流式荧光法检测CEA、CYFRA21-1和NSE的应用评价

目的评价流式荧光法(FFA)在癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)检测中的应用价值。方法用FFA检测CEA、CYFRA21-1、NSE的精密度,确定FFA与电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测3种标志物结果的相关性,建立两法3种标志物参考区间。对FFA检测CEA、CYFRA21-1和NSE准确性进行评价。结果 FFA检测CEA、CYFRA21-1、NSE批内变异系数(CV)均<6%,批间CV均<10%,检测CEA、CYFRA21-1和NSE的结果与ECLIA相关性良好(rCEA=0.974、rCYFRA21-1=0.929、rNSE=0.982)。以第95百分位数(P95)为参考区间上限,FFA:P95 CEA=3.62 ng/mL、P95 CYFRA21-1=2.44 ng/mL、P95 NSE=11.23 ng/mL;ECLIA法:P95 CEA=3.83 ng/mL、P95 CYFRA21-1=2.88 ng/mL、P95 NSE=14.85 ng/mL。以ECLIA为参考方法,FFA检测CEA、CYFRA21-1和NSE与该法的总符合率分别为95.1%、92.6%、93.7%。结论 FFA法检测CEA、CYFRA21-1和NSE准确性好,所需样本量少,可三种指标联合检测,检测速度快,成本低,有良好的应用价值。

流式荧光法检测血清胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ的应用评价

目的评价流式荧光法在血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ/Ⅱ检测中的临床应用价值。方法评价流式荧光法检测PGⅠ/Ⅱ的精密度,通过检测临床血清标本与酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒进行方法学比对,初步建立健康人群PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ比值的参考值范围,并应用流式荧光法检测浅表性胃炎、萎缩性胃炎、胃癌患者血清。结果 PGⅠ检测批内变异系数（CV批内）为4.26%~5.35%,批间变异系数（CV批间）为6.73%~7.75%。PGⅡ检测CV批内为5.48%~6.42%,CV批间为8.46%~8.85%。与ELISA方法进行方法学比对存在线性关系,线性方程分别为PGⅠ：Y=0.911 X-22.635（r=0.966,P〈0.05）;PGⅡ：Y=0.892 X-0.548（r=0.980,P〈0.05）。PGⅠ和PGⅠ/PGⅠ比值的参考区间下限分别为32.77ng/mL、4.16。萎缩性胃炎和胃癌患者血清PGⅠ水平和PGⅠ/PGⅡ比值明显低于浅表性胃炎患者,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论流式荧光法可以实现PGⅠ、PGⅡ的并行测试,方法学性能良好,可以提高检测效率,流式荧光法对血清PGⅠ和PGⅡ的测定可以为早期胃癌和萎缩性胃炎的筛查及诊断提供实验室依据。

流式荧光法在检测肺癌患者血清cyfra21-1中的应用

目的探讨流式荧光法检测血清cyfra 21-1的临床应用价值。方法比较流式荧光法与电化学发光法检测血清cyfra21-1水平的相关性,设定本实验室流式荧光法检测血清cyfra 21-1诊断肺癌的cut off值并进行评价。结果流式荧光法检测血清cyfra 21-1水平结果与电化学发光法显著相关(r=0.989,P<0.05);流式荧光法检测血清cyfra 21-1的cut off值为5.36ng/mL,高于厂商提供的值5.0 ng/mL;肺癌患者血清cyfra 21-1阳性率为66.0%,其中鳞癌为77.8%,腺癌69.7%、小细胞癌19.2%。Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者血清cyfra 21-1水平显著高于Ⅰ、Ⅱ期,P均<0.05。结论流式荧光法检测血清cyfra 21-1对非小细胞肺癌有一定的辅助诊断价值。

流式荧光法检测多肿瘤标志物的方法学评价

目的:应用流式荧光法检测血清中甲胎蛋白(AFP)、细胞角质素片段19(CYFRA211)、癌胚抗原(CEA)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)等多肿瘤标志物的浓度水平,并比较本方法与电化学发光法对同一样本检测结果的一致性。方法:在Luminex200多功能流式荧光分析仪上评价了本法的灵敏度、抗干扰性、精密度、线性,对本法与电化学发光法检测结果的相关性作了线性回归分析。结果:在测定范围内,流式荧光法测定AFP、CYFRA211、CEA和NSE等指标的线性良好。批内变异系数在2.43%～9.23%之间,批间变异系数在4.76%～9.84%之间。200份标本的检测结果表明,流式荧光法与电化学发光法相关性良好,检测AFP、CYFRA211、CEA和NSE的相关系数分别为0.9760、0.9268、0.9727和0.8992。结论:本方法测定结果准确可靠,操作简便,值得推广使用。

流式荧光法检测多肿瘤标志物性能评估及临床应用

目的建立检测人血清多种肿瘤标志物的流式荧光法并评估方法学性能。方法将抗AFP、CEA、CA125、CA242、NSE、free-β-hCG、cyfra 21-1、F-PSA、T-PSA、CA15-3、SCC、CA72-4、CA19-9抗体包被于Luminex荧光编码微球,用流式荧光法检测血清中上述标志物,并进行方法学与临床应用评价。结果与ELISA试剂盒相比,建立的流式荧光法线性范围较宽,灵敏度与电化学发光法较一致。各个指标的批内变异系数(CV)为(6.10±2.35)%,批间CV为(6.61±2.41)%;平均回收率均>90%。干扰实验结果表明,200 mg/mL三酰甘油、10 mg/mL胆红素和10 mg/mL血红蛋白对各指标检测均无显著影响且不受类风湿因子(RF)、异嗜性抗体、人抗动物抗体(HAAAs)及补体等干扰;有效指示AFP高浓度样本、避免hook效应导致的假阴性;临床实验结果表明,该法与电化学发光、ELISA法相关性良好。结论流式荧光法可实现多肿瘤标志物并行测试,方法学性能良好,可以提高检测效率。

流式荧光法检测胃蛋白酶原Ⅰ与Ⅱ的评价及应用分析

目的探讨流式荧光法检测血清胃蛋白酶原(PGⅠ、PGⅡ)的方法学评估及其与化学发光法的对比分析。方法收集来宾市人民医院2013年12月至2015年9月确诊浅表性胃炎,萎缩性胃炎,早、晚期胃癌患者155例和无胃部疾病健康者145例血清标本。采用流式荧光法与化学发光法进行PGⅠ、PGⅡ检测,评估流式荧光法的准确度和精密度、检测上下限等指标,以胃镜和病理诊断作为金标准,对两种方法的灵敏度、特异度进行比较。结果流式荧光法检测的PGⅠ、PGⅡ最低限分别为0.65ng/mL和0.22ng/mL,上限为190ng/mL和110ng/mL;PGⅠ、PGⅡ的相对标准偏差(RSD%)为2.96%和3.65%;PGⅠ、PGⅡ不同浓度的回收率均在95.8%~100.1%;200mg/mL三酰甘油、20mg/mL胆红素和20mg/mL血红蛋白对流式荧光法检测PGⅠ、PGⅡ水平没有干扰;胃癌患者PGⅠ、PGⅡ水平与其他胃部疾病差异有统计学意义(P<0.05);流式荧光法检测PGⅠ、PGⅡ灵敏度和特异度分别为74.85%、79.02%,而化学发光法检测PGⅠ、PGⅡ灵敏度和特异度分别为63.81%、63.75%,差异有统计学意义(P<0.05)。流式荧光法检测PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ比值与化学发光法存在线性关系,线性方程分别为PGⅠ:Y=0.548 5 X+2.241,r=0.988 2;PGⅡ:Y=0.558 7 X+1.005,r=0.987 6;PGⅠ/PGⅡ:Y=0.624 1 X+0.325,r=0.984 6。结论流式荧光法检测PGⅠ、PGⅡ的方法学性能良好,与化学发光法有良好的相关性,检测患者血清PGⅠ、PGⅡ对于胃癌的筛查具有重要意义。

流感病毒基因分型流式荧光法的建立及临床应用研究

目的 基于流式荧光技术建立一种对流感病毒及其亚型进行快速检测的方法,并进行临床标本检测。方法 通过序列比对,设计简并引物及特异性探针,合成质粒,利用Luminex平台建立检测方法并进行430份临床标本的检测,检测结果与福建省疾病预防控制中心的检测结果进行比较。结果 建立了一种快速的流感病毒分型检测方法,可同时检测A、B、C3种流感病毒及亚型(H1-H16、N1-N9),耗时3.5 h,特异性好、灵敏度高,稳定性可行,430份临床标本检测结果与福建省疾病预防控制中心结果进行比较,显示高度的一致性。结论 利用流式荧光技术建立的流感病毒及亚型分型检测方法灵敏度、特异性、稳定性高。

流式荧光法检测NSE的应用评价

建立流式荧光法定量检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的正常参考值,评估其在肺癌诊断中的应用价值。采用流式荧光法检测176例临床血清样本的NSE水平,并与罗氏Elecsys电化学发光法检测结果进行比较,确定两种方法之间的可比性。进一步采用流式荧光法检测668例健康者血清NSE水平,建立健康人群的NSE正常参考值。最后,以流式荧光法检测242例肺癌患者、108例肺部良性疾病者和147例健康者血清NSE水平,评价流式荧光法检测NSE的应用。结果显示,176例临床样本的检测结果表明流式荧光法和电化学发光法相关性良好(Y=0.9746X-0.2075,R2=0.9653),二者具有可比性。根据668例健康者检测结果的第95%百分位数(17.07ng/ml)确定流式荧光法的NSE正常参考值,与罗氏Elec-sys 2010电化学发光法的相似。以NSE>17.07ng/ml判断为阳性,NSE在小细胞肺癌患者中的阳性率显著高于肺鳞癌、肺腺癌患者(P<0.01)。建立了流式荧光法检测NSE的正常参考值,并初步评估了流式荧光法检测NSE在肺癌诊断中的应用,为流式荧光法检测NSE的合理应用和广泛推广奠定了基础。

流式荧光发光法联合检测肺癌患者血清CEA、CYFRA21-1、CA125及NSE的性能评价

目的探讨流式荧光发光法(FFA)对肺癌患者血清中癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、癌胚抗原125(CA125)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)检测的应用价值。方法用FFA法检测CEA、CYFRA21-1、CA125及NSE的精密度,确定流式荧光发光法(FFA)与电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测4种标志物结果的相关性,验证FFA法的准确度及确定4种肿瘤标志物检测的检出限参考区间。对FFA法检测CEA、CYFRA21-1、CA125及NSE的准确性进行评价。结果 FFA法检测CEA、CYFRA21-1、CA125及NSE批内变异系数(CV)均<10%,批间CV均<13%,以第95百分位数(P95)为参考区间上限,FFA:P95CEA=5.00ng/mL、P95CYFRA21-1=3.3ng/mL、P95CA125=35U/mL;P95NSE=12.5ng/mL。以ECLIA为参考方法,FFA检测CEA、CYFRA21-1、CA125和NSE与该法的相关性良好((rCEA)=0.98917,(rCA125)=0.99523,(r CYFRA21-1)=0.99978,(rNSE)=0.99059)。结论 FFA法检测CEA、CYFRA21-1、CA125和NSE精密度高,重复性好,相关性高,可4种指标联合检测肺癌,检测速度快,成本低,对肺癌患者后期用药指导及疗效观察均有良好的应用价值。

流式细胞术用于鲍曼不动杆菌体外药敏试验的研究

目的探讨流式细胞术(FCM)方法快速检测鲍曼不动杆菌体外药敏试验的临床应用价值。方法选用碘化丙啶(PI)作为荧光染料,用FCM检测大肠埃希菌标准菌株和66株鲍曼不动杆菌临床菌株对舒氨西林、左氧氟沙星、美罗培南、头孢噻肟钠的敏感性。根据细菌培养物在不同浓度药物作用后所检测到的荧光强度来判断细菌存活率,从而推断MIC值。并与微量稀释法和VITEK仪检测结果进行比较。结果 66株鲍曼不动杆菌流式细胞荧光法抗菌药物敏感试验(FCST)结果测得舒氨西林耐药35株,左氧氟沙星耐药30株,美罗培南耐药13株,头孢噻肟钠耐药38株。采用χ2检验,分别比较与微量稀释法、VITEK仪检测判断的敏感性结果,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论鲍曼不动杆菌流式细胞荧光法药敏试验与常规方法检测结果具有一致性,并且更快速、灵敏、客观。

不同方法检测抗双链DNA抗体在系统性红斑狼疮诊断中的价值评估

目的评估流式荧光法(FFIA)、间接免疫荧光法(IIF)及酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体用于系统性红斑狼疮(SLE)诊断的临床价值,为临床实践寻找适宜的检测策略。方法选取我院就诊的SLE患者92例,非SLE自身免疫性疾病患者127例及50例健康体检者,分别采用FFIA、IIF和ELISA检测血清中抗dsDNA抗体,计算各方法检测灵敏度和特异性,采用Kappa检验评估结果一致性,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)比较各方法用于区分SLE和非SLE自身免疫性疾病的效能。结果用FFIA、IIF、ELISA检测抗dsDNA抗体,SLE组阳性率分别为44.6%、50.0%和62.0%,均高于疾病对照组和健康对照组(P<0.0001)。IIF与FFIA、ELISA具有高度的一致性,Kappa值分别为0.64和0.72。FFIA与ELISA检测结果具有中等的一致性,Kappa值为0.56。以串联的方式FFIA-IIF或ELISA-IIF联合检测,可提高SLE诊断的灵敏度,分别达到59.8%和67.4%,其特异性分别为92.1%和89.3%,阴阳性与诊断符合率分别提高到81.0%和81.8%。ROC曲线分析显示,FFIA的AUC最大,达到0.768,ELISA和IIF的AUC分别为0.748和0.711。结论FFIA、ELISA和IIF检测抗dsDNA抗体具有较好的一致性,用于SLE诊断的准确性高。ELISA-IIF或FFIA-IIF(串联)联合检测,可作为临床实践中适用于SLE诊断的抗dsDNA抗体检测模式。

两种方法检测群体反应性抗体的比较分析

目的对流式荧光法和酶联免疫吸附实验(ELISA)法在群体反应性抗体(PRA)的检测中进行比较和评价。方法选取昆明市第一人民医院2016年9月至2019年4月门诊及住院患者2907例,采用流式荧光法或ELISA法检测患者血清PRA,比较两种方法的阳性率,同时抽取40例患者采用两种方法同时进行检测。结果ELISA法PRAⅠ类、Ⅱ类及总阳性率分别为9.0%(103/1142)、8.1%(92/1142)、13.7%(156/1142),流式荧光法分别为22.9%(404/1765)、21.9%(387/1765)、34.3%(606/1765)。采用两种不同方法同时对40例患者PRA进行检测,两种方法的一致性极低。结论流式荧光法检测PRA阳性率明显高于ELISA法,实验室宜采用灵敏度较高的流式荧光法进行PRA检测。

CD39^+CD73^+B细胞亚群在原发性胆汁性胆管炎患者中的变化及其临床价值分析

目的:分析原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者外周血CD39^+CD73^+B细胞亚群在B细胞中所占比例的变化,及其与PBC的临床指标间的关系。方法:收集江苏苏州吴江区和常熟地区PBC患者60例,健康人对照者40例,以流式细胞术分析所有研究对象外周血CD39^+CD73^+B细胞在B细胞中的比例,多重微珠流式荧光法定量分析PBC患者抗线粒体抗体M2(AMA-M2)水平,全自动生化分析仪检测肝功能各项指标。统计分析CD39^+CD73^+B细胞比例的组间差异及其与自身抗体和肝脏酶指标之间的关系。结果:PBC患者CD39^+CD73^+B细胞的比例较对照组显著降低[55.6%(44.9%,60.5%)vs 73.0%(69.8%,74.9%),P<0.001]。PBC组CD39^+CD73^+B细胞比例与AMA-M2呈明显的负相关关系(r=-0.349,P=0.027)。抗糖蛋白210抗体(anti-GP210)阳性患者CD39^+CD73^+B细胞比例较anti-GP210阴性患者明显降低[44.6%(38.2%,49.9%)vs 58.7%(49.8%,63.8%),P<0.001],抗核蛋体100抗体(anti-SP100)阳性和阴性患者间CD39^+CD73^+B细胞比例差异无统计学意义[58.6%(47.9%,62.7%)vs 51.6%(44.7%,60.4%),P=0.292]。结论:PBC患者外周血CD39^+CD73^+B细胞比例显著降低,且与特异性自身抗体存在显著相关性,提示该群B细胞在PBC发病过程中可能发挥重要作用。

HPV多重检测平台特点及结果差异性比较

目的探讨qRT-PCR法、反向斑点杂交法、流式荧光法进行HPV分型检测的特点及结果的差异性。方法样本均进行液基细胞学和qRT-PCR检测,选取qRT-PCR检测结果为阳性的标本68例和随机抽取阴性标本22例进行反向斑点杂交法和流式荧光法检测,结果不一致的型别以HPV DNA测序结果为参照。结果15种高危型HPV检测结果中,qRT-PCR与反向斑点杂交法结果一致性良好及以上为100%;qRT-PCR与流式荧光法结果一致性良好及以上为86.7%;流式荧光法与反向斑点杂交法结果一致性良好及以上为80%。三种平台检测结果与一代测序结果相比,qRT-PCR、反向斑点杂交法、流式荧光法的符合率分别为87.78%、94.45%、74.44%。结论qRT-PCR法和反向斑点杂交法的结果一致性最高,反向斑点杂交法与HPV DNA测序结果符合率最高。