋巴细胞(CD19+B)比例。结果:外周血IL-2水平和淋巴细胞亚群比例在乳腺良恶性肿瘤患者之间差异无统计学意义,P>0.05;在乳腺癌中,IL-2水平在检测线以下组(IL-2=0)与检测线以上组(IL-2>0)比较,CD25+IL-2R细胞、CD4+TH细胞和CD56+NK细胞比例(%)差异有统计学意义,与IL-2水平呈负相关;在乳腺良性肿瘤中,IL-2水平在检测线以下组(IL-2=0)与检测线以上组(IL-2>0)比较,CD19+B淋巴细胞比例差异有统计学意义(P=0.05),与IL-2水平呈负相关。结论:乳腺癌患者外周血IL-2水平状态与IL-2-R细胞、Th细胞、NK细胞比例呈负相关,乳腺良性肿瘤患者外周血IL-2水平状态与总B淋巴细胞比例呈负相关。

乳腺良、恶性肿瘤患者血清Th1/Th2细胞因子的比较

[目的]探讨乳腺良、恶性肿瘤患者血清Th1/Th2细胞因子是否存在差异及其临床意义。[方法]用流式荧光免疫微球分析技术(flowfluorenscenceimmunmicrobeadsassay,FFIA)检测60例乳腺癌患者及40例乳腺良性肿瘤患者血清Th1、Th2细胞因子水平。Th1型细胞因子包括:IL-2、TNF-α、IFN-γ;Th2型细胞因子包括:IL-4、IL-5、IL-10。[结果]乳腺良、恶性肿瘤患者血清Th1/Th2细胞因子水平差异无显著性(P>0.05)。[结论]与乳腺良性肿瘤比较,乳腺癌患者血清Th1/Th2细胞因子FFIA检测未发现Th1向Th2的偏移,临床意义有限。